补体、补体检测.

系统性红斑狼疮（SLE)•病因：•遗传•内分泌(雌激素（受体），催乳素、生长激素）•感染(麻疹、副伤寒、单纯疱疹、风疹、EB病毒等）•物理因素（紫外线等）•药物•免疫异常（BC功能亢进，TC失衡，CK表达异常，淋巴细胞凋亡异常）•致病机制：•机体产生大量抗细胞核样物质(DNA、RNA、核内可溶性蛋白）的抗体，形成大量IC，沉积于周身毛细血管，关节滑膜，心脏瓣膜等处，导致全身性损伤实验室检查•1.血常规：三系减少（RBC、WBC、PLT）•2.血沉：增快•3.毛细血管镜检查•4.免疫血清学检查：•狼疮细胞、类风湿因子、补体等补体检测•1.补体是什么？•2.为何要检测补体？•3.如何测？有哪些方法？第十八章补体的检测及补体参与的试验Contents第一部分 补体第二部分 补体的检测第一节 血清总补体活性测定第二节 单个补体成分的测定第三节 补体受体的测定第三部分 补体参与的试验掌握：补体的概念及其理化性质；血清总补体活性测定（CP-CH50）的实验原理；补体结合试验的原理。

熟悉：CP-CH50方法、结果判定及方法评价；单个补体成分测定。

了解：其他第一部分 补 体补体的发现1补体的生物学特性2补体系统的激活、调控3补体的生物学功能4补体与疾病的关系5Jules Bordet (1870-1961),Discoverer of Complement （ Nobel Prize for Physiology or Medicine in 1919）19世纪末，在发现抗体后不久，Bordet 通过霍乱弧菌溶菌实验发现，新鲜血清中存在一种不耐热的成分，可辅助特异性抗体介导的溶菌作用。

Ehrlich 同时独立发现了类似现象，他认为这种因子是抗体发挥溶细胞作用的必要补充条件，故将其命名为补体一、补体的发现正常豚鼠血清（溶菌）感染霍乱弧菌的豚鼠的血清霍乱弧菌菌液（溶菌）感染霍乱弧菌的豚鼠的血清56℃30分钟（凝集）（溶菌）（凝集）Presumptions:1. There is a component in the fresh serum that helps the antibody to lyse the bacteria.2. The chemical property of this component is not stable.3. This component is not antigen specific.补体（complement,C)：存在于人和动物血清、组织液和某些细胞上的一组与免疫有关，但无抗原特异性，激活后具有酶样活性的，不耐热的糖蛋白。

临床医学检验技士备考资料：溶血反应的检测试剂临床医学检验技士备考资料：溶血反应的检测试剂溶血反应的检测试剂(一)补体检测血清补体水平或补体活性时需要从受检者采血及分离血清。

做补体结合试验时多采用豚鼠血清作为实验用补体的来源。

因为补体在体外极易衰变，所以检测补体活性的血清标本和作为补体试剂的血清必须新鲜。

受检者一般做静脉采血，在动物可做心脏采血。

血清分离后应及时使用，最好在当日用完。

必须保存时采用小量分装的办法，置-70℃下可保存数月，避免反复冻融。

冻干制品可长期保存，但其活性都不同程度地比新鲜血清降低。

以豚鼠血清作补体来源时，应考虑到个体差异。

为了确保血清中补体的有效活性，必须取3只以上豚鼠的血清混合后使用。

(二)绵羊红细胞从绵羊颈静脉无菌采血，抽出血液后立即小心地注入放有璃珠的无菌干燥三角烧瓶中，充分旋摇15～20min，以除去纤维蛋白。

也可将羊血与等量或2倍量的'Alsever血液保存液混合，既有抗凝作用，又适于储存;分装后置4℃，可使用3周。

实验前，取适量抗凝血，加入8～10倍的生理盐水，轻轻混匀后2000r/min离心5min;弃上清，沉淀的红细胞用生理盐水再洗一次，这时上清为无色澄清，如显红色说明有溶血现象，应更换新鲜羊血;第三次用缓冲液洗涤，弃上清，取压积红细胞用缓冲液配制SRBC悬液，使用浓度一般为2%～5%。

为使红细胞浓度标准化，可吸取少量红细胞悬液，中入20～30倍的稀释液中，在542nm波长比浊，以吸光度为标准调整红细胞浓度。

(三)溶血素溶血素即抗绵羊红细胞抗体，多是以绵羊红细胞免疫家兔而得到兔抗血清。

一般没有必要进一步提纯抗体，但在试验前需先进行加热56℃30min或60℃3min以灭活补体。

由于补体溶血试验及补体结合试验均是比较精密的试验，其结果与溶血素的效价有关，所以试验需要滴定溶血素效价;在制备抗血清的过程中，于动物采血前和分离抗血清后也需要滴定溶血素效价。

1.溶血素稀释稀释溶血素时，要先对效价有个大概的估计，以便确定稀释度的范围。

第十九章补体检测及应用本章考点1.概述2.补体的活化途径3.有关补体测定的试验4.补体测定的应用补体是存在于人和脊椎动物正常新鲜血清及组织液中的一组具有酶样活性的球蛋白。

补体系统是补体加上其调节因子和相关膜蛋白共同组成一个反应系统，称为补体系统。

补体系统参与机体的抗感染及免疫调节，也可介导病理性反应，是体内重要的免疫系统和放大系统。

第一节补体系统的组成和性质一、命名根据l968年WH0命名委员会对补体系统进行了统一命名。

参与补体激活经典途径的固有成分按其被发现的先后顺序分别称Cl、C2、……C9。

Cl由Clq、Clr、Cls 三种亚单位组成；补体系统旁路激活途径及调节因子中另一些组分以英文大写字母表示，如B因子、D因子、P因子、H 因子等；补体调节成分多以其功能进行命名，如C1抑制物、C4结合蛋白、衰变加速因子等；补体活化后的裂解片段以该成分的符号后面加小写英文字母表示，如C3a、C3b等；具有酶活性的成分或复合物在其符号上划一横线表示，如、，灭活的补体片段在其符号前面加英文字母i表示，如iC3b等；对补体受体以其结合对象命名，如CLrR、C5Ar、对C3片段受体则用CRl、CR2……CR4表示。

二、分类构成补体系统包括30余种活性成分，按其性质和功能可以分为三大类：1.在体液中参与补体活化级联反应的各种固有成分；2.以可溶性形式或膜结合形式存在的各种补体调节蛋白；3.结合补体片段或调节补体生物效应的各种受体。

三、理化性质补体的大多数组分都是糖蛋白，且多属于β球蛋白，约占血清球蛋白总量的l0%；Clq，C8等为γ球蛋白；Cls，C9为α球蛋白。

正常血清中各组分的含量相差较大，C3含量最多，C2最低。

各种属动物间血中补体含量也不相同，豚鼠血清中含有丰富的补体，故实验室多采用豚鼠血作为补体来源。

补体性质不稳定，易受各种理化因素影响，如加热、机械振荡、酸碱、酒精等均可使其失活；在0℃～10℃下活性只保持3～4天，冷冻干燥可较长时间保持其活性；加热56℃30min可使血清中绝大部分补体组分丧失活性，称为灭活或灭能。

免疫补体测定实验报告实验目的了解免疫补体测定实验的原理和步骤，掌握实验操作技巧，培养动手能力和数据分析能力。

实验材料和仪器- 血清标本- 96孔板- 微量移液管和移液器- 酶标仪- 正常兔血清- 抗兔血清- 反应溶液：0.01M PBS（pH=7.4）- 辅助溶液：0.1%鸡蛋清溶液- 免疫附加试剂盒（ELISA Kit）实验步骤1. 准备工作：- 预热酶标板洗涤缓冲液至37C；- 将试剂盒中的标准品和待测标本复苏。

2. 实验操作：1. 将标准品、待测标本和对照血清按照试剂盒说明稀释，并加入96孔板中；2. 加入酶标试剂，混匀后孵育1小时；3. 倒掉孵育液，用洗涤缓冲液洗板3次，每次吸干；4. 加入显色液，避光孵育30分钟；5. 加入终止液，避光混匀。

3. 结果测定：- 使用酶标仪测量各孔的吸光度（OD值）；- 计算样本中的免疫补体含量。

结果分析根据实验测得的吸光度值和标准品的吸光度-浓度曲线，可得出待测标本中免疫补体的含量。

实验结果的相关系数越接近1，说明实验结果的可靠性越高。

误差分析实验中可能存在的误差源包括：- 操作误差：如加样本和试剂时的体积误差；- 实验条件误差：如温度、湿度不稳定等；- 仪器误差：如酶标仪的测量误差。

在实验中应注意操作规范，严格控制实验条件，并使用优质可靠的仪器和试剂，以减小误差的影响。

实验应用免疫补体测定实验在临床诊断中具有广泛的应用，例如：- 检测血清中的免疫补体含量，以判断机体免疫功能的活性程度；- 鉴定自身免疫性疾病和补体相关性疾病；- 监测药物治疗的效果和疾病进展情况。

实验总结通过本次免疫补体测定实验，我们了解了实验的原理和步骤，并掌握了实验操作技巧。

实验结果与标准品的相关系数表明实验结果具有较高的可靠性。

在实验中，我们也发现了一些误差源，并提出了应对误差的策略。

免疫补体测定实验具有广泛的应用价值，在临床诊断中发挥着重要的作用。

我们希望通过不断学习和实践，不断提高实验操作技能和数据分析能力。