Gendre固定液使用说明

第1页共1页4%组织细胞固定液说明书货号：P1110规格：100mL/500mL保存：常温，有效期1年。

产品说明：该固定液是免疫组织化学(IHC)和免疫细胞化学（ICC)研究中最常用的固定剂之一。

较为温和，能很好地保存组织的抗原性和细微结构，适于组织标本和细胞片的较长期保存，非常适合组织和细胞的光镜免疫化学研究。

本产品是用PBS 配置的组织细胞固定液，可直接用于组织和细胞固定。

若需使用其他低浓度的固定液，可使用0.01M PBS 按比例稀释。

使用说明（仅供参考）：组织固定：室温或4℃浸泡固定2-24h ，用缓冲液漂洗后即可石蜡或碳蜡或塑封包埋用于组织切片。

切片固定：室温或4℃固定10min-2h ，视切片厚度而定，用缓冲液漂洗后即可用于染色。

细胞固定：室温或4℃固定10-30min ，用缓冲液漂洗后即可用于染色。

注意事项：为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

相关产品：C1010柠檬酸钠缓冲液0.01mol/L ，pH6.0C1050ELISA 包被液DA1010DAB 显色试剂盒（20×）G1120HE 染色试剂盒P10100.01M PBS 干粉，PH7.2-7.4S2100抗荧光衰减封片剂X10200.1%胰蛋白酶液消化液相关文献:[1]Jingcai Liu,Lan Li,Hongchen Yan,et al.Identification of oxidative stress-related Xdh gene as a di(2-ethylhexyl)phthalate (DEHP)target and the use of melatonin to alleviate the DEHP-induced impairments in newborn mouse ovaries.Journal of Pineal Research.April 2019.(IF 15.221)[2]Tengjiao Ma,Zhiwei Zhang,Yilu Lu,et al.CLOCK and BMAL1stabilize and activate RHOA to promote F-actin formation in cancer cells.Experimental &molecular Medicine.October 2018.(IF 5.584)[3]Chengya Wang,Youyang Qu,Di Wang,et al.The Proangiogenic Roles of Long NonCoding RNAs Revealed by RNA-Sequencing.Cellular Physiology and Biochemistry.(IF 5.500)[4]Zhaoqing Li,Tingting Zhu,Yini Xu,et al.A novel STAT3inhibitor,HJC0152,exerts potent antitumor activity in glioblastoma.American Journal of Cancer Research.April 2019.(IF 4.737)注：更多使用本产品的文献请参考索莱宝官网。

北京雷根生物技术有限公司 戊二醛固定液(0.25%,电镜专用)简介：固定的目的在于保存细胞和组织的原有形态结构，固定剂能阻止内源性溶酶体酶对自身组织和细胞的自溶、抑制细菌和霉菌的生长。

固定剂通过凝固、生成添加化合物等使蛋白质内部结构发生改变，从而使酶失活。

固定剂对细胞核细胞外成分发生物理改变。

固定液主要分为醛类固定液、汞类固定液、醇类固定液、氧化剂类固定液、苦味酸盐类固定液等，较为常用的是醛类中的福尔马林、醇类中的乙醇。

戊二醛固定液会引起蛋白质α-螺旋结构变形，不利于过氧化物酶染色。

戊二醛固定液固定速度快，渗透力差。

Leagene 戊二醛固定液(0.25%,电镜专用)由戊二醛、磷酸盐、去离子水等组成，pH7.2～7.4，该固定液对细胞核、细胞浆的细微结构固定效果好，经常用于电镜标本固定。

组成：操作步骤(仅供参考)：1、 根据实验具体要求操作。

2、 取新鲜标本，立即入戊二醛固定液固定，稍大标本应适当延长固定时间。

3、 送检或保存。

注意事项：1、 Leagene 戊二醛固定液有一定腐蚀性，请在通风较好的环境下小心操作， 避免吸入。

2、 组织取材的厚度不同，固定时间也不同。

常规活检组织比较适合的厚度为2～4mm ，一般不超过6mm 。

对组织恰当的选材有利于固定液的渗透。

3、 固定液的容量应足够，一般固定液与组织块的体积比率应大于10:1。

如果容积不够大，可以在固定期间更换1～3次固定液。

4、 温度对固定的影响很明显，提高温度可以加速固定作用，但本固定液最好不要提高温度。

5、 取出新鲜组织后，应及时固定。

无法及时固定时，应保存于生理盐水中及时送检。

6、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

有效期： 12个月有效。

编号 名称 DF0159 Storage 戊二醛固定液(0.25%,电镜专用) 100ml 4℃ 避光 使用说明书 1份。

GENMED SCIENTIFICS INC. U.S.A GMS40039.3 v.A GENMED柠檬酸化学法冰冻组织抗原修复处理试剂盒产品说明书（中文版）主要用途GENMED柠檬酸化学法冰冻组织抗原修复处理试剂是一种旨在通过柠檬酸缓冲系统，辅以物理加热的强化处理，进行醛类固定的冰冻组织块的抗原修复和暴露，增强免疫化学的染色强度，降低背景噪音的权威而经典的技术方法。

该技术由大师级科学家精心改良、成功实验证明的。

主要适用于醛类处理的冰冻动物组织块的各种抗原的修复，尤其是核蛋白的修复。

产品即到即用，操作简捷，性能稳定，修复显著，敏感可靠。

技术背景组织制片固定时，使用醛类固定剂（例如福尔马林等），会导致醛类分子与组织蛋白产生分子交联，遮蔽了组织抗原。

其原理是在组织蛋白的反应部位（胺、氨类基团、巯基、氢氧基团、芳香环等）形成了亚甲基桥（methylene bridges）。

通过物理热处理和化学处理方法，破坏醛类分子交联，暴露和修复抗原。

产品内容GENMED清理液（Reagent A）XX毫升GENMED固着液（Reagent A）XX毫升GENMED修复液（Reagent B）XX毫升GENMED保护液（Reagent B）XX毫升产品说明书1份保存方式保存在4℃冰箱里，有效保证6月用户自备小型染色缸：用于清理的容器200毫升烧杯：用于修复操作的容器实验步骤1．准备1个6孔细胞培养板2．放进新鲜切除的或冰冻保存的动物组织样本（注意：建议组织大小为0.5厘米厚，1厘米长；如果过大，最好刀切处理一下）3．将组织压平4．小心加入XX毫升GENMED清理液（Reagent A），清洗组织样本5．小心抽去清理液6．小心加入XX毫升GENMED固定液（Reagent B），浸没整个组织7．在4℃条件下孵育2小时8．小心抽去固定液9．小心加入XX毫升GENMED清理液（Reagent A），清洗组织样本10．小心抽去清理液11．小心加入XX毫升GENMED修复液（Reagent C），浸没整个组织12．在4℃条件下孵育16小时13．准备一个200毫升的烧杯14．加入XX毫升GENMED修复液（Reagent C）15．煮沸16．用镊子取出组织，放入到煮沸的GENMED修复液（Reagent C）中17．孵育5分钟18．用镊子取出组织，放入到预冷的XX毫升GENMED保护液（Reagent D）里，浸没整个组织19．在4℃条件下孵育，直至组织块沉入底部20．即刻包埋和冰冻21．放进－80℃冰箱保存22．进行冰冻切片23．继续后续免疫化学染色操作注意事项1．本产品为20次操作2．操作时，须戴手套3．操作时，避免污染母液，尤其是GENMED保护液（Reagent D）4．本公司提供系列组织抗原修复试剂产品质量标准1．本产品经鉴定性能稳定2．本产品经鉴定修复效果显著使用承诺杰美基因秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。

北京雷根生物技术有限公司
EDTA 溶液(0.25mol/L,pH8.0)
简介：
EDTA 溶液(0.25mol/L,pH8.0)是用EDTA.2Na 配制，调pH 至8.0，只有其pH 接近8.0，才能完全溶解。

Leagene EDTA 溶液经高压灭菌处理，用于螯合金属离子等，是常用分子生物学试剂。

组成：
操作步骤(仅供参考)：
1、按实验具体要求操作。

注意事项：
1、 实验要求无菌时，应注意无菌操作。

2、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

有效期： 12个月有效。

相关：
编号 名称 ND0080 Storage EDTA 溶液(0.25mol/L,pH8.0) 500ml RT 使用说明书 1份
编号 名称 DH0006 苏木素伊红(HE)染色液 PE0080 Tris-HCl 缓冲液(1mol/L,pH6.8) PE0103 Acr-Bis(30%,29:1) PS0013 RIPA 裂解液(强) R00195 Tris-EDTA 缓冲液(10×TE,pH8.0) R00300
X-gal(20mg/ml) TC1213 总胆固醇(TC)检测试剂盒(COD-PAP 单试剂比色法)。

FAA固定液编号名称北京派瑞金LB9429FAA固定液FAA固定液简介：固定液主要分为醛类固定液、汞类固定液、醇类固定液、氧化剂类固定液、苦味酸盐类固定液等，较为常用的是醛类中的福尔马林、醇类中的乙醇。

FAA固定液又称酒精醋酸福尔马林混合固定液或AAF、AAF固定液，主要由乙醇(A)、乙酸(A)、甲醛(F)组成，兼有脱水作用。

AAF固定液常用于快速脱水和固定以及冷冻切片的快速固定。

FAA固定液操作步骤(仅供参考)：1、取新鲜组织入AFA固定液，置于冰箱内低温固定。

2、常规石蜡切片因固定不佳导致染色效果不满意时，可在染色前再用AAF固定液固定，染色效果会有明显提高。

FAA固定液注意事项：1、AAF固定液对人体有一定的损害，请在通风好的环境下小心操作，避免吸入。

2、固定液pH最好接近用中性，pH范围6～8。

3、组织取材的厚度不同，固定时间也不同，对组织恰当的选材有利于固定液的渗透。

常规活检组织比较适合的厚度为2～4mm，一般不超过6mm。

4、温度对固定的影响很明显，提高温度可以加速固定作用，但温度不宜过高。

5、取出新鲜组织后，应及时固定，无法及时固定时，应保存于生理盐水中及时送检。

保存条件：RT避光，12个月有效。

FAA固定液相关的固定液：乙醇-甲醛固定液Altmann固定液Maximov固定液甲醛-生理盐水固定液Allen B-15固定液Lillie甲醛中性固定液铬-醋酸固定液乙醇-甲醛固定液，A-F固定液Lichent's固定液多聚甲醛-磷酸缓冲固定液Picric acid-硫酸固定液Kolmer固定液Zirkle-Erliki固定液甲醛-乙酸-乙醇固定液Kleinenberg's（克来宁堡氏）固定液Susa固定液多聚甲醛-氢氧化钠固定液Karnovsky固定液Schaudinn（绍丁）固定液对苯醌固定液Hollande固定液Marchi固定液Zetterqvist固定液Helly固定液Karnovsky改良固定液Zenker固定液Gendre固定液Houseby固定液Zamboni固定液Flemming固定液Heidenhain（海登汉）固定液Verhoeff固定液ECD-G固定液Goldsmith固定液Rossman固定液Champy固定液Gilson固定液Romeis固定液Carnoy固定液Davidson固定液PLP固定液Carnoy-LeBrun固定液Dafano固定液PLPD固定液Champy固定液，Champy’s Fluid Carl固定液，卡尔固定液PFG固定液Helly固定液，Helly SolutionCajal甲醛-溴化铵固定液（FAB）Orth固定液AAF固定液Brasil固定液Nawaschin’s固定液卡诺氏固定液，Carnoy Fluid Bouin固定液Muller固定液Bouin固定液,Bouin氏固定液B-5固定液Mirsky's固定液Zetterqvist固定液Aoyama固定液Methacarn固定液组织细胞固定液。

石蜡包埋切片技术实验目的：1、学习石蜡包埋切片技术的基本原理和基本步骤；2、掌握石蜡包埋切片技术。

实验原理：大家在生物学实验时，曾经观察过动物组织和植物组织的切片。

通过光学显微镜，我们可以观察到细胞内部的结构（例如细胞核、细胞质、肌肉组织的横纹等）、细胞相互间的联系以及组织的构成等。

那么，如何来制作这种切片呢？其过程是比较复杂的，我们利用3—4次实验来学习组织切片的制作。

大家知道，我们要在显微镜下研究生物体的内部结构，在自然状态下是无法观察的，因为整个动、植物体大部分都是不透明的，不能直接在显微镜下观察，一定要经过特殊的处理，使要观察的材料先减少它的厚度和体积，使光线能透过才能用显微镜观察。

通常应用的有两种方法：一种是非切片法，即用物理或化学的方法将生物体组织分离成为单个细胞或薄片，例如我们在生物学实验曾做过口腔上皮的观察、洋葱鳞茎表皮的观察。

这种方法的不足之处在于细胞彼此间相互的联系不一定观察到。

另外一种为切片法，即用刀将标本切成薄片。

非切片法比较简单，一学就会，我们这里不作介绍。

切片法也分徒手切片法和切片机切片法。

最简单的切片法是将新鲜植物材料直接用刀切成薄片，称之为徒手切片法。

切片机切片法是用特殊的切片机来切片，切片的厚度可薄到几个微米。

因此，切片机的发明与应用也是细胞学诞生的重要因素。

切片机切组织用的也是刀（切片刀），所要切的组织要有一定的软硬度，如刀切肉（新鲜、冷冻）。

但大部分生物材料比较柔软，所以为了能切出薄片，必须先使所切材料有一定的软硬度。

一些包埋剂可以达到这个目的，如石蜡，它融化时可渗入到组织内部；凝固时，使整个组织有一定的软硬度，正好能切出很薄的切片，故称为石蜡包埋切片法。

另外还有火棉胶包埋切片法（火棉胶做包埋剂）、冰冻切片法（使组织冷冻到一定的硬度）等。

其中最常用的切片方法还是石蜡包埋切片法，我们这里重点学习石蜡包埋切片技术。

实验器材：（一）小鼠、小广口瓶、标签、量筒、烧杯、95%酒精、无水酒精、蒸馏水、手术刀、剪刀、镊子、平皿、石蜡块、滤纸、甲醛液、苦味酸、冰醋酸、移液管、洗耳球。

多聚甲醛-氢氧化钠固定液Paraformaldehyde-Sodium hydroxide Fixative Solution编号名称规格单位北京华越洋WG00590多聚甲醛-氢氧化钠固定液250ml瓶多聚甲醛-氢氧化钠固定液用途：多聚甲醛-氢氧化钠固定液为甲醛，磷酸二氢钠，氢氧化钠混合液，pH为7.2-7.4。

多聚甲醛-氢氧化钠固定液适用于光镜和电镜免疫细胞化学研究，用于免疫电镜时最好加入少量新鲜配制的戊二醛。

多聚甲醛-氢氧化钠固定液条件温和，组织固定于该液中，4℃保存数月，仍可以获得满意的染色效果。

多聚甲醛-氢氧化钠固定液固定时间：15分钟-2小时。

保存条件：4℃，有效期1年。

多聚甲醛-氢氧化钠固定液固定时的注意事项：(1)固定液量：20倍于材料的体积，以免固定液被稀释。

(2)选择合适的固定液：渗透力强的固定液既可以迅速进入组织中，又不使组织过度收缩或膨胀。

(3)固定的时间要合适：与材料的大小和温度有关：材料大则时间长，材料小则时间短；温度高则时间短，温度低则时间长。

经固定的材料如不及时使用，可以经过90%酒精换到70%酒精中各半小时，再换入一次70%酒精，在0-4℃冰箱内可保存半年。

经过较长时间保存的材料进行观察前可以换新的固定液再处理一次，效果较好。

多聚甲醛-氢氧化钠固定液固定的条件：(1)迅速渗入组织，杀死原生质。

在杀死的短时期中，细胞形态不致有所变化。

(2)必须具有渗透力，对组织各部分的渗透力相等，可使组织内外完全固定。

(3)尽可能避免使组织膨胀或收缩。

(4)使细胞内的成分凝固或沉淀。

(5)增加细胞内含物的折光程度，易于鉴别。

(6)增加媒染作用和染色能力。

(7)使组织变硬，具有一定的硬度。

(8)固定以后能起到保存的作用。

(9)在凝固原生质以后，增加细胞对于各种穿透的抵抗力，不致于因以后的处理而使固定的原生质变形。

华越洋多聚甲醛-氢氧化钠固定液其他相关固定液：通用组织细胞固定液Champy固定液Helly固定液AAF固定液Bouin固定液戊二醛固定液Zetterqvist固定液多聚甲醛-氢氧化钠固定液Brasil固定液Dafano固定液Gendre固定液Methacarn固定液A-F固定液。

EDTA抗原修复液（1×）使用方法及注意事项EDTA抗原修复液（1×）使用方法及注意事项货号：C1033规格：100ml/500ml保存：室温密封保存，有效期12个月。

产品说明：细胞或组织用多聚甲醛、甲醛或其它醛类试剂固定后，会导致细胞内抗原形成醛键、羧甲键而被封闭了部分抗原决定簇，同时蛋白之间发生交联而使抗原决定簇隐蔽，导致免疫染色时染色信号减弱，甚至出现一些假阴性染色结果。

所以要求在进行免疫组化染色时，需要先进行抗原修复或暴露，即将固定时分子之间所形成的交联破坏，而恢复抗原的原有空间形态。

从而提高抗原的检出率，降低背景染色，提高检测的准确性。

EDTA抗原修复液(EDTA Antigen Retrieval solution，1×)是一种常用的抗原修复液，可以用于石蜡切片、冰冻切片等样品使用多聚甲醛、甲醛或其它醛类试剂固定后的抗原修复。

可以有效去除醛类固定试剂导致的蛋白之间的交联，充分暴露石蜡切片等样品中的抗原表位，从而大大改善免疫染色效果。

通常石蜡切片都需进行抗原修复处理，而冰冻切片可以不进行抗原修复处理。

抗原修复可以提高石蜡切片的免疫染色效果，亦可以不同程度的提高冰冻切片的染色效果。

当冰冻切片免疫染色效果不理想时，考虑进行抗原修复。

按照每个片子需要10ml抗原修复液(1×)计算，100ml抗原修复液(1×)可以用于10个样本的抗原修复。

使用方法：1.对于石蜡切片：a.脱蜡：二甲苯3次，每次3-5min→无水乙醇2次，每次3-5min →95％乙醇1次，3-5min→90%乙醇1次，3-5min→75％乙醇1次，3-5min→蒸馏水洗2次，每次3-5min。

b.抗原修复：将切片浸泡在抗原修复液(1×)中，95-100℃加热约15 min(加热时间可以控制在10-20min内，最佳的加热时间需根据不同的样品和目的蛋白自行摸索)。

抗原修复液(1×)使用前需预热到95-100℃。