菌检培养基配制、使用和检验标准操作规程
- 格式：doc
- 大小：31.00 KB
- 文档页数：3
目的：建立菌检培养基配制、使用和检验的方法，以保证检验结果客观准确。
应用范围：适用于微生物检查、生物测定检查用培养基的配制及使用。
责任人：菌检检验员、QA、质量部经理。
内容：
1 概述
培养基是人工配制的生物营养物质，目前，多数微生物应使用商品化的干粉培养基，这些培养基性能一般比较稳定，只需按照产品说明书的规定贮存条件，配制，在有效期内使用即可获得满意的效果，而自制培养基则应进行较严格的质量控制。
2 培养基的制备通则
2.1 常用玻璃仪器的制备
2.1.1 概述
制备培养基所用的吸管、锥形瓶、毛细吸管、平皿等玻璃仪器用前要用肥皂水洗刷后用清水冲洗干净，晾干后备用。
2.1.2 细则
2.1.2.1 平皿用纸或布包好，或装在金属盒内，于121℃高压蒸汽灭菌20min后烘干，备用。
2.1.2.2 试管管口用棉花塞或硅氟塑料试管塞塞好，用布或报纸包好，于121℃高压蒸汽灭菌20min后烘干，备用。
2.1.2.3 吸管与滴管先用少许棉花塞于吸口端（防止污染物吸出或橡皮帽内的气体污染）然后用纸包好或装入金属吸管筒内，于121℃高压蒸汽灭菌20min后烘干，备用。
其他玻璃器皿均可按上法进行处理，也可装金属筒内于160～180℃干热灭菌2h后，备用。
2.2.培养基的制备及储存
2.2.1 配制
2.2.1.1配制干粉培养基时，先将蒸馏水按足量加入容器中，然后称取一定量培养基干粉放入水中，静置10～15 min，搅拌，振荡，或延长时间以促进溶解，一般不要加热，必要
时加热，但时间不宜过长，温度不宜过高，避免某些营养成分被破坏。
2.2.1.2 溶化一般应放在玻璃器皿或搪瓷器内。
加入蒸馏水，隔水加热以促其溶解，加热时应经常搅拌，防止焦化，待其溶解后加足水分。
2.2.2 校正酸碱度
2.2.2.1 培养基必须有适当的pH。
测定pH是培养基配制过程中的重要步骤之一，干粉培养基一般已校正过pH，用时也必须再验证。
2.2.2.2 pH测定时，一般用指示剂滴入培养基中观察，其颜色的变化，或用pH计校正，测定标准温度应为（25±2℃），如与所需pH不符，可用酸或碱液加以校正。
一般用无菌的1mol/L氢氧化钠校正弱碱性培养基，高压灭菌培养基的pH可比最终pH值调离0.2左右，灭菌后基本合适，调整pH后要加热，使培养基澄清。
2.2.3 培养基的分装
2.2.
3.1 液体、半固体培养基一般在高压、灭菌前分装，改装试管容积的1/3，在灭菌后还要加入成分的液体、半固体培养基，灭菌后，再分装于灭菌试管或锥形瓶中。
2.2.
3.2 固体培养基一般分装在250ml、500ml锥形瓶中，高压灭菌后根据需要分装平皿或试管。
2.2.
3.2.1 斜面制备低层，斜面分装于试管，装入容积1/5，灭菌后趁热放置成高层短斜面，待其凝固后应用。
2.2.
3.3 制成平板或分装于试管的培养基应进行下列检查：容器和盖子不得破裂，装量应相同，尽量避免形成气泡，固体培养基表面不得产生裂缝或涟漪，在冷藏温度下不得形成结晶，不得污染微生物等。
2.2.4 培养基的灭菌
培养基的灭菌多采用高压蒸汽灭菌各种培养基的灭菌时间和压力，按其成分不同而定。
普通培养基多采用121℃。
103.42kpa灭菌15min，组容器和装量较大时，可延长20min。
含糖培养基116℃、68.95kpa灭菌20min。
含糖、血清、鸡蛋等培养基可用流动蒸汽及血清凝固器80～100℃、30min，连续三天，间歇灭菌。
血清或组织液，采用低热56～58℃水浴1h，连续5～6天灭菌。
一些遇高温即被破坏的物质如尿素、腹水等，可用细菌过滤器，过滤除菌。
高压灭菌应严格按照操作规程执行，必须逐渐加热，彻底排除灭菌器内的空气，再逐渐升压保持预定的压力和时间，达到全部杀灭微生物。
培养基仅能进行一次蒸汽灭菌处理，
使用前的融化应用置45～50℃水浴融化，融化不得超过8小时。
固体培养基灭菌后的再融化只允许1次，以避免因过度受热造成培养基质量下降或微生物污染
2.2.5 培养基的储存
保存培养基的时间需视培养基中水分蒸发的程度及有无污染而定，已制备好的培养基要保存在2～25℃避光的环境，或置冰箱4～8℃冷藏。
培养基若保存于非密闭容器中，应在3周内使用；若保存于密闭容器中，可在1年内使用。
3 培养基的质量控制
3.1 培养基制备中各个环节的质量控制
3.1.1 配制培养基的各种成分
化学试剂要求化学（CP）以上规格，其中不包括对细菌生长有害的抑制物；对特殊要求的培养基如葡萄糖氧化一发酵（01F）管，除加入葡萄糖外，其他成分均不能含有任何可分解的糖类；又如供药敏试验用的培养基不应含有抗菌药物的抗体；用于鉴别产少量酸或碱的细菌的培养基不宜含有缓冲系统。
3.1.2 配制培养基时的pH测定
其波动范围应在规定的pH±0.2之内。
还要注意高压灭菌后的pH变化。
3.1.3 对所制备培养基的质量控制
每批培养基均应有配制记录，如名称配制量（各种成分用量）、配制人、配制日期、有效期。
3.2 培养基的适用性检查
培养基的适用性试验包括无菌性检查和灵敏度检查。
本检查可在供试品的无菌检查前或与供试品的无菌检查同时进行，符合规定者方可用于供试品的无菌检查。
同时进行检查时，所用培养基不符合无菌要求，则供试品的无菌检查结果视为无效。
培养基的灵敏度检查见《培养基灵敏度检验标准操作规程》.
4 变更历史。
