菌落总数与大肠菌群数测定

菌落总数及大肠菌群的测定一、菌落总数的测定1.准备工作：1.1先将所有仪器用报纸包好，所需药品配置好，放入121℃灭菌锅灭菌15min分钟1.1微检室提前开好紫外线灯杀菌30分钟以上。

1.2把灭好菌的培养基加热溶解，放置50℃的水浴锅恒温备用2.样品处理：先用酒精对产品外袋消毒，然后打开放入放入研钵中压碎或用剪刀剪碎（注：手部接触的部分要丢弃）3.称取25ɡ样品于225ml生理盐水中，摇匀生理盐水中，摇匀。

各吸1ml至两个培养皿中，倒入培养琼脂，转动平板混匀。

4.待琼脂凝固后放翻转平皿，放入36±1℃无菌培养箱培养48小时。

二、大肠菌群的测定：1.称取25ɡ处理好的样品于225ml生理盐水中，摇匀。

各吸取10ml至3根月桂基硫酸盐胰蛋白（LST）肉汤双料管中，再各吸取1ml至3根月桂基硫酸盐胰蛋白（LST）肉汤单料管和9ml生理盐水中，把试管中样液和生理盐水摇匀，用另一支移液管分别吸取1ml至另外3根单料管中。

2.把试管塞好放入36±1℃无菌培养箱培养24小时，观察导管内是否有气泡产生，如未产气则继续培养至48小时，不产气者为阴性，产气者进行复发酵实验。

3.复发酵实验：用接种环从所有48小时内发酵产气的LST肉汤管中分别取1环，移种于煌绿乳糖胆盐（BGLB）肉汤管中，36±1℃培养48小时，观察是否产气，产气者为大肠菌群阳性。

4.大肠菌群最可能（MPN）的报告根据大肠菌群阳性管数，检索MPN表报告每克（或毫升）样品中大肠杆菌的MPN 值。

（1）营养琼脂的配置：称取23.5g于1L蒸馏水中，加热沸腾至完全溶解，分装于500ml锥形瓶中，1瓶大约装350ml，121℃高压灭菌15分钟。

（2）月桂基硫酸盐胰蛋白（LST）肉汤双料管配置：称取17.8g于300ml蒸馏水中，加热沸腾至完全溶解，分装于有倒立发酵管的试管中，每管10ml，121℃高压灭菌15分钟。

（注：单料其他成分不变，水分加倍）（3）煌绿乳糖胆盐（BGLB）肉汤配置：称取40g于1L蒸馏水中，热沸腾至完全溶解，分装于有倒立发酵管的试管中，每管10ml，121℃高压灭菌15分钟。

菌落总数和大肠菌群测定（固体样品）药品：1、平板计数琼脂2、月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤（LST）3、煌绿乳糖胆盐肉汤（BGLB）4、氯化钠设备材料：烧杯、三角瓶、广口瓶、培养皿、刻度吸管、倒气管、玻璃棒、试管、硅胶塞、洗耳球、棉花、布或报纸等。

一、准备工作（指导书是按一个样品所需物品准备的，实验室可按样品量增加）1、平板计数琼脂培养基准备----用于菌落总数测定将三角瓶放在电子称上，去皮，按平板计数琼脂使用说明称量，加200ml蒸馏水搅拌，放电炉上煮沸加热煮沸，充分溶解，盖上硅胶塞，用报纸或布包好，再用橡皮筋扎紧。

2、月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤----用于大肠菌群测定（a）将烧杯放在电子称上，去皮，按使用说明称量，加100ml蒸馏水搅拌，放电炉上煮沸，充分溶解。

（b）用10ml（毫升）的吸管分装到9支（18*180规格）试管中，每支试管加10ml的月桂基溶液LST （合计90毫升）。

（c）9支试管分别放入倒气管（开口向下），排气，盖上硅胶塞。

3、0.85%的生理盐水----用于样品稀释将广口瓶去皮，称取氯化钠1.91g加225ml蒸馏水，摇匀，用报纸或布包好，再用橡皮筋扎紧；同样配制第二瓶。

4、准备2个空试管，盖上硅胶塞----用于样品稀释。

5、准备8个培养皿，用布包扎好。

6、准备至少3支5ml和1支10ml带有刻度的吸管，用布包扎好（顶部可用棉球塞住，防止吸液时，液体不慎吸入洗耳球）。

7、准备操作的工具：剪刀1把、镊子1个、勺子等打开产品包装所需工具，用布包扎好。

二、使用灭菌锅灭菌1、检查灭菌锅底部加热管水位是否正常，水位要高过加热丝。

2、将上面准备好的7步骤物品逐一放入锅内，注意：滴定管吸口向下，有棉球的向上。

3、盖上火菌锅盖子时，将排气管插到排气口内，注意从对角线开始拧紧螺丝，将排气阀打开（安全阀始终关闭），通电后，待排气阀放气3分钟后（锅内冷空气已经排完），关闭排气阀。

4、查看灭菌锅的压力表，当温度升到121°，压力升到0.1MP（兆帕）时，灭菌维持15分钟后（温度和压力不能过高或者过低），断电自然冷却到接近“ 0”度后，慢慢打开排气阀，再对角拧开灭菌锅。

中国药典中对微生物的测定
中国药典对微生物的测定包括以下方面：
1. 菌落总数测定：该方法用于测定制剂和原料药中的菌落总数。

通过将样品接种在特定的培养基上，培养一定时间后，进行菌落计数，计算出单位重量或单位体积中的菌落总数。

2. 大肠菌群测定：该方法用于测定制剂和原料药中的大肠菌群的数量。

通过将样品接种在含有特定抑制剂的培养基上，培养一定时间后，进行菌落计数，计算出单位重量或单位体积中的大肠菌群数量。

3. 霉菌测定：该方法用于测定制剂和原料药中的霉菌的数量。

通过将样品接种在含有特定抑制剂的培养基上，培养一定时间后，进行菌落计数，计算出单位重量或单位体积中的霉菌数量。

4. 周赤霉糖的测定：该方法用于测定制剂和原料药中的周赤霉糖的含量。

通过将样品提取，使用特定试剂反应后，测定反应产物的吸光度，通过比对标准曲线计算出样品中的周赤霉糖含量。

5. 大肠杆菌测定：该方法用于测定制剂和原料药中的大肠杆菌的数量。

通过将样品的提取液接种在含有特定抑制剂的培养基上，培养一定时间后，进行菌落计数，计算出单位重量或单位体积中的大肠杆菌数量。

以上是中国药典对微生物测定的一些常见方法，用于评估药品和药物原料的微生物质量。

摘要：菌落总数和大肠菌群是食品中安全性指标，针对食品微生物检测中茵落总数结果很高但大肠菌群很低进行分析。

关键词：菌落总数；大肠菌群；食品我国的国家标准绝大多数食品都制订了菌落总数和大肠菌群的指标，并对其数量做了详细的规定，菌落总数和大肠菌群是食品中安全性指标，是影响产品质量问题的常见指标，常常受到生产企业和消费者的高度父注，菌落总数的报告单位是cfu／g (ml )，大肠菌群的报告位是mpn／100g ( ml)，那么cfu，mpn是什么含义呢，有的食品微生物检测中菌落总数结果很高但大肠菌群很低，有关企业对此不太理解，现在将做一下解释说明。

L菌落总数(cfu)菌落总数是用来判定食品在被加工过程中被污染的程度及卫生质量的重要指标，食品的生产加工过程叶中，卫生质量的高低首先决定食品原料的来源．原料的卫生与否，是否被污染过，这是根本原因，其次是环境卫生水平的高低，再次就是加工人员和加工工具的卫生状况，要保证食品卫生安全就必须保证所加工的原料来源，环境，加工工具和人员符合卫生标准，但是如何判定食品生产加工过程中是否符合卫生要求，以便对被检产品做出一个科学的评价，菌落总数的多少在一定程度上反映出卫生质量的优劣，也可以用这一方法观察出食品中细菌的繁殖动态，以便于对被捡样品进行卫生评价时提供科学依据。

菌落总数中的菌落英文意思是(colony)，定义为细菌和其他几种做微生物在固体培养基上生长繁殖而形成的能被肉眼所识别的生长物，它是由数以万计的相同细菌聚集而成的，故又有细菌集落之称。

各种细菌的菌落各自具有一定的特征，按其特征的不同可以在某种程度上鉴别某种细菌，为卫生检验提供依据，菌落总数是指在被检样品的单位重量( g )．体积(m1) 或表面积(clni) 内所含能于某种固体培养基上在一定条件下培养后所生成的细菌集落的总数。

其培养的原理是以检样在被稀释到一定体积后，吸取一定量的检样，检样中的细菌细胞和培养基混合后，每个细菌细胞部形成一个肉眼可见的菌落的假设为基础的．由于检验中采用的是37℃有氧条件下培养。

菌落总数测定与大肠菌群计数准备工作1、5个平板培养明（用报纸包封好）一个空白，其他4个就两个稀释度分别做两个平板2、6条1ml吸管（用报纸包封好）吸管多包几条都没问题3、称取3.3g营养琼脂加100ml蒸馏水(加热煮沸制成液)《用500ml凸瓶装，用棉花蜜封瓶口，加报纸包蜜》以上三步就是菌落总数测定的准备工作4、称取0.85g氯化钠加100ml蒸馏水（摇匀制成生理盐水）《用500ml凸瓶装，用棉花蜜封瓶口，加报纸包蜜》5、（装有9ml盐水2支小试管，多放一支预做空白）做样品稀释（装有9ml肉汤9支小试管，多放一支预做空白）做三个稀释度，每个稀释度做三支小试管6、称取?克LST肉汤100ml蒸馏水（摇匀分装下以下9支小试管，每个9ml）9支小试管要倒放小试管（装有9ml LST肉汤1：10 / 1：100 / 1：1000）每个稀释度做三支小试管7、量斗、量杯(以上全部放入高压锅消毒121~126℃约15~30分)8、5g样品菌落总数（以下步骤为已消毒好，要进入已消毒的室内及消毒台操作）5g样品加入45ml 生理盐水配成1：10的样品A试剂↓在其中一支装有9ml生理的小试管中加入1ml A试剂配成1：100的样品B试剂↓↓在其中一支装有9ml生理的小试管中加入1ml B试剂配成1：1000的样品C试剂↓（以下要在洒精灯下操作要在消毒台操作菌落总数我们一般做两个稀释度在A管中抽取2次，每次1ml，分别至于两个已经倒好营养琼脂的培养基中在B管中抽取2次，每次1ml，分别至于两个已经倒好营养琼脂的培养基中倒一个空白营养培养基，做空白对照大肠菌群我们做三个稀释度在A管中抽取三次，每次1ml，分别至于3支已经消毒好的9mlLST肉汤小试管中在B管中抽取三次，每次1ml，分别至于3支已经消毒好的9mlLST肉汤小试管在C管中抽取三次，每次1ml，分别至于3支已经消毒好的9mlLST肉汤小试管中放入培养箱中36℃48小时培养睇结果。

食品微生物学检测中菌落总数和大肠菌群检验的质量控制摘要：目的在对食品进行微生物学检测的时候菌落总数以及大肠菌群两项指标容易出现相应的检测问题，为了能够保证检测结果的科学性和正确性，就需要制定相关的质量控制措施，这样才能保证食品的安全。

本文阐述了两项指标检测的基本要求，并在此基础上对两个指标的控制分别进行了论述，以期能够加深人们对这两个指标质量控制的了解。

关键词：食品；菌落总数；大肠菌群；基本要求食品从生产到销售需要经过各个环节，在这些环节中很可能受到微生物的污染，从而造成腐败、产生毒性，为了能够保证人们能够吃到健康的食品，就需要对食品中菌落总数以及大肠菌群作为其主要的检测项目。

只有对其检测进行严格的把控，才能保证食品的安全，才能确保消费者的健康，才能更好地促进经济的发展。

1 质量控制的基本要求要确保对菌落总数和大肠菌群的检验能够更加准确，就需要对一些基本要求进行确保。

1.1 检验人员为了能够对食品的菌落总数和大肠菌群进行有效的检验，就需要检验人员具备相关的技术知识，这样才能确保检测结构更加准确。

作为食品的检验，首先就要求检验人员能够对食品微生物学理念以及相关的检验技术能够有比较深入的了解，并且在其参加工作之前需要对其进行必要的考核。

其次就是要了解相关的法律法规，我国的食品法对相关的标准有明确的规定，只有了解这些才能有更好地执行检验。

最后就是要了解计量学的内容，因为检验工作十分精细，只有了解计量学的基本知识才能更好地进行实验。

1.2 仪器设备为了能够保证检验能够正常的进行，需要准备好必要的仪器和设备，这样才能为检验的进行提供必要的基础。

1.3 试剂与培养基对菌落总数和大肠菌群的检验需要利用必要的培养基、染色剂以及一些必备的试剂，并严格按照相关的标准进行相关的操作。

1.4 检验环境由于空气中本身就存在着细菌和微生物，为了能够对菌落总数和大肠菌群进行有效的检测，需要在无菌室进行检验。

为了达到理想的检测效果，工作人员应该进行良好的卫生处理，这样才能达到很好的效果。

试验九食品中细菌菌落总数及大肠菌群的检测［试验目的］1、了解我国规定的食品质量与细菌菌落总数和大肠菌群数量的重要关系。

2、把握食品细中细菌菌落总数及大肠菌群的检测方法。

［试验原理］菌落总数依据稀释平板技术法检测每mL/g检样在牛肉音蛋白陈琼脂培育基上，经373 24h 培育后，所生长的细菌菌落的总数。

它所反映的是检样中的活菌数，细菌数越多，说明污染程度越大，这项指标可作为判定待测样品被污染的程度。

大肠菌群数是在lOOmL（g）食品中（或1000 mL水中）大肠菌群最近似值。

它是指肠杆菌科中的4个属，即埃希氏菌属、柠檬酸杆菌属、克雷伯氏菌属和肠杆菌属。

这一菌群致病力不强，具有共同特点：好氧和兼性厌氧、革兰氏染色阴性反应、无芽抱杆菌、37℃培育24-48h能发酵乳糖产酸产气。

大肠菌群在人畜肠道内含最最多，可随排泄物进入水源或污染食品。

国际公认以大肠菌群的存在作为粪便污染指标。

这项指标可判定待测样品有无被粪便污染及污染的程度。

［试验材料］1、检样牛乳（饮料、酱油）2、培育基一般养分琼脂平板、单料乳糖胆盐发酵培育基、乳糖发酵培育基、EMB平板3、仪器和其他物品恒温箱、水浴锅、无菌培育皿、无菌吸管、无菌盐水瓶（内装225 mL无菌生理盐水）、无菌试管（内装9 mL无菌生理盐水）、灭菌剪刀、镜子等［试验内容］1、细菌菌落总数的测定（1）制备样品及样品稀释取待测样品（牛乳、酱油）一瓶，用点燃的酒精棉球烧灼瓶口，若是塑料瓶则用75%的酒精棉球擦拭灭菌。

在无菌条件下取样25 mL放入内装225 mL生理盐水的瓶中，充分混匀，制成10-1的稀释液。

用1 mL无菌吸管吸取10-1稀释液1mL,沿管壁缓缓注入装有9mL无菌生理盐水的试管中（留意，吸管尖端不要触及管内稀释液），振物试管，混合匀称，制成10-2的稀释液。

另取1mL无菌吸管，按上述操作方法做成10-3稀释液。

每次稀释，换用一支无菌吸管，共做10-1、10-2、10-3三个稀释度，分别含样品0.1mL, 0.01mL, 0.001 mLo（2）培育将上面已做好的样品稀释液充分振荡，然后分别吸取该稀释度的稀释液1mL至标有相应稀释度的无菌培育皿中，每个稀释度做2个培育皿。