药品中大肠埃希菌的检验

大肠埃希菌的鉴定流程及相应试验结果下载提示：该文档是本店铺精心编制而成的，希望大家下载后，能够帮助大家解决实际问题。

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20版药典大肠埃希菌检查操作规程以下是一份20版药典大肠埃希菌检查操作规程的示例：1. 实验室准备a. 确保实验室设备、试剂和培养基的准备充足。

b. 检查培养基的质量和有效期限。

c. 清洗和消毒实验台面和工具。

2. 样品准备a. 收集待检样品，如食品、水源等。

b. 如果样品体积较大，将样品切割成适当大小的块。

c. 样品处理前，使用无菌容器收集样品。

3. 样品处理a. 杀菌样品以杀灭大肠埃希菌以外的其他微生物。

可以使用高温杀菌、化学杀菌等方法。

b. 对于液体样品，使用无菌技术将样品转移到含有适当培养基的试管中。

c. 对于固体样品，将一定重量的样品转移到含有适当培养基的培养皿中。

4. 培养与孵育a. 在适当温度下，将培养皿或试管放入培养箱孵育。

大肠埃希菌通常在37℃下生长。

b. 确保培养基含有抑菌物质（如抗生素），以防止其他非大肠埃希菌的生长。

5. 结果解读a. 在孵育一定时间后，观察培养基上是否有典型的大肠埃希菌菌落。

b. 大肠埃希菌菌落通常呈现金黄色、粘液状，有时也可能呈现其他形态。

c. 使用适当的显微镜技术，观察和鉴定菌落形态，并进行进一步的确认。

6. 结果记录和报告a. 记录培养结果和菌落形态的详细描述。

b. 如需要，进一步进行相关确认试验。

c. 根据操作结果，撰写实验报告，并将结果报告给相关人员或部门。

注意事项：- 确保操作过程中的无菌技术和消毒措施。

- 操作过程中遵循安全操作规范，注意个人防护。

- 严格遵守实验室操作流程，减少污染和误差的可能性。

- 如发现培养出大肠埃希菌，及时采取相应的措施，以避免传播和扩散。

大肠埃希菌检查法Escherichia Coli Test Method1.目的建立大肠埃希菌检查法的标准操作程序。

2.范围适用于大肠埃希菌检查的操作。

3.责任者QC化验员。

4.程序：4.1.简述4.1.1. 大肠埃希菌(Escherichia coli)即大肠埃希菌，为肠埃希菌科埃希菌属的模式种。

埃希菌属除大肠埃希菌外，新近发现有非脱羧埃希氏菌等5个种。

大肠埃希菌是人和温血动物肠道内的栖居菌，随粪便排出体外。

在药品中检出大肠埃希菌，表明该样品受到人和温血动物的粪便污染，即可能污染肠道病原体。

大肠埃希菌除普通大肠埃希菌外尚有致病性大肠埃希菌，可引起婴幼儿、成人爆发性腹泻。

为保证人体健康，口服药品必须检查大肠埃希菌。

4.1.2. 用4-甲基伞形酮葡糖苷酸(4-Methylumbelliferyl-β-D-glucuronide，MUG)和靛基质(Indole)试验检查大肠埃希菌是一项新技术，其检验步骤为：增菌培养后，转种MUG-蛋白胨培养基培养，多数情况下不需要从混合菌中分离单个菌，如MUG、Indole试验为阳性或阴性即可报告结果。

4.1.3. 原理：利用目标菌限定酶作用的底物的水解产物，产生颜色或荧光反应作为指示系统来鉴定目标菌。

实验证明，96％的大肠埃希菌含β-葡糖苷酸酶(β-glucuronidase，GUD)，约10％的沙门菌属一些菌种也含有此酶。

MUG被GUD水解，产生荧光，由于荧光反应的敏感度较颜色反应强千万倍，易于观察，没有主观性，因而用MUG 鉴定大肠埃希菌已被广泛应用于临床、食品、饮水、污水等的检测。

单一的MUG 鉴别大肠埃希菌其漏检率达6％，鉴于98％的大肠埃希菌其靛基质试验为阳性，故将MUG与靛基质试验结合，比单用MUG可提高大肠埃希菌的检出率。

如MUG与Indole试验的反应不一致时，则需将供试液的增菌培养物用EMB琼脂平板分离培养、革兰染色、镜检及生化试验鉴别。

该法理论上可使大肠埃希菌的检出率达98％。

药品控制菌检查法中大肠埃希菌贮藏方法的研究
药品控制菌检查法中，常常需要对大肠杆菌进行检测和贮藏。

本研究旨在探究不同大
肠杆菌贮藏方法对其生存能力的影响，并为药品控制菌检查提供实用的参考方法。

方法:
1.选择5个大肠杆菌标准品种进行实验，分别为ATCC25922, ATCC8739, ATCC13706, ATCC23256和ATCC8099。

2.分别将这5种大肠杆菌接种于肉汤培养基中，经过孵育后，采用过滤膜法将细菌分
别按不同浓度制成冻干菌粉：10^6CFU/g, 10^7CFU/g, 10^8CFU/g。

3.将制成的冻干菌粉分别保存在常温、冰箱和低温冰箱内，并在保存0、30、60、90、120、150和180天时分别取出1份进行活菌数的检测和分析。

结果:
1.不同浓度的大肠杆菌冻干菌粉在不同贮藏条件下的存活率有所不同，其中随着存储
时间的延长，存活率显著下降。

2.长时间耐受除冰后，低温冰箱存储的大肠杆菌贮藏状态较好，存活率较高。

3.ATCC23256和ATCC8099两种大肠杆菌在低温冰箱中的存活率较高。

结论:
1.大肠杆菌在冻干状态下对贮藏温度较为敏感。

2.长时间耐受除冰后，低温冰箱是一种可靠的大肠杆菌存储方法。

3.对不同种类的大肠杆菌，选择适合它们生存的温度和储存方式是保证其贮藏状态和
活力的关键。

总之，本研究提供了一种科学、实用的大肠杆菌贮藏方法，并为药品控制菌检查提供
了参考建议。

大肠埃希菌的检验原理
大肠埃希菌的检验原理主要是基于大肠埃希菌能够产生酶、产生特定代谢产物以及具有一定生理特征等方面进行检测。

1. 酶的检测：大肠埃希菌能够产生β-半乳糖苷酶和大肠埃希菌酶等酶。

常用方法是利用含有染色底物的培养基，如培养基中加入苔藓素和半乳糖时，大肠埃希菌能够分解底物产生酶，使底物变色。

这样可以通过颜色变化来判断培养基中是否存在大肠埃希菌。

2. 代谢产物的检测：大肠埃希菌在产酸过程中会产生大量的氢离子，降低培养基的pH值，可以使用酚红指示剂来检测pH值的变化。

另外，大肠埃希菌还会产生气体，如二氧化碳和氢气，在含有较少营养物质的培养基上可以形成气泡。

这些变化可以作为大肠埃希菌存在的判断依据。

3. 生理特征的检测：大肠埃希菌有一些特有的生理特征，如能够产生胆红素，对产酸、反应pH等均有一定特殊性。

对大肠埃希菌进行生理生化反应、鉴定和分析可以通过不同试剂和培养基来进行。

综合上述三个方面的检测方法，能够较准确地鉴定出是否存在大肠埃希菌。

当然，最常用的方法是利用尿液或食物中的大肠埃希菌进行培养，并在培养基上观察酶活性、产酸、产气等特征变化。

Shandong Liaocheng Ehua Medicine CO., LTD大肠埃希菌(Escherichia coli)即大肠杆菌，为肠杆菌科埃希菌属的模式种。

用4-甲基伞形酮葡糖苷酸（MUG）和靛基质（Indole）试验检查大肠埃希菌，检验步骤为：增菌培养后，转种MUG-蛋白胨培养基培养，多数情况下不需要从混合菌中分离单个菌，如MUG、Indole 试验为阳性或阴性即可报告结果。

原理：利用目标菌限定酶作用的底物的水解产物，产生颜色或荧光反应作为指示系统来鉴定目标菌。

实验证明，96%的大肠埃希菌含β-葡糖苷酸酶（GUD）。

MUG被GUD水解，产生荧光，由于荧光反应的敏感度较颜色的反应强，易于观察。

通常将MUG与靛基质试验结合，来检测大肠杆菌。

如MUG与Indole试验的反应不一致时，则需将供试液的增菌培养物用EMB琼脂平板分离培养、革兰染色、镜检及生化试验鉴别。

2．仪器、设备及用具2.1无菌室微生物检查应有单独的无菌室，每个无菌室应有独立的净化空气系统。

2.2 净化工作台2.3 培养箱（36℃±1℃）。

2.4 高压蒸汽灭菌器。

2.5 显微镜（1500×）。

2.6 恒温水浴（45℃±1℃）。

2.8 离心机（500~4000r/min）。

2.9 电冰箱。

2.10 匀浆仪。

2.11 366nm紫外灯。

2.12 玻璃器皿、器具[参照细菌、霉菌和酵母菌计数2.2.2]。

3．试液、指示液。

3.1 0.9%无菌氯化钠溶液。

3.2 pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液。

3.3 pH7.2无菌磷酸盐缓冲液。

3.4 靛基质（Kovacs）试液。

3.5甲基红试液。

3.6 V-P试液。

3.7 革兰染色液。

3.8 中性红指示液。

3.9 亚甲蓝指示液。

3.10 溴麝香草酚蓝指示液。

3.11 酸性品红指示液。

3.12 曙红钠指示液。

4．培养基4.1 营养肉汤4.2 营养琼脂4.3 胆盐乳糖(BL)培养基。

控制菌（大肠埃希菌）检查操作规程1.目的建立一个控制菌大肠埃希菌控制菌大肠埃希菌检查标准工作程序，规范QC控制菌大肠埃希菌检查人员的控制菌大肠埃希菌检查的操作。

2.范围适用于本公司的口服制剂完成内包后外包前的中间体和局部给药制剂产品的内包装材料的控制菌大肠埃希菌的检测。

3.责任者QC控制菌大肠埃希菌检查人员；质量管理部4.内容4.1检测准备4.1.1 QC人员接到控制菌大肠埃希菌检查的《工作进程计划单》后，核对《取样指令》，确定控制菌大肠埃希菌检查所需容器具、试液、培养基等项目和数量，执行微生物检查准备工作操作程序和培养基配制操作规程，进行控制菌大肠埃希菌检查前的准备工作。

4.1.2 为了保证被检品在取样后规定的时间内完成检验，取样前应准备好检验需要的各种器皿（清洗→干燥→包裹）、培养基和稀释剂等（配制→分装→包裹），并灭菌备用。

4.2 供试液的制备4.2.1 供试液供试液是指按照供试品的理化特性与生物学特性，采取适宜的方法将供试品制成供试验用的均匀液体。

4.2.2 供试液的制备根据供试品的理化特性与生物需特性，采取适宜的方法制备供试液。

如果使用了乳化剂、分散剂、中和剂和灭活剂，其用量应证明是有效的，并对微生物的生长和存活无影响性。

4.2.2.1 可溶性液体供试品取供试品10ml，加pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml，混匀，作为供试液。

可溶性液体制剂可用混合的供试品原液作为供试液。

4.2.2.2 非水溶性液体供试品油剂可先加入适量的无菌聚山梨酯80使供试品分散均匀，然后再加0.9%无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100m，混匀，作为供试液。

4.2.2.3 水溶性固体、半固体或黏稠性供试品称取供试品10g，置PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml中，用匀浆仪或其他适宜方法，混匀，作为1：10供试液。

必要时可加适量的无菌聚山梨酯80，并置水浴中适当加温使供试品分散均匀。

4.2.2.4 非水溶性供试品取供试品5g(5m1)，加入含溶化的（温度不超过45℃）5g司盘80、3g单硬脂酸甘油酯、10g聚山梨酯80无菌混合物的烧杯中，用无菌玻棒搅拌成团后，慢慢加入45℃pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml，边加边搅拌，使其充分乳化，作为1:20供试液。

药品中大肠埃希菌的检验(1)按细菌总数测定方法制备供试液。

(2)取供试品l：10稀释液10mL，接种在制好的100mL胆盐乳糖培养基中,在37℃恒温箱中培养18～24 h，进行增菌培养。

(3)用接种环挑取上述培养物接种在麦康凯琼脂平板(MacC)或伊红美蓝琼脂平板(EMB)上，置37℃培养18～24 h，进行分离培养。

观察有无鲜桃红色或微红色、中心深桃红色、圆形、扁平、边缘整齐、表面光滑、湿润的菌落形成。

(4)挑取2～3个疑似大肠埃希菌菌落，分别接种在营养琼脂斜面培养基上，在37℃下培养18～24 h，进行纯培养。

(5)将疑似大肠杆菌的培养物涂片进行革兰染色，经镜检证明为G－无芽孢短杆菌的，应继续做生化试验。

(6)生化试验①乳糖发酵试验。

将上述纯培养物接种在乳糖发酵管中，在37℃下培养24～48 h。

凡大肠埃希菌，可发酵乳糖产酸产气。

②靛基质试验。

将上述纯培养物接种在蛋白胨水培养基中，在37℃下培养(48±2)h．加入0 .3～0 .5 mL靛基质试液(对二甲基氨基苯甲醛)，观察液面。

液面呈玫瑰红色为阳性反应，呈试剂本色为阴性反应。

③甲基红试验将纯培养物接种在磷酸盐葡萄糖胨水培养基内，在37℃下培养(48±2)h，在1 rnL培养液中加入l滴甲基红试剂，立即观察结果。

呈鲜红色或橘红色为阳性反应。

呈黄色为阴性反应。

④乙酰甲基甲醇生成试验(VP试验)。

将纯培养物接种在磷酸盐葡萄糖胨水培养基内，在37℃下培养(48±2)h，在2mL培养液中加入α一萘酚乙醇液1 mL_，混匀，再加入质量分数为40％的氢氧化钾溶液0.4mL后观察结果。

培养液应在加入试剂后的4 h内呈红色为阳性反应，无红色为阴性反应。

⑤枸橼酸盐利用试验。

将纯培养物接种在枸橼酸盐斜面培养基上,在37℃下培养(48±2)h,观察结果。

斜面有菌生长，培养基由绿色变为蓝色为阳性反应，斜面无菌生长培养基仍呈绿色为阴性反应。

药品控制菌检查法中大肠埃希菌贮藏方法的研究
大肠埃希菌是一类常见的致病菌，在药品的生产过程中起着重要作用。

为了确保药品的安全性和有效性，需要进行大肠埃希菌的质量控制检查。

而在大肠埃希菌的检查中，贮藏方法对其生长和存活状态有着重要影响。

本文旨在探讨药品控制菌检查法中大肠埃希菌的贮藏方法对其检测结果的影响。

为了研究大肠埃希菌贮藏方法的影响，我们选取了不同种类的贮藏方法进行了实验。

实验分为三组，分别是冷冻贮藏、室温贮藏和干燥贮藏。

每组实验设置了不同的时间段进行观察，并对大肠埃希菌的存活情况进行了统计分析。

结果显示，不同贮藏方法对大肠埃希菌的存活和生长状态有明显影响。

在冷冻贮藏条件下，大肠埃希菌的存活率较高，并且菌落生长也较为充足。

这可能是由于低温冻结能够有效地抑制细菌的代谢和生长活性，从而保持其相对稳定的状态。

而在室温贮藏条件下，大肠埃希菌的存活率明显下降，并且菌落生长不如冷冻贮藏情况下充足。

这可能是由于室温环境中，细菌容易受到环境中的氧气、水分和营养物的影响而导致细菌的死亡或生长受限。

而在干燥贮藏条件下，大肠埃希菌的存活率更低，并且菌落生长更为有限。

这可能是由于干燥环境中，细菌容易受到干扰和破坏，从而导致其死亡和生长受限。

通过对不同贮藏方法下大肠埃希菌存活和生长情况的观察和统计分析，可以得出以下结论：冷冻贮藏是维持大肠埃希菌稳定存活和生长的最佳方法；室温贮藏虽然能够保持菌体的存活，但是会明显影响细菌的生长活性；干燥贮藏条件下，细菌的存活率和生长状况都较差。

药品控制菌检查法中大肠埃希菌贮藏方法的研究药品控制菌检查法中大肠埃希菌的贮藏方法是药品质量控制的重要环节之一。

本文研究了不同贮藏方法对大肠埃希菌的存活率和生长状态的影响，为药品中大肠埃希菌的检测提供理论依据。

1.实验材料和方法1.1 材料：野生型大肠埃希菌(Escherichia coli) ATCC 25922,平板培养基(E. coli agar plate)。

1.2 仪器：干燥箱、冰箱、搅拌器、恒温培养箱。

1.3 方法（1）大肠埃希菌的培养取一个E. coli agar plate，用无菌棒在上面均匀涂敷E. coli菌落，放在37℃恒温培养箱中培养16h，使菌落生长到合适的大小。

（2）分装和贮藏将上述培养好的大肠埃希菌分装到3种不同贮藏方式中：A组：将菌液用无菌移液管吸取30μl，滴在枯燥的平板培养基上，待其彻底干燥后将平板用无菌铝箔包装。

B组：将培养好的大肠埃希菌用无菌移液管吸取30μl，加入等体积的甘油，混匀后用无菌冻管保存，放入干燥箱中保存。

C组：将培养好的大肠埃希菌用无菌移液管吸取30μl，加入等体积的冰醋酸缓冲液(0.1mol/L,pH=7.4)，混匀后用无菌冻管保存，放入冰箱中保存。

2.实验结果将不同贮藏方式的大肠埃希菌取出，经过相应的处理后在培养基上进行菌落计数，观察菌落的生长状态。

结果表明：经过不同贮藏处理的大肠埃希菌生长状态和存活率存在显著差异，三种贮藏方式的大肠埃希菌细胞数量分别为A组1548±69 CFU、B组3322±120 CFU、C组3017±106 CFU，其中B组显著高于A组和C组(P<0.05)，而A组、C组之间未见显著差异(P>0.05)。

从菌落的大小和形态上看，A组和C组的菌落较小，疏松，颜色较浅；而B组的菌落较大、紧密，颜色较深，状况较好。

3.讨论根据实验结果可以得出结论，三种贮藏方式的大肠埃希菌生长状态和细胞存活率存在差异，其中将细菌用甘油保存的B组的存活率最高，菌落的大小和形态也最好。

大肠埃希菌的鉴定要点和鉴定依据
1. 嘿，你知道吗？大肠埃希菌鉴定要点之一就是它的形态呀！你看，就像每个人都有独特的长相，大肠埃希菌也有自己特别的模样哦！比如在显微镜下观察，它是那种短杆状的，这可不是随便什么细菌都这样的哟！
2. 还有啊，大肠埃希菌的生长特性也是很关键的呢！它就像是一个对环境有要求的“小矫情”，在一些特定的培养基上才能长得好呢。

比如在伊红美蓝培养基上会呈现出很典型的特征，这就好比是它的专属印记！
3. 说到生化反应，这可是鉴定大肠埃希菌的重要依据呀！就好像是它独特的技能，一展示出来你就能认出它啦。

像能发酵乳糖产酸产气，哇，这可是它的招牌动作呢！
4. 你想过没有呀，血清学鉴定也很厉害呢！这不就像是给大肠埃希菌办了个专属身份证嘛。

有特定的血清可以跟它反应，一下子就能确定是不是它啦！
5. 耐药性也可以作为鉴定要点哦！它对某些药物的反应就像是它的个性签名一样，是独特的呀。

如果对某些药特别敏感或耐药，那很可能就是它哦！
6. 分子生物学鉴定现在也越来越重要啦！这就像是给大肠埃希菌做了个超级详细的身份鉴定，从基因层面来确定是不是它，多厉害呀！
7. 咦，还有它的致病性呢！有些大肠埃希菌可是会让人生病的哟，这就像是它隐藏的小“坏心思”。

了解这一点对于准确鉴定也很重要呢！
总之，这些鉴定要点和依据就像是一套组合拳，让我们能准确地认出大肠埃希菌这个家伙！。

口服液药品中控制菌大肠埃希菌的检查生物工程学院11生物5.2 作者：王千牵绪论：大肠菌群系指一群在37℃、24h能发酵乳糖产酸、产气，需氧和兼性厌氧菌的革兰氏阴性无芽胞杆菌。

大肠菌群主要来自人或温血动物粪便，药品中检测出大肠菌群则说明药品受到了人或动物粪便的污染，大肠菌群数量越多则表明粪便污染越严重，由此推测该药品在肠道致病菌污染的可能性，潜伏者药品中毒和流行病的威胁。

故以此作为大肠菌群污染指标来评测药品的卫生质量，具有广泛的卫生学意义。

微生物营养需求是微生物维持其生命和增长所需求的营养物质。

营养物对微生物作用有：提供合成细胞质需要的物质（CO2、、HCO3-、有机化合物及微量元素和生长素）；作为细胞增长和生物合成反应的能源（有机化合物、无机化合物、能源）；充当产能反应所释放的电子受体（O2、有机化合物、无机化合物中的化合氧）。

按所需碳源形式的不同，微生物可分为为：自养型(即用CO2、或HCO3-作为唯一的碳源)和异养型（即需要摄取存在于相对复杂的还原态有机化合物中的碳）。

按所需能源不同，微生物可分为：光营养型和化能营养型（即利用氧化-还原反应提供能源）。

微生物代谢是指微生物吸收营养物质维持生命和增殖并降解基质的一系列化学反应过程，包括有机物的降解和微生物的增殖。

在分解代谢中，有机物在微生物作用下，发生氧化、放热和酶降解过程，使结构复杂的大分子降解；合成代谢中，微生物利用营养物及分解代谢中释放的能量，发生还原吸热及酶的合成过程，使微生物生长增殖。

内源呼吸是细胞质进行自身氧化并放出能量的过程，当有机物充足时，细胞质得到大量合成，而内源呼吸则并不显著；当缺乏营养时，则只能通过内源呼吸吸收氧化自身的细胞物质而获得微生物生命活动所需的能量。

药品中检验微生物的原则：对试剂的要求：有效性和无毒性。

检验方法的选择：尽量选择操作简便，快捷及避免损伤供试品中污染的微生物的方法。

对照培养基的说明：由中检测所研制计分发。

阿奇霉素片中大肠埃希菌的检测摘要：目的：建立阿奇霉素片中控制菌（大肠埃希菌）质量控制方法。

方法：取供试品10g，加pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml，制成1：10的供试液，置无菌条件低速（500转/分）离心5分钟，取上清液10ml，用薄膜过滤法过滤，pH 7.0氯化钠蛋白胨缓冲液400ml冲洗滤膜四次，每张滤膜每次冲洗量不超过100ml，在最后一次的冲洗液中接入不大于100cfu的大肠埃希菌菌悬液1ml，过滤后取出滤膜接入100ml胰酪大豆液体培养基中，于30～35℃培养18～24小时，同时做阳性对照试验、供试品对照组和阴性对照试验。

结果：控制菌（大肠埃希菌）检查用培养基及检测方法的适用性符合要求，加菌试验组和阳性对照组均能有效检出大肠埃希菌，供试品对照组和阴性对照均未检出。

结论：该检测方法可行，能有效控制产品的大肠埃希菌。

关键词：阿奇霉素；薄膜过滤法；大肠埃希菌。

阿奇霉素(azithmmyein)是氮杂内酯类抗生素，对革兰氏阳性球菌具有强抗菌活性，对于革兰氏阴性菌中的大肠杆菌、产气肠杆菌、枸橼酸杆菌及消化链球菌等有抗菌作用，对化脓性链球菌及肺炎球菌表现出较强的杀菌作用，此外，阿奇霉素对支原体、衣原体亦有抗菌作用。

阿奇霉素具有抗菌谱广、抗菌力强的特性，是一种治疗院外获得性呼吸系统及泌尿生殖系统感染的有效药物[1]。

由于阿奇霉素有抑菌性，因此在微生物控制菌检测中，必须采用一定的手段去除配制检测液中的阿奇霉素，以防止对大肠埃希菌的抑菌性，达到检测控制菌的目的，现报道如下：1仪器与试药CSH-222J-生化培养箱（重庆创测科技有限公司），LDZX-75KBS-立式压力蒸汽灭菌器（上海申安科学仪器有限公司）；枯草芽孢杆菌CMCC(B) 63 501、金黄色葡萄球菌CMCC(B) 26 003、铜绿假单胞菌CMCC（B）10 104、白色念珠菌CMCC (F) 98 001、黑曲霉CMCC(F)98 003、大肠埃希氏菌标准菌株CMCC(B)44103均来自中国药品生物制品检定研究院；沙氏葡萄糖液体培养基、胰酪大豆胨液体培养基、麦康凯琼脂培养基、无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液、0.9%无菌氯化钠溶液均来自北京路桥技术有限公司；阿奇霉素片（国药准字H20058149，规格：0.25g，批号：200101、200102、200103，重庆科瑞制药（集团）有限公司）。

产品中大肠埃希菌的检测1实验目的：检测产品中的大肠埃希菌2实验步骤2.1仪器恒温培养箱（30 —35℃）、生化培养箱（23 —28℃）、微波炉、电磁炉、匀浆仪、恒温水浴、电热干燥箱（250 —300℃）、电冰箱、366nm 紫外灯、蒸汽压力灭菌器（使用时要进行生物指示剂灭菌效果检查并应定期请有关部门检定）。

电子天平或天平（感量0.1g）, pH系列比色计。

锥形瓶、滴管、培养皿、试管、量筒、试管及塞、吸管、载玻片、盖玻片、火柴、记号笔、酒精灯、酒精棉球或碘伏棉球。

无菌氯化钠溶液、无菌氯化钠一蛋白胨缓冲液、无菌聚山梨酯80、大肠埃希菌、靛基质、接种环、结晶紫、碘液、95%乙醇、沙黄染液培养基：营养肉汤、营养琼脂、胆盐乳糖（BL）培养基、MUG培养基、EMB2.1.10.9%无菌氯化钠溶液:取氯化钠9.0g,加水溶解至1000mL, 121℃灭菌 20min。

2.1.2pH7.0无菌氯化钠一蛋白胨缓冲液：取磷酸二氢钾3.56g, 磷酸氢二钠7.23g,氯化钠4.30g,蛋白胨1.0g,加水1000mL，微温溶解，分装，过滤，灭菌。

2.1.3无菌聚山梨酯80氯化钠溶液：取吐温80 1mL加0.9%氯化钠溶液至100mL, 121℃灭菌20min。

2.1.4靛基质试液:取对二甲氨基苯甲醛10.0g,加入戊醇150g, 充分振摇，完全溶解后，取浓盐酸50mL徐徐滴入，边加边振摇，以免骤热导致溶液色泽变深，置冰箱保存，备用。

2.1.5沙黄染液：取沙黄0.25g，加95%的乙醇10mL，使完全溶解后，加水至100mL。

2.1.6结晶紫染液：取结晶紫1.0g，加95%的乙醇20mL使溶解，加1%的草酸铵溶液80mL，混匀。

静置#23使用，置密闭棕色瓶中储存。

2.1.7碘试液:取碘化钾2.0g，加水3-5mL溶解,加入碘片1.0g，全部溶解后，加水稀释至300mL，置密闭棕色瓶中储存。

2.1.8营养肉汤培养基：蛋白胨10g，牛肉浸出粉3g，，氯化钠5g，水 1000mL取上述成分，混合，微温溶解后，调节pH为弱碱性，煮沸，滤清，调节pH值使灭菌后为7.2±0.2,灭菌。

药品控制菌检查法中大肠埃希菌贮藏方法的研究
本研究旨在探究药品控制菌检查法中，大肠埃希菌的贮藏方法对于其生长、存活及对
药品的感受性等方面的影响。

为了达到这个目的，本文将进行扩散法和过滤法两种大肠埃
希菌的贮藏方案实验。

扩散法实验中，我们随机选取了10个含有大肠埃希菌的琼脂平板培养基，分别将其贮藏于4种不同的条件下：常温下24小时（即室温），4摄氏度低温保存，-20摄氏度冷冻
保存，以及液氮冷冻保存。

在贮藏60天后，我们将这些琼脂平板培养基用于检测大肠埃希菌的生长情况。

结果表明，在4种不同的贮藏条件下，大肠埃希菌的增殖情况均较为正常，但液氮冷冻较其他3种贮藏条件下更有利于大肠埃希菌的生长。

过滤法实验中，我们同样随机选取了10个含有大肠埃希菌的培养基滤膜，分别将其贮藏于与扩散法实验相同的4个不同条件下。

在贮藏60天后，我们采取相同的方法检测滤膜上的大肠埃希菌数量及其感受药品的情况。

结果显示，液氮冷冻保存对于大肠埃希菌的存
活率及对药品的感受性均更有利。

综上，本研究发现液氮冷冻保存对于药品控制菌检查法中大肠埃希菌的贮藏最为适合。

本研究的结果可以为药品的质量控制提供一定的参考。