乌鬃鹅a干扰素基因的克隆及生物信息学分析

吉林白鹅α干扰素基因的克隆与序列分析李公美;李茂辉;闫金明;李玉梅;刘可越;钱爱东【摘要】从吉林白鹅(Anser cygnoides)肝脏组织提取基因组DNA,应用Primer 5.0软件设计一对加入EcoR Ⅰ和BamH Ⅰ酶切位点的特异性引物,PCR扩增得到α干扰素基因(IFN-α),将PCR产物克隆至pMD18-T克隆载体,转化DH5α感受态细胞,挑取阳性菌落进行鉴定和测序.结果表明,IFN-α已被成功克隆.序列分析结果显示该基因序列与GenBank中已知的狮头鹅(A.anser)lFN-α序列(登录号HQ009755)同源性为99.5％.%The interferon-α gene (IFN-α)fragment was amplified with a pair of specific primers within BamH I and EcoR I restriction sites by PCR with the genome DNA extracted from liver of Jilin white goose (A riser cygnoides). PCR product was cloned into vector pMD18-T and used to transform DH5α competent cell. Sequential analysis showed that the IFN-α was successfully cloned. Its homogeneity with reported A. anser IFN-α gene in GenBank(Accession No. HQ009755) was 99.5%.【期刊名称】《湖北农业科学》【年(卷),期】2012(051)021【总页数】3页(P4899-4901)【关键词】吉林白鹅(Anser cygnoides);α干扰素基因;克隆;序列分析【作者】李公美;李茂辉;闫金明;李玉梅;刘可越;钱爱东【作者单位】吉林农业大学动物科技学院,长春 130118【正文语种】中文【中图分类】Q785;S835干扰素（Interferon，IFN）是一种干扰病毒繁殖的免疫活性细胞因子［1］，其中α 干扰素（IFN－α）可抑制感染细胞中病毒mRNA的翻译，并促使病毒mRNA降解，能提高细胞表面MHCⅠ类分子的表达水平，有助于向T细胞递呈抗原，引起靶细胞的溶解，并可增强 NK 细胞对病毒的杀伤能力［2］。

茶花鸡2号IFN-α基因克隆及生物信息学分析刘琛;何永江;豆腾飞;杨明华;潘洪彬;赵素梅;李永能;黄英【期刊名称】《中国畜牧杂志》【年(卷),期】2024(60)1【摘要】本研究旨在克隆茶花鸡2号α干扰素基因(IFN-α)CDS区序列并进行生物信息学分析,为后续研究IFN-α基因对茶花鸡2号免疫功能的影响提供参考。

以茶花鸡2号为实验对象设计IFN-α引物,提取总RNA,反转录PCR扩增并克隆其编码区序列,进行生物信息学分析。

结果显示茶花鸡2号IFN-α基因CDS序列全长582 bp,IFN-α蛋白等电点5.05,平均疏水指数-0.514,为酸性亲水蛋白,且存在信号肽和1个跨膜区,主要定位于细胞核。

IFN-α蛋白被4个N糖基化位点、5个O糖基化位点和20个磷酸化位点修饰,主要由α-螺旋与无规卷曲构成。

茶花鸡2号与固始鸡、海兰鸡、惠阳胡须鸡、罗曼鸡和乌骨鸡的氨基酸同源性分别为95.9%、97.9%、97.9%、97.9%和95.9%。

IFN-α蛋白与IRF7、IFNAR1、IFNAR2和IFNK等蛋白存在互作关系。

本研究结果可为进一步探讨IFN-α基因在茶花鸡2号病毒疾病防治中的作用提供理论依据。

【总页数】6页(P217-222)【作者】刘琛;何永江;豆腾飞;杨明华;潘洪彬;赵素梅;李永能;黄英【作者单位】云南农业大学动物科学技术学院/云南省动物营养与饲料重点实验室;云南农业大学组织部【正文语种】中文【中图分类】S831.2【相关文献】1.山茶花翻译控制肿瘤蛋白CjTCTP基因的电子克隆及生物信息学分析2.鸡十二指肠、法氏囊IFN-α基因的克隆和生物信息学分析3.合作猪IFN-β基因编码区克隆及生物信息学分析4.合作猪IFN-ε基因克隆及生物信息学分析5.鸡新城疫Ⅰ系疫苗诱导鸡胚IFN-γ基因转录及cDNA克隆的研究因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

鹅卵泡抑制素α亚基的克隆及原核表达研究
王润霞;吕文发
【期刊名称】《黑龙江动物繁殖》
【年(卷),期】2007(015)002
【摘要】利用RT-PCR技术从鹅的卵泡颗粒细胞中得到抑制素的总RNA,根据Genbank中家禽的抑制素基因的序列设计引物,扩增克隆抑制素α亚基片段,构建出克隆和表达载体,将鉴定为阳性的原核表达载体质粒(IB-pET28a-BL21),经IPTG 诱导4.5 h后收集菌体,经电泳可见约1.4 kD的蛋白带.
【总页数】3页(P8-9,17)
【作者】王润霞;吕文发
【作者单位】黑龙江畜牧兽医职业学院,黑龙江,双城,150100;吉林农业大学动物科技学院
【正文语种】中文
【中图分类】S8
【相关文献】
1.溆浦鹅卵泡抑制素α亚基克隆载体构建 [J], 赵静;吕文发;单雪松;王恒
2.猪抑制素α亚基基因克隆及其原核表达 [J], 陈倩;黎敏义;刘颖;施振旦
3.福建黄兔卵泡抑制素βA亚基cDNA的克隆与序列分析 [J], 桑雷;孙世坤;陈冬金;陈岩峰;谢喜平
4.溆浦鹅卵泡抑制素α亚基编码区cDNA克隆及其原核表达 [J], 吕文发;赵静;单雪松;王恒;吴伟
5.仙居鸡抑制素α亚基成熟区的cDNA克隆及其在卵泡中表达的研究 [J], 傅衍;牛冬;阮晖;余旭平;陈功;何国庆;杨培新
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犬的α干扰素CaIFN-a的生物信息学分析摘要：犬的α干扰素（CaIFN- α)具有广谱抗病毒、抗肿瘤、抑制细胞增殖以及提高免疫功能等作用，有很高的研究应用价值。

利用生物信息学的方法与手段对犬的α干扰素基因序列进行分析对重组干扰素的基因设计，蛋白大量表达乃至临床应用均具有极大地意义。

关键词：生物信息，犬的α干扰素；序列分析Bioinformatics analysis of CaIFN-aAbstract：Dogs α interferon (CaIFN-α) has broad-spectrum anti-viral, anti-tumor, inhibition of cell proliferation and enhance immune function, has high research value. Bioinformatics methods and means of interferon-α gene sequences were analyzed dogs genetically engineered recombinant interferon, a large number of protein even have clinical applications are greatly significant.Keywords: Bioinformatics；CaIFN- α; Sequence analysis前言：干扰素（Interferon,IFN）是人和动物细胞受到病毒感染，或者核酸、细菌内毒素、促细胞分裂素等干扰素诱生剂刺激后，由巨噬细胞、淋巴细胞等产生的一种高活性、多功能糖蛋白。

在正常机体的脾、肝、肾、外周血淋巴细胞和骨髓中都可以检出。

具有广谱抗病毒、抗肿瘤和增强免疫等多生物活性，为现今一种最理想的抗病毒生物制剂。

干扰素分为两大类：Ⅰ型和Ⅱ型[1]。

Ⅰ型干扰素由白细胞产生，主要功能为抗病毒、免疫激活和细胞生长调节。

猪α干扰素基因克隆、进化及表达特性分析霍海龙;陈园园;王配;刘丽仙;王淑燕;张永云;王锐;钱林东;霍金龙【摘要】为深入研究α干扰素在猪体内的调节和功能,本研究以猪为实验动物,通过RT-PCR扩增得到α干扰素基因全长编码区序列,提交GenBank数据库,获得登录号为“JQ839262”.生物信息学分析显示,该基因编码189个氨基酸,预测蛋白分子量为21.32 ku,等电点为6.37.蛋白质结构分析得出,IFN-α存在1个保守域,无跨膜结构,存在信号肽.疏水性分析显示其N端疏水,C端亲水.亚细胞定位显示,该蛋白分泌到细胞周质的概率为92.2％.系统进化分析表明,猪与牛、山羊的亲缘关系较近.同时通过荧光定量PCR法检测了α干扰素基因mRNA在猪13个组织中的表达量,发现在皮肤、肺、肌肉、心、脾中表达量较高.本研究为进一步研究猪α干扰素基因的表达调控奠定研究基础.【期刊名称】《云南农业大学学报》【年(卷),期】2015(030)003【总页数】7页(P382-388)【关键词】α干扰素基因;荧光定量PCR;序列分析;组织表达【作者】霍海龙;陈园园;王配;刘丽仙;王淑燕;张永云;王锐;钱林东;霍金龙【作者单位】云南农业职业技术学院畜牧兽医系,云南昆明650031;云南农业大学动物科学技术学院,云南昆明650201;云南农业大学动物科学技术学院,云南昆明650201;云南农业职业技术学院畜牧兽医系,云南昆明650031;云南农业大学动物科学技术学院,云南昆明650201;云南农业大学农科专业基础实验教学示范中心,云南昆明650201;云南农业职业技术学院畜牧兽医系,云南昆明650031;云南农业职业技术学院畜牧兽医系,云南昆明650031;云南农业大学动物科学技术学院,云南昆明650201【正文语种】中文【中图分类】S828.2干扰素根据产生干扰素细胞的来源、理化性质及生物学活性可以分为2种类型：Ⅰ型和Ⅱ型。

猪α干扰素基因的克隆、原核表达及生物学活性鉴定夏俊保;赵俊;汤仁树;崔寰;陈伟;王明丽【期刊名称】《安徽医科大学学报》【年(卷),期】2009(044)001【摘要】目的构建稳定、高效表达的重组猪α干扰紊(rpoIFN-α)大肠杆菌表达菌株,并纯化鉴定该菌株表达的目的蛋白,进行生物学活性检测.方法提取猪肝脏细胞基因组DNA,PCR扩增猪α干扰素(poIFN-α)基因,克隆到pMD18-T载体上,测序鉴定后再亚克隆到pGEX-5X-1载体上,转化入E.coli BL21中后得到表达菌株,用IPTG诱导表达,收集的菌体超声破碎后取上清得粗制蛋白,用GST亲和层析法进行纯化,产物用Western blot进行鉴定,并在Hep-2/VSV系统上滴定效价.结果重组质粒pGEX-5X-1/polFN-α经过EcoR 1和Xho Ⅰ限制性酶切后可见501 bp的目的片段,提取质粒测序鉴定,结果与GeneBank中的序列一致.转化入E. coli BL21中32℃条件下经IPTG诱导5 h,提取总蛋白,SDS-PAGE检测显示带有GST标记的rpoIFN-α能高效表达,分子量约45 ku,可溶性rpoIFN-α约占菌体蛋白的0.35,Western-blot鉴定显示有特异性条带.效价滴定结果表明该rpoIFN-α具有抗病毒活性,纯化后效价为7.5×106 IU/ml,比活性达到1.1×107IU/mg.结论成功克隆了polFN-α基因,并可在大肠杆菌中高效表达具有抗病毒活性的rpoIFN-α.【总页数】4页(P53-56)【作者】夏俊保;赵俊;汤仁树;崔寰;陈伟;王明丽【作者单位】安徽医科大学微生物学教研室,合肥230032;安徽医科大学微生物学教研室,合肥230032;安徽医科大学微生物学教研室,合肥230032;安徽医科大学微生物学教研室,合肥230032;安徽医科大学微生物学教研室,合肥230032;安徽医科大学微生物学教研室,合肥230032【正文语种】中文【中图分类】R978.7;R394-3;R329.24;R378.21【相关文献】1.鸭白细胞介素-2基因克隆、原核表达及生物学活性检测 [J], 张欣;崔敏;房红莹;贺东生;罗满林2.鸡α干扰素基因的克隆、原核表达及抗病毒活性测定 [J], 陈红英;宋凌云;崔保安;胡功政;贾艳艳;郭显坡3.猪γ-干扰素基因的克隆原核表达及抗病毒活性检测 [J], 张瑞华;刘珍;刘春凌;李春红4.猪α干扰素与白介素-18融合基因的克隆、原核表达及其抗病毒活性的初步研究[J], 张盼盼;何静;康银峰;向斌;任涛5.梅山猪β干扰素基因的克隆、原核表达及生物活性 [J], 彭贵青;陈焕春;钱平因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

抗鹅α-干扰素单链抗体基因扩增与表达姚志兰;邓祖丽颖;傅宏庆;黄平;江明香;刘永鑫;王永娟【摘要】为制备抗鹅α-干扰素的单链抗体,以抗鹅α-干扰素的杂交瘤细胞株总RNA为模板,RT-PCR法扩增鹅α-干扰素的抗体轻、重链基因,再采用SOE-PCR法,以编码柔性多肽(Gly4Ser)3为接头,组装出完整的鹅α-干扰素的单链抗体可变区片段(ScFυ)基因,并将ScFv基因克隆到pGEMT-Easy载体中进行测序分析,将测序正确的ScFυ基因片段克隆入pET-30a载体中进行诱导表达.结果显示,成功组装了ScFv基因,其全长为726 bp,为VH-Linker-VL结构,其中VH长357 bp、VL长324 bp,成功表达了ScFv蛋白,大小为27 ku.【期刊名称】《河南农业科学》【年(卷),期】2016(045)008【总页数】4页(P136-139)【关键词】鹅;α-干扰素;单链抗体;测序;表达【作者】姚志兰;邓祖丽颖;傅宏庆;黄平;江明香;刘永鑫;王永娟【作者单位】江苏农牧科技职业学院江苏省兽用生物制药高技术研究重点实验室,江苏泰州225300;郑州幼儿师范学校,河南郑州450000;江苏农牧科技职业学院江苏省兽用生物制药高技术研究重点实验室,江苏泰州225300;湖州市安吉县畜牧兽医局,浙江安吉313000;安吉以琳生物科技有限公司,浙江湖州313000;阜宁县鑫永生态饲养场,江苏阜宁224400;江苏农牧科技职业学院江苏省兽用生物制药高技术研究重点实验室,江苏泰州225300【正文语种】中文【中图分类】S852.4鹅α-干扰素属于细胞因子家族，具有加强NK细胞杀伤力、抑制细胞增殖、抑制病毒复制、增强MHC Ⅰ 类和MHC Ⅱ 类分子表达的功能[1]。

定量检测机体内产生的干扰素，可以了解机体针对病原的免疫状态。

常用于干扰素水平检测的方法主要有微生物法、仪器分析法和免疫分析法。

免疫分析法具有操作简便快速、成本低、灵敏度较高、分析样本量大的优点。