植物细胞色素C氧化酶活性测定试剂盒产品说明书中文版

NADH氧化酶（NOX）活性检测试剂盒说明书可见分光光度法注意：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定。

货号：BC0630规格：50T/24S产品内容：试剂一：液体25mL×1瓶，-20℃保存。

试剂二：液体5mL×1瓶，4℃保存。

试剂三：液体0.5mL×1瓶，-20℃保存。

试剂四：液体70mL×1瓶，4℃保存。

试剂五：液体10mL×1瓶，4℃保存。

试剂六：粉剂×2瓶，-20℃保存；临用前每瓶加入9mL双蒸水，用不完的试剂仍-20℃保存。

产品说明：NOX（EC1.6.99.3）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，可在氧气存在下，直接将NADH氧化为NAD。

该酶不仅参与NAD的再生，而且与免疫反应密切相关。

NOX能够将NADH氧化为NAD，NADH的氧化与2,6二氯酚靛蓝（DCPIP）的还原相偶联，蓝色的DCPIP被还原为无色的DCPIP，在600nm下测定蓝色DCPIP的还原速率计算出NADH氧化酶活性的大小。

需自备的仪器和用品：可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、冰、蒸馏水操作步骤：一、样品测定的准备：1、组织、细菌或细胞中胞浆蛋白与线粒体蛋白的分离：2、准确称取0.1g组织或收集500万细胞，加入1mL试剂一和10µL试剂三，用冰浴匀浆器或研钵匀浆。

3、将匀浆600g，4℃离心5min。

4、将上清液移至另一离心管中，11000g，4℃离心10min。

5、将上清液转移至另一EP管中，用于线粒体中泄露NOX活性测定。

6、沉淀即为线粒体，加入200µL试剂二和2µL试剂三，用于NOX活性测定。

7、NOX总酶活即为上清中NOX活性与沉淀中NOX活性之和。

二、测定步骤和加样表：1、可见分光光度计预热30min以上，调节波长至600nm，蒸馏水调零。

2、试剂四37℃保温放置。

Integrated mapping of pharmacokinetics and pharmacodynamics in a patient-derived xenograftmodel of glioblastomaElizabeth C. Randall a, Kristina B. Emdal b, Janice K. Laramy c, Minjee Kim c, Alison Roos d, David Calligaris e, Michael S. Regan e,Shiv K. Gupta f, Ann C. Mladek f, Brett L. Carlson f, Aaron J. Johnson g, Fa-Ke Lu e,h,i, X. Sunney Xie h, Brian A. Joughin b, Raven J. Reddy b, Sen Peng j, Walid M. Abdelmoula e, Pamela R. Jackson k, Aarti Kolluri k, Katherine A. Kellersberger l, Jeffrey N. Agar m, Douglas A. Lauffenburger b, Kristin R. Swanson k, Nhan L. Tran d, William F. Elmquist c, Forest M. White b, Jann N. Sarkaria f, and Nathalie Y. R.Agar a,e,nSupplementary InformationSupplementary Figures 1 – 8Supplementary Tables 1 – 2Supplementary Fig. 1 Measured and theoretical m/z of erlotinib detected from each tissue section and corresponding Δppm.Supplementary Fig. 2 Comparison of relative peak intensities detected at m/z 394.1760 and 380.1760 corresponding to ions of erlotinib and erlotinib metabolite M13/M14 respectively, a) average mass spectrum over all regions analyzed and b) example single pixel spectra from locations indicated inset.Supplementary Fig. 3 Registration of H&E image and MALDI MS ion image of erlotinib.Supplementary Fig. 4 Erlotinib quantification from MALDI MSI of mouse brain (BR) sections with GBM tumors and GBM flank (FL) tumor sections at 2-hour dosing time (placebo or dosage 33mg/kg, and 100 mg/kg). a) Ion image of Erlotinib (m/z 394.176 ± 0.001) displaying the relative abundance of the drug within the tissue mimetic model, brain, and flank sections. Sections were imaged at 125 μm spatial resolution by MALDI MSI. b) Data series in blue indicate the calibration curve constructed by plotting the maximum intensity values for the monoisotopic Erlotinib peak in the average mass spectra of each homogenate core of the tissue mimetic model (500 − 50000 ng/g). The red, green, and pink data points display the maximum intensity values from the monoisotopic Erlotinib peak in the average mass spectra of the brain, and flank sections (delineated by red and green lines on the MALDI MSI image), and the tumor area within the brain sections (delineated by a pink line on the MALDI MSI image), respectively.Supplementary Fig. 5 MALDI ion image of ions with m/z 616.176 (heme) in the dataset used for quantitative measurement of erlotinib, high intensity of heme can be seen around and within tumor region for 33 mg/kg intracranial tumor. Regions of interest delineating IC tumor from normal brain are displayed inset.Supplementary Fig. 6 Segmentation of MALDI MSI data for calculation of concentration of erlotinib in IC PDX, a) bisecting k-means clustering of full MSI dataset (k = 16), ROIs indicate IC tumor region, manually selected from segmentation map, b) MALDI MS ion image of ions with m/z 394.176 (erlotinib), c) enlarged view of segmentation map for brain dosed with 100 mg/kg erlotinib, with ROI delineating tumor core (yellow) and tumor edge (green), with associated erlotinib ion image and histology of serial section, d) boxplot of ion intensity for m/z 394.176 over different doses in IC and flank tumors and segmented regions of IC tumor, alongside scatterplot of individual datapoints.Supplementary Fig. 7 Example images showing description of image analysis for tissue IF, ROIs were manually drawn around tumors in Hoechst image using ImageJ software (shown in yellow), this ROI was then copied to either the EGFR or phosphorylated-EGFR (not shown) image and average intensity within tumor ROI was calculated. EGFR is detected with higher intensity from the tumor (outlined in yellow) compared with normal brain tissue (in background).Supplementary Fig. 8 Example fluorescence images (Hoechst in blue, EGFR/p-EGFR in red) of IC PDX tumors from placebo and 100 mg/kg treatment groups, selections displayed in yellow indicate manual segmentation of tumors for quantitative assessment. Variable intensity of EGFR and p-EGFR was observed throughout tumor regions under all treatment conditions. Scale bar = 1000 µmSupplementary Table 1 correlation matrix of Pearson’s correlation coefficient for selected ion images corresponding to erlotinib (m/z 394.176), M13/M14 metabolite (m/z 380.160), heme (m/z 616.177) and a tumor biomarker (m/z 503.949).Supplementary Table 2 Correlation coefficient between heme and drug ion images from MALDI MSI data, higher correlation was observed between heme and drug in IC tumors compared with flank, suggesting the drug is less available in IC tumors.flank tumor 33 mg/kg 2426.7 0.0098flank tumor placebo <LOD n/aIC tumor 100 mg/kg 2182.3 0.0268IC tumor 33 mg/kg 2354.2 0.0199IC tumor core100 mg/kg 2787.1 0.0146IC tumor edge 100 mg/kg 1446.5 0.0415IC tumor core 33 mg/kg 2411.5 0.0099IC tumor edge 33 mg/kg 2011.2 0.0192IC normal hemisphere 100 mg/kg 1082.9 0.027IC normal hemisphere 33 mg/kg 619.3 9.45E-05。

植物中脂氧合酶（LOX微量法注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。

货号：BC0325规格：100T/96S产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

试剂名称规格保存条件提取液液体110 mL×1瓶4℃保存粉剂一粉剂×1瓶4℃保存试剂一液体20 mL×1瓶4℃保存试剂二液体3mL×1瓶4℃保存溶液的配制：1、提取液：临用前将粉剂一倒入提取液中，溶液为悬浊液，使用前需摇匀。

产品说明：LOX广泛存在于植物组织中，特别是黄豆种子中。

LOX催化不饱和脂肪酸氧化反应，导致膜脂过氧化。

在植物的生长发育、成熟衰老及逆境胁迫过程中具有重要作用。

LOX催化亚油酸氧化，氧化产物在234nm处有特征吸收峰；测定234nm吸光度增加速率，来计算LOX活性。

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。

如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：研钵/匀浆器、冰、台式离心机、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔UV板、可调式移液枪和蒸馏水。

操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）称取约0.1g样本，加提取液1mL，冰上充分研磨，16000g 4℃离心20min，取上清液置冰上待测。

二、测定步骤1. 分光光度计/酶标仪预热30 min以上，调节波长到234nm，蒸馏水调零。

2. 试剂一在25℃水浴中预热30min以上。

3. 空白管：依次在微量石英比色皿/96孔板中加入20μL蒸馏水、160μL试剂一和20μL试剂二，迅速混匀后于234nm比色，记录15s和75s的吸光值，分别记为A1和A2。

空白管只需做1-2次4. 测定管：依次在微量石英比色皿/96孔板中加入20μL上清液、160μL试剂一和20μL试剂二，迅速混匀后于234nm 比色，记录15s和75s的吸光值，分别记为A3和A4。

线粒体呼吸链复合体Ⅳ/细胞色素C 氧化酶活性检测试剂盒说明书微量法注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。

货号：BC0945规格：100T/96S产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

试剂名称规格 保存条件 提取液液体75 mL×2瓶 2-8℃保存 试剂一液体33mL×1瓶 2-8℃保存 试剂二粉剂×2瓶 -20℃保存 试剂三粉剂×2支 2-8℃保存溶液的配制：1、 试剂二：试剂放于试剂瓶内玻璃瓶中。

临用前取1支加入13.5mL 试剂一溶解，用不完的试剂-20℃分装保存2周，避免反复冻融；2、 试剂三：试剂置于试剂瓶内EP 管中；临用前取1支加入2mL 试剂一溶解，用不完的试剂-20℃保存2周，避免反复冻融；3、 工作液的配制：临用前取0.5mL 试剂三加入到溶解好的4.5mL 试剂二中混合备用（约25T ），或者按比例现用现配。

产品说明：线粒体复合体Ⅳ又称细胞色素C 氧化酶，也是线粒体呼吸电子传递链主路和支路的共有成分，负责催化还原型细胞色素C 的氧化，并最终把电子传递给氧生成水。

还原型细胞色素C 在550nm 有特征光吸收，线粒体复合体Ⅳ催化还原型细胞色素C 生成氧化型细胞色素C ，因此550nm 光吸收下降速率能够反映线粒体复合体Ⅳ酶活性。

Reduced Cytochrome C （550nm ） Oxidized Cytochrome C注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。

如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅/恒温培养箱、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵/匀浆器/细胞超声破碎仪、冰和蒸馏水。

操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）1. 称取约0.1g 组织或收集500万细胞，加入1.0 mL 提取液，用冰浴匀浆器或研钵匀浆。

多酚氧化酶（PPO）活性检测试剂盒说明书微量法货号：BC0195规格：100T/48S产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系本公司工作人员。

试剂名称规格保存条件提取液液体100mL×1瓶4℃保存粉剂粉剂×1瓶4℃保存试剂一液体20mL×1瓶4℃保存试剂二液体5mL×1瓶4℃保存溶液的配制：1、提取液：临用前将粉剂一倒入提取液中，溶液为悬浊液，使用前需摇匀。

产品说明：PPO（EC1.10.3.1）是一种广泛存在于植物体内的含铜的氧化酶，能使一元酚和二元酚氧化产生醌，从而引起褐化，与果蔬加工、茶叶品质和组培等密切相关。

PPO能够催化邻苯二酚产生邻苯二醌，后者在410nm有特征光吸收。

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。

如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）1、收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照每500万细菌或细胞加入1mL提取液，超声波破碎细菌或细胞（功率20%，超声3秒，间隔10秒，重复30次）；8000g4℃离心10分钟，取上清，置冰上待测。

2、称取约0.1g组织，加入1mL提取液进行冰浴匀浆。

8000g4℃离心10分钟，取上清，置冰上待测。

3、血清（浆）：直接检测。

二、测定步骤1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至410nm，蒸馏水调零。

2、样本测定（在EP管中依次加入下列试剂）试剂名称（μL）测定管对照管试剂一200200试剂二5050样本50煮沸的样本5037℃(哺乳动物)或25℃（其它物种）中准确水浴10min后，迅速放入沸水中加热10min。

充分混匀，5000g，常温离心10min，收集上清，取200μL至微量玻璃比色皿或96孔板中，410nm处检测测定管和对照管吸光度，计算ΔA=A测定-A对照。

一、产品简介：原花青素（Oligomeric Proantho Cyanidins，OPC）是一类黄烷醇单体及其聚合体的多酚化合物，广泛存在于植物的各种器官中，具有极强的抗氧化性和清除自由基的作用，广泛的应用于医药，食品，化妆品，保健品行业。

在酸性条件下，植物原花青素A环上的间苯二酚和间苯三酚与香草醛发生缩合反应，产生有色化合物，在500nm处有特征吸收峰，测定500nm光吸收值可计算原花青素的含量。

二、试剂盒组分与配制：三、需自备的仪器和用品：酶标仪、96孔板、台式离心机、恒温水浴锅/培养箱、研钵/匀浆器、天平、可调式移液器、甲醇和蒸馏水。

四、操作步骤：建议正式实验前选取2个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验样本和试剂浪费！1、预实验样本制备①组织样本：称取0.1g样本，加入1mL提取液进行匀浆，用超声法进行提取（功率300W，温度25℃，时间30min），12000rpm，4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

【注】：若增加样本量，可按照组织质量(g)：提取液体积(mL)为1：5~10的比例进行提取。

②细菌/细胞样本：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；取约500万细菌或细胞加入1mL提取液，超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；12000rpm，4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

【注】：若增加样本量，可按照细菌/细胞数量（10）：提取液（mL）为500~1000：1的比例进行提取。

③液体样本：直接检测；若浑浊，离心后取上清检测。

2、标准溶液的配制：把10mg/mL标准品母液用提取液稀释成1、0.8、0.6、0.4、0.2、0.1mg/mL 的标准溶液备用。

3、预实验上机操作：①酶标仪预热30min以上，调节波长至500nm。

②操作表：4、正式实验：①若预实验测定吸光值超出标准吸光值线性范围：高于最高值建议将待测样本适当稀释后再进行测定，低于最低值建议适当增加样本质量W后再进行测定，并将改变后的W和D 代入公式计算；②确定好最适实验条件后，正式实验样本制备同预实验样本制备；③正式实验按照预实验上机操作步骤进行（标准管和空白管预实验已做，正式实验可选做）。

BC0960 -- 第 1 页，共 4 页Ca Mg -ATP 酶活性检测试剂盒说明书可见分光光度法货号：BC0960 规格：50T/24S产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

试剂名称 规格 保存条件 试剂一 液体30 mL×1瓶 2-8℃保存 试剂二 液体4 mL×1 瓶 2-8℃保存 试剂三 粉剂×2支 -20℃保存 试剂四 液体2 mL×1瓶 2-8℃保存 试剂五 液体3 mL×1瓶 2-8℃保存 试剂六 粉剂×1瓶 2-8℃保存 试剂七 粉剂×1瓶 2-8℃保存 试剂八 液体15 mL×1 瓶 常温保存 标准品液体1 mL×1支2-8℃保存溶液的配制：1、 试剂三：临用前取1支加入1 mL 蒸馏水充分混匀待用；现用现配。

用不完的试剂-20℃分装保存一周。

2、 试剂六：临用前加入15 mL 蒸馏水，溶解后2-8℃保存两周。

3、 试剂七：临用前加入15 mL 蒸馏水，溶解后2-8℃保存两周。

4、 标准品：10mmol/L 标准磷贮备液。

将标准品 20倍稀释，即取0.1 mL 标准品加1.9 mL 蒸馏水充分混匀，配成0.5 μmol/mL 标准磷应用液，现用现配。

5、 定磷剂的配制：按H 2O ：试剂六：试剂七：试剂八=2:1:1:1的比例配制，配好的定磷剂应为浅黄色。

若无色则试剂失效，若是蓝色则为磷污染，定磷剂根据样本量现用现配。

注意：配试剂最好用新的烧杯、玻棒和玻璃移液器，也可以用一次性塑料器皿，避免磷污染。

产品说明：Ca ++Mg ++-ATP 酶广泛分布于植物、动物、微生物和细胞中，可催化ATP 水解生成ADP 和无机磷。

根据Ca ++Mg ++-ATP 酶分解ATP 生成ADP 及无机磷，通过测定无机磷的量来确定ATP 酶活性高低。

ATP ADP + Pi注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。

Calcein/PI 细胞活性与细胞毒性检测试剂盒产品简介：碧云天生产的Calcein/PI 细胞活性与细胞毒性检测试剂盒(Calcein/PI Cell Viability/Cytotoxicity Assay Kit ，或Calcein/PI Live/Dead Viability/Cytotoxicity Assay Kit)是一种非常便捷的基于Calcein-AM (钙黄绿素)和PI (碘化丙啶)双荧光染色法检测动物细胞死活的试剂盒。

本试剂盒使用便捷，荧光染色和检测仅需约30分钟。

本试剂盒染色30分钟后，就可进行后续的荧光显微镜拍照、流式分析或者荧光酶标仪定量等荧光检测和分析。

本试剂盒的原理是两种探针可分别检测细胞内酯酶活性和细胞膜完整性，从而反映细胞活性与细胞毒性。

其中Calcein AM 染色活细胞，呈现绿色荧光；而碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)染色死细胞，呈现红色荧光。

本试剂盒用于检测动物细胞活性与细胞毒性效果参考图1。

图1. Calcein/PI 细胞活性与细胞毒性检测试剂盒用于HT-29(人结肠癌细胞)细胞活性与细胞毒性检测的效果图。

HT-29细胞(C6410)在明场视野下仔细观察可以看到有明显的坏死细胞(图A)；绿色荧光标记的即为Calcein 染色的活细胞(图B)，红色荧光标记的即为PI 染色的死细胞(图C)；Calcein和PI 双染叠加(merge)后可以非常清晰地观察到活细胞和死细胞的荧光染色差别(图D)。

在本实验中，HT-29细胞经TSZ 处理4小时。

TSZ 为TNFα、SM-164和Z-V AD-FMK 组成的细胞程序性坏死诱导试剂(C1058)。

实测数据会因实验条件、检测仪器等的不同而存在差异，图中数据仅供参考。

Calcein AM (Calcein Acetoxymethyl Ester ，中文名称为钙黄绿素AM或钙黄绿素乙酰氧基甲酯)，是一种可以对活细胞进行荧光染色的细胞染色试剂，Calcein AM 是在Calcein (钙黄绿素)的基础上增加了乙酰氧基甲酯(AM)基团，加强了疏水性，因此能够很容易穿透细胞膜。

检测试剂盒(愈创木酚比色法)说明书
4ml预冷的PODLysisBuffer研磨或匀浆，4 POD粗提液，-20℃冻存，用于过氧化物酶的
A测定0=加入PODAssaybuffer工作液后立即测定的测定孔吸光度值t=反应时间(min)=3
注意事项：
1、待测样品中不能含有酶抑制剂，同时需避免反复冻融。

2、POD酶液提取时注意低温操作，防止酶活性。

3、以煮沸的酶液为对照时，酶要充分失活。

4、POD氧化剂和POD终止液具有一定腐蚀性，请小心操作。

5、POD氧化剂易挥发，请密闭保存，否则检测效率下降。

6、如果没有分光光度计，也可以使用普通的酶标仪测定，每次检测指标不宜过多，否则操作时间不一，有可能导致样本间的差异。

7、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。