致病性大肠埃希氏菌及其检验

牛肉样品中产志贺毒素大肠埃希氏菌和肠致病性大肠埃希氏菌的分离鉴定朱应飞，聂　翔，熊丽霞，吴学平，占忠旭，匡佩琳（江西省检验检测认证总院食品检验检测研究院，江西南昌 330000）摘　要：于2018年9月—2019年3月，每个月从超市和农贸市场中抽取20个样本，共抽取140个牛肉及制品样本，在qPCR初筛时stx阳性率为45.8%，eae的阳性率为52.2%。

每月的stx初筛阳性率分别为65%、60%、80%、5%、25%、45%和40%；eae初筛阳性率分别为70%、70%、65%、0%、40%、65%和55%。

检出携带stx基因的产类志贺毒素大肠埃希氏菌样本4份，样本阳性菌株检出率为2.9%；检出携带eae基因的肠致病性大肠埃希氏菌样本12份，样本阳性菌株检出率为8.6%。

关键词：产志贺毒素大肠埃希氏菌；肠致病性大肠埃希氏菌；分离；鉴定Isolation and Identification of Shiga Toxin Producing Escherichia coli and Enteropathogenic Escherichia coli in BeefSamplesZHU Yingfei, NIE Xiang, XIONG Lixia, WU Xueping, ZHAN Zhongxu, KUANG Peilin (Jiangxi General Institute of Testing and Certification Food Testing Institute, Nanchang 330000, China)Abstract: From September 2018 to March 2019, 20 samples were taken from supermarkets and farmers’ markets every month, with a total of 140 beef and product samples taken. the positive rate of stx was 45.8%, and the positive rate of eae was 52.2%. The monthly positive rates of stx initial screening positive rates of 65%, 60%, 80%, 5%, 25%, 45%, and 40%, respectively; The positive rates of eae initial screening were 70%, 70%, 65%, 0%, 40%, 65%, and 55%, respectively. Four Shiga toxin producing Escherichia coli samples carrying the stx gene were detected, with a positive strain detection rate of 2.9%; From September 2018 to March 2019, 12 samples of enteropathogenic Escherichia coli carrying the eae gene were detected, with a positive strain detection rate of 8.6%.Keywords: Shiga toxin producing Escherichia coli; enterogenic Escherichi coli; separation; appraisal产志贺菌毒素的大肠杆菌（Shiga Toxin Producing Escherichia coli，STEC）和肠致病性埃希氏菌（Enterogenic Escherichi coli，EPEC）是世界上最重要的食源性病原体之一。

大肠埃希氏菌生化鉴定结果大肠埃希氏菌（Escherichia coli）是一种常见的细菌，可以引起多种感染性疾病，包括腹泻、尿路感染和食物中毒等。

鉴定大肠埃希氏菌的生化特征可以帮助确定病原菌的身份以及其潜在的耐药性和毒力因子。

本次实验目的是对一株致病性大肠埃希氏菌样本进行生化鉴定，以确认其菌株的性质和特征。

首先，我们进行了气体产生实验。

在Triple Sugar Iron Agar（TSI）培养基中，观察到菌落周围发生了气体产生，此结果表明该菌株具有产气性。

产气性通常意味着大肠杆菌等需要葡萄糖产生酸，进而分解产生气体的细菌。

其次，我们进行了甲烷发酵试验。

在Methyl Red（MR）试剂中，当菌液发酵产酸时，溶液颜色由黄色变成红色。

然而，该菌株在MR试剂中没有产生红色反应，这表明它无法通过甲烷发酵产酸。

这一结果与典型的大肠杆菌不同，因为大肠杆菌通常可以通过此途径产酸。

进一步，我们进行了亮氨酸脱氨酶试验。

使用亮氨酸脱氨酶（LDC）培养基，如果菌株具有亮氨酸脱氨酶活性，菌液会变色。

然而，我们观察到该菌株在培养基中没有出现任何颜色变化，这表明它不具备亮氨酸脱氨酶活性。

亮氨酸脱氨酶活性通常是大肠杆菌的典型特征之一。

此外，我们还进行了尿素酶试验。

使用尿素平板培养基，如果菌株具有尿素酶活性，培养基颜色将由黄色变为粉红色。

然而，我们观察到该菌株在培养基上未显示出任何颜色变化。

这暗示着该菌株可能缺乏尿素酶活性，与大肠杆菌的典型特征不同。

最后，我们进行了青霉素酶试验。

使用青霉素酶试纸进行反应检测，在试纸上出现蓝色点状斑点表示菌株具有青霉素酶活性。

而对于这个菌株，我们观察到在试纸上没有出现蓝色斑点。

这意味着该菌株可能对青霉素类药物敏感，这对于抗生素选择治疗提供了重要信息。

综上所述，通过对致病性大肠埃希氏菌样本进行生化鉴定，我们发现该菌株具有产气性，但与典型的大肠杆菌不同，它不表现出甲烷发酵、亮氨酸脱氨酶和尿素酶活性。

《微生物与实验技术》食品中大肠埃希菌的检验实验一、实验目的1.熟悉大肠埃希菌的检验原理2.熟悉大肠埃希菌检验的基本操作二、实验原理1.大肠杆菌，又叫大肠埃希氏菌是条件致病菌，在一定条件下可以引起人和多种动物发生胃肠道感染或尿道等多种局部组织器官感染。

因此，检查食品中是否存在治病大肠埃希氏菌具有实际意义。

2. 在TSI琼脂中,典型菌株为斜面与底层均呈黄色，产气或不产气，不产生硫化氢(H2S)。

置MUG-LST肉汤管于长波紫外灯下观察,MUG阳性的大肠埃希氏菌株应有荧光产生,MUG阴性的应无荧光产生，大肠埃希氏菌O157:H7/NM为MUG试验阴性,无荧光。

三、试剂及器材1 月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤：2 EC肉汤（E.coli broth）：3 蛋白胨水：4磷酸盐缓冲液：5伊红美蓝（EMB）琼脂：6 营养琼脂斜面：7结晶紫中性红胆盐琼脂（VRBA）：8革兰氏染色液：9无菌1mol/LNaOH：10无菌1mol/LHCl：四、操作方法样品的稀释1. 固体和半固体样品：称取25g样品，放入盛有225mL磷酸盐缓冲液的无菌均质杯内，8000r/min~10000r/min均质1min~2min，制成1:10的样品匀液或放入盛有225mL磷酸盐缓冲液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1min~2min制成1:10的样品匀液。

2.液体样品：以无菌吸管吸取25mL样品置盛有225mL磷酸盐缓冲液的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成1.10的样品匀液。

3. 样品匀液的pH值应在6.5~7.5之间，必要时分别用1mol/LNaOH或1mol/LHCl 调节。

4 .用1mL无菌吸管或微量移液器吸取1:10样品匀液1mL，沿管壁缓缓注入9mL 磷酸盐缓冲液的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面）振摇试管或换用1支1mL无菌吸管或吸头反复吹打，使其混合均匀，制成1：100的样品匀液。

埃希氏大肠菌及检验一、定义：大肠埃希氏菌更习惯称为大肠杆菌，分类于肠杆菌科，归属于埃希氏菌属，并且大肠杆菌株ATCC 11775是该属的模式菌种。

大肠杆菌的不同菌株间DNA相关性为80%，而与同科的志贺氏菌属（除鲍氏志贺氏菌外）的DNA相关性可达80-87%。

与人类疾病有关的大肠杆菌，统称为致泻性大肠杆菌（此名称不易与致病性大肠杆菌相混淆），一般包括五种：即肠毒素性大肠杆菌（ETEC）、致病性大肠杆菌（EPEC）、出血性大肠杆菌（EHEC）、侵袭性大肠杆菌（EIEC）和粘附性大肠杆菌（EAEC）。

文献报道还有几种，象：凝集性大肠杆菌、即产VT毒素又具有侵袭性的大肠杆菌等，但目前尚未达成统一共识。

二、生物学特性：基本形态特征：此菌为两端钝圆的短小杆菌，一般大小约0.5μ-0.8μm*1.0μm-3.0μm,因生长条件不同，个别菌体可呈近似球状或长丝状。

此菌多单独存在或成双，但不呈长链状排列。

约有50%左右的菌株具有周生鞭毛而能运动，但多数菌体只有1-4根，一般不超过10根，故菌体动力弱；多数菌株生长有比鞭毛细、短、直且数量多的菌毛，有的菌株具有荚膜或微荚膜；不形成芽胞，对普通碱性染料着色良好，革兰氏染色阴性。

培养特征：由于此菌合成代谢能力强，在含无机盐、胺盐、葡萄糖的普通培养基上生长良好。

最适生长温度为37℃，在42-44℃条件下仍能生长，生长温度范围为15-46℃。

在普通营养琼脂上生长表现3种菌落形态：（1）光滑型：菌落边缘整齐，表面有光泽、湿润、光滑、呈灰色，在生理盐水中容易分散。

（2）粗糙型：菌落扁平、干涩、边缘不整齐，易在生理盐水中自凝。

（3）粘液型：常为含有荚膜的菌株。

此菌兼性厌氧，在有氧条件下生长良好，最适生长pH为6.8-8.0，所用培养基pH为7.0-7.5,若pH值低于6.0或高于8.0则生长缓慢。

生化反应与血清学反应大肠杆菌属于卫生学意义的大肠菌群和粪大肠菌群的范畴，因此，必须符合大肠菌群和粪大肠菌群的有关定义，在检测大肠菌群、粪大肠菌群的基础上，可以应用I（吲哚）、M（甲基红）、Vi（3羟基-2-丁酮）、C（柠檬酸）即IMViC 生化试验对大肠杆菌作进一步鉴定，其IMViC结果为++--或-+--。

---文档均为word文档，下载后可直接编辑使用亦可打印--- 摘要：烟台海阳地区某猪场新生仔猪发生了大规模的腹泻，为了判断其发病原因及病原体种类，从该养猪场采集腹泻仔猪粪便及肛门拭子48份，对粪样进行了细菌的分离纯化、革兰氏染色镜检，生化试验，PCR鉴定，血清型鉴定以及药物敏感性检测。

结果表明，致病性大肠杆菌感染导致了该猪场发生仔猪腹泻疫情。

分离到的菌株血清型为987P型，该菌株对头孢噻肟、恩诺沙星、环丙沙星、左氧氟沙星敏感。

通过检测为该猪场仔猪腹泻的治疗与防控提供了依据。

关键词：仔猪腹泻；大肠杆菌；分离；鉴定Isolation and identification of E. coli from piglets with diarrhea Abstract：Yantai haiyang area mass happened a pig newborn piglets diarrhea，in order to determine the causes and kinds of pathogens，collected from the pig diarrhea piglets 48，feces and anal swabs of fecal samples for the separation and purification of bacteria，gram's staining microscopy，biochemical test，PCR identification，serotype identification and drug sensitivity test.The results showed that the pathogenic escherichia coli infection caused diarrhea in piglets in the farm.The serotype of the isolated strain was 987p，which was sensitive to cefotaxime，enoxacin，ciprofloxacin and levofloxacin.The results provided a basis for the treatment，prevention and control of diarrhea in piglets.Key words:Piglets diarrhea;E. coli;Separation;Identification引言大肠杆菌（Escherichia coli），又叫大肠埃希氏菌，属于肠杆菌科埃希氏菌属，是短杆菌，它的两端呈钝圆形，大小一致，革兰氏染色下呈现红色，为革兰氏阴性菌，一般情况下多是单一或两个存在，但不会排列成长链。

大肠埃希氏菌实验室检验方法简介大肠埃希氏菌（Escherichia coli）是一种常见的肠道细菌，它可以引起多种疾病，包括食物中毒、泌尿道感染和肠道感染等。

因此，对大肠埃希氏菌进行实验室检验是非常重要的。

本文将介绍大肠埃希氏菌实验室检验的方法和步骤。

实验室检验方法大肠埃希氏菌实验室检验主要包括以下几个方面：1.样品采集：根据不同的检验要求，可以采集不同的样品，例如食物、水样、粪便等。

采集样品时需要注意避免污染和交叉感染。

2.样品处理：对于食物和水样，通常需要进行前处理步骤，如浸泡、稀释等。

对于粪便样品，可以直接进行处理。

3.培养方法：将样品接种到适当的培养基上，培养培养基通常包括富营养的琼脂、选择性培养基等。

大肠埃希氏菌喜欢在富含葡萄糖的培养基上生长。

4.鉴定方法：通过观察菌落形态、生理生化特性和抗生素敏感性等指标，进行大肠埃希氏菌的鉴定。

常用的鉴定方法包括免疫学方法、分子生物学方法和生化试剂盒等。

5.结果判读：根据鉴定结果，判断样品中是否存在大肠埃希氏菌。

根据不同的检验要求，可以进行定性或定量判读。

实验步骤下面是一个常见的大肠埃希氏菌实验室检验的步骤示例：1.样品采集：根据检验要求，采集相应的样品。

例如，如果是食物样品，可以使用无菌取样棒在食物表面轻轻刮取一些，然后放入无菌容器中。

2.样品处理：对于食物样品，可以将其浸泡在含有缓冲液的容器中，摇动一段时间，使菌落充分分散。

对于水样，可以进行适当的稀释。

3.培养方法：将处理后的样品接种到富含葡萄糖的培养基上，如MacConkey琼脂或EC琼脂。

根据需要，可以使用选择性培养基，如Eosin MethyleneBlue琼脂。

4.培养条件：将接种的培养基置于适当的温度和湿度条件下，一般为37摄氏度，培养时间通常为24小时。

5.菌落观察：观察培养基上的菌落形态，大肠埃希氏菌通常呈现为粉红色的菌落，具有金属光泽。

6.鉴定方法：根据需要，可以进行进一步的鉴定。

大肠艾希氏菌的鉴定[资料介绍]随着季节的转暖，人们身边的细菌和病毒又开始活跃起来，各家医院和新闻媒体相继报导了多起春季由于饮食造成的腹泻，人们的饮食卫生问题又再次被提上了议程。

本人对全市的几家冻禽供应商进行了抽样检测，用血清学诊断及生化鉴定方法对产肠毒素大肠艾希氏菌进行分离和鉴定，其结果可以说明当今冻离类产品中所存在的问题。

[目录][1]gb/t4789-2021中华人民共和国国家标准食品微生物学检验[2]韩秀兰,柳连顺,杜敏,等.致泻性大肠埃希菌病原学原产研究[j].中国医学检验杂志,2001,2(4):258～261.[3]杨胜彬,胡昌军,米庆秀等.一起肠产毒性大肠埃希菌o6:lt致婴幼儿腹泻爆发的调查[j].中华流行病学杂志,2021,25(11):977.keywords:enterovirulente.coliseparatejudge1.样品来源2.检验项目3.检验方法4.评判标准5.仪器与试剂结果与分析[原文]产肠毒素大肠艾希氏菌的拆分和鉴别所须要材料与方法1.样品来源：从本市批发部、超市、另售点等12家供货单位共采取鸡翅、鸡腿、鸡胸、鸡尖、鸡爪、整鸡及鸭头、鸭掌等9个冻离类产品计20件样品。

2.检验项目：致泻性大肠艾希氏菌。

3.检验方法：3.1增菌和拆分培育：以无菌相关手续称取检验25g，加到225ml营养肉汤中，以均质器击碎1min或用乳钵提杀菌砂切碎。

抽出适度，注射乳糖胆盐培养基，以测量大肠菌群mpn，其余的迁入500ml广口瓶内，于36±1℃培育6h。

挑取1环，注射于1管30ml肠道菌增菌肉汤内，于42℃培育18h。

3.2分离：将乳糖发酵阳性的乳糖胆盐发酵管和增菌液分别划线接种麦康凯或伊红美蓝琼脂平板；污染轻微的检样，可以将检样匀液轻易划线注射麦康凯或伊红美绿平板，于36±1℃培育18～24h，观测菌落。

不但必须特别注意乳糖蒸煮的菌落，同时也必须特别注意乳糖不蒸煮和迟缓蒸煮的菌落。