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谷胱甘肽过氧化物酶和硒的关系(二)
谷胱甘肽过氧化物酶和硒的关系
1. 谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase）
•谷胱甘肽过氧化物酶是一种重要的抗氧化酶
•它能帮助降解有害的过氧化物并保护细胞免受氧化损伤的影响2. 硒的作用
•硒是谷胱甘肽过氧化物酶的重要辅酶
•它能激活谷胱甘肽过氧化物酶，增强其抗氧化功能
•硒还能够参与其他抗氧化系统的运作，提高细胞的抗氧化能力3. 谷胱甘肽过氧化物酶和硒的关系
•谷胱甘肽过氧化物酶的活性和功能都依赖于适量的硒
•硒能够促使谷胱甘肽过氧化物酶转化为活性形式，从而发挥抗氧化作用
•如果身体内缺乏硒，谷胱甘肽过氧化物酶的活性将会降低，导致细胞更容易受到氧化损伤
4. 其他影响因素
•谷胱甘肽过氧化物酶的活性还可能受到其他因素的影响，如供体谷胱甘肽的浓度、其他辅酶的存在等
•因此，除了确保适量的硒摄入外，维持细胞内谷胱甘肽过氧化物酶和其他抗氧化物质的平衡，也是保持身体健康的关键
5. 总结
•谷胱甘肽过氧化物酶和硒之间存在着密切的关系，硒是谷胱甘肽过氧化物酶活性的重要辅酶
•适量的硒摄入可以增强谷胱甘肽过氧化物酶的抗氧化功能，保护细胞免受氧化损伤
•除了硒外，还要注意维持细胞内抗氧化物质的平衡，以维持身体健康。
1.3.6.2 血或组织中谷胱甘肽过氧化物酶（GSH －Px ）活力测定）活力测定 1.3.6.2.1 原理原理谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px ）是体内存在的一种含硒清除自由基和抑制自由基反应的系统。
对防止体内自由基引起膜脂质过氧化特别重要，其活力以催化GSH 氧化的反应速度，及单位时间内GSH 减少的量来表示，GSH 和5,5,5’5’5’--二硫对硝基苯甲酸（DTNB ）反应在GSH-Px 催化下可生成黄色的5-硫代2-硝基苯甲酸阴离子，于423nm 波长有最大吸收峰，测定该离子浓度，即可计算出GSH 减少的量，由于GSH 能进行非酶反应氧化，能进行非酶反应氧化，所以最后计所以最后计算酶活力时，必须扣除非酶反应所引起的GSH 减少。
减少。
1.3.6.2.2 试剂和仪器试剂和仪器仪器：可见光分光光度计、酶标仪、低温高速离心机、匀浆器、恒温水浴锅、微量加样器样器试剂：叠氮钠磷酸缓冲液试剂：叠氮钠磷酸缓冲液pH7.0 N a N 3 16.25mg 终浓度2.5mmol/L EDTA-N a2 7.44mg 终浓度0.2mmol/L N a2HPO 41.732g 终浓度0.2mol/L N a H 2PO 41.076g终浓度0.2mol/L加蒸馏水至100mL ，用少量HCL 、N a OH 调pH7.0，4℃保存。
℃保存。
1mmol/L 谷胱甘肽（还原型GSH ）溶液）溶液GSH 30.7mg 加叠氮钠磷酸缓冲液至100mL ，临用前配制，冰冻保存1－2日。
日。
1.25－1.5mmol/LH 2O 2溶液溶液取30％H 2O 2 0.15－0.17mL ，用双蒸水稀释至100mL ，作为贮备液，4℃避光保存，临用前将贮备液用双蒸水稀释10倍即可。
倍即可。
偏磷酸沉淀液偏磷酸沉淀液 HPO 3 16.7g （先用蒸馏水溶解）（先用蒸馏水溶解） EDTA 0.5g N a Cl280g加蒸馏水至1000mL ，用普通滤纸过滤，室温保存。
谷胱甘肽过氧化物酶（GSH—Px）试剂盒说明书谷胱甘肽过氧化物酶（GSHPx）试剂盒说明书微量法100T/96S注意：正式测定之前选择23个预期差别大的样本做猜测定。
测定意义：GSHPx是谷胱甘肽氧化还原循环中催化还原型谷胱甘肽（GSH）氧化的重要酶之一、GSHPx不但能够特异地催化还原型谷胱甘肽与ROS反应，生成氧化型谷胱甘肽GSSG，从而保护生物膜免受ROS的损害，维持细胞的正常功能；而且具有保护肝脏、提高机体免疫力、拮抗有害金属离子对机体的损害和加添机体抗辐射等本领。
测定原理：GSHPx催化有机过氧化物氧化GSH，产生GSSG；谷胱甘肽还原酶（GR）催化NADPH还原GSSG，再生GSH，同时NADPH氧化生成NADP+；NADPH在340nm有特征汲取峰，而NADP+没有；通过测定340nm光汲取减少速率来计算GSHPx活性。
自备仪器和用品：低温离心机、水浴锅、可调整移液器、酶标仪、96孔板和蒸馏水。
试剂构成和配置：试剂一：液体120mL×1瓶，室温保管。
试剂二：粉剂×1瓶，4℃保管。
试剂三：液体10μL×1支，20℃保管。
试剂四：液体200μL×1瓶，4℃保管。
粗酶液提取：1.组织：依照组织质量（g）：试剂一体积（mL）为1：5～10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL试剂一）进行冰浴匀浆。
8000g，4℃离心10min，取上清置冰上待测。
2.细菌、真菌：依照细胞数量（104个）：试剂一体积（mL）为500～1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL试剂一），冰浴超声波碎裂细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后8000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。
3.血清等液体：直接测定。
GSHPx测定操作：1.酶标仪预热30min，调整波长到340nm。
2.混合试剂在25℃或者37℃（哺乳动物）水浴中预热30min。
谷胱甘肽过氧化物酶和髓过氧化物酶
谷胱甘肽过氧化物酶通过将谷胱甘肽还原为还原型谷胱甘肽，从而清除细胞内的过氧化物，保护细胞膜和细胞器免受氧化损伤。
它对于维持细胞内氧化还原平衡具有重要作用，同时也参与调节细胞的生长、增殖和凋亡等生命活动过程。
而髓过氧化物酶则主要参与中性粒细胞对细菌、真菌和病毒的杀伤作用，它能够产生高氯酸根离子和其他活性氧化物质，参与杀灭病原体和调节炎症反应。
然而，过度活化的髓过氧化物酶也可能导致组织损伤和炎症性疾病的发生。
总的来说，谷胱甘肽过氧化物酶和髓过氧化物酶在生物体内发挥着重要的作用，它们的平衡和调节对于维持细胞内稳态和机体免疫功能至关重要。
对这两种酶的研究不仅有助于深入了解细胞氧化应激和免疫反应的机制，也为相关疾病的治疗和预防提供了重要的理论基础。
谷胱甘肽过氧化酶和有机硒是两种在人体内具有重要作用的生物活性物质。
它们在抗氧化、抗炎、抗肿瘤等方面发挥着关键作用，对于维护人体健康具有重要意义。
谷胱甘肽过氧化酶（Glutathione Peroxidase，简称GPx）是一种广泛存在于动植物细胞中的抗氧化酶，它的主要功能是清除体内的过氧化物和自由基，保护细胞免受氧化损伤。
谷胱甘肽过氧化酶通过催化谷胱甘肽（Glutathione，简称GSH）与过氧化物发生反应，生成水和无害的产物，从而降低氧化应激对细胞的损害。
此外，谷胱甘肽过氧化酶还参与了许多生物过程，如解毒、信号传导等。
有机硒是一种天然存在的硒化合物，包括硒代氨基酸、硒酸酯等多种形式。
硒是人体必需的微量元素之一，对人体健康具有重要作用。
有机硒在人体内主要以硒蛋白的形式存在，如谷胱甘肽过氧化酶。
硒蛋白具有抗氧化、抗炎、抗肿瘤等多种生物活性。
有机硒与谷胱甘肽过氧化酶的关系密切。
首先，硒是谷胱甘肽过氧化酶的重要组成部分，缺硒会导致谷胱甘肽过氧化酶活性降低，进而影响其抗氧化功能。
其次，有机硒可以促进谷胱甘肽过氧化酶的合成和稳定，提高其抗氧化能力。
综上所述，有机硒还可以调节其他抗氧化酶的活性，如超氧化物歧化酶（Superoxide Dismutase，简称SOD）、谷胱甘肽还原酶（Glutathione Reductase，简称GR）等，共同维护细胞内氧化还原平衡。
货号：MS1202 规格：100管/96样谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）试剂盒说明书微量法注意：正式测定之前选择 2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：GSH-Px是谷胱甘肽氧化还原循环中催化还原型谷胱甘肽（GSH）氧化的主要酶之一。
GSH-Px 不仅能够特异地催化还原型谷胱甘肽与ROS反应，生成氧化型谷胱甘肽GSSG，从而保护生物膜免受ROS的损害，维持细胞的正常功能；而且具有保护肝脏、提高机体免疫力、拮抗有害金属离子对机体的伤害和增加机体抗辐射等能力。
测定原理：GSH-Px催化H2O2氧化GSH，产生GSSG；谷胱甘肽还原酶（GR）催化NADPH还原GSSG，再生GSH，同时NADPH氧化生成NADP+；NADPH在340nm有特征吸收峰，而NADP+没有；通过测定340nm光吸收减少速率来计算GSH-Px活性。
自备仪器和用品：低温离心机、水浴锅、可调节移液器、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、和蒸馏水。
试剂组成和配置：试剂一：液体×1 瓶，室温保存。
试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存。
试剂三：液体×1 支，-20℃保存。
混合试剂配制：临用前，在试剂二中加入试剂一 20mL，充分震荡溶解后加入全部试剂三，混匀。
（当天用完）试剂四：液体×1 瓶，4℃保存。
粗酶液提取：1. 组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL试剂一）进行冰浴匀浆。
8000g，4℃离心10min，取上清置冰上待测。
2. 细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：试剂一体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间 3min）；然后 8000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。
3. 血清等液体：直接测定。
GSH-Px 测定操作：1. 分光光度计/酶标仪预热30min，调节波长到340nm，蒸馏水调零。
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谷胱甘肽过氧化物酶正常值范围什么是谷胱甘肽过氧化物酶？谷胱甘肽过氧化物酶（Glutathione Peroxidase，GPx）是一种重要的抗氧化酶，存在于生物体内，能够催化还原型谷胱甘肽与过氧化物发生反应，将其转化为相应的醇和水。
谷胱甘肽过氧化物酶在细胞内起到清除自由基、保护细胞膜和维持细胞内环境稳定的作用。
谷胱甘肽过氧化物酶的正常值范围谷胱甘肽过氧化物酶的正常值范围可以根据不同实验室和不同测量方法有所差异。
一般来说，成年人血液中谷胱甘肽过氧化物酶的正常值范围为10-70 U/L。
然而，这个范围并不是绝对的，因为正常人群中谷胱甘肽过氧化物酶的水平受到多种因素的影响。
影响谷胱甘肽过氧化物酶水平的因素1.年龄：谷胱甘肽过氧化物酶的水平随着年龄的增长而下降。
这是由于年龄增长导致细胞功能逐渐退化以及自由基产生和清除能力下降等因素所致。
2.性别：一些研究发现，女性血液中谷胱甘肽过氧化物酶的水平要高于男性。
这可能与女性激素和遗传差异有关。
3.生活方式：吸烟、饮酒、不健康的饮食习惯、缺乏运动等不良的生活方式会导致谷胱甘肽过氧化物酶水平下降。
4.疾病状态：某些疾病如癌症、心脏病、肝脏疾病等会影响谷胱甘肽过氧化物酶的水平。
例如，癌症患者往往伴有氧化应激状态，导致谷胱甘肽过氧化物酶水平升高或下降。
如何检测谷胱甘肽过氧化物酶水平？谷胱甘肽过氧化物酶的水平可以通过血液或其他体液的检测来确定。
常用的检测方法包括酶联免疫吸附法（ELISA）、光度法、比色法等。
这些方法能够定量测定谷胱甘肽过氧化物酶的活性或浓度。
谷胱甘肽过氧化物酶异常与疾病关系谷胱甘肽过氧化物酶水平异常可能与多种疾病的发生和发展相关。
以下是一些常见疾病与谷胱甘肽过氧化物酶异常之间的关系：1.氧化应激相关疾病：谷胱甘肽过氧化物酶能够清除自由基，参与细胞内抗氧化防御系统，因此与氧化应激相关的疾病如心血管疾病、癌症、神经退行性疾病等可能导致谷胱甘肽过氧化物酶水平异常。
磷脂过氧化氢谷胱甘肽过氧化物酶磷脂过氧化氢和谷胱甘肽过氧化物酶是生物体内两种重要的氧化还原反应酶。
本文将从分子结构、生物学功能、代谢通路、调控机制等多个方面详细介绍这两种酶。
一、磷脂过氧化氢磷脂过氧化氢（phospholipid hydroperoxide, PLHP）是一种具有强氧化性的有机物，常常由脂肪酸、磷脂酰胆碱、脂肪酰肌醇等氧化生成。
PLHP会导致膜脂质的氧化损伤，严重的损伤可能导致生物膜的完整性失效。
1.分子结构磷脂过氧化氢酶是一种谷胱甘肽过氧化物酶家族（glutathione peroxidase，GPx）中的一个成员。
与一般的GPx不同的是，PHGPx有两个反应中心：一个是对PLHP的直接酶促还原，另一个是将草鱼卵黄急速酸化后形成的玉米油酸甘油磷酸（MPPC）还原为MPPOH的催化反应。
PHGPx 是一个多肽链蛋白，包括重链和轻链。
轻链含有一个谷胱甘肽，谷胱甘肽是由谷氨酸、半胱氨酸和甘氨酸三个氨基酸组成的三肽，是一种细胞内的重要抗氧化剂。
在还原反应中，谷胱甘肽经过金属茎德尔反应（metal-stimulated Delreaction）发生硫酯键的双反应，作为高效的氧化剂消耗过氧化氢类物质。
在是谷胱甘肽分子断环形式之后，还原次数可以在没有外源氧化剂的情况下进行数十次。
2.生物学功能在生物体内，磷脂过氧化氢可以经由多条代谢通路生成和消除。
PHGPx 所在的代谢通路是一种以半面体谷胱甘肽为还原试剂的代谢通路，这种代谢通路可以保护羊膜内皮细胞中的微血管系统，减少有害物质的产生，从而保护胎儿。
此外，PHGPx还具有改善思维能力、保护大脑神经细胞，调节生长发育和免疫功能等多种重要生物学功能。
3.代谢通路PHGPx代谢通路是由PHGPx、NADPH和谷胱甘肽三个组成部分组成的。
当细胞代谢产生PLHP，PHGPx催化PLHP和还原型谷胱甘肽反应，生成对应的水和还原型PLP。
在还原过程中，谷胱甘肽起到还原剂的作用。
谷胱甘肽过氧化物酶检测方法
谷胱甘肽过氧化物酶检测方法是一种用于测定生物体内谷胱甘
肽过氧化物酶（GPx）活性的方法。
本方法基于GPx的催化作用，将
过氧化氢还原成水，并在反应过程中消耗还原型谷胱甘肽（GSH），使其转变为氧化型谷胱甘肽（GSSG）。
测定反应前后GSH和GSSG的比例变化，即可计算出样品中GPx的活性。
常用的谷胱甘肽过氧化物酶检测方法包括紫外-可见分光光度法、荧光法和色谱法等。
其中，紫外-可见分光光度法是常用的定量方法，其原理是利用GPx催化剂将过氧化氢还原为水，测定反应前后NADPH 浓度的变化。
荧光法利用GSH与荧光探针的反应性，在荧光信号变化的同时测定GPx活性。
色谱法则是在高效液相色谱仪上使用GSH和GSSG标准品，通过检测样品中这两种化合物的浓度，计算出GPx活性。
总体而言，谷胱甘肽过氧化物酶检测方法是一种有效的检测生物体内GPx活性的方法，适用于疾病诊断和治疗效果评估等领域。
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本科生毕业论文（设计）题 姓 学 专 班 学目: 名: 院: 业: 级: 号:谷胱甘肽过氧化物酶（GPX）对灵芝生长发育中 的活性氧物质（ROS）的改变及理化性的质影响 于南 生命科学学院 生物科学 生物科学 101 班 13210101 师亮 职称: 讲师指导教师:2013 年 5 月 20 日 南京农业大学教务处制1目录摘要 .......................................................................................................... 错误！未定义书签。
关键词 ...................................................................................................... 错误！未定义书签。
Abstract ................................................................................................... 错误！未定义书签。
Key words ................................................................................................ 错误！未定义书签。
引言 .......................................................................................................... 错误！未定义书签。
1 材料与方法 ........................................................................................ 错误！未定义书签。
1．1 材料 ....................................................................................... 错误！未定义书签。
1．1．1 菌种 .......................................................................... 错误！未定义书签。
1．1．2 CYM 培养基 ............................................................ 错误！未定义书签。
1．1．3 PDA 固体培养基 ..................................................... 错误！未定义书签。
1．1．4 试剂 .......................................................................... 错误！未定义书签。
1．1．5 主要仪器设备 .......................................................... 错误！未定义书签。
1．2 实验方法 ............................................................................... 错误！未定义书签。
1．2．1 ROS 的测定 ............................................................. 错误！未定义书签。
1．2．2 NBT 测定 ................................................................. 错误！未定义书签。
1．2．3 DAB 染色 ................................................................. 错误！未定义书签。
1．2．4 菌株对氧化物耐受性的检测 .................................. 错误！未定义书签。
1．2．5 胞内 Ca2+的荧光检测 .............................................. 错误！未定义书签。
1．2．6 三萜的测定 .............................................................. 错误！未定义书签。
1．2．7 菌丝分叉检测 .......................................................... 错误！未定义书签。
2 结果与分析 ........................................................................................ 错误！未定义书签。
2．1 GPX 沉默转化子胞内 ROS 含量上升 ......................... 错误！未定义书签。
2．2 NBT 染色显示 GPX 沉默转化子胞内超氧根离子含量上升错误！未定义书签。
2．3 DAB 染色显示 GPX 沉默转化子胞内 H2O2 含量下降...... 错误！未定义书签。
2．4 GPX 沉默转化子的菌株对氧化性物质的耐受力下降 ...... 错误！未定义书签。
2．5 GPX 沉默转化子胞内 Ca2+的含量下降 .............................. 错误！未定义书签。
2．6 GPX 沉默转化子菌株的三萜含量下降： .......................... 错误！未定义书签。
2．7 GPX 沉默转化子菌丝的分叉数减少 .................................. 错误！未定义书签。
3 讨论 .................................................................................................... 错误！未定义书签。
致谢 .......................................................................................................... 错误！未定义书签。
参考文献 .................................................................................................. 错误！未定义书签。
2谷胱甘肽过氧化物酶（GPX）对灵芝生长发育中的活性氧物质 （ROS）的改变及理化性的质影响生物科学 101 指导教师 于南 师亮摘要：谷胱甘肽过氧化物酶（GPX）是机体内广泛存在的一种重要的过氧化物分解酶。
ROS 是需氧细胞在代谢过程中产生一系列活性氧簇,包括：O2-、H2O2 及 HO2、OH- 等。
生物体为了减少过氧化物质对机体的伤害，会通过 GPX 基因来调控体内过氧化物质的 含量。
本次试验就是通过 GPXi（沉默）后测定真菌 ROS 信号通路中相关理化性质的改 变例如：ROS 的含量；ROS 调控的钙离子浓度等变化；菌株耐氧能力的改变。
关键词：GPXi；ROS；Ca2+；三萜；分叉The influence of Glutathione peroxidase (GPX) on reactive oxygen species (ROS) and the physical and chemical properties change during the growth and development of ganoderma lucidumStudent Majoring in Biology Tutor Shi Liang Yu NanAbstract：Glutathione peroxidase (GPX) an important peroxide decomposition enzyme that is widely exist in organic cells. ROS is a series reactive oxygen species in the process of metabolism, which produced by Aerobic cells, including: O2 -, H2O2 , HO2 and OH-. In order to reduce the body damage caused by peroxide material the organism adjusts the content of ROS by controlling Glutathione peroxidase (GPX). Our experiments test the change of the fungal ROS signal pathway and the change of physical and chemical properties by making the GPX gene silent, such as the content of ROS, Calcium ions concentration and the tolerant ability to oxidizing substances. Key words: GPXi; ROS; Ca2+ concentration; Ganoderic acids; bifurcation引言灵芝是非常珍贵的药用真菌，性微温，气特殊，味微苦涩。
始载于汉代《神农 本草经》 ，被认为能“益心气，安精魂，补肝益气，坚筋骨”，列为上品。
《本草纲目》认 [i] 为灵芝有“滋补强壮，延年益寿”“利关节，治耳聋”等功效 。
2000 年出版的《中华人民 共和国药典》收载灵芝（赤芝、紫芝）子实体为法定中药材，药典中规定的中药材是赤 芝或紫芝的干燥子实体[2]。
同年，灵芝作为 10 种中草药之一也被收载于美国出版的《美 国草药药典和治疗概要》中，灵芝在国内和国际医药学界的地位可见一斑。
