第十节谷胱甘肽过氧化物酶GSHPx活力测定

禾本科植物谷胱甘肽氧化物酶的活性测定摘要：本文以羊草的叶片和根为材料, 用0. 2 mo l /L pH 6. 2的磷酸缓冲液( 含1 mmo l/L EDTA-2Na，5%的水溶性PVP)作为谷胱甘肽过氧化物酶（GSH一PX）的提取介质，偏磷酸为酶促反应的蛋白质沉淀剂, 二硫代对二硝基苯甲酸(DTNB ) 与GSH显色反应3min, 在412 nm测定酶管和非酶管的OD值, 以测定谷胱甘肽过氧化物酶的活性关键词：盐碱胁迫；羊草；GSH-PX；酶活性Analyzing Soluble Sugar Content and Biomass of Sweet Sorghumunder Saline-alkali StressAbstract:Soil salinization is a global issue. Experiments prove that growing state of sweet sorghum shows growth inhibition，lower production and physiological disorders under soil salinity In this study,sweet sorghum as our material，was sowed in neutral soil and saline soil, respectively，exploring characteristics of salinity stress for the sweet sorghum and the change of soluble sugar and biomass. According to the particularity of different soils，we observed the relationship between different varieties and salt-alkali stress at different growth stages.Profound understanding of physiological mechanism of sweet sorghum response to salt-alkali stress for screening sweet sorghum germplasm,identifying salinity tolerance and cultivating the new sweet sorghum species is significance.Keywords: Salt stress; sweet sorghum; Glutathione peroxidase; enzyme actirityⅠ1前言植物是一个需氧代谢的有机体。

谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）的生物学作用谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）是机体内广泛存在的一种重要的过氧化物分解酶。

GSH-Px 的活性中心是硒半胱氨酸，其活力大小可以反映机体硒（Se）水平。

硒是GSH-Px酶系的组成成分，它能催化GSH变为GSSG，使有毒的过氧化物还原成无毒的羟基化合物，同时促进H2O₂的分解，从而保护细胞膜的结构及功能不受过氧化物的干扰及损害。

而谷胱甘肽还原酶可以利用NADPH催化GSSG产生GSH，通过检测NADPH的减少量就可以计算出谷胱甘肽过氧化物酶的活力水平。

在上述反应中谷胱甘肽过氧化物酶是整个反应体系的限速步骤，NADPH的减少量则和谷胱甘肽过氧化物酶的活力线性相关。

几乎所有的有机氢过氧化物(ROOH)都可以在GSH-Px的作用下还原为ROH。

大概反应如下：2GSH＋H2O2→GSSH＋2H2O，2GSH＋ROOH→GSSH＋2ROH。

谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）分类谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）系主要包括4种不同的GSH-Px，分别为：胞浆GSH-Px、血浆GSH-Px、磷脂氢过氧化物GSH-Px及胃肠道专属性GSH-Px。

第一种：胞浆GSH-Px 由4个相同的分子量大小为22kDa的亚基构成四聚体，每个亚基含有1个分子硒半胱氨酸，广泛存在于机体内各个组织，以肝脏红细胞为最多。

它的生理功能主要是催化GSH参与过氧化反应，清除在细胞呼吸代谢过程中产生的过氧化物和羟自由基，从而减轻细胞膜多不饱和脂肪酸的过氧化作用。

第二种：血浆GSH-Px的构成与胞浆GSH-Px相同，主要分布于血浆中，其功能目前还不是很清楚，但已经证实与清除细胞外的过氧化氢和参与GSH的运输有关。

第三种：磷脂过氧化氢GSH-Px是分子量为20kDa的单体，含有1个分子硒半胱氨酸。

最初从猪的心脏和肝脏中分离得到，主要存在于睾丸中，其它组织中也有少量分布。

其生物学功能是可抑制膜磷脂过氧化。

检测谷胱甘肽还原酶活性水平在乙型肝炎辅助诊断中的应用【摘要】本文研究了谷胱甘肽还原酶活性水平在乙型肝炎辅助诊断中的应用。

通过对谷胱甘肽还原酶活性与乙型肝炎的关系、检测方法、相关研究进展和临床应用情况进行分析，发现谷胱甘肽还原酶活性水平在乙型肝炎的诊断具有重要意义。

文章总结了谷胱甘肽还原酶活性水平对乙型肝炎辅助诊断的重要性，并展望了未来研究方向。

研究结果表明，谷胱甘肽还原酶活性水平的检测可以提高乙型肝炎的早期诊断率，为临床治疗提供更准确的依据。

谷胱甘甘胺还原酶活性水平检测在乙型肝炎的辅助诊断中具有重要的临床应用前景。

【关键词】谷胱甘肽还原酶活性水平、乙型肝炎、辅助诊断、检测方法、相关研究进展、临床应用、意义、未来研究方向、总结。

1. 引言1.1 研究背景乙型肝炎是一种由乙型肝炎病毒引起的传染病，是全球范围内常见的疾病之一。

乙型肝炎患者在发病初期往往没有明显症状，容易被忽视或误诊，导致病情进展。

及早进行乙型肝炎的辅助诊断至关重要。

谷胱甘肽还原酶是人体内一种重要的抗氧化酶，具有清除体内自由基、保护细胞和维持细胞内氧化还原平衡等功能。

近年来，研究发现谷胱甘肽还原酶活性水平与乙型肝炎的发生和发展密切相关。

乙型肝炎病毒感染会引起机体内氧化应激反应增强，从而导致谷胱甘肽还原酶活性水平的改变。

通过检测谷胱甘肽还原酶活性水平，可以反映出乙型肝炎病情的严重程度及预后情况，为临床医生提供重要的诊断和治疗依据。

研究谷胱甘肽还原酶活性水平在乙型肝炎辅助诊断中的应用具有重要的临床意义，有助于提高乙型肝炎的早期诊断率和治疗效果。

1.2 研究目的本研究的目的是探讨谷胱甘肽还原酶活性水平在乙型肝炎辅助诊断中的应用，并评估其对乙型肝炎诊断的准确性和可靠性。

通过检测谷胱甘肽还原酶活性水平，我们希望能够提供一种简便、敏感和特异的辅助诊断方法，为临床医生在乙型肝炎的诊断和治疗过程中提供更多信息和参考依据。

我们还将探讨谷胱甘肽还原酶活性水平与乙型肝炎发病机制之间的关系，为深入研究乙型肝炎的发生发展提供新的视角和理论基础。

主要目的：——测定物质谷胱甘肽过氧化物酶（GSH —Px ）活力。

主要原理：--谷胱甘肽过氧化物酶（GSH —Px)可以促使过氧化氢（H 2O 2）与还原性谷胱甘肽（GSH ）反应生成H 2O 及氧化性谷胱甘肽(GSSG ）,谷胱甘肽过氧化物酶的活力可用其酶促反应的速度来表示，测定此酶促反应中还原型谷胱甘肽的消耗，则可求出酶的活力.H 2O 22O+GSSG GSH —Px 的活力以催化GSH 的反应速度来表示,由于这两个底物在没有酶的条件下，也能进行氧化还原反应(称为非酶促反应），所以最后计算此酶活力时必须扣除非酶促反应引起的GSH 减少的部分。

而GSH 含量的测定可以跟据GSH 和二硫代二硝基苯甲酸作用生成5—硫代二硝基苯甲酸阴离子呈现较稳定的黄色,在412nm 处测其吸光度即可计算出实验室签章一、试剂-—谷胱甘肽过氧化物酶(GSH—Px）测定试剂盒(南京建成生物研究所）二、仪器设备——96孔酶标板—-UV—Vis可见多功能酶标仪-—旋涡混匀器——离心机-—水浴锅-—移液枪及其相应量程枪头三、实验方法根据试剂盒说明书具体操作步骤如下:1. 非酶管和酶管各加入 1 mmol/LGSH 0。

2 mL,酶管加入稀释后的待测血清和组织匀浆液0.2 mL ，37 ºC 水浴预温5分钟,酶管和非酶管分别加入试剂一应用液0。

1 mL ，37 ºC 水浴准确反应5分钟，酶管和非酶管分别加入试剂二应用液2 mL ，同时非酶管加入待测细胞上清液0.2 mL 。

混匀,3500-4000转/分，离心10分钟，取上清1 mL 作显色反应。

2。

空白管加入1 mL GSH 标准品溶剂应用液,标准管加入1 mL 20 μmol/LGSH 标准液，非酶管和酶管各加入上一步骤1 mL 上清液，然后空白管、标准管、非酶管和酶管各加入1 mL 试剂三应用液,0。

25 mL 试剂四应用液和0。

05 mL 试剂五应用液。

1.3.6.2 血或组织中谷胱甘肽过氧化物酶（GSH－Px）活力测定1.3.6.2.1 原理谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）是体内存在的一种含硒清除自由基和抑制自由基反应的系统。

对防止体内自由基引起膜脂质过氧化特别重要，其活力以催化GSH氧化的反应速度，及单位时间内GSH减少的量来表示，GSH和5,5’-二硫对硝基苯甲酸（DTNB）反应在GSH-Px催化下可生成黄色的5-硫代2-硝基苯甲酸阴离子，于423nm波长有最大吸收峰，测定该离子浓度，即可计算出GSH减少的量，由于GSH能进行非酶反应氧化，所以最后计算酶活力时，必须扣除非酶反应所引起的GSH减少。

1.3.6.2.2 试剂和仪器仪器：可见光分光光度计、酶标仪、低温高速离心机、匀浆器、恒温水浴锅、微量加样器试剂：叠氮钠磷酸缓冲液pH7.0N a N316.25mg 终浓度2.5mmol/LEDTA-N a27.44mg 终浓度0.2mmol/LN a2HPO4 1.732g 终浓度0.2mol/LN a H2PO4 1.076g 终浓度0.2mol/L加蒸馏水至100mL，用少量HCL、N a OH调pH7.0，4℃保存。

1mmol/L谷胱甘肽（还原型GSH）溶液GSH 30.7mg加叠氮钠磷酸缓冲液至100mL，临用前配制，冰冻保存1－2日。

1.25－1.5mmol/LH2O2溶液取30％H2O20.15－0.17mL，用双蒸水稀释至100mL，作为贮备液，4℃避光保存，临用前将贮备液用双蒸水稀释10倍即可。

偏磷酸沉淀液HPO316.7g（先用蒸馏水溶解）EDTA 0.5gN a Cl 280g加蒸馏水至1000mL，用普通滤纸过滤，室温保存。

0.32mol/LN a2HPO4溶液:N a2HPO422.7g加蒸馏水至500mL，室温保存。

DTNB显色液DTNB 40mg柠檬酸三钠 1.0g加蒸馏水至100mL，4℃避光保存1个月。

0.2M磷酸缓冲液pH7.40.9%生理盐水1.3.6.2.3 实验步骤1.3.6.2.3.1 样品制备溶血液：取鼠血10μl加入到1mL双蒸水中，充分振摇，使之全部溶血1:100待测，4h内测定酶活力。

收稿日期:2005-02-27作者简介:董卫华(1975-),女,河南扶沟人,助教,硕士。

主要从事微量元素和蛋白质等方面的研究工作。

宁夏枸杞谷胱甘肽过氧化物酶的测定董卫华, 赵春澎, 谷兆侠, 昝玉玺, 赵长安(新乡医学院生物化学教研室 新乡 453003)摘要: 目的 研究宁夏枸杞谷胱甘肽过氧化物酶(GSH Px )的测定方法,以寻求测定枸杞中GSH Px 的最佳条件。

方法 以0.2mol L 1的磷酸缓冲液作为提取介质,1.67%的偏磷酸作为沉淀液,用分光光度计分别在410nm 、412nm 、414nm 、416nm 、418nm 、420nm 、422nm 波长下比色测定宁夏枸杞中GSH Px 活性。

结果 宁夏枸杞中GSH Px 在含1mmol L 1乙二胺四乙酸(EDTA)和1%聚乙烯吡咯烷酮(PVP)的0.2mol L 1磷酸缓冲液(pH6.24)作为提取介质,反应2min 、412nm 波长条件下比色测定,活性最高。

结论 本方法可以准确地测定枸杞中GSH Px 的活性,且重复性好。

关键词: 枸杞;谷胱甘肽过氧化物酶;测定中图分类号:Q946.5 文献标识码:A 文章编号:1004-7239(2006)01-0031-02Determination of glutathione peroxidase in Lycium barbarum form Ningxia DONG Wei hua,ZHA O Chun peng,G U Zhao x ia,et al(Dep artment o f Biochemistry and Molecule Biology ,X inx iang Medical College,X inx iang 453003,China )Abstract: Objective T o find the opt imum conditions o f determine glutathione peroxidase (GSH Pil)in L ycium bar barum.Methods W ith 0.2mol L 1PBS used as distilled solut ion,and 1.67%metaphosphor ic acid used as pr ecipitator,the activity of GSH Px was determined using colorimetric analysis at wavelengt h of 410nm,412nm,414nm,416nm,418nm,420nm,422nm respectively w ith spectrophotometer.Results Extr actove ,edoi,pf 0.2mol l 1PBS(pH6.24)containing 1mmol l 1EDT A 2Na and 1%po lyvinglpyoolidone w ere the suitable conditio n for the ex traction of G SH Px in L ycium bar barum.T he activit y of GSH Px was highest at wavelengt h of 412nm after GSH had reacted with DT NB for thr ee mor nutes.C onclusion By this method,the activ ity of GSH Px can be deter mined accur ately and the results keep steady in every t est.Key words: L ycium chinese mill;glutathio ne perox idase;determination 宁夏枸杞是茄科枸杞属植物,其籽粒性味甘平,具有强健滋补功效。