waters色谱柱-XTerra色谱柱
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Waters高效液相色谱柱简单介绍与选择2016-04-25 Bruce Lee生产高效液相色谱柱的厂家有很多,如Waters,Agilent,Phenomenex,Shimadzu,Thermo等,每家供应商又生产多个系列,导致市场上的液相色谱柱的可选择性极强。
目前实验室以及公司,企业使用最多的是Waters以及Agilent所生产的RP液相色谱柱。
Waters主要有Symmetry,Sunfire,XTerra,XBridge,XSelect,CORTECS以及Atlantis系列等,其详细分类以及键合相如下。
Figure 1 Waters Symmetry column familyFigure 2 Waters Sunfire column familySymmetry与Sunfire系列色谱柱使用高纯度硅胶(B型)作为固定相基质,摒除金属离子杂质对固定相Si-O键的促进水解作用,此外由于金属离子含量特别低,在对其表面键合选择性烃基或内嵌极性官能团烃基时,可通过配体添加量控制硅胶表面键合相的多少,因此其最大特点在于批次之间的重现性。
两个系列均采用封端技术,Sunfire C8与C18表面载碳量分别为12%和16%;SymmetryC8与C18载碳量均为12%,因此两个系列的C8色谱柱对于分析物的保留能力上没有本质的区别,而Sunfire C18色谱柱则相比Symmetry C18色谱柱,对于非极性比较大的分析物具有更强一些的保留能力,当然对于有机相的最低比例也相对比较高一些。
Symmetry C8 Prep与C18 Prep色谱柱的填料粒径为7 um,其设计用途为制备;Symmetry300 C18(孔径300埃,载碳量8.5%)与Symmetry300 C4(孔径300埃,载碳量2.8%)则是为生物大分子多肽以及蛋白质的分离,分析而设计。
Symmetry Shield RP 18内嵌极性官能团色谱柱,由于在靠近硅胶表面的极性官能团的存在,增加了硅胶表面的水分子浓度,改善了与水之间的浸润状况;因此可以允许使用极高水相作为分离,分析条件,而不会出现孔隙内去湿现象,对于分析碱性等大极性分析物而言,减少其保留能力,改善峰形,具有很高的方法重现性。
waters液相色谱柱的活化
Waters液相色谱柱的活化方法如下:
1. 使用新的C18柱时,先用甲醇或乙腈冲洗20-30个柱体积,然后用甲醇/乙腈:水(50:50)冲洗10个柱体积,然后再用流动相平衡10-30柱体积。
2. 若流动相含有缓冲盐,用跟流动相中盐相等比例的超纯水和有机相冲洗过渡,用量为20倍柱体积,再用含缓冲盐的流动相平衡色谱柱,用量为20倍柱体积或以上。
3. 当用HILIC模式时,新柱用50倍柱体积50/50乙腈/水活化平衡,然后再用流动相平衡20个柱体积。
另外,当出现拖尾或者柱压升高时,可以考虑将正向进口端拆开,并将筛板超声清洗干净,有时候效果很好。
若使用正相色谱柱时,用异丙醇或乙醇冲洗色谱柱50-100个柱体积。
以上信息仅供参考,具体操作建议咨询专业人士。
常见液相色谱柱性能比较一、高性能色谱柱特点:柱效高,价格高,通用性好,使用寿命长,pH范围宽1、Waters公司Xbridge2005年waters公司推出,杂化颗粒柱。
优点:pH 1-12,在高pH状态下,没有能与此色谱柱匹敌的,目前市场的宽pH色谱柱在高pH的状态下(9-12)普遍寿命很短,如Gemini,资生堂公司Capcell,YMCPro-C18,包括waters 的第一代杂化柱Xterra都是寿命不长,Zorbax Extend更是不堪。
柱效与一流的硅胶柱相当,甚至有过之无不及,杂化颗粒柱和聚合物色谱柱的问题在于柱效,Xterra和常见的PSDVB的色谱柱都有不错的pH范围,但是柱效低的问题无法解决,这是聚合物填料一般比较软且不耐压的原因造成。
在如此宽的pH范围,最大的好处是可以在化合物的保留平台区去开发方法(pH1-3,pH9-12),这样能得到更稳定更容易重现的方法,对酸性,中性,尤其是碱性化合物都能得到理想的峰形。
注:Waters UPLC色谱柱与Xbridge采用同类型填料,只是颗粒度是1.7um,所以不再重复。
缺点:价格高,平均每支¥7000多的,不是大多数中国客户可以接受的。
2、MerckChromolith整体化色谱柱Merck公司2001年推出。
优点:高流速、低压力,可以快速分析样品,因为压力低,所以可以串联色谱柱以获得更高的柱效而不用担心色谱柱耐压问题,低压力是因为硅胶棒的大量中孔的存在,中孔的存在也让这支色谱柱不怕堵,在处理比较脏的样品的时候会优势很大(如中药),实际的寿命也因此延长。
这个色谱柱最大的特点是柱效高出峰时间快,特别适合之前分析时间超长的实验条件,目前很好的例子就是人参的指纹图谱,因为成分复杂,之前出峰要2个小时,现在用整体化色谱柱30min 就可以分析完了(已有报导),且不影响柱效,类似于UPLC,但不像UPLC那么容易堵。
缺点:规格单一,单价比较高,单价¥7000左右,所以通过串联获得更高柱效的方式显得比较奢侈。
waters酰胺基色谱柱
Waters公司是一家知名的分析仪器制造商,其生产的色谱柱在液相色谱(Liquid Chromatography,简称LC)领域中应用广泛。
酰胺基色谱柱是Waters公司提供的一种色谱柱,具有独特的选择性和稳定性,常用于多种化合物的分离和分析。
酰胺基色谱柱通常使用酰胺官能团作为固定相的配体,这种配体能够提供极性和非极性相互作用,适用于多种类型化合物的分离。
与传统的C18色谱柱相比,酰胺基色谱柱在分离一些极性化合物时显示出更优的性能。
在选择和使用酰胺基色谱柱时,需要注意以下几点:
1.样品性质:根据样品的极性、分子大小和样品基质
等因素选择合适的酰胺基色谱柱。
2.流动相:酰胺基色谱柱通常对流动相的pH值和有机
溶剂种类比较敏感,需要仔细选择流动相的组成,
以保证色谱分离的效果和柱子的寿命。
3.温度:温度对酰胺基色谱柱的分离性能和稳定性也
有影响,需要根据实验要求调整色谱柱的工作温
度。
4.保护柱:为了延长色谱柱的使用寿命,建议在色谱
系统中安装保护柱,以防止杂质和颗粒物对色谱柱
的损害。
总的来说,Waters酰胺基色谱柱以其独特的分离性能和稳定性,在液相色谱分析中有着广泛的应用,能够满足不同领域用户的需求。
XBridge™色谱柱专门为液相色谱方法开发和快速纯化而设计,用户能够在整个pH范围内使用种类多样的流动相体系和很宽的温度范围进行方法开发,从而建立稳定耐用的分析方法。
XBridge OBD™制备色谱柱在高pH条件下分离和纯化碱性化合物能够得到更高的纯度,并且上样量可提高几十倍。
XBridge色谱柱具有非常稳定的性能和更长的寿命,即使在最苛刻的条件下。
它采用革命性的创新技术生产,而且按照行业内最严苛的质量标准进行质量控制,因此成为用户针对挑战性色谱分离的值得信赖的解决方案。
XBridge色谱柱具有如下优势
∙HPLC方法无间隙转换到UPLC®
∙极端pH条件下的更长的寿命和可靠性
∙OBD制备柱的卓越性能
XBridge 色谱柱的特性参数。
waters液相色谱柱的尺寸
Waters是一家著名的液相色谱柱生产商,他们提供各种规格
的液相色谱柱以满足不同应用需求。
一般来说,Waters液相
色谱柱的尺寸通常由内径和长度两个参数决定。
内径(inner diameter)是液相色谱柱管壁内圆形截面的直径,
一般用毫米(mm)表示。
常见的内径尺寸有2.1 mm、3.0 mm、4.6 mm等。
长度(length)是液相色谱柱的有效分离区域的长度,一般用
毫米(mm)表示。
常见的长度尺寸有50 mm、100 mm、150 mm、250 mm等。
此外,Waters还提供一些特殊尺寸的液相色谱柱,用于特定
应用或技术,比如超高效液相色谱(UHPLC)柱和超高压液
相色谱(UPLC)柱等。
需要根据具体的实验需求选择适当的液相色谱柱尺寸,以实现所需的分离效果和分离速度。
基于第一代杂化颗粒技术的XTerra®系列高效液相色谱柱, 可以让色谱工作者在药物发现,方法开发和纯化分离领域使用高pH值流动相。
∙XTerra颗粒能耐受二甲基亚砜(DMSO)溶剂,可延长高通量药物发现研究中色谱柱的寿命。
∙宽pH 范围使得方法开发研究人员在所需的pH值条件下操作,以获得最佳选择性。
∙高载荷量使得分离纯化的科学家在高pH值条件下,在纯化碱性化合物时,一次进样量增加六十倍。
XTerra 色谱柱特性
键合相类型颗粒状态孔径(s) (µm)碳载量 (Å)端基(%)是否端基封尾
XTerra MS C18 球形 2.5, 3.5, 5, 10 µm 125 15.5 是
XTerra MS C8 球形 2.5, 3.5, 5, 10 µm 125 12 是
XTerra RP18 球形 3.5, 5, 10 µm 125 15
是
XTerra RP8 球形 3.5, 5, 10 µm 125 13.5 是
XTerra Phenyl 球形 3.5, 5 µm 125 12 是
[ 杂化颗粒技术] 药物发现
方法开发分离和纯化
XTerra®色谱柱将硅胶和聚合物的最优特性与革命性的杂化颗粒专利*技术相结合,在合成中,使用甲基取代了部分硅羟基。
疏水性Si-C基团分布在颗粒骨架结构中,最后获得耐用的杂化(无机/有机)颗粒,可在如下条件操作:
∙高速
∙高温
∙高pH值.
经过键合和封端处理后,填料表面的残留硅羟基减少了33%,因此XTerra色谱柱分析碱性化合物时可得到尖锐对称的色谱峰,从而获得更好的分离。
*美国专利号6,686,035 B2
不同键合相的XTerra色谱柱对分离选择性的影响
不同键合相的XTerra色谱柱是方法开发策略的关键组成部分。
时获得更快的分析速度。
更快的流速和更短的色谱柱允许更短的梯度运行时间,却不会降低峰容量。
为了得到与LC/MS 分析相匹配的流速,请选择小内径的色谱柱。
XTerra色谱柱更宽的pH使用范围是改变可离子化的化合物色谱分离选择性的强有力工具。
XTerra 色谱柱使得pH成为方法开发的的有力工具。
XTerra 色谱柱在高pH值具有卓越的稳定
性,以更高的分辨率和上样量分离碱性化合物。