微生物检测原始记录大肠杆菌

大肠杆菌的检测(MPN计数法) 大肠杆菌的检测在环境和食品微生物检测中至关重要，因为这些微生物的存在可能指示污染和潜在的健康风险。

MPN计数法是一种常用的检测大肠杆菌的方法，下面将详细介绍这种方法。

一、MPN计数法简介MPN计数法，全称Most Probable Number，即最可能数，是一种通过统计学方法估算微生物数量的方法。

它的基本原理是在一定的稀释度下，通过系列梯度稀释的样本中存在微生物的概率来推算样本中实际的微生物数量。

二、MPN计数法检测大肠杆菌的步骤1.样品采集：采集被检样品，如水、食品等，并按照无菌操作的要求进行处理，以避免污染和交叉感染。

2.制备稀释液：将样品进行一系列的稀释，如10-1、10-2、10-3等。

每个稀释度的样品需要进行三份平行试验，以增加结果的可靠性。

3.选择合适稀释度的样品：根据实验结果，选择适合的稀释度的样品进行MPN计数。

这个稀释度应该是使样品中大肠杆菌的数量落在10~100之间，以提高估算的准确性。

4.培养：将选择的稀释度的样品分别接种到含有特殊培养基的试管中，培养基是为了促进大肠杆菌的生长。

每个试管中接种的样品量为10ml。

5.结果分析：经过一定时间的培养后，观察每个试管中的菌落数并记录。

根据统计学原理，通过这些数据可以得出样本中大肠杆菌的最可能数。

6.结果报告：根据实验数据，计算并报告每100ml（或者每1g）样品中大肠杆菌的最可能数。

三、MPN计数法的优势和局限性优势：1.MPN计数法是一种广泛应用的方法，可用于估计微生物的数量，不仅适用于大肠杆菌，还适用于其他微生物。

2.该方法不需要昂贵的仪器设备，操作相对简单，可用于基层实验室。

3.MPN计数法可以提供微生物数量的范围，而非单一数值，对于初步估计和趋势分析具有一定的参考价值。

局限性：1.MPN计数法的主观性较强，结果会受到操作人员的影响。

因此，需要操作者接受专业培训并遵循严格的操作规程。

2.MPN计数法的准确性相对较低，尤其是在微生物数量较少的情况下，可能存在较大的误差。

、实验方案设计实验数据原始记录：随时间的变化大肠杆菌液吸光度的数据（括号内数字表示稀释倍数）曲线图时间/h01 3.756788.5910OD6000.0730.0730.0790.2820.456 1.105 1.168 1.662 2.284时间/h1112131418.3320.52324OD600 2.564 2.016 3.020 2.605 3.315 2.860 3.024 3.324时间/h01 3.756788.5910111318.3320.5 0应00.0730.0730.0790.2820.456 1.105 1.168 1.662 2.284 2.564 3.020 3.315 2.86时间/h01 3.756788.591011OD6b00.0730.0730.0790.2820.456 1.105 1.168 1.662 2.284 2.564六•参考文献[1] .牛天贵•食品微生物学实验技术•第1版•北京：科学出版社，2010.[2] .杨革.微生物学实验教程.第2版.北京：科学出版社,2010.[3] .何国庆，贾英民，丁立孝等.食品微生物学.第2版.北京：中国农业大学出版社，2009.[4] .周德庆，胡宝龙.微生物学实验教程.第2版.北京：高等教育出版社，2006.前12小时的大肠杆菌的生长曲线图七•教师对实验方案设计的意见签名：二、实验报告实验现象：随着培养时间的增加，培养基里的液体变得越来越混浊，所散发出来的味道也越来越浓，味道很难闻。

实验结果:大肠杆菌在培养基里生长繁殖，数量越来越多，达到一定数量后，增长速度变慢，后大肠杆菌进行营养和空间的竞争，有些大肠杆菌死亡，最后数量不断减少，直至变为2 •对实验现象、实验结果的分析及其结论分析：①随着培养时间的增加，培养基里的液体变得越来越混浊，所散发出来的味道也越来越浓，味道很难闻，是因为大肠杆菌增长迅速，后来数量达到顶峰，此时培养基内的营养物质已被消耗殆尽，大肠杆菌进行营养和空间的竞争，有些大肠杆菌死亡，最后数量不断减少，直至变为0。

微生物大肠杆菌检测方法微生物大肠杆菌（Escherichia coli）是一种常见的肠道细菌，它可以以多种方式进入人体，包括通过摄入受污染的食物或水，以及通过直接接触感染或间接接触感染。

大肠杆菌是一种潜在的致病菌，它可以引起食物中毒，导致腹泻、腹痛、呕吐等症状。

因此，对大肠杆菌进行快速而准确的检测非常重要。

一般来说，对大肠杆菌的检测可以分为两种方法：传统方法和分子生物学方法。

传统方法主要包括培养法和生化检测法。

培养法是将样品在富含营养物的培养基上进行培养，并通过观察菌落形态、生理生化特性等来识别是否存在大肠杆菌。

常用的培养基包括大肠杆菌选择性培养基（如紫胶杆菌平板和免疫球蛋白平板）和大肠杆菌检测培养基（如二甲基绿平板和温和滴定培养基）。

在培养过程中，大肠杆菌通常会表现为革兰氏阴性、产生气体、氧可用的以及发酵甘露糖等特性。

这种方法的优点是简单易行，成本低廉，但需要较长的培养时间，一般需要24-48小时才能得到结果。

生化检测法是通过检测大肠杆菌产生的特定酶或其他代谢产物来快速识别该菌株。

传统的生物化学试剂盒可以用于检测大肠杆菌的存在，如白酒石酸盐绿的发酵和产气检测。

这种方法的优点是快速、简单，但缺点是它无法提供准确的菌株识别，因为其他细菌也可能产生相似的酶和代谢产物。

分子生物学方法是一种基于DNA或RNA的检测方法，可以提供更准确和快速的识别大肠杆菌。

这些方法包括聚合酶链反应（PCR）、实时荧光PCR、核酸杂交和基因测序等。

PCR是最常用的方法之一，它利用特定的引物扩增目标DNA 序列，然后通过凝胶电泳分析扩增产物，从而确定是否存在大肠杆菌。

PCR方法的优点是高度敏感和特异性，可以在几个小时内得到结果，但缺点是需要复杂的实验设备和技术，并且可能受到PCR抑制物质的干扰。

在实际应用中，常常会结合多种方法来进行微生物大肠杆菌的检测。

例如，可以通过培养法获得初步结果，并用PCR方法进行鉴定确认。

此外，还可以采用免疫学方法来检测大肠杆菌，如流式细胞仪和ELISA等。

微生物检验结果报告注意事项一、涉及定性项目的检验结果报告沙门氏菌、志贺氏菌、金黄色葡萄球菌、单核细胞增生李斯特氏菌、大肠杆菌O157：H7、空肠弯曲杆菌、副溶血性弧菌（定性）等，如果检样是称重取样，则最后检测结果一定报告为检出/25g或未检出/25g。

如果检样是体积取样，则最后检测结果一定报告为检出/25mL或未检出/25mL。

检测标准要求g必须要小写，mL中m必须小写，L则必须大写。

记录中所有有用的信息必须填上，无法填充的用“/”划掉。

二、菌落总数检验结果报告1.菌落总数小于100CFU时，按“四舍五入”原则修约以整数报告，如80.5CFU可修约报告为81CFU;80.4CFU则修约报告为80CFU。

2.菌落总数大于等于100CFU时，左边数第3位数字采用四舍五入原则修约后，取前2位数字，后面位数用0代替，也可用10的指数形式表示：如10-2两平板平均菌落数为238CFU/g，可修约为240CFU/g，最后报告为24000CFU/g或2.4×104CFU/g。

3.霉菌、酵母菌、乳酸菌、蜡样芽孢杆菌、产气荚膜梭菌报告形式和菌落总数一样。

4.称重取样以CFU/g为单位报告，体积取样以CFU/mL为单位报告。

三、大肠菌群检验结果报告。

LST初发酵，产酸产气，接种BGLB复发酵后仍产酸产气，则证明样品受到了大肠菌群污染，可检索MPN表，得出相应结果。

检测时如果采用（10-1，10-2,10-3）三个稀释度，最后BGLB 产气管为（2，0，0），查MPN表可得出大肠菌群检测值为9.2MPN/g；检测时如果采用（100，10-1,10-2）三个稀释度，最后BGLB产气管仍为（2，0，0），查MPN表可得大肠菌群检测值为0.92MPN/g；如果采用（10-2，10-3,10-4）三个稀释度，最后BGLB产气管仍然为（2，0，0），查MPN表可得大肠菌群检测值为92MPN/g。

称重取样以MPN/g为单位报告，体积取样以MPN/mL 为单位报告。

大肠杆菌及菌落总数检测方法为了对鸡精产品的微生物指标进行有效的控制，对微生物的检测就显的十分重要。

下面是鸡精产品的大肠杆菌及菌落总数实验检测方法。

一、大肠杆菌：1）培养基准备（以3.5g乳糖胆盐发酵琼脂为例）双料试管配制A、用量杯量取加热的100ML蒸馏水（实验前需对蒸馏水进行高压灭菌处理，处理方法详见注一）。

B、用0.1g称量天平秤取7g乳糖。

C、将A、B混合均匀，并用10ml吸管各取10ml混合液分别注入三根装有小导管的试管中（此三根为双料试管，即双倍原料）。

单料试管配制A、用量杯量取加热的100ML蒸馏水（实验前需对蒸馏水进行高压灭菌处理，处理方法详见注一）。

B、用0.1g称量天平秤取3.5g乳糖。

C、将A、B混合均匀，并用10ml吸管各取10ml混合液分别注入六根装有小导管的试管中（此六根为单料试管，即单倍原料）。

2）将配制好的试管放入灭菌锅进行115℃进行灭菌10min。

3）将灭菌过后的试管放置在无菌室，常温保存一周。

4）若要对生产的样品检测其大肠杆菌，其步骤如下：A、量取灭菌后的蒸馏水225ml加温后与25g样品混合均匀。

（样品需要在无菌室中，有封盖的塑料杯中进行混合）B、取三个玻璃培养皿，分别标上-1、-2、-3标记。

C、取两根新试管取9ml蒸馏水分别标为a、b。

D、用吸管吸取1ml样品液体，注入-1培养皿中，并盖上盖子。

E、用吸管吸取1ml样品液体，注入a试管中，记为-2培养基液。

F、用吸管吸取1ml a试管中的液体，注入到b试管中，记为-3培养基液。

G、用1ml吸管取样品液体分别注入3根单料试管中，用10ml 吸管取样品液体分别注入双料试管中H、用1ml吸管取-2培养试管液体，分别注入到单料试管中。

I、装好液体的试管，用试管塞封好，放到36℃±1℃的恒温培养箱中24小时培养。

J、24小时培养后，取出并用肉眼观察试管的颜色及冒气泡情况，若有其中的任意状况，说明有大肠杆菌，需要通过美兰做进一步的检测。

第三章大肠菌群测定一、大肠菌群检验( 一) 检验方法( 二) 培养基( 三 ) 检验时应注意事二、大肠菌群的卫生学意义大肠菌群是评价食品卫生质量的重要指标之一，目前已被国内外广泛应用于食品卫生工作中。

该菌群主要来源于人及温血动物粪便，一般多用来作为食品中的粪便污染指标。

过去我国在大肠菌群的检验方面经验不多，对该菌群的认识也不够充分。

1974 年全国修订食品卫生细菌检验方法座谈会和1976 年全国食品卫生标准会议建议以大肠菌群作为粪便污染指标菌，并提出进行有关大肠菌群方面的科研工作。

为此，我们成立了大肠菌群科研协作组，对犬肠菌群的检验方法( 包括快速检验方法) 及其卫生学意义进行了广泛的科学研究和实践，取得了一定成绩，为制订大肠菌群检验方法提供了科学依据。

在这次修订l976年版食品卫生检验方法的过程中，大肠菌群科研协作组又于1983 ～1985 年对大肠菌群检验方法进行了实验研究，并作了对比观察，同时对国内常用的大肠菌群快速检测方法也进行了研讨，为这次修订国家标准食品卫生检验方法微生物学部分中的大肠菌群测定提供了科学依据。

大肠菌群不是细菌学上的分类命名，而是根据卫生学方面的要求，提出来的一组与粪便污染有关的细菌，这些细菌在生化及血清学方面并非完全一致。

其定义为：系指一群需氧及兼性厌氧、在37℃能分解乳糖产酸产气的革兰氏阴性无芽胞杆菌。

有些科学工作者又用靛基质、甲基红、 V～ P、柠檬酸盐、硫化氢、明胶、动力和 44．5℃乳糖分解等试验，将这群细菌再分为大肠艾希氏菌、柠檬酸杆菌、产气克雷白氏菌和阴沟肠杆菌等。

不论分法如何，对大肠菌群的判定，均应以上述定义为基础。

一、大肠茵群检验( 一) 检验方法1．乳糖发酵试验。

以无菌操作采取样品，采取量及稀释倍数，依据国家或当地卫生标准要求及样品污染情况而定。

将待检样品接种于乳糖胆盐发酵管内，接种量在 l m J 以上者，用双料乳糖胆盐发酵管， lm1 及 1mI 以下者，用单料乳糖胆盐发酵管。

微生物检测原始记录一、目的本文档旨在规定微生物检测的原始记录格式和内容，以确保检测过程和结果的准确性和可追溯性。

二、记录格式1、记录纸张：使用A4纸，横向排列，页边距至少留有2cm。

2、记录标题：在页面顶部居中书写“微生物检测原始记录”。

3、日期和实验室名称：在页面右下角书写检测日期和实验室名称。

4、检测样品信息：在页面中部或适当位置填写样品信息，包括样品名称、编号、来源、处理方式等。

5、检测项目和指标：在页面中部或适当位置列出检测项目和指标，如菌落总数、大肠杆菌、沙门氏菌等。

6、检测方法和仪器：在页面中部或适当位置描述检测所采用的方法和使用的仪器设备。

7、检测结果记录：在页面中部或适当位置详细记录每个检测项目的实验数据，并确保数据准确、清晰、可追溯。

8、结论和建议：在页面底部或适当位置总结检测结果，并给出相应建议或处理意见。

9、检测人员签名：在页面右下角或适当位置由检测人员签名，以示负责。

10、备注：根据需要添加其他相关信息，如样品异常情况说明、引用标准、注意事项等。

三、记录内容1、样品信息：样品名称、编号、来源（如生产批次、产地等）、处理方式（如取样、前处理等）。

2、检测项目和指标：根据实际需要确定检测项目和指标，如菌落总数、大肠杆菌、沙门氏菌等微生物指标，以及可能的化学指标等。

3、检测方法：描述微生物检测所采用的方法，如国标法、第三方检测方法等。

同时应注明所用方法的版本号和发布机构。

4、仪器设备：列出在检测过程中使用的所有仪器设备的名称、型号、编号和使用状态等信息。

5、实验数据记录：详细记录每个检测项目的实验数据，包括观察结果、计数结果、吸光度值等。

数据应准确、清晰、可追溯，并附上必要的图表和曲线图。

6、结论和建议：根据检测结果给出相应的结论和建议，如是否符合标准要求，是否需要进一步处理或跟进等。

7、其他信息：根据需要添加其他相关信息，如样品异常情况说明、引用标准、注意事项等。

8、检测人员签名：由检测人员签名，以示负责。

微生物检验原始记录(大肠菌群)检验原始记录编号：报告类别：微生物共页项目：大肠菌群coliforms 检验地点：样品名称：样品编号：样品状态：符合检验要求；其他境条件：实验依据及步骤GB4789.3-2016样品稀释固体和半固体样品：称取25g样品置盛有225ml生理盐水或磷酸盐缓冲液的无菌均质容器内均质，或放入盛有225ml稀释液的无菌均质袋中拍击式均质器拍打，制成为1:10样品匀液。

依次进行10倍递增稀释。

液体样品：以无菌吸管吸取25ml样品置盛有225ml磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中混匀，为1:10样品匀液。

样品匀液的ph应在6.5-7.5之间，必要时分别用1mol/lNaOH或1mol/lHcL调节。

取1mL1∶10稀释匀液沿管壁缓缓注入9ml磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管或换用一支无菌吸管反复吹打，使其混合均匀，制成1:100样品匀液。

按上述操作顺序做10倍递增稀释液，每稀释一次，换用一支1mL灭菌吸量管。

从样品匀液制备到样品接种完毕，全过程不得超过15min。

初发酵试验（9管法）每个样品，选择3个适宜的连续稀释度的样品匀液（液体样品可以选择原液），每个稀释度接种3管月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤（大肠菌群测定：如果超过1ml，则用双料LST肉汤）36℃±1℃培养24h±2h，观察倒管内是否有气泡产生。

产气者进行复发酵试验，未产气则继续培养至48±2h，产期进行复发酵试验。

未产气者为大肠菌群阴性。

复发酵试验（证实试验）用接种环从产气的LST肉汤管中分别取培养物1环，移种于煌绿糖胆盐肉汤（BGLB）管中，36℃±1℃培养48h±2h，，观察产气情况。

数据分析与结果一、菌落计数根据证实为大肠菌群的阳性管数，查MPN检索表，报告大肠菌群的最可能数。

竭诚为您提供优质文档/双击可除大肠杆菌培养实验报告篇一：大肠杆菌实验报告大肠杆菌紫外线诱变及抗药性菌株筛选0740063阿噟兰1.前言抗生素能破坏细菌细胞壁的结构，使细菌的繁殖和生长受到抑制。

但某些细菌对抗生素表现出抗性，原因是其基因发生了改变，产生能抵抗抗生素的性状。

在自然情况下，细菌的基因突变率很低，而且突变是不定向的，因此在自然条件下，想要获得有抗性的细菌是很困难的。

当给与适当的物理条件时，其突变率会大大增加。

如当用α射线、β射线、γ射线、Χ射线、中子和其他粒子、紫外线、微波等物理因素辐射时，能够促进遗传物质突变。

DnA对紫外线（uV）有强烈的吸收作用，尤其是碱基中的嘧啶，它比嘌呤更为敏感。

紫外线引起DnA结构变化的形式有DnA链断裂、碱基破坏、胸腺嘧啶二聚体等。

因此，紫外线通常作为诱变剂，用于微生物菌种选育。

一般细胞分裂越旺盛，诱变剂量越大，突变率高，诱变最有效的波长253~265nm。

选择合适的诱变剂量对于获得较高突变率十分关键，过高或过低的辐射剂量会导致菌株死亡或诱变不充分而降低诱变效果。

在紫外线诱变下，菌株发生不定向的突变，想要得到需要的特向变异必须对诱变后的菌株做筛选。

本实验想要得到的是能够抵抗抗生素的菌株，因此可以用抗生素培养基作为筛选培养基对菌种进行筛选。

若菌株没有发生定向突变，则该菌株不能在抗性培养基上正常生长，只有发生了定向突变才可能在筛选培养基上正常生长。

紫外线对于菌株有诱变作用外，对菌株还有较强的致死作用，因为紫外线改变了菌株的基因结构导致菌株无法正常生长繁殖。

因此，通过本实验的操作，在合适的照射剂量的设置下，比较不同不同照射剂量下的致死效果和突变率，并初步分析两者的相关性。

在分析死亡曲线和诱变率曲线的基础上，能了解诱变育种的机理和方法，为做进一步的诱变实验做准备。

2.材料和方法2.1实验材料、仪器和试剂菌种：大肠杆菌仪器：超净台、离心机、高压灭菌锅、培养箱、磁力搅拌器、培养皿、涂布器、移液管、移液器试剂：牛肉膏蛋白胨培养基相关试剂、硫酸卡那霉素水溶液（50mg/ml）、生理盐水2.2实验方法2.2.1制备培养基普通培养基——牛肉膏蛋白胨培养基（400ml）：牛肉膏5g蛋白胨10gnacl5g琼脂20g蒸馏水1000mlph7.0按配方配制好培养基后置于灭菌锅中115℃15min，倒平板，4皿*15ml*5组+2皿*15ml=22皿*15ml=330ml筛选培养基(200ml)：含抗生素50mg/L。