高效液相色谱仪的操作步骤及注意事项

第一部分：仪器准备1. 确保waters超高效液相色谱仪处于正常工作状态，检查仪器是否连接电源，是否有故障指示灯显示。

2. 打开色谱仪软件，检查仪器参数设置是否符合实验要求，包括流速、温度、检测波长等。

3. 准备所需的色谱柱、色谱柱连接器、进样器以及其他实验所需的耗材。

第二部分：样品准备1. 准备实验所需的样品，确保样品已经滤过或者处理过以去除杂质。

2. 根据实验要求，将样品溶解在适当的溶剂中，并进行稀释或者稀释。

第三部分：超高效液相色谱仪操作步骤1. 开始操作前，先进行系统平衡。

具体操作步骤为：将色谱柱连接至色谱柱连接器上，然后连接至色谱仪，用洗脱液平衡色谱柱。

2. 设置色谱仪的操作参数，包括流速、温度、检测波长等。

3. 进行样品进样，具体操作步骤为：将进样器连接至色谱仪，将稀释好的样品注入进样器中，设置好进样量。

4. 开始进行实验，监控色谱图谱的变化，记录实验数据。

5. 实验结束后，对色谱柱和色谱仪进行清洗和维护，确保仪器干净、整洁。

第四部分：数据处理和分析1. 对实验获得的数据进行处理和分析，比对标准曲线，计算样品中所含物质的浓度或者纯度。

2. 对实验结果进行统计分析，进行数据呈现，如绘制色谱图谱、制作数据统计图表等。

3. 通过数据处理和分析，得出实验结论，对实验结果进行解释和讨论。

第五部分：实验安全及注意事项1. 在操作过程中，注意个人安全，避免发生化学品溅泼或者接触有害物质。

2. 操作过程中需严格按照实验要求和操作规程进行，如有疑问请及时向实验指导老师或专业人士请教。

3. 实验结束后，及时清理实验台面和仪器设备，妥善存放试剂和耗材。

通过以上步骤的操作，可以保证在使用waters超高效液相色谱仪进行实验时，能够得到准确、可靠的实验结果，为科研工作和学术研究提供有力支持。

第六部分：精密控制与调试1. 在进行实验操作前，要确保色谱仪的各项参数已经精确调试完毕。

这包括流速、温度、压力、检测波长等参数的精准控制。

简述安捷伦高效液相色谱仪的操作流程和注意事项
安捷伦高效液相色谱仪（Agilent HPLC）是一种常用的分析仪器，广泛应用于化学、生物、环境等领域。

其操作流程和注意事项如下：
操作流程：
1. 准备样品溶液：根据分析目的选择适当的溶剂，将样品溶解或稀释至所需浓度。

2. 准备色谱柱：根据分析需求选择合适的色谱柱，并按照柱床规定的要求进行预处理，如洗涤、调pH等。

3. 连接系统：将色谱柱安装在仪器上，连接好进样器、泵、检测器和废液收集器等组件，确保连接紧密无漏。

4. 设置方法参数：根据分析需求，设置泵的流速、进样器的进样量、检测器的波长和灵敏度等方法参数。

5. 系统平衡：启动泵和检测器，运行空白试验，确保色谱柱和系统内部达到平衡状态。

6. 样品进样：将样品进样器插入样品瓶中，抽取足够的样品并注入进样器，按下进样按钮进行进样。

7. 进行分离：启动泵，使流动相通过柱床，样品分离过程中不断采集检测器的信号。

8. 数据处理：分析和处理检测器输出的信号，得出对应的峰面积、峰高度等结果，进行数据分析和解释。

注意事项：
- 严格按照使用手册和方法要求操作仪器，遵循操作规程，避免误操作和事故发生。

- 确保色谱柱、进样器及连接部分的密封性良好，防止泄漏和污染。

- 选择适当的溶剂和流动相，避免与柱材和样品相互作用，影响分析结果。

- 定期检查和维护仪器，如泵的排气、封头的更换、泄漏点的处理等，确保仪器正常运行。

- 样品处理过程中，注意避免光线、温度和湿度的影响，尽量保持稳定的分析环境。

- 使用仪器前，需提前熟悉相关方法和仪器操作，做好实验前的准备工作。

高效液相色谱仪的操作步骤高效液相色谱仪（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）是一种常用的分离和分析技术。

它利用液体流动相和固定相之间的相互作用，将样品中的混合物分离出来，并通过检测器进行定量分析。

本文将介绍高效液相色谱仪的具体操作步骤。

1. 准备工作在进行高效液相色谱仪的操作之前，首先需要进行一些准备工作。

检查色谱柱是否安装正确，确保色谱柱是干净的，并检查流动相的配制是否准确。

2. 样品制备根据需要分析的物质，准备好待测样品。

样品制备可以包括溶解样品、过滤样品等步骤，以确保样品的纯净度和稳定性。

3. 仪器开机将高效液相色谱仪接通电源，打开仪器的电源开关。

等待仪器初始化，并确保仪器各个部分正常工作。

4. 设置参数在仪器上设置分析所需的参数。

包括选择适当的检测器类型和检测波长、设置流量、温度等。

5. 启动系统启动高效液相色谱仪系统，等待系统稳定。

通常需要一段时间使得流动相在管路中充分平衡，并确保流量稳定。

6. 校正进行色谱柱的校正。

校正过程包括流量校正、波长校正等。

通过校正可以保证仪器输出结果的准确性和可靠性。

7. 注射样品将样品通过注射器引入色谱柱中，控制样品的注射量，通常在微升至毫升的量级。

确保样品的注射量稳定和准确。

8. 分离分析开始运行高效液相色谱仪系统，进行样品的分离与分析。

在此期间，流动相通过色谱柱，将样品中的化合物根据它们与固定相之间的相互作用进行分离。

9. 监测结果通过检测器对分离后的化合物进行监测。

根据检测器的信号，可以得到每个化合物的峰面积、保留时间等数据。

10. 数据处理将监测到的信号输入到数据处理软件中，进行结果的计算和分析。

通常可以得到各个化合物的峰高、峰面积等数据，从而实现对样品的定量分析。

11. 关机分析结束后，关闭高效液相色谱仪的电源开关，并进行必要的清洗和维护工作。

确保仪器的正常运行，并延长其使用寿命。

总结：高效液相色谱仪的操作步骤涵盖了仪器准备、样品制备、仪器设置、校正、样品注射、分离分析、结果监测和数据处理等多个方面。

安捷伦高效液相色谱仪的规范操作安捷伦高效液相色谱仪 (Agilent High Performance Liquid Chromatography，简称HPLC) 是一种常用的色谱分析仪器，广泛应用于化学、生物、药学等领域中的分析和研究工作。

为了确保正确、可靠地操作 HPLC 仪器，以下是一些规范操作的步骤和注意事项。

1.仪器准备-开启仪器电源，并等待仪器自检完成。

-检查仪器的梯度系统、进样系统、柱温控制系统、检测系统等是否正常。

-检查注射器、柱、检测器等是否清洁干净，并按需更换柱筒。

2.试剂准备-准备所需的溶剂、标准品和样品，并确保其纯度和浓度符合实验要求。

-制备规范的稀释液或内标溶液，以便进行质量控制和校准。

3.方法设置-设置流速、梯度、柱温、检测器波长等实验参数。

-设定样品进样量、进样方式和柱温控制方式。

-根据实验要求选择合适的检测器（如紫外检测器、荧光检测器等）。

4.柱的装置和平衡-根据实验需求选取合适的柱，并将柱安装在柱底座上。

-将导线连接到柱温控制系统，并设置柱温。

-选择适当的流动相溶剂，用它们预平衡柱，以确保柱达到稳定状态。

5.校正与质控-使用标准品进行系统灵敏度和线性范围的校正。

-定期进行质控分析，以检验仪器的准确性和精确性。

-根据需要，进行合适的质量控制和校正操作。

6.样品进样-根据实验要求选择合适的进样方式（如自动进样器、手动进样器等）。

-通过进样器吸取样品，并确保进样量准确无误。

-进行一定的进样准备，如过滤、稀释等。

7.开始分析-确保所有仪器参数正确设置，样品进样准备完毕，并进行柱的平衡。

-点击“开始”按钮，启动分析程序。

-监测分离曲线或结果，确保分析结果的准确性与可靠性。

8.数据分析与存储-持续监测和记录实时分析结果。

-对结果进行后处理和数据分析，如绘制色谱图、峰面积计算等。

-存储数据，以备后续分析和查阅。

9.仪器维护与清洁-使用完毕后，关闭仪器并断开电源。

-清洗注射器和柱等关键部位，以防止残留的样品引起交叉污染。

高效液相色谱仪的操作与维护指南高效液相色谱仪（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）作为一种常用的分析仪器，广泛应用于化学、药学、环境科学等领域。

为了保证仪器的正常运行和获得可靠的分析结果，正确的操作和科学的维护是非常重要的。

本指南将详细介绍高效液相色谱仪的操作和维护方法，以帮助用户正确使用该仪器。

一、高效液相色谱仪的操作方法1. 准备工作在操作前，需要先进行一些准备工作。

首先，检查仪器是否处于稳定的工作环境中，以确保仪器不受外界干扰。

其次，检查所有的连接与密封件是否完好，确保流体不会泄漏。

最后，检查溶剂和样品的储存条件，保证其符合要求。

2. 开机与关闭正确的开机和关闭步骤可以延长仪器的寿命。

开机前，需要检查电源和其他外部连接。

按照仪器的说明书，按顺序打开电源和其他必要的开关。

关闭仪器时，应按照相反的顺序关闭开关，并断开电源。

3. 样品准备与进样在进行进样操作前，需要准备好样品和溶剂。

样品准备时，应遵循相应的样品制备方法，确保样品的准确性和稳定性。

进样时，应根据实验需求设置适当的进样方式，并注意定量准确。

4. 仪器参数设置在进行分析之前，需要设置仪器的参数，以调整流速、温度、检测波长等参数。

仪器的参数设置应根据实验目的和样品特性进行优化调整，确保获得准确的分析结果。

5. 分析运行与数据处理设置好仪器参数后，可以开始进行分析运行。

根据实验要求和样品特性，选择合适的分析方法和梯度程序。

在分析过程中，应定期检查仪器运行状态，注意观察流速、峰面积、保留时间等数据，并记录相关结果。

6. 仪器清洗与维护分析结束后，必须对仪器进行清洗和维护。

首先，关闭流体通道，清除流体残留物和样品残留物。

然后，根据仪器说明书的要求，进行仪器的常规清洗和维护工作。

定期检查和更换液相柱、检测器等易损件，以保证仪器的正常运行。

二、高效液相色谱仪的维护方法1. 液相柱维护液相柱作为HPLC分离的重要组件，需要定期维护和保养。

高效液相色谱法操作步骤
高效液相色谱法的操作步骤如下:
1. 过滤流动相并根据需要选择不同的滤膜。

溶剂必须为色谱纯，且溶剂及样品必须过膜（0.45μm）。

超声脱气30分钟以上。

2. 用流动相冲洗金属过滤器，然后将过滤器浸入储液罐的流动相中。

有一段时间没用或者换了新的流动相，需要先冲洗泵和进样阀。

3. 将储液罐放置在一定的高度，以避免由于搬运和其他操作人员的移动而造成不必要的跌落。

4. 然后按以下顺序依次启动高效液相色谱仪：泵→检测器→高效液相色谱软件→设置软件参数，如分析时间、检测波长、流速等。

5. 启动泵，运行5分钟，主要是为了排除系统中的气泡，结束后关闭所有排气阀。

6. 然后按照预先计划的速度，以固定的速率，如1mL/min左右，运行流动相，走基线，直到基线平稳。

7. 基线平稳后，在软件中设置样品的运行参数，如流速和分析时间等。

分析时间会因样品、流速、柱长等因素变化。

8. 设计走样方法。

9. 在进样和进样后操作的过程中，需要及时调整和监控各项参数。

高效液相色谱仪操作使用过程中的注意事项一，高效液相色谱仪操作过程：1、开机操作：（1）、打开电源，用Harb相连接时，注意Harb电源，打开计算机，打开Bootp Server（一般启动时已打开）；（2）、自上而下打开个组件电源，Bootp Server里显示有信号时（有六行字符），打开工作站（先打开On line）；（3）、打开冲洗泵头的10％异丙醇溶液的开关（需用针捅抽），控制流量大小，以能流出的最小流量为准；（4）、注意各流动相所剩溶液的容积设定，若设定的容积低于最低限会自动停泵，注意洗泵溶液的体积，及时加液；（5）、使用过程中要经常观察仪器工作状态，及时正确处理各种突发事件。

2、先以所用流动相冲洗系统一定时间（如所用流动相为含盐流动相，必须先用水冲洗20分钟以上再换上含盐流动相），正式进样分析前30min 左右开启D灯或W灯，以延长灯的使用寿命；3、建立色谱操作方法，注意保存为自己命名的Method，勿覆盖或删除他人的方法及实验结果；4、使用手动进样器进样时，在进样前和进样后都需用洗针液洗净进样针筒，洗针液一般选择与样品液一致的溶剂，进样前必须用样品液清洗进样针筒3遍以上，并排除针筒中的气泡；5、溶剂瓶中的沙芯过滤头容易破碎，在更换流动相时注意保护，当发现过滤头变脏或长菌时，不可用超声洗涤，可用5%稀硝酸溶液浸泡后再洗涤；6、实验结束后，一般先用水或低浓度甲醇水溶液冲洗整个管路30分钟以上，再用甲醇冲洗。

冲洗过程中关闭D灯、W灯；7、关机时，先关闭泵、检测器等，再关闭工作站，然后关机，最后自下而上关闭色谱仪各组件，关闭洗泵溶液的开关；8、使用者须认真履行仪器使用登记制度，出现问题及时向老师报告，不要擅自拆卸仪器。

（续）1、操作过程若发现压力很小，则可能管件连接有漏，注意检查。

当出现错误警告（各组件指示灯均为红色），一般为漏液，其中一个感应器中已有溶剂，漏液故障排除后，擦干，点击On line操作界面中的Instrument/System Off，然后再点击操作界面中的Instrument/System On即可。

高效液相色谱仪的操作流程和注意事项引言：高效液相色谱仪（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）是一种重要的分析仪器，广泛应用于化学、生物、医药等领域。

掌握正确的操作流程和注意事项，对保证分析的准确性和结果的可靠性至关重要。

下面将详细介绍高效液相色谱仪的操作流程和注意事项。

一、仪器准备在开始操作高效液相色谱仪之前，需要进行一些准备工作。

首先，检查仪器是否正常工作，例如电源是否正常接通，各个模块是否连接牢固等。

其次，确保色谱柱处于良好的工作状态，即没有泄漏和堵塞等问题。

最后，根据需要，选择合适的检测器，并校准相应的参数。

二、样品准备和进样样品的准备是操作高效液相色谱仪的关键一步。

首先，根据样品的性质选择合适的溶剂体系，并将样品完全溶解。

其次，为了提高分析的准确性，通常需要对样品进行预处理，例如磷酸酯酶的样品需要经过脱磷酸处理。

最后，将样品装入进样瓶中，根据仪器的要求设定进样量。

三、流动相的选择和准备流动相是高效液相色谱仪中的关键因素之一。

在选择流动相时，需要考虑样品的性质以及分析的目的。

常见的流动相包括有机溶剂、水以及它们的混合溶液。

在选择后，需要准备流动相，并进行除气处理以去除气泡。

此外，还要注意流动相的质量，例如pH值、浓度等。

四、色谱条件的设置色谱条件是操作高效液相色谱仪的关键之一。

根据分析的目的和样品的性质，需要设置合适的参数，例如流速、温度、梯度等。

在设置前，需要根据样品性质选择合适的色谱柱，并设定相应的温度以优化分离效果。

此外，还需要根据检测器的要求设定相应的参数。

五、数据采集和结果分析在操作高效液相色谱仪时，需要进行数据采集和结果分析。

首先，确保数据采集系统正常工作，并根据仪器的要求进行设定。

其次，启动数据采集并进行监控，及时记录实验过程中的各项指标。

最后，对采集的数据进行处理和分析，例如峰面积的计算、峰形的分析等。

注意事项：1. 严格按照操作流程进行操作，避免任意更改设置。

HPLC使用操作和注意事项HPLC（高效液相色谱法）是一种常用的分析技术，广泛应用于化学、生物和环境等领域。

在进行HPLC分析时，操作和注意事项非常重要，可以确保数据的准确性和可靠性。

以下是HPLC使用操作和注意事项：1.仪器准备和检查-在进行HPLC分析之前，确保仪器处于正常工作状态，并进行必要的检查和校准。

-检查并确保溶剂瓶、移液器、混匀器、色谱柱等零件的完整性和安装正确。

2.样品准备-样品应根据需要进行稀释或提纯。

-样品应避免与空气接触，以防止氧化或降解。

-对于固态样品，可以使用溶剂进行提取。

-对于液态样品，应尽量使用无色或低吸光度的溶剂。

-样品必须先过滤，以去除悬浮物和杂质。

3.HPLC系统设置-根据试验要求设置合适的流速、温度和检测方式。

-设置正确的进样量和进样方式，确保准确和稳定的进样。

-检查色谱柱的状态，确保它处于正常工作条件。

4.溶剂和试剂准备-使用HPLC级别的纯溶剂和试剂，以确保分析结果的准确性。

-为了避免测定结果的误差，必须使用纯化的水和有机溶剂。

-按照仪器的要求准备缓冲液。

5.进样与洗脱-采用适当的进样模式，如体积进样或峰进样。

-进样体积应根据样品浓度和检测灵敏度进行优化。

-洗脱条件是决定分析分离效果和峰形的关键因素，应根据实验要求进行优化。

6.数据分析-分析HPLC数据时，应先进行标定，确定峰的保留时间和相对峰面积。

-根据标定峰的结果，进行峰识别和定量分析。

-结果应进行统计分析，并计算相对标准偏差以评估数据的可靠性。

除了上述操作，使用HPLC时还需要注意以下事项：1.安全操作-使用HPLC时，应遵守实验室的安全规定，佩戴个人防护装备，如手套和安全眼镜。

-与高压液体及其设备一起操作时，必须特别小心。

2.色谱柱保养-定期进行色谱柱的保养和洗脱，以确保其性能和寿命。

-使用适当的保护柱，避免杂质和有害物质进入色谱柱。

3.仪器保养-定期清洗和保养仪器零件，如移液器和混匀器。

-定期更换空气过滤器和溶剂瓶，以防止污染。

高效液相色谱仪操作步骤1.准备工作：a.检查设备是否正常运转，所有零件是否安装和连接正确。

b.检查每个必需的溶液和试剂是否充足并且符合规定的质量标准。

c.检查色谱柱是否装配完好，并根据要进行的分析校准适当的流量和压力范围。

d.打开色谱软件，并设置所需的分析方法和参数。

e.开始预热色谱柱直到达到所需的温度。

2.样品制备：a.准备待检测样品的溶液或提取物，并进行必要的预处理步骤，例如固相萃取、浓缩、稀释或离心等。

b.将样品溶液通过0.22微米滤膜过滤，以去除杂质、微粒和可能堵塞色谱柱的颗粒。

3.样品进样：a.打开进样器，并选择合适的样品进样模式（如定量进样或自动进样）。

b.使用微量注射器或自动进样器将样品注入进样器，并确定进样量符合分析方法的要求。

4.色谱柱选择：a.根据样品特性和分析目的选择合适的色谱柱类型（如反相、离子交换、大小排阻等），尺寸（长度和内径）和填充材料等。

b.根据样品的pH值调节移动相的酸碱度，以满足分析要求和保护色谱柱。

5.色谱条件设置：a.设置流量速率，根据色谱柱的额定最大流速和样品的分离要求来确定。

一般来说，较高的流速可提高分离速度，但也会降低分离效果。

b.设置柱温，并确保温度稳定在所需的分析条件下。

c.设置检测器的参数，如波长、增益、灵敏度等，以适应待测试样品的检测需求。

6.分析运行：a.开始进样和运行色谱，确保流量和压力稳定。

b.监测色谱峰形的变化和信号强度，以评估分离速度和效果。

c.记录每个样品的保留时间和峰高（面积），并进行相应的数据处理和分析。

7.数据处理：a.使用色谱软件导出和处理分析数据，如生成色谱图、峰面积测定、峰高度测定、定量计算等。

b.根据实验目的和要求，对分析数据进行统计学分析、校正和解释。

c.对数据进行结果汇总、报告撰写和存档。

8.后期维护：a.定期检查和维护仪器，如清洁色谱柱、更换零件、校准仪器、更换溶液等，以确保仪器的正常运行和结果的准确性。

b.对废液和废品进行妥善处理，符合环境保护要求。

本文由北京SEO整理发布高效液相色谱仪操作步骤：1)．过滤流动相，根据需要选择不同的滤膜(0.45um)。

2)．对抽滤后的流动相进行超声脱气10-20分钟。

3)．打开HPLC工作站（包括计算机软件和色谱仪），连接好流动相管道，连接检测系统。

4)．进入HPLC控制界面主菜单，点击manual，进入手动菜单。

5)．有一段时间没用，或者换了新的流动相，需要先冲洗泵和进样阀。

冲洗泵，直接在泵的出水口，用针头抽取。

冲洗进样阀，需要在manual菜单下，先点击purge，再点击start，冲洗时速度不要超过10 ml/min。

6)．调节流量，初次使用新的流动相，可以先试一下压力，流速越大，压力越大，一般不要超过2000。

点击injure，选用合适的流速，点击on，走基线，观察基线的情况。

7)．设计走样方法。

点击file，选取select users and methods，可以选取现有的各种走样方法。

若需建立一个新的方法，点击new method。

选取需要的配件，包括进样阀，泵，检测器等，根据需要而不同。

选完后，点击protocol。

一个完整的走样方法需要包括：a.进样前的稳流，一般2-5分钟；b.基线归零；c.进样阀的loading-inject转换；d.走样时间，随不同的样品而不同。

8)．进样和进样后操作。

选定走样方法，点击start。

进样，所有的样品均需过滤。

方法走完后，点击postrun，可记录数据和做标记等。

全部样品走完后，再用上面的方法走一段基线，洗掉剩余物。

9)．关机时，先关计算机，再关液相色谱。

10)．填写登记本，由负责人签字。

注意事项：1)．流动相均需色谱纯度，水用20M的去离子水。

脱气后的流动相要小心振动尽量不引起气泡。

2)．柱子是非常脆弱的，第一次做的方法，先不要让液体过柱子。

3)．所有过柱子的液体均需严格的过滤。

4)．压力不能太大，最好不要超过2000 psi。

液相色谱法简介【我要发表论文】--------------------------------------------------------------------------------作者：dujinx正文气相色谱不能由色谱图直接给出未知物的定性结果，而必须由已知标准作对照定性。

高效液相色谱仪的操作步骤及注意事项一、操作步骤：1.开机前先将流动相过滤和超声：水流动相用混合滤膜（0.2μm）过滤,有机流动相用有机滤膜过滤，之后超声脱气15-20分钟。

（过滤的目的是除去流动相里的杂质，以免杂质进入色谱柱堵塞色谱柱；超声的目的是排除流动相里面的气体，以防气体进入色谱柱损害色谱柱，影响柱效能）注：试验过程中由于只有0.45μm的混合滤膜，第一次使用时感觉效果不好，于是过滤水时同时使用两张混合滤膜过滤水流动相。

2.超声结束后，将流动相放置到规定位置（1号泵接水流动相，2号泵接有机流动相），开机逐个排气（先启动泵，排气结束后再打开检测器）。

3.排气结束后，关闭所有排气阀。

先用纯有机流动相冲洗色谱柱20-30分钟，基线走稳之后，再打开水流动相（注意：水流动相和有机流动相流速之和为1ml/min），继续走基线，直到基线平稳。

注意：实验结束后，再用纯有机流动相冲洗色谱柱20-30分钟，冲出色谱柱内残留的样品物质，预防长时间不使用仪器样品的残留物质沉积在色谱柱内，导致下次使用难以冲出，色谱柱柱压偏高，基线不稳，出现大量鬼峰。

（不同规格的色谱柱其所允许的最大流速之和不同）4.走基线时，应将进样阀处于Load状态，用注射器进样时应快速进样，进样后将进样阀立即扳回到Inject状态，此时液相系统开始进入采样状态。

采样结束后，可在数据分析里面查看分析结果并可进行编辑，也可以在脱机状态下查看样品的分析结果并编辑。

二、使用中常见的问题及注意事项1.过滤时有时会出现流动相漏液。

可能的原因是滤膜放置不正确（有点偏）和接头有点错位，导致流动相从缝隙中漏出。

注意：操作时，应先向滤瓶内倒入少量流动相，观察是否漏液并开始过滤，若未漏液，再向滤瓶中添加流动相。

2.超声时，瓶外液体的液面应高于瓶内流动相的液面，否则流动相内的气体可能无法排出液体，气体仍然残留在流动相内，以致开机排气时无气泡排出。

3.开机排气结束后，应先将流动相流量调小，再关闭排气阀，否则会导致柱压瞬间升高超过压力上限，致使泵停止工作。

高效液相色谱仪的基本操作和使用1.准备工作：-确保高效液相色谱仪的设备和耗材齐全。

-检查色谱柱，确保色谱柱选择正确并在有效使用期内。

-检查溶剂的质量和纯度，确保溶剂无杂质。

-设置所需的操作温度。

2.连接高效液相色谱仪：-将进样器连接到色谱柱，并将进样针座固定住。

- 将固相柱插入色谱柱座，然后将电导/ UV-Vis检测器连接到色谱柱座。

3.样品制备：-将待测样品溶解于合适的溶剂中，并进行必要的前处理步骤（如过滤、稀释等）。

-对于固体样品，可以采用适当的溶解方法，如超声波处理等。

4.设置色谱仪参数：-开启电源，等待色谱仪预热稳定。

- 打开色谱仪的软件，并设置所需的参数，包括流速、波长（对于UV-Vis检测器）、进样量、运行时间等。

5.校准仪器和程序：-制备标准品溶液，并用标准曲线法对色谱仪进行校准，以确保仪器输出的结果准确可靠。

-确认色谱仪的波长和检测器的线性范围，并根据需要进行修正。

6.进样：-打开进样器盖，用吸尘器吸出残液，然后用纯溶剂将针清洗干净。

-分别进行空白样品和待测样品的进样，保证进样量准确。

7.开始运行：-在软件界面上点击“开始运行”，观察色谱图输出的曲线形状和峰的出现。

-根据需要，可以进行多次重复运行。

8.结果分析：-对于定性分析，根据色谱图的特征峰形状、保留时间和波长，进行物质的鉴别。

-对于定量分析，根据标准曲线和色谱图的峰面积，计算出待测样品中目标物质的浓度。

9.清洗仪器：-运行结束后，关闭仪器，并将进样器和色谱柱进行清洗。

10.维护：-定期检查仪器的性能和功能是否正常。

-及时更换色谱柱、固相柱和检测器，确保仪器的正常运行。

-做好仪器维护和维修记录。

高效液相色谱仪操作规程
《高效液相色谱仪操作规程》
一、实验目的
本实验旨在通过高效液相色谱仪分析样品，准确测定目标化合物的含量，并学习高效液相色谱仪的操作方法和技巧。

二、实验设备
1. 高效液相色谱仪
2. 注射器
3. 色谱柱
4. 移液管
5. 色谱仪软件
三、操作步骤
1. 打开高效液相色谱仪的电源并进行系统初始化，启动色谱仪软件。

2. 调整流速，进样量等参数，使得实验条件符合要求。

3. 将样品通过移液管注入色谱柱中，注意避免样品泡沫和气泡的产生。

4. 设置色谱条件，如梯度洗脱，流速等，启动色谱分析。

5. 记录实验数据和结果，并进行数据处理和分析。

6. 清洗色谱仪，保持设备清洁。

四、实验注意事项
1. 在操作色谱仪时，要严格按照操作步骤进行，严禁随意更改参数。

2. 在进行样品进样时，要小心操作，避免产生气泡和样品泡沫。

3. 在进行色谱分析时，注意梯度洗脱条件的设置，保证分析结果准确。

4. 在实验结束后，及时清洗色谱仪，保持设备干净。

五、实验结果
根据实验数据和结果，可以得出目标化合物的含量和纯度，并进行结果的解释和分析。

通过《高效液相色谱仪操作规程》的学习，使我们更加熟悉高效液相色谱仪的操作方法和技巧，能够准确进行样品分析，为科研工作的开展提供了重要的技术支持。

⾼效液相⾊谱法操作规程与注意事项⾼效液相⾊谱法操作规程与注意事项1.程序1.1.仪器及性能要求：所⽤的仪器为⾼效液相⾊谱仪，由泵系统，进样系统，⾊谱柱，检测器和⾊谱数据处理系统组成。

1.1.1.泵系统：HPLC泵系统通过⾼压⼒管和设备从溶剂瓶中吸取计量的流动相到柱⼦中。

现⾏的泵系统有⼀元或多元计算机控制的计量泵组成，这些泵可以按照梯度洗脱的要求改变流动相的⽐例或者是按等度洗脱的要求混合流动相。

1.1.2.进样系统：化合物被溶解在流动相或合适的溶剂中，可以通过⼿动进样器或定量环，或⾃动进样器转移到流动相中。

⾃动进样器由可存放进样瓶的卡盘组成，进样瓶的顶部有⼀个可以刺⼊的隔膜，进样针通过这个隔膜将样品转移到⼀个定量环中然后输送到⾊谱系统中。

1.1.3.⾊谱柱：最常⽤的⾊谱柱填充剂为化学键合硅胶。

反相⾊谱系统使⽤⾮极性填充剂，以⼗⼋烷基硅烷键合硅胶最为常⽤，⾟基硅烷键合硅胶和其他类型的硅烷键合硅胶（如氰基键合硅胶和氨基键合硅胶）也有使⽤。

正相⾊谱系统使⽤极性填充剂，常⽤的填充剂有硅胶等。

离⼦交换⾊谱系统使⽤离⼦交换填充剂量；分⼦排阻⾊谱系统凝胶或系统⾼分⼦多孔微球等；对映异构体的分离通常使⽤⼿性柱。

除另有规定外，柱温为室温。

1.1.4.检测器：常⽤的检测器包括紫外分光检测器，⽰差折光检测器，⼆极管阵列检测器。

固定波长检测器在单⼀波长下运⾏，典型的波长是254nm，通过低压⼒的汞灯发射。

可变波长的检测器包含持续的能源，例如氘灯或⾼压⼒氙灯，通过单⾊器或⼲涉过滤器产⽣⼀定波长的单⾊光。

1.2.系统适⽤性试验1.2.1.为了确定最终运⾏系统的有效性，应当进⾏系统适⽤性试验。

整个系统可以⽤以下指标来评价：信噪⽐、理论塔板数，分离度，重复性，拖尾因⼦，其指标及计算⽅法应在相关分析⽅法中予以规定，如果没有专门的规定，按以下⽅法进⾏计算：信噪⽐：⽤于评价⾊谱系统检测微量物质的能⼒，美国药典的计算公式：S/N=2H/h，H为峰顶到基线的距离，h为基线中噪声峰最⼤值与最⼩值的差，该段基线需取≥5倍半峰⾼宽的距离，如果有可能，⽬标峰两侧取相等的距离（如图1）。

L-2000高效液相色谱仪操作使用方法和注意事项Liquid Chromatograph型号L-2000厂商日本HITACHI公司性能特点液相色谱仪配有紫外检测器，波长范围190～900nm，波长带宽6nm。

仪器配备四元泵，可使流动相进行高压混合梯度洗脱。

基本功能对一般的中性及弱酸、弱碱性有机物进行分离分析。

应用范围有机合成、药物分析、环境样品、化工厂品纯度分析、天然有机化合物的分析等。

操作规程：1.检查1～4号瓶，准备好预先经过滤并超声脱气20min以上的所用流动相，并保证实验过程中各液体足用。

2.打开稳压电源开关→待电压稳定后打开组织器后总开关→检测器开关→泵开关→检查仪器自检情况。

3.设定检测器的波长：按输入波长数值4.泵的准备：逆时针旋转旁通阀→按将%B、%C、%D设为0排A通道气至回液管内无气泡关泵）5.同上操作分别将B、C、D通道内的气体排空→关闭旁通阀（顺时针关到底）。

6.设定工作方式及条件→打开计算机→工作站7.开泵始工作→待基线稳定后进样→搬动六通阀→进样→等出峰完全后，停止采集保存色谱图，再将六通阀手柄转回到“LOA D”，拔出注射器。

8.实验结束后，根据色谱柱类型用相应的流动相清洗柱30分钟，若使用过缓冲液，还要用经过滤并超声脱气的水清洗管道泵头，以防堵塞。

9.退出色谱工作站→关闭各模块电源开关→清洁实验工作面。

10.关闭仪器总电源开关，经由负责人验收，并在使用记录本上登记签字后方可离开。

注意事项：1.使用仪器前必须仔细阅读仪器使用说明书。

2.必须在熟悉仪器使用人员的指导下操作仪器。

3.按仪器使用要求准备测试样品，不得测试不符合要求的样品。

4.小心操作，防止样品污染和腐蚀仪器。

5.仪器要保持干燥、清洁，每次使用完毕应盖上防尘罩。

高效液相色谱仪操作流程高效液相色谱仪操作流程1、准备工作：（1）校准：在使用高效液相色谱仪之前，应先进行校准，以保证测定结果的准确性。

校准时要使用一系列标准物质，以便检验仪器的性能和精密度。

常用的校准模式有线性校准、多项式校准和外部校准等。

（2）柱温控制：所有的分析柱都有一定的温度要求，高效液相色谱仪的温度控制精度要求比较高，因此需要进行柱温控制。

（3）泵调试：泵是气液色谱系统中最重要的部件，也是最容易发生故障的部件。

使用前，应检查泵的抽真空度、流量稳定性等性能，以保证测定的精度和准确性。

（4）色谱柱稳定性检查：色谱柱的稳定性是检测的重要因素，影响到测定结果的准确性和精度。

在使用之前，应检查柱内各部分的稳定性，以确保其能够按照设定的条件正常工作。

2、色谱柱装载：（1）清洗色谱柱：色谱柱在使用前必须进行清洗，以去除柱内可能存在的有机物，并保证柱内液体的稳定性。

（2）安装色谱柱：色谱柱的安装是非常重要的，因为不正确的安装会影响测定结果的准确性。

色谱柱的安装应紧固，确保柱的稳定性，避免柱管损坏。

（3）组装液体系统：液体系统的组装包括柱头部、柱底部、负压调节器等，组装时应确保所有部件的密封性，以免出现压力泄漏等情况。

3、液相色谱仪系统调试：（1）开机：首先将高效液相色谱仪通电，根据用户手册按步骤启动计算机系统，以及液相色谱仪的电子控制系统。

（2）程序设定：根据实际检测要求，设定相应的程序参数，包括柱温、梯度曲线、进样量、采集时间等。

（3）样品进样：根据实际检测要求，将样品按要求的体积加入样品管中，然后将样品管放入色谱柱内，以开始检测。

4、色谱检测：（1）检测：将样品按照设定的梯度曲线进行移动，并根据程序参数进行数据采集和处理。

（2）分析数据：根据所采集的数据，可以分析出样品中各种成分的含量、比例等信息，从而得出测定结果。

（3）打印报告：将测定结果打印出来，以便查看和记录。

5、清洁：（1）清洁柱头部：在使用完毕后，应及时清洗柱头部，以免柱头部的污染影响下一次测定的准确性。

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