TSK凝胶色谱法测定头孢地尼中高分子杂质含量_朱美容

凝胶色谱法测定头孢菌素类药物中高分子杂质的应用心得作者：申贺来源：《科学与财富》2019年第02期摘要：在物质鉴定技术体系当中。

凝胶色谱法一直以来都是一种非常常用的技术，尤其在头孢菌素药物的高分子杂志测定当中的应用尤其广泛。

和其他成分测定技术相比起来，该技术分离效果出色，同时操作简单，易于使用，设备操作也并不复杂，所以在长期实践当中得到了人们的喜爱。

本文对于凝胶色谱法测定头孢菌素类药物当中高分子杂质的一些应用要点进行了总结和分析，希望可以给相关工作的开展提供一些参考。

关键词：头孢菌素类药物；凝胶色谱技术；高分子杂质由于药物药理以及具体的制备工艺的原因，很多抗生素药物当中有很多高分子杂质的存在，其对于抗生素药物效果的正常发挥而言起到了很大的影响，在严重时，甚至会产生一些副作用，所以不难看出高分子杂质测定的重要性，在其投入市场开始大规模销售之前，首先需要保证高分子杂质数量符合于相关规定。

现在在头孢菌素类药物的高分子杂质测定当中，凝胶色谱法的应用较为广泛，本文针对其中的测定要点进行了分析。

1 仪器准备和实验准备对于这种物质分析类的医学实验而言，准备工作是非常重要的，头孢菌素类的药物高分子杂质测定实验也是如此。

总结起来，作为实验人员来说，首先需要做好各项准备工作，保证各项参数完全符合说明书的要求，让实验可以取得一个更好的结果。

1.1 仪器准备对于仪器准备而言，实验人员首先需要将输液设备、检测设备以及数据处理设施准备好，对于输液设备而言，首先需要保证设别在运行过程中输液流动速度的均匀性，让其符合相关标准的规范，同时监测设备准备工作也要着重考虑紫外检测能力，确保该项能力达到饰演的需要。

设备准备过程中，工作人员也要及时和色谱工作站的人员取得联络，保证数据记录的准确无误，同时工作人员也可以将数据发送到积分记录仪器当中。

仪器准备工作最关键的一个环节就是设置合理的检测标准，及时检测自行配置的仪器设备。

实验人员为了可以保证试验的重现性，在工作中也要随时对设备进行复检。

测量高分子分子量的方法
哇塞，高分子分子量咋测量呢？有个办法叫凝胶渗透色谱法。

把高分子样品弄进去，就像让小火车进隧道一样，不同分子量的高分子在里面跑的速度不一样。

这过程可得注意样品要处理好，别整得乱七八糟的。

安全不？那肯定安全呀，只要按规矩来，没啥危险。

啥地方能用呢？化工厂、科研机构都能使。

优势可不少呢，测量快又准。

就像神枪手打靶，一枪一个准。

还有个光散射法。

哇，这就像用探照灯找东西一样，通过光的散射来确定分子量。

操作的时候要小心光别伤着眼睛。

稳定性也不错呢。

适合那些对精度要求高的地方。

好处是啥？精度高得很呐！就像超级放大镜，啥都看得清清楚楚。

举个例子呗，有个科研团队用凝胶渗透色谱法，一下子就把高分子的分子量给测出来了，那叫一个爽。

为他们的研究提供了超级大的帮助。

所以呀，测量高分子分子量的方法有不少，选对方法就能搞定。

咱可不能瞎整，得用好这些方法。

凝胶渗透色谱法测高聚物的分子量分布聚合物的分子量及分子量分布是聚合物性能的重要参数之一，它对聚合物的物理机械性能影响很大。

在聚合物分子量的测定方法中凝胶渗透色谱法（gel permeation chromatography, GPC）由于其快速方便的特点受到了广泛的应用。

一、实验目的1．了解凝胶渗透色谱法测高聚物分子量分布的原理2．熟悉安捷伦型凝胶渗透色谱仪的简单工作原理和操作。

二、GPC简单原理凝胶渗透色谱（Gel Permeation chromarography 简称GPC）为一种液体色谱，是一种很有效的分离技术。

其分离过程在装填有多种固体的“凝胶”小球的谱柱中进行。

凝胶多为高交联度的聚苯乙烯或多孔硅胶。

这些凝胶孔径的大小要与所分离聚合物的分子尺寸相同。

用待测样品的良溶剂不断淋洗色谱柱，当把用相同溶剂制备的试样稀溶液注入柱前淋洗液中后，待高聚物从柱的尾竿流出时，即得分级。

关于GPC的分离机理，目前尚无一完备的理论，但就目前存在的理论可以分为三大类：平衡排除理论；限制扩散理论；流动分离理论。

其中最常用的，认为起主要作用的是平衡排除理论；流速较低时扩散在分离过程中是不重要的；至于液动分离机理则只在液速很高时才起作用。

按照此理论，GPC是基于大分子尺寸不同而进行分级的。

凝胶孔洞的大小有一定的分布，当溶解的聚合物分子液以多孔小球时，扩散到凝胶孔结构内去的程度依赖于分子的尺寸和凝胶孔径的大小和分布。

尺寸大的分子只能进入凝胶内层的一小部分，或完全被排除在外；而尺寸小的分子则能渗透到大部分的凝胶内层中去，因此分子的尺寸越大，在柱中走的路程越短，相反，分子的尺寸越小，在柱中的路程越长，保留时间也就越长。

这样，当高聚物流经色谱柱时，就按其分子量的大小分开，大分子首先流出，达到分级的目的。

分离过程如图1。

图1 GPC 的分离原理柱子的总体积可分为三部分：凝胶粒间体积V 0，凝胶骨架体积V GM ，凝胶总孔洞体积V i ；如果柱子的总体积为V t则： V t ＝V 0＋V i ＋V GM （1）如果某种尺寸的大分子可进入的孔洞体积为V i acc ，则其淋出体积V c 应为：我们定义分配系数为：i i d V acc V /K ⋅= （2） i d c V K V V +=0 （3）如果K d ＝1，则该分子可进入全部孔洞，此时V c ＝V 0＋V i ；如果K d ＝0则该分子完全被排斥在孔洞之外，此时V ＝V 0。

凝胶色谱法测定头孢菌素类药物中高分子杂质的应用心得刘洪培
【期刊名称】《科学与财富》
【年(卷),期】2015(7)9
【摘要】在对头孢菌素类药物中的高分子杂质进行测定的过程中,主要选择的是凝胶色谱法.主要是由于这种方式不仅测定方式比较简单,而且分离效果比较明显,操作方式比较常见.在实际的研究和测定的过程中,研究人员对对这一技术加强重视,现如今已经在医药研究领域中得到高效地推广.在本文中,笔者主要对凝胶色谱法对头孢菌素类药物中的高分子杂质进行测定的方式进行分析和探讨,希望能够给相关的药物研究人员提供借鉴和参考.
【总页数】1页(P296)
【作者】刘洪培
【作者单位】哈尔滨誉衡药业股份有限公司
【正文语种】中文
【相关文献】
1.凝胶色谱法测定头孢菌素中高分子杂质心得
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凝胶色谱法测定头孢菌素中高分子杂质心得抗生素类药物中的高分子杂质是指药品中分子量大于药物本身的杂质，分子量一般在1000～5000，个别可至10000道尔顿左右。

头孢菌素类药物中的高分子杂质主要成分为蛋白（多肽）类杂质和聚合物杂质两类，前者主要来自生产过程的残留或污染，后者主要是抗生素在生产、贮存和使用条件下发生的分子间的聚合反应产物。

国内外大量的实验及临床研究证明，抗生素所致的速发型过敏反应和其中的高分子杂质有关，其含量对药品的质量有很大影响。

为提高药品纯度，减少不良反应的发生，头孢菌素类品种中高分子杂质的含量，获得很好效果。

中图分类号：o615.4+3 文献标识码：a 文章编号：1009-914x （2013）23-0224-01一、仪器与实验准备仪器。

采用液相色谱仪测定抗生素高分子杂质含量时，液相色谱仪部分应按国家技术监督局国家计量检定规程汇编中实验室液相色谱仪检定规程“（jjg705-90）”的规定作定期检定，应符合规定。

仪器的具体使用应详细参阅各操作说明书。

采用自行配置的简易仪器或系统应包括输液单元、检测单元和记录及数据处理单元三部分。

其中输液单元应能在实验过程中提供1m1/min左右稳定的流速，检测单元应具备满足标准规定波长在内的紫外检测能力，同时检测单元应能向记录单元（色谱工作站或积分记录仪）输出模拟信号，以进行数据的记录和处理。

自行配置的仪器系统可以参照液相色谱仪的检测规定，拟定自检规程和能达到的技术指标，并定期检定，以保证实验的重现性。

二、凝胶色谱柱准备色谱柱体积规格的选择应根据仪器系统的最大进样能力、所分析样品的溶解能力和检测限度要求综合考虑。

通常凝胶色谱柱的载样能力（体积）小于柱床体积的2%。

一般头孢菌素抗生素高分子杂质测定的柱床体积应为60m1以上。

玻璃柱管的分端。

开口的玻璃柱管可以采用玻璃棉加开口橡胶塞封端，或者在一端烧结石英过滤板，也可以直接购买带调节头的商品玻璃柱管。

凝胶色谱法测定头孢菌素类药物中高分子杂质的应用心得实际上，所谓的凝胶色谱法也是一种凝胶色谱技术，更是一种十分快捷、简单的分离分析技术，其由于具备分离效果理想，操作方便等优点，因此受到了相关研究人员的喜爱，并在头孢菌素类药物中高分子杂质测定中得到了十分广泛的应用，具有一定的推广价值。

因此，笔者通过结合自身多年实践工作经验，针对采用凝胶色谱法对头孢菌素类药物中高分子杂质的测定进行了详细的论述，简单介绍了相关操作流程，并得出以下相关结论，以供同行业人员参考交流。

标签：凝胶色谱法头孢菌素类药物高分子杂质测定目前，根据大量临床验证研究表明，大部分由抗生素引起的过敏性反应普遍是与药品中含有的高分子杂质有关联。

由此，我们可以判断出，高分子杂质含量的多少将会对药品安全性造成极大的影响，甚至还会对人们的身体健康构成威胁。

因此，为了保障药物质量，进一步提高药品纯度，防止不良时间的发生，我们必须通过采取相关有效的测定方法，有效检测出头孢菌素类药物中高分子杂质的含量。

对此，本文将重点对凝胶色谱法测定头孢菌素类药物中高分子杂质的应用心得进行了阐释。

一仪器与实验准备上的注意事项通常情况下，在采用凝胶色谱法对头孢菌素类药物中高分子杂质含量进行测定时，必须要严格遵守实验室中相关的检定过程，全面掌握各种仪器设备的操作规范，从而确保测量结果的精确性。

1、仪器准备在实验的准备阶段中，若是决定采用自行配置的简单仪器设备，就要充分做好检测单元、输液单元以及数据记录处理单元的三方面工作。

其中，检测环节是为了保证满足于紫外检测要求，而输液单位则是为实验顺利开展所提供的可靠流速，同时通过对色谱工作站发出模拟信号，以便于后续数据的记录处理。

并且，在自行配置仪器系统使用过程中，一定要确保符合液相色谱仪的测定要求，制定出规范合理的检测规程，定期进行检定，以此来保证实验结果的有效性。

2、凝胶色谱柱准备在色谱柱规格的选择上应该从仪器系统的最大进样能力、所分析样品的溶解能力以及检测限度等方面综合进行考虑。

TSK凝胶色谱系统测定头孢丙烯干混悬剂中的高分子杂质
TSK凝胶色谱系统测定头孢丙烯干混悬剂中的高分子杂质孙玉双张锁庆* 张文胜杨梦德刘远华马亚微贺娇柳世萍*
【摘要】摘要：目的建立针对头孢丙烯干混悬剂中高分子杂质的检测方法。

方法采用HPLC法，色谱柱为TSK-GEL G2500 PWXL(7.8mm×30mm, 7μm)，以0.1mol/L pH6.8磷酸盐缓冲液为流动相，流速0.8mL/min，波长254nm，进样体积为20μL。

结果高分子杂质峰与头孢丙烯(Z)异构体峰能有效分离，辅料不产生干扰，方法专属性良好；头孢丙烯溶液在4.6944～93.8880μg/mL浓度范围内线性关系良好，线性回归方程为y=24226.5x-19.3(r=1.0000)；检测限为0.183μg/mL；定量限为0.549μg/mL；方法精密度良好(RSD=0.9%)，中间精密度良好(RSD=0.6%)；头孢丙烯干混悬剂中高分子杂质均低于1.5%。

结论该方法操作简便、检测灵敏度高、方法重现性好，适用于头孢丙烯干混悬剂高分子杂质的检测。

【期刊名称】中国抗生素杂志
【年(卷),期】2018(043)012
【总页数】5
【关键词】头孢丙烯；干混悬剂；高分子聚合物；TSK凝胶色谱
分析质控与制剂
头孢丙烯干混悬剂属于β-内酰胺类抗生素，广泛用于临床，主要用于针对由敏感菌引发的轻中度呼吸道、皮肤、软组织等感染的治疗，其常见的不良反应是其中存在的高分子杂质所引起的过敏反应[1-2]，因此，控制β-内酰胺抗生素中的高分子杂质是质量控制的关键；同时，引起过敏反应的高分子杂质具有共性，因此可以通过控制其总量[3-4]达到质量控制的目的。

在文献[5]中，提到测定头。

分子排阻色谱法测定头孢克洛胶囊中高分子杂质的含量张云;王立立;孙玲【摘要】目的建立分子排阻色谱法测定头孢克洛胶囊中的高分子杂质.方法采用球状亲水硅胶柱(TSK-GEL(R)G2500PWXL 色谱柱,7.8mm×300mm,7μm),流动相为磷酸盐缓冲液(pH7.0)[0.02mol/Lr酸氢二钠溶液和0.02mol/L磷酸二氢钠溶液(61∶39)]-乙腈(95∶5)为流动相,流速为0.8mL/min,检测波长为265nm,以头孢克洛对照品外标法计算高分子杂质的含量.结果头孢克洛在0.532～21.280μg/mL的浓度范围内,面积与浓度呈良好的线性关系(r=0.9999);最小检出浓度为0.161μg/mL;高分子杂质与头孢克洛峰能有效分离,并先于主峰流出,方法专属性良好.结论该方法适于测定头孢克洛胶囊中高分子杂质,灵敏度高,重复性好,操作简便.【期刊名称】《中国抗生素杂志》【年(卷),期】2018(043)007【总页数】3页(P863-865)【关键词】头孢克洛;高分子杂质;分子排阻色谱【作者】张云;王立立;孙玲【作者单位】山东省药学科学院,山东省化学药物重点实验室,济南250101;山东省药学科学院,山东省化学药物重点实验室,济南250101;山东省药学科学院,山东省化学药物重点实验室,济南250101【正文语种】中文【中图分类】R978.1头孢克洛为β-内酰胺类抗生素，由美国礼来公司于1976年研制成功，临床上主要用于治疗敏感菌株引起的中耳炎、呼吸道感染、尿道感染、皮肤和皮肤软组织感染、鼻窦炎和淋球菌性尿道炎等疾病。

此类药物常见的不良反应是速发型变态反应[1-3]，这是由药物在生产、贮存和使用过程中由自身聚合形成的高分子杂质引发的[4-7]，因此严格控制头孢菌素中高分子杂质的含量有着重要意义。

欧洲药典(EP9.0)、美国药典(USP40)、中国药典(2015年版二部)中相关的质量标准均未将此项订入质量标准。

论述高效分子排阻色谱法测定头孢西丁钠中高分子杂质的含量作者：周春玲来源：《中国科技博览》2015年第16期[摘要]目的：本文对应用高效分子排阻色谱法测定头孢西钠中高分子杂质的含量进行了论述。

方法：本组实验采用了TSK-G2000SWxl（7.8mm×30cm，5μm）柱，流动相采用了磷酸盐缓冲液-乙腈（95：5），检测波长为235nm，流速为0.8mL·min-1，还采用头孢西丁对照法，对头孢西丁钠中高分子杂质的含量进行了检测与计算。

结果：头孢西丁对照品的浓度为0.0544～0.0011mg·min-1时，其峰面积呈现出了良好的线性关系，采用高效分子排阻色谱法测定头孢西丁钠中高分子杂质的含量有着较高的效率。

结论：采用高效分子排阻色谱法测定头孢西丁钠中高分子杂质的含量，具有操作简单、定量准确等优点，而且这种测定方法的重现性较高，在头孢西丁钠高分子杂质含量测定中值得大力推广。

[关键词]高效分子排阻色谱法头孢西丁钠高分子杂质中图分类号：S158 文献标识码：A 文章编号：1009-914X（2015）16-0347-01头孢西丁钠属于第二代头孢菌素，这种药物的作用机制主要是通过抑制细菌细胞壁合成实现的，其对抑制ESBLs细菌的滋生有着较强的效果，所以，在临床中有着广泛的应用。

头孢西丁钠属于β-内酰胺类头孢菌素，这类药物是临床中一种常用的抗感染药物，但是在使用头孢西丁钠这种药物时，有时会使患者出现过敏反应，经过研究发现，这主要是因为头孢西丁钠中高分子杂质含量超标，为了提高该药物的质量以及使用的安全性，必须控制好头孢西丁钠中的高分子杂质。

本文采用了高效分子排阻色谱法这一高分子杂质测定法对头孢西丁钠中的杂质进行检测，以供参考，希望可以提高头孢西丁钠的生产质量。

一、仪器与试药1、仪器Agilent1200DAD液相色谱仪（美国安捷伦科技有限公司，安捷伦1200工作站）、SartoriusCPA225D型十万分之一天平（德国赛多利斯仪器公司）。

高效液相色谱法测定头孢地尼及制剂中聚合物的含量目的采用聚苯乙烯高效液相色谱法检查头孢地尼中聚合物的方法。

方法色谱柱为聚苯乙烯凝胶为填料的TSKgel G2000SWxl（7.8 mm×300 mm 5um）色谱柱，流动相为0.1 mol/L，pH=7.0缓冲溶液-甲醇（95∶5），流速为0.5 mL/min，检测波长285 nm，通过HPLC-ESI-MS法鉴定高分子杂质峰，并对其结构进行推定。

结果头孢地尼在0.0002～1.5 mg/mL浓度范围内与峰面积呈良好线性关系（r=1.0000）最小检测浓度为0.2 ug/mL，聚合物杂质与头孢地尼能有效分离，并先于主峰流出，方法专属性良好，样品在溶液中不稳定，需临用新配。

结论建立的方法快速准确。

适用于头孢地尼及其聚合物的测定。

标签：高效液相色谱；聚苯乙烯凝胶；头孢地尼；聚合物；β-内酰胺类抗生素；过敏原头孢地尼为半合成的第三代口服头孢菌素，属于β-内酰胺类抗生素，具有抗菌谱广、疗效高、毒性低等特点。

β-内酰胺抗生素是目前临床上最常用的抗感染药物[1]。

研究证明，引发过敏反应的过敏原不是抗生素本身，而是其中的高分子杂质，因此国内外对β-内酰胺类抗生素的高分子杂质的控制非常重视。

2010版中国药典已有22个品种43个标准的控制[2]。

中国药典2010年版已采用葡聚糖G-10自身对照外标法对大部份常用注射用头孢类抗生素进行了高分子杂质控制，也有文献报道使用葡聚糖G-10用于头孢地尼聚合物的测量[3]。

葡聚糖G-10可以手工填装，也有商品化色谱柱，使用该填料的分离的色谱峰拖尾严重，不利于该产品聚合物的测定。

日本药典（JP）对头孢卡品酯采用以苯乙烯-二乙烯基苯共聚物为基础的TSKgel G2000 色谱柱进行聚合物控制。

也有文献报道使用国产的苯乙烯-二乙烯基苯共聚物为基础的，以分子排阻为主要分离机制，用于测定头孢呋辛酯中高分子聚合物的检查[4]。

因此我们采用苯乙烯为填料的TSKgel G2000SWxl色谱柱。

高效分子排阻色谱法在测定盐酸头孢替安酯中高分子杂质含量中的应用效果陈　剑，苏承云，魏　妍（丽珠医药集团股份有限公司，广东　珠海　519020）[摘要]目的：分析高效分子排阻色谱法在测定盐酸头孢替安酯中高分子杂质含量中的应用效果。

方法：采用TSK-GEL G2000SWXL色谱柱（规格：300×7.8 mm，5 μm）对盐酸头孢替安酯中高分子杂质的含量进行色谱分析（以0.03 mol·L-1的磷酸二氢钠溶液为流动相）。

色谱仪参数设置：流速为每分钟0.5 mL，检测波长为254 nm，进样量为20 μL。

分析结束后，观察样品中高分子杂质含量的检出情况。

结果：供试品溶液在0.25～2.5 mg·mL-1浓度范围内与峰面积有良好的线性关系，r2=0.9997。

对照品重复性试验RSD为1.9%，供试品重复性试验RSD为1.4%。

结论：文中所建立的盐酸头孢替安酯中高分子杂质测定方法稳定、可重现，可用于对本品进行质量控制。

[关键词]盐酸头孢替安酯；高分子杂质；高效分子排阻色谱法[中图分类号]R917 [文献标识码]B [文章编号]2095-7629-（2020）02-0128-03The application of high efficiency molecular exclusion chromatography in the determination of macromolecularimpurities in cefotiam hydrochlorideChen jian, su chengyun, wei yan(Livzon Pharmaceutical Group Inc., zhuhai guangdong 519020)[abstract] objective: to analyze the application of high efficiency molecular exclusion chromatography in the determination of polymer impurities in cefotiam hydrochloride. Methods: tsk-gel G2000SW XL column (size: 300× 7.8mm, 5 m) was used for chromatographic analysis of the content of macromolecular impurities in cefotean hydrochloride (0.03mol · l-1 sodium dihydrogen phosphate solution was used as mobile phase). Chromatograph parameters were set: the flow rate was 0.5 mL per minute, the detection wavelength was 254 nm, and the injection volume was 20 liters. After the analysis, the detection of polymer impurities in the samples was observed. Results: the sample solution had a good linear relationship with the peak area in the concentration range of 0.25 ~ 2.5 mg· ml-1, r2=0.9997. The RSD of the control substance was 1.9%, and that of the supplied substance was 1.4%. Conclusion: the method for the determination of macromolecular impurities in cefotetranium hydrochloride is stable and reproducible, and can be used for quality control of this product.[key words] cefotiam hydrochloride; Polymer impurities; High efficiency molecular exclusion chromatography盐酸头孢替安酯（Cefotiam Hexetil Hydrochloride）为日本武田药品工业株式会社（Takeda Pharmaceutical Company Limited）开发的第二代口服头孢菌素类抗生素，最早于1990年以商品名Pansporine在日本上市[1]。

专利名称：中药注射液中高分子物质的检测方法专利类型：发明专利
发明人：李莎莎,史琳莉,涂国莉,董礼
申请号：CN201811299784.7
申请日：20181102
公开号：CN109324133A
公开日：
20190212
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明涉及药物分析技术领域，尤其是涉及一种中药注射液中高分子物质的检测方法。

中药注射液中高分子物质的检测方法，包括如下步骤：采用凝胶色谱法对中药注射液样品进行分离，以蒸发光散射法进行检测；其中，流动相为30‑100mmol/L的醋酸铵溶液；系列分子量的右旋糖酐标准品作为对照品，采用同样条件测试对照品溶液，对比对照品溶液与中药注射液的保留时间。

本发明的检测方法，通过采用高浓度的30‑100mmol/L的醋酸铵溶液作为流动相，避免了物质的聚集造成的高分子假阳性，能够真实反映注射液中的高分子物质的真实水平。

申请人：华润三九(雅安)药业有限公司
地址：625000 四川省雅安市雨城区南坝中街1号
国籍：CN
代理机构：北京超凡志成知识产权代理事务所(普通合伙)
代理人：宋南
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