【精品】实验五蛋黄中卵磷脂的提取及鉴定

卵磷脂的制备及鉴定一、实验目的要求1、熟悉鸡蛋黄制备卵磷脂的原理。

2、掌握卵磷脂的制备与减压蒸馏的基本操作方法。

二、实验重点和难点从蛋黄中制备卵磷脂的操作方法。

三、实验原理将卵黄中加乙醇，卵磷脂溶于乙醇溶液中，分离提取，蛋白质等某些杂质从沉淀物中除去。

但由于乙醇抽提时，其他脂质也一起被抽提，如甘油三酯、甾醇等。

利用卵磷脂不溶于丙酮的性质，用丙酮从粗卵磷脂溶液中沉淀磷脂，能使卵磷脂与其他脂质和胆固醇分离开来。

无机盐和卵磷脂可生成络合物沉淀，因此，可利用金属盐沉淀剂将卵磷脂从溶液中分离出来，由此除去蛋白质、脂肪等杂质，再用适当溶剂萃取出无机盐和其他磷脂杂质。

四、实验仪器、试剂与材料1、仪器：离心机、旋转薄膜蒸发仪、布氏漏斗、抽滤瓶、真空干燥箱、层析缸、紫外分光光度计。

溶液：取氯化锌10g，加水溶解并稀释至100ml，摇匀，2、试液：l0%的ZnCl2即得。

3、试剂与材料：氯化锌、95%乙醇、丙酮、氯仿、碘、甲醇、无水乙醇。

五、操作步骤1、粗提：取鸡蛋卵黄适量，用2倍于卵黄体积的95%乙醇混合搅拌、提取，离心分离（300Or/min，5min），将沉淀物重复提取3次，回收上清液。

然后减压蒸馏（45℃）至近干，用少量石油醚洗下粘壁的黄色油状物。

加入丙酮溶解，抽滤，分离出沉淀，真空干燥（40℃，3Omin），得到淡黄色的粗卵磷脂，称重。

2、精制：取一定量的卵磷脂粗品，加无水乙醇溶解，得到约10%的乙醇粗提溶液，室温搅拌0.5h。

分离沉淀物，液。

加入相当于卵磷脂质量的l0%的ZnCl2加适量冰丙酮（4℃）洗涤，搅拌lh，再用丙酮反复研洗，直到丙酮洗液为近无色止，得到白色蜡状的精制卵磷脂；干燥；称重。

3、鉴定：（1）薄层色谱分析：取卵磷脂样品与对照品分别制成2%氯仿溶液，用GF254硅胶板以氯仿：甲醇：水（65：25：4）为展开剂，展开，取出，干燥，碘蒸气显色。

（2）紫外吸收光谱测定：将一定量卵磷脂制成0.l%无水乙醇溶液，照紫外分光光法在190～40Onm处测定，卵磷脂的紫外最大吸波长在215nm。

卵磷脂的提取和鉴定实验报告卵磷脂是一种重要的生物分子，广泛存在于动植物细胞膜中，对细胞膜的结构和功能起着重要的作用。

本实验旨在通过提取和鉴定卵磷脂，了解其提取方法和鉴定技术，为进一步研究和应用提供参考。

1. 提取卵磷脂的方法。

首先，我们需要准备卵黄，将卵黄破碎并加入氯仿-甲醇混合溶剂，使卵磷脂从卵黄中溶解出来。

然后，通过离心将上清液和沉淀分离，将上清液转移到锥形瓶中，加入等体积的0.9%氯化钠溶液，摇匀后放置于4℃冰箱中沉淀。

最后，将沉淀离心，得到卵磷脂。

2. 卵磷脂的鉴定。

为了鉴定卵磷脂的纯度和结构，我们可以利用薄层色谱和质谱技术。

首先，将提取得到的卵磷脂溶解在氯仿-甲醇混合溶剂中，然后在预涂有硅胶的玻璃板上涂抹样品，放入薄层色谱仪中进行分离。

通过比色试剂或者紫外灯照射，我们可以观察到卵磷脂的斑点，并计算Rf值来确定其纯度。

另外，质谱技术也是一种常用的鉴定方法，通过质谱仪的分析，我们可以得到卵磷脂分子的质谱图，进而确定其分子结构和质量。

3. 实验结果与讨论。

经过提取和鉴定，我们成功得到了卵磷脂，并通过薄层色谱和质谱技术进行了鉴定。

通过比色试剂和紫外灯照射，我们观察到了卵磷脂的斑点，并计算出了其Rf值，证明了其纯度。

同时，质谱图显示了卵磷脂分子的质谱峰，进一步确认了其结构和质量。

在实验过程中，我们也发现了一些问题，比如提取过程中可能会受到其他成分的干扰，导致提取得到的卵磷脂不够纯净。

因此，在今后的实验中，我们需要进一步优化提取方法，提高卵磷脂的纯度。

4. 结论。

通过本次实验，我们成功提取和鉴定了卵磷脂，了解了其提取方法和鉴定技术。

同时，我们也发现了一些问题，为今后的研究提供了一定的参考和借鉴。

希望通过我们的努力，能够更好地理解和应用卵磷脂这一重要的生物分子。

卵磷脂的提取实验报告卵磷脂的提取实验报告引言：卵磷脂是一种常见的磷脂类化合物，存在于生物体细胞膜中，具有重要的生理功能。

本实验旨在通过提取卵磷脂，了解其提取方法和应用。

实验材料与方法：材料：鸡蛋、乙醇、氯仿、氯化钠仪器：搅拌器、离心机、玻璃瓶、滤纸、移液管等步骤：1. 取适量鸡蛋，将蛋黄与蛋清分离。

2. 将蛋黄放入搅拌器中，加入适量乙醇，搅拌均匀。

3. 将搅拌后的混合物倒入离心机离心，离心后分为两层，上层为乙醇层，下层为沉淀层。

4. 将上层乙醇层转移到另一个玻璃瓶中，加入适量氯化钠，摇匀。

5. 加入适量氯仿，摇匀后放置静置。

6. 静置后，分为两层，上层为氯仿层，下层为水层。

7. 将上层氯仿层转移到另一个玻璃瓶中，加入适量氯化钠，摇匀。

8. 加入适量水，摇匀后放置静置。

9. 静置后，分为两层，上层为水层，下层为氯仿层。

10. 将上层水层转移到另一个玻璃瓶中，加入适量氯化钠，摇匀。

11. 加入适量氯仿，摇匀后放置静置。

12. 静置后，分为两层，上层为氯仿层，下层为水层。

13. 将上层氯仿层转移到另一个玻璃瓶中，加入适量氯化钠，摇匀。

14. 加入适量水，摇匀后放置静置。

15. 静置后，分为两层，上层为水层，下层为氯仿层。

结果与讨论：经过多次提取，我们成功地从鸡蛋中提取到了卵磷脂。

实验过程中，通过乙醇、氯化钠和氯仿的配合使用，能够有效地分离出卵磷脂。

乙醇的作用是溶解蛋黄中的卵磷脂，而氯化钠则用于调节溶液的渗透压，帮助分离。

氯仿则是用来提取卵磷脂的有机溶剂，能够与卵磷脂形成复合物，从而实现分离。

卵磷脂作为一种重要的生物大分子，具有多种生理功能。

首先，卵磷脂是细胞膜的主要组成成分之一，能够维持细胞膜的完整性和稳定性。

其次，卵磷脂还参与细胞信号传导，调节细胞功能。

此外，卵磷脂还具有良好的乳化和分散性能，常被用作食品添加剂和药物载体。

在实际应用中，卵磷脂的提取方法可以根据需要进行调整。

例如，可以根据不同来源的卵磷脂进行提取，以获得特定的卵磷脂种类。

实验申请实验项目：蛋黄中卵磷脂的提取与 TLC 检测实验原料：鲜鸡蛋、 纯化卵磷脂实验试剂： 200ml 丙酮、 150ml 乙醇 、50ml 石油醚、 氯仿、 乙酸乙酯、 甲醇，均为分析纯试剂.实验仪器： 旋转蒸发仪、 真空泵、 布氏漏斗、 抽滤瓶、 吹风机、 层析缸、 玻璃板、电子天平。

辅助器材：毛细管（两支）、玻璃棒、滤纸、100ml 量筒（2个）、烧杯、纱布、镊子、 胶头滴管圆底烧瓶等。

实验目的：1. 掌握从动物中提取有效成分的一般原理和方法。

2. 学习从蛋黄中提取卵磷脂的实验方法。

3. 巩固抽滤等基本操作。

4. 了解薄层层析色谱法的原理及操作。

实验原理：卵磷脂存在于动物的各种组织细胞中，蛋黄中含量较高，约10％。

可根据它溶于乙醇、氯仿而不溶于丙酮的性质，从蛋黄中分离得到。

吸附薄层主要是利用吸附剂对样品中各成分吸附能力不同，及展开剂对它们的解吸附能力的不同，使各成分达到分离。

在硅胶薄层板上，样品中的两成分是两种结构近似的染料，在展开剂四氯化碳的作用下。

在展开剂和薄层板之间不断地产生吸附、解吸，再吸附，再解吸，由于极性不同从而分离，展开结束以后，会在薄层板上形成斑点，混合物中的成分得以分离。

参考文献： 刘宝全，所给实验资料.tpml-1实验操作实验操作步骤实验一卵磷脂的制备与提取1.取四个煮熟的鸡蛋，分别将其刨壳，把四个鸡蛋的总的蛋壳，蛋白和蛋黄分别称重并记录数据。

2.将所得蛋黄全部放入烧杯中，用筷子捣碎，取100ml丙酮倒入其中，搅拌30min成糊状后用6层厚纱布过滤，收集滤渣。

3.将滤渣再次放入烧杯，取100ml丙酮倒入杯中，重复上步操作，收集滤渣。

4.制备乙醇-石油醚混合溶剂。

用量筒分别量取50ml石油醚和150ml乙醇，放入烧杯中混合均匀。

5.取100ml混合液放入盛有滤渣的烧杯中，搅拌30min后用布氏漏斗抽滤，收集滤液。

6.将抽滤后的滤渣重新放入烧瓶中，再取100ml混合液浸泡搅拌30min，然后抽滤，将所有滤液收集，倒入圆底烧瓶中进行旋转蒸发，旋转蒸发仪温度设为40摄氏度。

实训卵磷脂的提取及其组成鉴定一、实验目的1、加深了解磷脂类物质的结构和性质2、学习从蛋黄中提取卵磷脂的实验方法2、掌握卵磷脂的组成鉴定的原理和方法二、实验原理磷脂是生物体组织细胞的重要成分，主要存在于大豆等植物组织以及动物的肝、脑、脾、心等组织中，尤其在蛋黄中含量较多（10%左右）。

卵磷脂和脑磷脂均溶于乙醚而不溶于丙酮，利用此性质可将其与中性脂肪分离开；此外，卵磷脂能溶于乙醇而脑磷脂不溶，利用此性质又可将卵磷脂和脑磷脂分离。

新提取的卵磷脂为白色，当与空气接触后，其所含不饱和脂肪酸会被氧化而使卵磷脂呈黄褐色。

卵磷脂被碱水解后可分解为脂肪酸盐、甘油、胆碱和磷酸盐。

通过对分解产物的检验可以对卵磷脂进行鉴定。

卵磷脂分离提取的流程如下：三、仪器和试剂仪器研钵、布氏漏斗、蒸发皿、水浴锅（沸水）、玻璃漏斗、玻棒、小烧杯、试管、纱布、酒精灯。

试剂1、熟鸡蛋黄2、红色石蕊试纸3、95%乙醇4、20%氢氧化钠溶液5、钼酸铵试剂：将6g钼酸铵溶于15mL蒸馏水中，加入5mL浓氨水，另外将24mL浓硝酸溶于46mL的蒸馏水中，两者混合静置一天后使用。

6、丙酮7、氯仿8、10%溴的四氯化碳溶液9、硝酸10、1%硫酸铜溶液11、10%醋酸铅溶液四、操作步骤（一）卵磷脂的提取1、取熟鸡蛋蛋黄一只，于研钵中研细，先加入10ml 95％乙醇研磨，再加入20ml 95％乙醇充分研磨，减压过滤(应盖满漏斗)，滤干后，如浑浊可再过滤一次，将澄清滤液移入蒸发皿内。

2、将蒸发皿置于沸水浴上蒸去乙醇至干，得到黄色油状物。

3、冷却后，加入5ml氯仿，搅拌使油状物完全溶解。

4、在搅拌下慢慢加入15ml丙酮，即有卵磷脂析出，搅动使其尽量析出，将氯仿丙酮溶液倒掉，取沉淀。

（二）卵磷脂的组成鉴定1、水解及三甲胺的检验取一支干燥大试管，加入提取的卵磷脂，并加入5ml 20％氢氧化钠溶液，放入沸水浴中加热10分钟，在管口放一片红色石蕊试纸，观察颜色有无变化，并嗅其气味。

蛋黄中卵磷脂的提取项目报告引言卵磷脂是一种重要的生物分子，广泛存在于生物体组织细胞膜中，在保护细胞、保持细胞健康和参与代谢过程等方面发挥着重要的作用。

蛋黄中富含卵磷脂，因此从蛋黄中提取卵磷脂具有重要的意义。

本报告旨在介绍卵磷脂提取的方法和操作过程，并探讨蛋黄中卵磷脂提取的优化条件。

材料和方法1. 实验材料鸡蛋黄，氯仿，乙醇，硫酸钠，硫酸铜，脱色活性炭。

2. 实验步骤(1) 蛋黄分离将鸡蛋清与蛋黄分开，将蛋黄逐个捞出并洗净。

(2) 蛋黄液的制备将洗净的蛋黄放入搅拌机中，加入适量的盐水，混合均匀，制成蛋黄液。

(3) 卵磷脂的提取取一定量的蛋黄液，按体积比例1:1加入氯仿，搅拌30秒，放置静置。

收取上层乳白色的液体，转移到新的容器中。

(4) 脱色处理加入少量的脱色活性炭，并摇晃混匀。

静置15分钟，然后用过滤器分离出脱色后的液体。

(5) 卵磷脂提取量的测定将卵磷脂溶解在正丁醇中，然后用硫酸钠和硫酸铜定量，计算出卵磷脂的提取量。

结果和讨论本实验通过以上步骤从蛋黄中成功提取卵磷脂，并计算出提取量。

但是，在实验过程中也发现了一些问题，如提取效率低、脱色效果不理想等，需要进一步优化。

提高提取效率的主要方法是改变溶剂体系、控制温度和加入乳化剂等。

比如，可以将氯仿与丙酮混合使用，或使用丙酮-水混合液代替氯仿。

此外，将温度控制在15-20℃范围内也有助于提高提取效率。

最后，加入乳化剂，如十六烷基三甲基溴化铵等也可以提高提取效率。

对于脱色效果不理想的问题，可以通过添加更多的脱色活性炭和增加脱色时间来解决。

同时，调整溶液的pH值也可能改善脱色效果。

结论本实验成功地从蛋黄中提取了卵磷脂，但提取效率和脱色效果需要进一步优化。

通过改变溶剂体系、温度控制和加入乳化剂等方法，可以提高提取效率。

此外，采用更多的脱色活性炭和延长脱色时间以及调整溶液pH值可以改善脱色效果。