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大肠菌群是经常用来衡量食品卫生情况的重要指标，绝大部分食品都会要求检测的项目。
在食品微生物实验室里，大肠菌群和菌落总数的检测频次应该是最高的，但检测过程中总会有一些小问题困扰着大家，以下来讲解一下大肠菌群平板计数法的注意事项。
方法选择相比于MPN计数法，平板计数法更适用于大肠菌群含量较高的食品。
但大肠菌群多少算是含量较高呢国标里没有明确规定，但通常认为，产品大肠菌群以100CFU/g（mL）为界，超过这个含量一般认为是含量较高。
但具体什么时候选用平板计数法进行大肠菌群的检测，大部分情况还是要看你的产品执行的标准。
假如产品标准要求大肠菌群含量的单位为CFU/g（mL），那必须选用平板计数法。
若是/g(mL)或者MPN/100g(mL)，就应选择MPN计数法，MPN法具体选用哪版国标此处不再赘述。
因此，根据自己产品的情况选择适当的检测方法。
培养基的要求平板计数法使用的培养基为结晶紫中性胆盐琼脂培养基，简称VRBA。
无论是国标，还是培养基的使用说明中都明确表示，VRBA是不需要进行灭菌的，煮沸2min即可使用。
特地点出这一点是因为很多朋友都在问VRBA的灭菌条件，对不灭菌的培养基不信任，害怕出现检测异常，那是因为这些小伙伴们对其中的原理不清楚。
大肠菌群的定义是在一定培养条件下能够在发酵乳糖、产酸产气的需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌，因此大肠菌群是不能形成芽孢的，在VRBA培养基煮沸的过程中，即使有大肠菌群存在也会被杀灭，所以从培养基带入污染的可能性是没有的。
当然盛装培养基的容器是需要进行灭菌的，以免容器引入污染。
另外，VRBA是一种选择性的培养基，含有的结晶紫对革兰氏阳性菌有比较强的抑制作用而对革兰氏阴性菌几乎没有作用，而且平板培养产生的菌落还需要进行复发酵的验证，因此VRBA培养基就不需要进行灭菌了。
但值得注意的是，VRBA需要现配现用，配制出的培养基应当在3h之内使用完毕。
稀释度的确定国标中要求选择2-3个适宜的连续稀释度。
大肠菌裙检测是一项非常重要的微生物检测工作，它可以帮助我们了解环境和食品中是否存在大肠菌裙，从而保证人们的健康安全。
在大肠菌裙检测中，平板计数法是一种常用的检测方法。
下面将介绍大肠菌裙检测中平板计数法的主要操作要领。
1.准备工作在进行大肠菌裙检测之前，需要准备相应的实验器材和培养基。
实验器材包括平板计数仪、移液器、无菌培养皿等。
培养基一般选择大肠埃希氏菌（EC）培养基。
2.样品处理将待测样品取适量放入无菌容器中，进行适当的稀释。
这一步要确保样品的稀释倍数适中，以保证后续的计数结果准确。
3.接种和培养取一定量的处理过的样品，在无菌工作台上均匀涂抹于含有适量培养基的培养皿上，然后进行培养。
培养条件一般为37摄氏度，培养时间为24小时。
培养后会形成菌落，这些菌落代表了原始样品中的细菌数量。
4.计数和记录在培养后，利用平板计数仪对菌落进行计数。
计数的时候需要注意避免重复计数同一菌落，保证计数准确。
需要记录计数结果，包括菌落数量和相应的单位。
5.结果分析根据计数结果，可以对原始样品中的大肠菌裙数量进行估算。
可以通过对对照组和样品组的比较来判断样品中大肠菌裙的数量是否合格。
大肠菌裙检测中平板计数法的主要操作要领就是以上几点。
通过严格按照这些要领进行操作，可以确保检测结果的准确性和可靠性。
在进行操作过程中，还需要遵守无菌操作规范，确保实验过程中不受外界污染。
希望大家在进行大肠菌裙检测时能够严格按照操作要领进行，保证测试结果的准确性，从而更好地保障人们的健康安全。
大肠菌裙检测中的平板计数法是一种经典的微生物计数方法，它主要用于测定食品、饮用水、环境等样品中大肠菌裙的数量。
在这个过程中，我们需要注意几个关键的环节，来保证实验的准确性和结果的可靠性。
在准备工作环节，我们需要保证实验器材和培养基的质量。
实验器材一定要经过严格的消毒和清洁，以免外来细菌的污染影响实验结果。
培养基的选用也尤为重要，要选择与待测细菌的生长要求相适应的培养基，以保证细菌在培养基上的正常生长。
大肠菌群计数实验报告一、实验目的大肠菌群是一群在一定培养条件下能发酵乳糖、产酸产气的需氧和兼性厌氧革兰氏阴性无芽孢杆菌。
本实验旨在通过特定的检测方法对样品中的大肠菌群进行计数，以评估样品的卫生质量和安全性。
二、实验原理大肠菌群在特定的培养基和培养条件下会生长并表现出特定的生化特征。
通常使用乳糖胆盐发酵管进行初发酵，若产酸产气，则表明可能存在大肠菌群。
随后将初发酵阳性的样品转接至伊红美蓝琼脂平板进行分离培养，典型的大肠菌群菌落具有特定的形态特征。
最后通过革兰氏染色和证实试验，确认大肠菌群的存在，并根据阳性管数采用相应的计数方法得出样品中的大肠菌群数量。
三、实验材料与设备1、样品：＿____2、培养基和试剂乳糖胆盐发酵管伊红美蓝琼脂平板革兰氏染色液（结晶紫染液、碘液、95%乙醇、沙黄染液）生理盐水3、仪器设备恒温培养箱无菌移液管（1ml、10ml）无菌培养皿显微镜四、实验步骤1、样品处理称取或吸取一定量的样品，加入适量的生理盐水，制成 1:10 的均匀稀释液。
根据样品的污染程度，进行适当的梯度稀释。
2、初发酵试验用无菌移液管吸取 1ml 稀释液，分别注入到 3 支乳糖胆盐发酵管中。
置于 36℃±1℃恒温培养箱中培养 24h±2h，观察产酸产气情况。
3、分离培养对初发酵阳性的发酵管，用接种环挑取培养物，在伊红美蓝琼脂平板上进行划线分离。
置于 36℃±1℃恒温培养箱中培养 18h～24h。
4、复发酵试验挑取伊红美蓝琼脂平板上可疑的大肠菌群菌落，进行革兰氏染色和证实试验。
革兰氏染色：将菌落涂片、固定，经过结晶紫染色、碘液媒染、乙醇脱色、沙黄复染后，在显微镜下观察细菌的形态和革兰氏染色反应。
证实试验：将可疑菌落接种到乳糖发酵管中，置于 36℃±1℃恒温培养箱中培养 24h±2h，观察产酸产气情况。
5、结果计算根据初发酵阳性管数和复发酵证实的阳性管数，查阅相应的大肠菌群最可能数（MPN）检索表，得出样品中大肠菌群的 MPN 值。
大肠菌群平板计数法一、操作步骤1.样品的稀释2.选取2个～3个适宜的连续稀释度, 每个稀释度接种2个无菌平皿，每皿1 mL。
同时取1mL 生理盐水加入无菌平皿作空白对照。
3.及时将15 mL～20 mL冷至46 ℃的结晶紫中性红胆盐琼脂（VRBA）约倾注于每个平皿中。
小心旋转平皿，将培养基与样液充分混匀，待琼脂凝固后，再加3 mL～4 mLVRBA覆盖平板表层。
翻转平板，置于36 ℃±1 ℃培养18 h～24 h。
4.平板菌落数的选择选取菌落数在15 CFU～150 CFU 之间的平板，分别计数平板上出现的典型和可疑大肠菌群菌落。
典型菌落为紫红色，菌落周围有红色的胆盐沉淀环，菌落直径为0.5 mm 或更大。
5.证实试验从VRBA 平板上挑取10 个不同类型的典型和可疑菌落，分别移种于BGLB 肉汤管内，36 ℃±1 ℃培养24 h～48 h，观察产气情况。
凡BGLB 肉汤管产气，即可报告为大肠菌群阳性。
6.大肠菌群平板计数的报告经最后证实为大肠菌群阳性的试管比例乘以8.3中计数的平板菌落数，再乘以稀释倍数，即为每g（mL）样品中大肠菌群数。
例：10-4样品稀释液1mL，在VRBA平板上有100个典型和可疑菌落，挑取其中10个接种BGLB肉汤管，证实有6个阳性管，则该样品的大肠菌群数为：100×6/10×104/g（mL）=6.0×105CFU/g（mL） 2020年普通高等学校招生全国统一考试（山东模拟卷）语文一、现代文阅读（35分）（一）现代文阅读I（本题共5小题，19分）阅读下面的文字，完成1～5题。
材料一：《流浪地球》的票房奇迹，加上此前《三体》的热销，刘慈欣的作品影响巨大，但社会各界的评价却颇有两极分化之势。
刘慈欣的大多数作品都没有精巧的剧情或百转千回的人物感情，更多是直接甩出一个个宏大震撼的设定，靠设定本身为读者带来审美快感。
在他笔下，主人公与他人的情感联结不过是宇宙规律中很小的部分，和人类命运、宇宙洪荒相比，根本不值一提。
大肠菌群MPN计数【实验目的】通过本实验学习和掌握食品中大肠菌群计数的方法。
【实验原理】大肠菌群，即在一定培养条件下（37℃、24h之内）能发酵乳酸，产酸产气的需氧和兼性厌氧革兰氏阴性无芽孢杆菌。
主要包括大肠埃希杆菌、产气肠杆菌、枸橼酸盐杆菌和副大肠杆菌。
水中的病原微生物主要来自人和温血动物的分辨，但是水中的病原微生物分析难度大，对分析者也有危害，大肠菌群在水中生存时间与病原菌基本相同，而且在粪便中数量最多，检出技术上也较为方便，最适合充当水污染的卫生指标。
目前检测大肠菌群的标准分析方法是多管发酵法，以最可能数（most probable number，MPN）来表示检测结果。
MPN是基于泊松分布的一种间接计数法。
我国《生活饮用水卫生标准》规定：生活饮用水中大肠菌群数1L不能超过3个。
【设备和材料】除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：恒温培养箱：36℃±1℃冰箱：2℃～5℃天平：感量0.1g无菌吸管：1mL（具0.01mL刻度）、10mL（具0.1mL刻度）或微量移液器及吸头菌锥形瓶：容量500mLpH计或pH比色管或精密pH试纸菌落计数器【培养基和试剂】月桂基硫酸盐胰蛋白胨（Lauryl Sulfate Tryptose，LST）肉汤：见附录A 中A.1煌绿乳糖胆盐（Brilliant Green Lactose Bile，BGLB）肉汤：见附录A 中A.2 无菌生理盐水：见附录A 中A.3无菌1 mol/L NaOH：见附录A 中A.4无菌1 mol/L HCl：见附录A 中A.5【检验程序】【操作步骤】1 样品的稀释1.1 以无菌吸管吸取25 mL样品置盛有225 mL生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成1:10的样品匀液。
1.2 样品匀液的pH值应在6.5～7.5之间，必要时分别用1mol/L NaOH或1mol/L HCl调节。
大肠菌群平板计数限量标准1. 引言大肠菌群是一类存在于人体肠道中的细菌，其计数可以作为评估肠道菌群健康状态的重要指标。
为确保食品安全和公共卫生，制定一份大肠菌群平板计数限量标准具有重要意义。
2. 目的本标准的目的是通过设定大肠菌群平板计数的限量，以减少食品和饮用水中的大肠菌群污染，保障公众健康。
3. 定义3.1 大肠菌群：指在大肠中常见的一类细菌菌群。
3.2 平板计数：采用平板培养方法，通过计数可成满足一定生长条件的菌落形成单位，来确定大肠菌群数量。
4. 大肠菌群平板计数限量标准4.1 食品中的大肠菌群平板计数限量标准：4.1.1 食品类别 | 大肠菌群平板计数限量（单位：CFU/g）鲜肉类食品| ≤100熟肉或熟制品| ≤10生鲜水果蔬菜| ≤100加工水果蔬菜| ≤10食品类加工品| ≤104.1.2 大肠菌群的检验方法：采用标准的培养基和平板计数法，培养温度为37°C，培养时间为24-48小时。
4.2 饮用水中的大肠菌群平板计数限量标准：4.2.1 饮用水类别 | 大肠菌群平板计数限量（单位：CFU/mL）自来水| ≤10包装饮用水| ≤104.2.2 大肠菌群的检验方法：采用标准的培养基和平板计数法，培养温度为37°C，培养时间为24-48小时。
5. 检测与监管5.1 大肠菌群平板计数的检测应由具备相应技术与资质的实验室进行。
5.2 相关部门应定期进行食品和饮用水的大肠菌群平板计数检测，确保其符合本标准要求。
5.3 如超出限量标准，则需要采取相应措施，例如立即终止生产、销售或使用，并进行卫生处理等。
6. 结论本标准制定了食品和饮用水中大肠菌群平板计数的限量标准，旨在确保食品安全和公共卫生。
相关部门和实验室应积极采取措施，加强对大肠菌群平板计数的监管和检测，保障公众的健康与安全。
注：CFU - 菌落形成单位 (Colony Forming Unit)。
大肠菌群计数1 目的规范大肠菌群的检测流程，确保检测结果的准确。
2 范围2.1 本标准中第一法为大肠菌群MPN计数法,单位MPN/g（mL），适用样品如：设备清洁程度，员工手部工作服清洁程度，原材料中的黄原胶、蜂蜜等；第二法为大肠菌群平板计数法,单位CFU/g（mL），适用样品如：腐乳成品，蚝油，黄豆酱等。
具体方法选择以对应样品的内控标准或验收标准为准。
2.2 本标准适用于广东美味鲜调味食品有限公司及其子公司、分公司。
3 依据GB 4789.3-2016《食品安全国家标准食品微生物学检验大肠菌群计数》、GB 4789.1《食品安全国家标准食品微生物学检验总则》、GB/T 4789.22《食品卫生微生物学检验调味品检验》4 定义和原理4.1 定义:大肠菌群是在一定培养条件下能发酵乳糖、产酸产气的需氧和兼性厌氧革兰氏阴性无芽孢杆菌。
4.3第二法：大肠菌群平板计数法大肠菌群在固体培养基中发酵乳糖产酸，在指示剂的作用下形成可计数的红色或紫色，带有或不带有沉淀环的菌落。
5 培养基和试剂5.1月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤（LST）、5.2煌绿乳糖胆盐肉汤（BGLB）、5.31mol/L盐酸（HCl）、20%～30%碳酸钠（Na2CO3）、5.4磷酸盐缓冲液、5.5结晶紫中性红胆盐琼脂（VRBA）。
（以上培养基和试剂配置方法见瓶子上的说明和《微生物检验用试剂的配制》）6 设备和材料6.1均质器6.2电子天平（0.1g）6.3灭菌吸管10mL，具0.1mL刻度；6.4生化培养箱、恒温培养箱(36℃±1℃，46℃±1℃)6.5 PH计、PH比色管或精密PH试纸6.6超净工作台、冰箱4℃～8℃7 第一法：大肠菌群MPN计数法7.1 检验程序36℃±1℃ 48h ±2h36℃±1℃ 48h ±2h7.2 操作步骤7.2.1样品的稀释步骤参照《大肠菌群测定（GB/T 4789.3-2003乳糖胆盐检测法）》执行。
