高效液相色谱的色谱柱的类型和流动相的选择方法_徐红

高效液相色谱的色谱柱选择与优化高效液相色谱（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）是一种常用的分离和分析技术，广泛应用于化学、生物、药物等多个领域。

在HPLC中，色谱柱的选择和优化是至关重要的一步，它直接影响到分析结果的准确性和分离效果的好坏。

本文将探讨HPLC色谱柱选择与优化的相关问题。

一、色谱柱选择的基本原则在选择HPLC色谱柱时，需要考虑以下几个基本原则：1. 样品特性：首先要考虑待分离的样品特性，包括其化学性质、分子量、溶解度等。

不同的样品可能需要不同类型的色谱柱，如反相色谱柱、离子交换色谱柱、手性色谱柱等。

2. 分离效果：色谱柱的分离效果是选择的关键因素之一。

分离效果好的色谱柱能够提供较高的分离度和较好的峰形，从而使得分析结果更加准确可靠。

3. 色谱柱品牌和质量：选择知名品牌和质量可靠的色谱柱是保证分析结果准确性的重要保障。

品牌和质量好的色谱柱通常具有较好的稳定性和耐用性，能够提供稳定的分离效果。

二、色谱柱优化的方法和技巧除了选择合适的色谱柱，还可以通过优化色谱条件来改善分离效果。

以下是一些常用的色谱柱优化方法和技巧：1. 流动相的优化：流动相的选择和组成对于分离效果有着重要影响。

可以通过调整流动相的pH值、浓度、添加剂等来改善峰形和分离度。

此外，还可以尝试使用梯度洗脱法，即在分离过程中逐渐改变流动相的组成，以提高分离效果。

2. 温度的优化：温度对于色谱柱的分离效果也有一定影响。

在某些情况下，调整温度可以改善分离度和峰形。

一般来说，提高温度可以加快分离速度，但也可能导致峰形变宽。

因此，在优化温度时需要综合考虑分离效果和分析时间的平衡。

3. 流速的优化：流速是影响分离效果的重要因素之一。

过高的流速可能导致峰形变宽、分离度下降，而过低的流速则会延长分析时间。

因此，需要根据样品特性和分析要求选择合适的流速。

4. 注射量的优化：注射量的大小也会对分离效果产生影响。

高性能液相色谱法中柱选型与优化方法高性能液相色谱（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）是一种常用的分离和分析技术，广泛应用于化学、生物、医药等领域。

柱选型和优化方法对于HPLC分析的成功与否至关重要，本文将介绍HPLC柱的选型原则和优化方法。

一、柱选型原则HPLC柱的选型是决定色谱系统分离效果的关键。

柱的选取应根据样品性质、分离要求以及仪器性能等方面进行综合考虑。

以下是柱选型的几个重要原则：1. 良好的分离能力：柱的分离能力决定了样品中各组分是否能够得到有效分离。

一般来说，分离度越高，分析结果越准确。

选择具有良好分离能力的柱可保证分析结果的可靠性。

2. 合适的保留特性：柱的保留特性应与待测物质的性质相匹配。

根据待测物分子量、极性、酸碱性等特征选择相应的柱，以使待测物在柱上有适度的保留和分离。

3. 良好的耐受性和稳定性：柱在长时间高温或酸碱环境下应有良好的耐受性和稳定性，以保证柱的寿命和分离效果。

选择具有耐受性和稳定性的柱，能够减少维护和更换柱的次数，提高实验效率。

4. 较短的保留时间：保留时间较长可能会影响分析的速度和效率。

选择保留时间相对较短的柱，不仅可以提高分析速度，还可以减少流动相的消耗。

二、柱的优化方法在进行HPLC分析时，柱的优化是提高实验效果和分析速度的关键。

以下是几种常用的柱优化方法：1. 选择合适的流动相：合理选取流动相可以改善分离效果。

由于柱的分离效果受到流动相极性的影响，因此根据待测物的极性特征，选择适当的溶剂比例和流动相成分。

2. 调整柱温：调整柱温可以改变柱的保留特性和分离效果。

较高的柱温通常能够提高样品的溶解度，加快保留时间，但会降低分离能力。

合适的柱温应根据待测物的性质和分离需求进行调整。

3. 优化流速：流速对分离效果和分析时间均有影响。

较低的流速可以提高分离度，但会延长分析时间。

适当调整流速可以在保证分离效果的前提下减少分析时间，提高效率。

hplc色谱柱的选择
高效液相色谱（ HPLC）是一种广泛应用于分析化学领域的分离技术。

在（HPLC（分析中，色谱柱的选择是至关重要的，因为它直接影响分离效果和分析结果的准确性。

下面是一些选择（HPLC（色谱柱的要点：
1.（色谱柱类型：HPLC（色谱柱主要分为反相柱、正相柱和离子交换柱等类型。

根据待分析物的性质选择合适的色谱柱类型，例如，对于非极性化合物，通常选择反相柱；对于极性化合物，正相柱可能更合适。

2.（填料粒度：填料粒度越小，分离效率越高，但柱压也会相应增加。

一般来说，分析小分子化合物时选择细粒度填料，分析大分子化合物时选择粗粒度填料。

3.（柱子长度：柱子长度越长，分离效果越好，但分析时间也会延长。

根据分离要求和分析时间的限制选择合适的柱子长度。

4.（柱子内径：柱子内径越小，柱效越高，但柱压也会相应增加。

一般来说，分析小分子化合物时选择细内径柱子，分析大分子化合物时选择粗内径柱子。

5.（固定相：选择合适的固定相可以提高分离效果。

根据待分析物的性质选择合适的固定相，例如，对于非极性化合物，可以选择（C18（固
定相；对于极性化合物，可以选择硅胶固定相。

6.（品牌和价格：不同品牌的色谱柱质量和价格可能存在差异。

在选择色谱柱时，可以参考其他用户的评价和经验，选择性价比较高的产品。

在选择（HPLC（色谱柱时，需要综合考虑待分析物的性质、分离要求、分析时间和成本等因素。

如果对色谱柱的选择有疑问，可以咨询专业的色谱柱供应商或实验室技术人员。

关于高效液相色谱仪流动相的选择如何呢高效液相色谱仪（High Performance Liquid Chromatography, HPLC）是一种常用的分离和分析技术，广泛应用于生命科学、化学、医药、环境等多个领域。

其中，流动相的选择对于色谱分离性能和分析结果的准确性有着重要的影响。

一、流动相的组成流动相是指用于在高效液相色谱仪中运载样品溶液，推动样品通过固定相柱的溶剂体系。

一般情况下，流动相由溶剂和缓冲剂组成。

溶剂用于将样品带入色谱柱，而缓冲剂则用于调整流动相的pH值。

在选择流动相的溶剂时，主要要考虑以下因素：1.溶剂极性：色谱柱的固定相特性和待分析的样品特性决定了所需的溶剂极性。

一般来说，溶剂可以选择非极性溶剂、极性溶剂或者两者的混合物，以适应不同的分析要求。

2.溶剂选择：常用的溶剂包括甲醇、乙醇、丙酮、乙腈等有机溶剂，以及水。

甲醇和乙腈是最常用的有机溶剂，由于它们的极性较低，因此溶解性广泛。

水是最常用的极性溶剂，可以提供更好的分离效果。

3.透过性：一些样品需要在其中一种溶剂中分离，因此选择适当的溶剂对于分析结果的准确性至关重要。

在选择缓冲剂时，需要考虑以下因素：1.pH值的调整：一些分析需要在特定的pH值下进行，需选择合适的缓冲剂，以维持所需的pH值。

2.缓冲能力：缓冲剂应具有良好的缓冲能力，以维持流动相的pH值的稳定性，避免pH值对分离效果的干扰。

3.溶解度：缓冲剂应具有较高的溶解度，以便在高浓度下使用，从而提供稳定的pH值。

二、常用的流动相系统1.等相流动相系统（Isocratic elution）：等相流动相系统是指流动相组成在整个分析过程中保持不变。

这种系统适用于分离度较差的样品，具有简单、稳定、易操作的特点。

2. 梯度流动相系统（Gradient elution）：梯度流动相系统是指在分析过程中，通过改变流动相组成来实现样品的分离。

这种系统适用于需要分离程度较高的样品，提供了更好的分离效果。

液相层析法中色谱柱选择与操作技巧液相层析法（Liquid Chromatography，LC）是一种常用的分离和分析技术，广泛应用于药物分析、环境监测、食品安全等领域。

在液相层析实验中，选择合适的色谱柱和掌握操作技巧是非常重要的，本文将探讨液相层析法中色谱柱选择与操作技巧的相关内容。

一、色谱柱的选择1. 相性选择在选择色谱柱时，相性是首要考虑因素之一。

色谱柱的相性应与待分离的化合物相匹配，以保证分离效果。

对于极性化合物，可以选择正相色谱柱，如C18柱；对于非极性化合物，可以选择反相色谱柱，如C8柱。

此外，还有其他特殊相性的色谱柱，如糖酒石酸柱、氨基酸柱等，可以根据需要进行选择。

2. 尺寸选择色谱柱的尺寸也是需要考虑的因素之一。

常见的色谱柱直径有2.1 mm、4.6mm等，长度一般为150-250 mm。

选择合适的柱尺寸可以提高分离效果和样品通量，同时也会影响分离时间和分辨率。

对于复杂的样品，可以选择细柱，如2.1mm×50 mm，以提高峰形和分辨率；对于样品量较大的情况，可以选择大柱径，如4.6 mm×250 mm，以增加样品通量。

3. 粒径选择色谱柱的粒径也是一个重要的选择因素。

粒径是指填充在柱中的固定相颗粒的直径，常见的有3 μm、5 μm、10 μm等。

粒径越小，表面积越大，分离效果越好，但也会带来较高的压力和较长的分离时间。

一般而言，对于常见的分析要求，5μm的粒径已足够满足分离要求；对于更高的分离要求，可以选择更小的粒径。

需要注意的是，选择不同粒径的柱时，需调整相应的操作参数，以保证分离效果。

二、色谱柱的操作技巧1. 前处理样品在液相层析实验中，样品前处理是一个非常关键的步骤。

样品中的杂质和干扰物会对分离效果产生不利影响，因此需要进行适当的前处理。

常见的前处理方法包括：固相萃取（Solid Phase Extraction，SPE）、液液萃取等。

前处理的目的是提取和富集分析物或去除干扰物，以提高检测灵敏度和分离效果。

液相色谱柱的选择和方法开发液相色谱（HPLC）是一种高效、准确和灵敏的分离和分析技术，在许多领域中具有广泛的应用。

液相色谱柱的选择和方法开发是HPLC分析中的关键步骤之一，它们直接影响到分离效果和分析结果的准确性和可靠性。

本文将详细介绍液相色谱柱的选择和方法开发的相关内容，并提供一些建议和注意事项。

一、液相色谱柱的选择1.分子排阻柱（SEC）：适用于分离和分析高分子物质，如蛋白质、多肽、聚合物等。

根据目标物分子量的大小选择不同的分子排阻柱。

2.反相柱（RP）：适用于分离和分析非极性、低极性化合物。

常用的反相柱有C18、C8、C4等，根据目标物的亲疏水性选择不同的柱材和碳链长度。

3.离子交换柱（IEC）：适用于分离和分析离子化合物，如酸、碱、金属离子等。

根据目标物的离子性质选择阴离子交换柱或阳离子交换柱。

4.亲合性柱：适用于分离和分析具有特定亲和性的目标物，如抗体、酶、细胞等。

常用的亲合性柱有亲和色谱柱、亲和半制备色谱柱等。

二、方法开发方法开发是指在具体的分析目标下，通过调整柱材、流动相、柱温、检测器等参数，寻找出最佳的分离条件和分析方法。

方法开发的过程中，需要进行实验设计、参数调整和结果评估等步骤。

1.实验设计：按照试验的目的和要求，设计合理的实验方案。

包括选择柱材、柱尺寸、流动相、梯度条件、柱温等参数，并确定荧光标准品的浓度和检测波长。

2.参数调整：根据实验设计，逐步调整各种参数，寻找出最佳的分离效果。

需要注意的是，在参数调整的过程中，要逐步变化，避免一次性调整多个参数。

3.结果评估：通过比较不同条件下的分离效果和结果，评估方法的可行性和可靠性。

主要评估指标包括分离度、保留时间、峰形等。

注意事项：1.根据样品的性质和分析目标选择合适的柱材和柱尺寸。

不同的柱材和柱尺寸对分离效果和分析结果有直接影响。

2.合理选择流动相和梯度条件。

流动相的选择应考虑样品的亲疏水性质，梯度条件应选择合理的温度和时间。

高效液相色谱柱的选择液相色谱柱的选择、使用、维护和常见故障的排除液相色谱的柱子通常分为正相柱和反相柱。

正相柱大多以硅胶为柱，或是在硅胶表面键合-CN,-NH3等官能团的键合相硅胶柱；反相柱填料主要以硅胶为基质，在其表面键合非极性的十八烷基官能团（ODS）称为C18柱，其它常用的反相柱还有C8,C4,C2和苯基柱等。

另外还有离子交换柱，GPC柱，聚合物填料柱等。

本文重点介绍反相色谱柱的选择和使用：一、反相色谱柱的选择1．柱子的PH值使用范围反相柱优点是固定相稳定，应用广泛，可使用多种溶剂。

但硅胶为基质的填料，使用时一定要注意流动相的PH范围。

一般的C18柱PH值范围都在2~8，流动相的PH值小于2时，会导致键合相的水解；当PH值大于7时硅胶易溶解；经常使用缓冲液固定相要降解。

一旦发生上述情况，色谱柱人口处会塌陷。

同样填料各种不同牌号的色谱柱不尽相同。

如果流动相PH较高或经常使用缓冲液时，建议选择PH范围大的柱子，例如戴安公司的Acclaim柱PH 2-9或Zorbax的PH 2-11. 5的柱子。

2．填料的端基封尾（或称封口）把填料的残余硅羟基采用封口技术进行端基封尾，可改善对极性化合物的吸附或拖尾；含碳量增高了，有利于不易保留化合物的分离；填料稳定性好了，组分的保留时间重现性就好。

如果待分析的样品属酸性或碱性的化合物，最好选用填料经端基封尾的色谱柱。

3．戴安公司Acclaim柱子介绍—极性封尾C16固定相柱戴安公司有28种类型的柱子，Acclaim反相柱填料高纯，金属含量极低，完全封尾。

PH 2-9范围内兼容，低流失，高柱效。

尤其是2003年推出的Acclaim极性封尾C16柱，是最先商品化的磺酰氨-O 链接键的色谱柱，具极低的硅羟基活性，能在极性溶剂甚至100%水的条件下长期使用。

对酸性和碱性化合物有极为尖锐的好的色谱峰形，与现有的一流色谱柱相比有更好的立体选择性。

（下图是Acclaim极性封尾C16柱和市售极性封尾一流色谱柱分离酸性化合物谱图的比较）二、液相色谱柱的使用色谱柱在使用前，最好进行柱的性能测试，并将结果保存起来，作为今后评价柱性能变化的参考。

关于高效液相色谱仪流动相的选择如何呢高效液相色谱仪（High-Performance Liquid Chromatography，HPLC）是一种将混合物分离成单一组分的有效工具。

为了实现这种分离，高效液相色谱需要两种相：固定相和流动相。

其中，流动相是高效液相色谱仪中至关重要的组成部分之一，因为它决定着分离效果和分离时间。

因此，选择正确的流动相对于分离的精度和效率来说非常重要。

流动相简介流动相是指在柱床中连续流动的溶液。

在高效液相色谱中，流动相主要由溶剂和缓冲液组成。

溶剂是用于将样品分离的液体，在高效液相色谱仪中通常采用多种溶剂的混合物，称为流动相溶剂或者移动相溶剂。

缓冲液是在溶剂中加入的一种化学物质来调节流动相的pH值，缓冲液的作用是保持样品成分的稳定性和防止封堵柱床。

流动相的选择取决于样品的特性、分离要求和分析环境的条件。

因此，选择合适的流动相是高效液相色谱仪分离分析的关键因素之一。

流动相的分类根据溶剂的极性，流动相可分为两种类型：有机相和水相。

具体分类如下：有机相有机相通常由疏水性的有机溶剂组成，这些有机溶剂的极性比水低。

主要有以下三类：•极性较小的有机溶剂：含有醚、酮或者类似于苯、四氢呋喃等非极性有机溶剂的混合物。

•极性中等的有机溶剂：含有乙腈、甲醇、乙醇等极性有机溶剂的混合物。

•极性较大的有机溶剂：如乙二醇、N-甲基吡咯烷酮等。

水相水相是由水和缓冲液组成的混合物。

水是极性溶剂，本身具有良好的溶解性和稳定性。

缓冲液是在水中加入的一种化学物质来调节流动相的pH值。

流动相的选择原则在选择流动相时，需要考虑分析的目标和样品的特性。

下面列举几种常见的流动相选择原则：根据分析目标选择流动相首先，需要根据分析目标选择流动相。

如果需要分离极性物质，则应选择相对极性较强的水相，如果需要分离非极性物质，则应选择相对极性较弱的有机相。

如果需要同时分离多种溶质，则可以选择相组合。

根据样品的特性选择流动相如果样品是非极性的，则应选择相对极性较弱的有机相，例如乙酸乙酯-甲醇体系。

关于高效液相色谱仪流动相的选择如何呢？高效液相色谱仪分析中，选择流动相时应考虑流动相与填料的作用、纯度、与检测器的匹配、粘度、对样品的溶解度和样品回收等方面。

1、流动相与填料的作用：流动相应不改变填料的任何性质。

低交联度的离子交换树脂和排阻色谱填料有时遇到某些有机相会溶胀或收缩，从而改变色谱柱填床的性质。

碱性流动相不能用于硅胶柱系统。

酸性流动相不能用于氧化铝和氧化镁等吸附剂的柱系统。

2、纯度：色谱柱的寿命与大量流动相通过有关，特别是当溶剂所含杂质在柱上积累时。

3、与检测器的匹配：当使用UVD时，所用流动相在检测波长下应没有吸收或吸收很小。

当使用RID时，应选择折光系数与样品差别较大的溶剂作流动相，以提高灵敏度。

4、粘度：高粘度溶剂会影响溶质的扩散和传质，使柱效降低，还会使柱压增加，分离时间延长。

尽量选择沸点在100℃以下的流动相。

5、对样品的溶解度：如果溶解度欠佳，样品会在色谱柱内沉淀，不但影响纯化分离，而且会使色谱柱恶化。

6、样品回收：应选用挥发性溶剂。

高效液相色谱仪分析选择流动相时应注意的问题：1.尽量使用高纯度溶剂作流动相，防止微量杂质长期累积损坏色谱柱和使检测器噪声增加。

不纯的溶剂会引起基线不稳，产生伪峰。

2.避免流动相与固定相发生作用而使柱效下降和损坏色谱柱，如使固定液溶解流失和酸性溶剂破坏氧化铝固定相等。

3.样品在流动相中应有适宜的溶解度，防止产生沉淀并在柱中沉积。

4.流动相粘度低（粘度适中）。

若使用高粘度溶剂，会增高压力，不利于分离。

常用低粘度溶剂有丙酮、甲醇和乙腈等。

但粘度过低的溶剂也不宜采用，如戊烷等，它们容易在色谱柱和检测器内形成气泡，影响分离。

5.化学稳定性好。

6.流动相应满足检测器的要求。

对于紫外吸收检测器，应注意选用检测器波长比溶剂的紫外截止波长长。

所谓溶剂的紫外截止波长是指当小于截止波长的辐射通过溶剂时，溶剂对此辐射产生强烈吸收，此时溶剂被看作是光学不透明的，会严重干扰组分的吸收测量。

高效液相色谱仪色谱柱类型
高效液相色谱仪可使用多种色谱柱类型，其中常见的有以下几种：
1. 反相色谱柱（Reverse Phase Chromatography Column）：常用于非极性或弱极性物质的分离，如有机化合物的分析。

常见的填充物包括C18、C8、C4、C2等。

2. 正相色谱柱（Normal Phase Chromatography Column）：适用于极性化合物的分离，如小分子有机物和天然产物。

填充物常见的有二氧化硅（Silica）等。

3. 离子交换色谱柱（Ion-exchange Chromatography Column）：适用于离子样品的分离。

根据离子的带电性质，分为阳离子交换和阴离子交换两种类型。

4. 锁相色谱柱（Size Exclusion Chromatography Column）：适用于大分子化合物的分离，如蛋白质、聚合物等。

通过孔径大小的区别，将大分子排除在柱外，使小分子进入柱中分离。

5. 亲和色谱柱（Affinity Chromatography Column）：适用于生物分析中的特定分离。

通过样品与柱中的特定配体结合，实现分离和富集。

6. 手性色谱柱（Chiral Chromatography Column）：适用于手性化合物的分离。

填充物上带有手性选择性，可以区分和分离两种手性异构体。

这些色谱柱类型的选择取决于分析物的性质、研究目的以及仪器的配置。

不同的色谱柱类型具有不同的分离机理和分离性能，可以根据实际需求选择合适的柱型。

关于高效液相色谱色谱柱、流动相以及检测器的选择1.概述高效液相色谱已成为化学、医学、工业和法学等学科领域中一项十分重要的分离分析技术。

近年来，我国对食品安全有了更高的关注度，越来越多的研究人员将高效液相色谱应用于食品安全检测中，获得了良好的效果。

高效液相色谱是色谱法中十分重要的一个分支，这项技术采用高压输液系统将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂作为流动相，由流动相携带需测定的混合物液体泵入有固定相的色谱柱中，而在色谱柱中各成分能够得到有效的分离，分离完成后将其输送到检测器中进行检测，能帮助工作人员对样本进行有效的分析，了解其中存在的不同物质。

高效液相色谱在应用过程中可通过选择固定相和流动相以及调节流动相比例达到最优的分离效果，不仅速度较快且重复性较高，检测时间能控制在十几分钟至几十分钟。

同时高效液相色谱柱能反复使用，在进样分离测定时为仪器自动化处理，具有较高的分析精度，可减少人为干扰及误差。

2.高效液相色谱色谱柱的选择童优芸[1]等人使用高效液相色谱法同时检测液体食品中6种人工合成色素，该研究选择的色谱柱为美国安捷伦XDB-C18(4.6 mm×250 mm, 5 μm)。

色谱柱是分离的核心，选择色谱柱的要求是柱效高、选择性好、分析速度快等。

市售的用于HPLC的各种微粒填料如多孔硅胶以及以硅胶为基质的键合相、氧化铝、有机聚合物微球(包括离子交换树脂)、多孔碳等，其粒度一般为3、5、7、10 μm等。

C18和C8色谱柱的应用较为广泛，都属于反相色谱柱。

C8适合分析大分子类的物质，其对同一个物质的保留能力比C18柱弱，保留时间比C18柱早，一些物质出峰过于靠前时使用C8柱很难实现分离。

C18柱对中等极性化合物保留最强，主要应用于羧基、脂肪酸、苯胺、甘油酯等物质的测定，对分子量较小的物质有较好的分离效果。

因此，考虑合成色素的保留时间和分离度，选用C18柱作为此次试验的色谱分析柱。

刘艳荣[2]等人在保健食品中叶黄素总量的高效液相色谱分析测定中选择的色谱柱为C18色谱柱，5μm,250 mm×4.6 mm（内径），在该研究中比较了C18和C30这两种色谱柱的分离效果，结果表明，叶黄素都能很好的出峰。

高效液相色谱柱根据固定相材料的不同可以分为以下几种类型：
反相柱（Reversed-Phase Column）：反相柱是最常见的HPLC柱，其固定相材料通常是碳链长烷基硅烷（C18、C8等）或苯基硅烷等。

在反相柱中，样品中的极性化合物会被固定相中的非极性区域所吸附，从而实现化合物的分离。

正相柱（Normal-Phase Column）：正相柱的固定相材料通常是含有亲水官能团的硅烷材料，如氨基硅烷、硅氧烷等。

在正相柱中，极性化合物会被固定相中的亲水区域所吸附，从而实现化合物的分离。

离子交换柱（Ion Exchange Column）：离子交换柱是一种根据化合物带电性质来分离化合物的柱。

其固定相材料通常是含有带正或负电的功能团的树脂，如弱阴离子交换树脂、强阳离子交换树脂等。

手性柱（Chiral Column）：手性柱是根据化合物手性性质来分离化合物的柱。

其固定相材料通常是手性的有机小分子或手性官能团修饰的硅烷材料等。

大孔柱（Size-Exclusion Column）：大孔柱也称为凝胶过滤柱，其固定相材料通常是一种多孔材料，如凝胶、聚合物微球等。

大孔柱可以通过样品分子的大小来实现化合物的分离，从而广泛应用于生物大分子的分离和纯化。

亲和柱（Affinity Column）：亲和柱是一种利用化合物之间特异性相互作用来分离化合物的柱。

其固定相材料通常是一种高度选择性的生物大分子或生物小分子，如抗体、蛋白质、核酸等。

液相色谱柱选择方法及保存液相色谱常见问题解决方法液相色谱柱选择方法及保存一、液相色谱柱选择方法液相色谱柱选择的简单思路1.确定分别目的确定你的应用是否要求高分别度、短分析时间、高灵敏度、长柱寿命，低的操纵本钱等等。

2.评估分析物的化学性质评估分析物的化学性质.诸如化学结构、溶解性、稳定性等等。

3.选择合适的色谱柱了解色谱填料的物理和化学性质。

液相色谱柱的保存1.反相色谱柱每天试验后的保养：使用缓冲液或含盐的流动相，试验完成后应用10%的甲醇/水冲洗30分钟，洗掉色谱柱中的盐，再用甲醇冲洗30分钟。

注意：不能用纯水冲洗柱子，应当在水中加入10%的甲醇，防止将填料冲塌陷。

2.长期保存色谱柱：如色谱柱要长时间保存，必需存于合适的溶剂下。

对于反相柱可以储存于纯甲醇或乙腈中，正相柱可以储存于严格脱水后的纯正己烷中，离子交换柱可以储存于水中，并将购买新色谱柱时附送的堵头堵上。

储存的温度*好是室温。

一）压力异常操作压力的变化往往是故障的征兆。

A、没有压力显示，没有流动相流动：原因解决方法1、电源问题接通电源，开机2、保险丝被烧坏更换保险丝3、掌控器设定不正确或设定失败实行恰当的设定、修理或更换掌控器4、柱塞杆折断更换柱塞杆5、泵头内有空气溶剂脱气、启动泵抽出空气6、流动相不足补充流动相、更换入口滤头7、单向阀损坏更换单向阀8、漏液拧紧或更换手紧接头B、流动相流动正常，但没有压力显示：原因解决方法1、仪表损坏更换仪表2、压力传感器损坏更换压力传感器C、压力持续偏高原因解决方法1、流速设定过高调整流速设定2、柱前筛板堵塞反冲色谱柱、更换筛板、更换色谱柱3、流动相使用不当或缓冲盐的结晶沉淀使用恰当的流动相、冲洗柱塞杆。

4、色谱柱选择不当选择恰当的色谱柱5、进样阀损坏清洗或更换进样阀6、柱温过低提高温度7、掌控器失常修理或更换掌控器8、保护柱堵塞清洗或更换保护柱9、在线过滤器堵塞清洗或更换在线过滤器D、压力持续偏低：原因解决方法1、流速设定过低调整流速2、系统漏液确定漏液位置并维护和修理3、色谱柱选择不当选择恰当的色谱柱4、柱温过高降低温度5、掌控器失常维护和修理或更换掌控器E、压力波动：原因解决方法1、泵中有气体溶剂脱气、从泵中除去气体2、单向阀损坏更换单向阀3、泵密封损坏更换泵密封4、脱气不充分重新过滤一遍、溶剂脱气5、系统漏液确定漏液位置并维护和修理6、使用梯度洗脱由于流动相粘度的变化引起的压力波动二）漏液通常可以通过拧紧或更换管路接头来解决漏液的问题。

高效液相色谱的色谱柱的类型和流动相的选择方法
徐红;侯健
【期刊名称】《计量与测试技术》
【年(卷),期】2010(037)002
【摘要】高效液相色谱仪的核心是色谱柱.另外,流动相对改善分离效果也有重要的辅助效应.色谱拄的关键内容是制备出高效的填料.现代高效液相色谱填料多使用键合固定相.色谱柱的填充技术直接影响柱效的发挥.在研究制定一个高效液相色谱方法时,选择适宜的流动相也很重要.
【总页数】1页(P10)
【作者】徐红;侯健
【作者单位】新疆昌吉州产品质量检验所,新疆,昌吉,831100;新疆昌吉州产品质量检验所,新疆,昌吉,831100
【正文语种】中文
【相关文献】
1.含盐流动相损坏色谱柱原因探讨 [J], 章志青
2.含盐流动相损坏色谱柱原因分析 [J], 章志青
3.色谱柱中填料颗粒粒度与流动相流速最佳关系的研究 [J], 回瑞华;侯冬岩
4.葫芦[8]脲作为流动相添加剂的高效液相色谱法测定牛奶中喹诺酮药物 [J], 吴玉田;周贻兵;李磊;张权;林野;刘利亚
5.高效液相色谱手性流动相添加剂法拆分愈创甘油醚对映体 [J], 翟明翚;韩爽;王颖;陈志伟;苏立强
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高效液相色谱的色谱柱的类型和流动相的选择方法The Choicing W ays of Chromatographic Colum n and Mobil Phase about HPLC徐　红　侯　健(新疆昌吉州产品质量检验所,新疆昌吉831100)摘　要:高效液相色谱仪的核心是色谱柱。

另外,流动相对改善分离效果也有重要的辅助效应。

色谱柱的关键内容是制备出高效的填料。

现代高效液相色谱填料多使用键合固定相。

色谱柱的填充技术直接影响柱效的发挥。

在研究制定一个高效液相色谱方法时,选择适宜的流动相也很重要。

关键词:高效液相色谱;色谱柱;填料;流动相;溶剂 色谱柱的关键内容是制备出高效的填料。

这些填料装成的色谱柱既要有好的选择性,又要有高的柱效。

要提高柱效是现代高效液相色谱的又一重要问题。

所以填料和装柱技术是关键问题。

现代高效液相色谱填料多使用键合固定相,其固定相膜很薄,因而大大提高了柱效。

高效液相色谱填料的基质有以下几种:(1)全多孔硅胶。

现代高效液相色谱填料绝大多数用键合的方法把活性基团接枝到基质上,全多孔硅胶是使用最为普遍的基质。

全多孔硅胶的孔径有三种类型:①微孔全多孔硅胶,孔径<2nm;(2)中孔全多孔硅胶,孔径<50nm,>2nm;(3)大孔全多孔硅胶,孔径>50nm。

高效液相色谱填料使用中孔和大孔全多孔硅胶,在分离低分子量的混合物时,选择(6～15)nm孔径的全多孔硅胶,其比表面相当于(500～200)m2/g。

在分离合成聚合物或生物大分子时,要使用(15～100)nm的全多孔硅胶。

如果使用<2nm的全多孔硅胶,色谱峰就会拖尾。

(2)其他金属氧化物基质。

由于硅胶有一些缺点:在碱性介质中(pH>8)不稳定;在孔隙中大分子扩散困难,降低柱效;硅胶表面上的剩余硅羟基有离子交换作用。

为此近年来用氧化铝、氧化锆、氧化钍和氧化钛作为高效液相色谱填料的基质有很大的H PLC应用前景。

高效液相色谱柱的选择现代高效液相色谱中，分离效果好坏的一个重要指标是色谱填料的选择。

但是色谱填料的选择范围很宽，因此，要做合适的选择，必须对此有一定的认识和了解。

一、硅胶基质填料1、正相色谱正相色谱用的固定相通常为硅胶（Silica）以及其他具有极性官能团胺基团，如（NH2，APS）和氰基团（CN，CPS）的键合相填料。

由于硅胶表面的硅羟基（SiOH）或其他极性基团极性较强，因此，分离的次序是依据样品中各组分的极性大小，即极性较弱的组份最先被冲洗出色谱柱。

正相色谱使用的流动相极性相对比固定相低，如正已烷（Hexane），氯仿（Chloroform），二氯甲烷（Methylene Chloride）等。

2、反向色谱反向色谱用的填料常是以硅胶为基质，表面键合有极性相对较弱官能团的键合相。

反向色谱所使用的流动相极性较强，通常为水、缓冲液与甲醇、乙腈等的混合物。

样品流出色谱柱的顺序是极性较强的组分最先被冲洗出，而极性弱的组分会在色谱柱上有更强的保留。

常用的反向填料有：C18（ODS）、C8（MOS）、C4（Butyl）、C6H5（Phenyl）等。

二、聚合物填料聚合物填料多为聚苯乙烯—二乙烯基苯或聚甲基丙烯酸脂等，其重要优点是在PH值为1—14均可使用。

相对于硅胶基质的C18填料，这类填料具有更强的疏水性；大孔的聚合物对蛋白质等样品的分离非常有效。

现有的聚合物填料的缺点是相对硅胶基质填料，色谱柱柱效较低。

三、其它无机填料其它HPLC的无机填料色谱柱也已经商品化由于其特殊的性质，一般仅限于特殊的用途。

如，石墨化碳黑正逐渐成为反向色谱柱填料。

这种填料的分离不同于硅胶基质烷基键合相，石墨化碳的表面即是保留的基础，不再需其它的表面改性。

该柱填料一般比烷基键合相硅胶或多孔聚合物填料的保留能力更强。

石墨化碳可用于分离某些几何异构体，由于在HPLC流动相中不会被溶解，这类柱可在任何PH与温度下使用。

氧化铝也可以用于HPLC。

怎样选择高效液相色谱柱高效液相色谱柱怎样选择色谱柱现代高效液相色谱中，分离效果好坏很大程度上取决于色谱填料的选择。

但是色谱填料的选择范围很宽，要做合适的选择，必须对此有一定的认识和了解。

中的各组份的极性大小，即极性强弱的组份最先被冲洗出色谱柱。

反相色谱填料常是以硅胶为基础，表面键合有极性相对较弱的官能团的键合相。

反相色谱所使用的流动相极性较强，通常为水，缓冲液与甲醇，已腈等混合物。

样品流出色谱柱的顺序是极性较强组合最先被冲出，而极性弱的组份会在色谱柱上有更强的保留。

二、聚合物填料质等样品的分离非常有效。

现在的聚合物填料的缺点是相对硅胶基质填料，色谱柱柱效较低。

三、其他无机填料用途。

如石墨化碳也用于正逐渐成为反相色谱填料。

这种填料的分离不同与硅胶基质烷基键合相，石墨化碳的表面即是保留的基础，不再需其它的表面改性，该柱填料一般比烷基键合硅胶或多孔聚合物填料的保留能力更强，石墨化碳可用于分离某些几何导构体，又由但由于氧化铝与碱性化合物作用也很强，应用范围受到一定的限制，所以未能广泛应用，度，其重要用途与优势尚在进行中。

怎样选择填料粒度但不是唯一的因素。

如果固定相选择是正确，但是分离度不够，那么选择更小粒度的填料短的色谱柱，以缩短分析时间，另外，可以采用低粘度的溶剂做流动相或增加色谱柱的使用温度，比如用乙腈代替甲醇，以降低色谱柱的压力。

一、如何保证良好的柱性能与柱寿命名称别名功能基团正相反相离子对应用Silica -OH√非极性和中等极性以及非离子性有机化合物。

SAS C1 -(CH3)3√在所有的烷基键合相中对非极性化合物保留最弱，典型用于中等极性和多官能团化合物.Butyl C4 -C4H9 √√分离肽和蛋白质，保留时间比C8和C18短。

MOS C8， -C8H17√√中等极性相中对中等化合物，小肽和蛋白质， Octyl极性药族化合物和环境样品。

ODS C18 -C18H37√√烷基键合相中对中等极性化合物保留最强。

高效液相色谱法中流动相组成优化技巧高效液相色谱法（High performance liquid chromatography, HPLC）是一种广泛应用于化学、生物、食品、医药等领域的分析技术。

在HPLC中，流动相的组成对分析结果有重要影响，因此优化流动相组成是提高HPLC分析效率和准确性的关键。

首先，对于HPLC中流动相的选择，常见的有水溶液、有机溶剂，以及它们的混合物。

合理选择流动相的组成可以提高分析的分离效果、保证柱寿命，同时降低分析时间和成本。

具体选择哪种流动相需要根据被测物性质和分析目的来确定。

一般来说，水溶液多用于极性物质的分析，有机溶剂适用于非极性物质的分析。

其次，流动相中各组分的浓度也需要进行优化。

浓度过高会影响柱寿命，增加压力，同时可能导致测定结果不准确；浓度过低则会降低分离效果。

在优化流动相组成时，需要通过实验找到最佳浓度范围，以获得最佳的分析结果。

除了浓度外，流动相pH值也是需要考虑的因素之一。

pH值的调整可以改变物质的分离行为和保留时间，进而影响到分析结果。

在实际操作中，可以通过改变酸碱度来调整流动相pH值，或者添加缓冲剂来稳定pH值。

根据被测物的性质，选择合适的pH范围可以有效提高分析的精确度和准确性。

此外，温度也会对流动相组成产生影响。

一般来说，温度的升高可以加快分析速度、提高分离效果。

然而，过高的温度可能会导致柱失效，因此需要根据柱的耐温范围来选择合适的温度条件。

在优化流动相组成时，应考虑到被测物的稳定性和分析目的，选择合适的温度条件。

此外，对于复杂样品的分析，可能需要引入梯度洗脱技术。

梯度洗脱是指在分析过程中逐渐改变流动相组成，以增强对复杂混合物的分离能力。

梯度洗脱可以根据被测物的特性来设计，例如从极性溶剂向非极性溶剂逐渐转变，或者反之。

通过优化梯度洗脱条件，可以提高HPLC的分离效果和灵敏度，获得更为准确的分析结果。

在进行HPLC分析时，还需要注意柱的选择和保养。