高效液相色谱法测定钩藤中钩藤碱、异钩藤碱含量 (2)

第49卷第8期2021年4月广州化工Guangzhou Chemical IndustryVol.49No.8Apr.2021钩藤不同部位生物碱类成分的含量测定及其质量评价刘小芬I,蔡洪鲍打王琼I,胡嘉璇打聂海澜I,蒋范任2(1益阳医学高等专科学校，湖南益阳413000；2益阳市食品药品检验所，湖南益阳413000)摘要：采用反相高效液相色谱法，对钩藤不同部位异钩藤碱、钩藤碱、去氢钩藤碱、异去氢钩藤碱4种生物碱类成分进行含量测定。

采用Gemini NX C18(250mmX4.6mm,5|im)色谱柱，以1%醋酸钱(A)-乙睛(B)为流动相进行梯度洗脱，流速l.OmL-min-1；检测波长为245nm；柱温25t；进样量10jl L o本方法简便可靠，专属性强，重现性好，适用于钩藤中生物碱的含量测定；钩藤不同部位生物碱类成分含量差异显著。

关键词：钩藤；异钩藤碱；钩藤碱；去氢钩藤碱；异去氢钩藤碱；反相高效液相色谱法；不同部位中图分类号：0657.72；R284.1文献标志码：B文章编号：1001-9677(2021)08-0153-03 Determination and Quality Evaluation of Alkaloids in Different Parts of Uncaria*LIU Xiao-fen,CAI Hong-kun1,WANG Qiong1,HU Jia-xuan,NIE Hai-lan,JIANG Fan-ren'(1Yiyang Medical College,Hunan Yiyang413000；2Yiyang Institute for Food and Drug Control,Hunan Yiyang413000,China)Abstract:The contents of isorhynchophylline；rhynchophylline,corynoxeine and isocorynoxeine in different parts of Uncaria were determined by RP-HPLG.The method was performed on a Gemini NX C18chromatographic column(250mmx 4.6mm,5|JLm),with1%ammonium acetate(A)-acetonitrile(B)as the mobile phase with gradient elution,the flow rate was1.0mL•min-1,the detect wavelength was245nm,the column temperature was25T,and the injection volume was10p,L.The method was simple,reliable,specific and reproducible.It was suitable for the determination of alkaloids in Uncaria.The contents of alkaloids in different parts of Uncariawere significantly different.Key words:uncaria;isorhynchophylline；rhynchophylline；corynoxeine；isocorynoxeine；RP-HPLC；different parts钩藤是《中国药典》収载品种，为茜草科植物钩藤干燥带钩茎枝，秋冬两季采收。

HPLC测定钩藤中钩藤碱和异钩藤碱的方法学探讨目的：探讨钩藤中钩藤碱和异钩藤碱的HPLC含量测定方法。

方法：采用RP-HPLC，对钩藤中钩藤碱和异钩藤碱的HPLC含量测定方法学进行考察，同时采用HPLC-ESI-MS研究钩藤碱和异钩藤碱在加热过程中的化学成分转化情况。

结果：钩藤碱在0.064～5.100 mg线性关系良好，精密度良好；当样品采用回流提取时，平均加样回收率87.51%～88.83%，提取回收率12.60%；当样品采用超声提取时，平均加样回收率99.48%～103.2%，提取回收率47.08%。

异钩藤碱在0.064～5.110 mg线性关系良好，精密度良好；当样品采用回流提取时，平均加样回收率107.9%～113.9%，提取回收率40.00%，当样品采用超声提取时，平均加样回收率97.00%～99.59%，提取回收率51.03%。

质谱分析结果表明回收率不合格的原因是钩藤碱在提取过程中大部分转化为异钩藤碱，有一小部分转化为未知成分；异钩藤碱在提取过程中转化为钩藤碱、去氢钩藤碱、异去氢钩藤碱及22-O-β-D-glucopyranosyl isocorynoxeinic acid 4种成分。

结论：HPLC测定钩藤中钩藤碱和异钩藤碱宜采用超声提取法，并应注意回收率问题。

标签：钩藤；钩藤碱；异钩藤碱；HPLC钩藤为茜草科植物钩藤Uncaria rhynchophylla、大叶钩藤U. rhynchophylla、毛钩藤Uncaria hirsuta、华钩藤U. sinensis或无柄果钩藤U. sessili fructus的干燥带钩茎枝[1]，主要分布于江西、广东、广西等地。

钩藤始载于《名医别录》，现仍为临床常用中药，主治小儿寒热，十二惊痫等[2-4]。

现代研究表明，钩藤的有效成分为吲哚类生物碱，主要为钩藤碱和异钩藤碱等，具有降血压、抗心律失常及抗血小板聚集和抗血栓形成作用[5-6]。

《中国药典》2010年版（一部）中钩藤的质量标准简单，未收录含量测定项。

HPLC法测定钩藤提取物中钩藤碱含量作者：张建奇金海燕来源：《科学与财富》2018年第35期摘要：建立反相高效液相色谱法测定钩藤提取物中钩藤碱的含量。

方法：采用奥泰公司C18色谱柱（220mm×4.6mm，5μm），乙腈-甲醇-5mmol/L乙酸铵水溶液用氨水调pH=9.8（20：30：50）为流动相，检测波长为240nm，流速为1.0ml/min，柱温为30℃。

钩藤碱在5～50μg·mL-1范围内呈良好的线性关系。

钩藤碱平均回收率分别为99.5%。

结论：本法简便、准确，可用于钩藤提取物中钩藤碱的含量测定。

关键词：钩藤提取物；含量；测定钩藤始载于《别录》，原名钓藤。

钩藤别名为吊藤（陶弘景）、钓钩藤（《滇南本草》）、金钩藤（《贵州民间方药集》）、挂钩藤（《药材学》）、钩耳（《湖南药物志》）等。

钩藤具有清热平肝，熄风止痉的功效。

《本草新编》记载：“钩藤，去风甚速，有风症者必宜用之。

但风火之生，多因于肾水不足，以致木燥火炎，于补阴药中，少用钩藤，则风火易散，倘全不补阴，纯用钩藤以祛风散火，则风不能息，而火且愈炽矣。

”钩藤具有抗炎、镇痛、抗肿瘤等多种药理作用[1-4]。

本文采用高效液相法对钩藤提取物中的钩藤碱的进行了含量测定。

1 仪器与试药1.1 仪器：VWR天平防震垫（北京慧龙环科环境仪器有限公司）；JJ-BF 0.001g天平（上海仁沃实业发展有限公司）；天星进样瓶清洗机TX-500型（北京天星科仪科技有限公司）；LC1620A高效液相色谱仪（河南郑州南北仪器设备有限公司）；长城狮鼎SHB-III型台式循环水式多用真空泵（郑州长城科工贸有限公司）；Milli-Q Direct水纯化系统（上海力晶科学仪器有限公司）；新芝scientz-T超声波提取机（宁波新芝生物科技股份有限公司）。

1.2 色谱柱：奥泰公司C18色谱柱（220mm×4.6mm，5μm）。

1.3 对照品：钩藤碱。

论钩藤的带钩率与质量控制黄惠莲【摘要】目的论钩藤的带钩率与质量的关系,建立钩藤的显微鉴定和异钩藤碱的高效液相含量测定.方法采用中药材粉末显微鉴定法,寻找钩藤药材在显微镜下的最常见的特征性细胞与带钩率的关系;用高效液相法测定不同带钩率的钩藤药材提取物的异钩藤碱含量.结果显微鉴定:特征性细胞与带钩率不同有关联;含量测定方法:操作简单,准确,异钩藤碱在1.0943～70.0350 μg之间呈良好的线性关系,异钩藤碱的回收率为 97.83%.结论本实验用定性、定量方法来检验不同带钩率的钩藤药材与提取物的质量,对药材的进一步开发利用提供了科学依据.并对传统用药习惯进行论证.【期刊名称】《中国现代药物应用》【年(卷),期】2012(006)003【总页数】3页(P1-3)【关键词】钩藤;异钩藤碱;显微鉴定;高效液相色谱法【作者】黄惠莲【作者单位】510450,广州王老吉药业股份有限公司【正文语种】中文钩藤为多源中药材，药典收载的品种有:茜草科植物钩藤 Uncariarhynch0phylla(Miq.)Jacks.、大叶钩藤 Uncariamacrophylla Wall.、毛钩藤Uncaria hirsuta Havil.、华钩藤 Uncaria sinensis(Oliv.)Havil.或无柄果钩藤Uncaria sessilifructus Roxb.的干燥带钩茎枝。

秋、冬二季采收，去叶，切段，晒干［1，2］。

钩藤药材是我公司产品小儿七星茶颗粒的主要原料，它具有清热平肝，息风定惊的作用;主要用于头晕目眩、风热头痛、小儿烦热惊厥等症。

是中医的儿科要药。

药用部分是钩藤植物花序柄变成的钩状物以及相连的一小部分枝条。

茎枝呈圆柱形或类方柱形，长2～3 cm，直径0.2～0.5 cm。

表面红棕色至紫红色者具细纵纹，光滑无毛，黄绿色至灰褐色者有时可见白色点状皮孔，被黄褐色柔毛。

多数枝节上对生两个向下弯曲的钩(不育花序梗)，或仅一侧有钩，另一侧为凸起的疤痕;钩略扁或稍圆，先端细尖，基部较阔;钩基部的枝上可见叶柄脱落后的窝点状痕迹和环状的托叶痕。

HPLC法测定中药钩藤中钩藤碱和异钩藤碱的含量目的：建立高效液相色谱法测定中药钩藤中有效成分钩藤碱和异钩藤碱的含量。

方法：色谱柱Lichrospher C18（4.0×250 mm，5 μm），流动相：甲醇：水（含10 mmol/L的三乙胺，冰醋酸调节pH值为7.4～7.6）=55：45，检测波长为254 nm，加入1%盐酸10μL作为改性剂。

温度为25 ℃，测定钩藤碱和异钩藤碱的线性关系方程。

结果：钩藤碱与异钩藤碱的回归方程分别为Y=9.2×104-0.281×104，Y=7.6×104-0.375×104，线性范围分别为0.100～1.60 μg/mL （r=0.9999），0.211～1.379 μg/mL（r=0.9998），钩藤碱的平均回收率为99.154%，异钩藤碱的平均回收率为99.40%。

结论：HPLC法测定中药钩藤中两种成分的含量，方法简单、快速，精密度及稳定性好，可以用于控制中药材钩藤的品质。

标签：钩藤；钩藤碱；异钩藤碱；高效液相色谱钩藤为茜草科植物钩藤、大叶钩藤、毛钩藤或者无柄果钩藤的干燥带钩茎枝[1-2]。

钩藤为常用的中药，具有清热、平肝熄风功能，评价钩藤及其制剂质量多以钩藤总生物碱或者钩藤碱含量作为指标，测定钩藤碱的方式主要有薄层扫描法和高效液相色谱法[3-4]。

本文在上述基础上，流动相中采用三乙胺缓冲液，以同时分离钩藤碱和异钩藤碱的含量，改进后的方法分离度、精密度好，操作简单，条件容易控制。

现将测定方法报告如下。

1 材料与方法1.1 仪器与材料美国Waters公司生产的高效液相色谱仪器：Waters717自动进样系统、Waters 486紫外检测系统、Waters600泵，德国公司生产的色谱柱Lichrospher C18（4.0×250 mm，5μm）；钩藤碱，异钩藤碱，纯度>98%（购于上海融禾医药科技有限公司提供，批号分别为120206，120124），甲醇为一级色谱纯，由飞世尔科技（Fisher Scientific）公司提供，水为三蒸水，其他试剂均为分析纯。

异钩藤碱药动学及其含量测定方法研究概述△周吉银;周世文;汤建林【期刊名称】《北方药学》【年(卷),期】2013(000)007【摘要】目的：归纳异钩藤碱药动学及其含量测定方法的研究进展。

方法：查阅国内外有关文献进行综合分析。

结果：异钩藤碱是中药钩藤中的主要生物碱之一，目前主要采用HPLC、反相HPLC等方法检测动物组织和血液中异钩藤碱浓度，并进行了异钩藤碱在大鼠、兔、猫体内的药动学研究；采用HPLC、超高效液相色谱、非水毛细管电泳、高效毛细管电泳、薄层色谱傅里叶变换表面增强拉曼散射法测定钩藤药材中异钩藤碱的含量。

结论：虽然对异钩藤碱药动学及其含量检测方法研究取得了一定成果，随着科技发展和高端检测仪器的应用，还需采用更加快速、便捷、精确的检测方法，为异钩藤碱今后的进一步研究和开发提供技术支撑。

【总页数】3页(P58-59,60)【作者】周吉银;周世文;汤建林【作者单位】第三军医大学新桥医院国家药物临床试验机构重庆 400037;第三军医大学新桥医院国家药物临床试验机构重庆 400037;第三军医大学新桥医院国家药物临床试验机构重庆 400037【正文语种】中文【中图分类】R285.6【相关文献】1.中药材有效部位总黄酮含量测定方法研究概述 [J], 包强;刘丽梅;王延玲;毕映燕2.天麻及其制剂中天麻素含量测定方法研究概述 [J], 苏健;王宝琴;马腾;韩敏彩3.中药复方药动学研究概述 [J], 张程荣;赵耀东4.以丹参素为指标成分的丹参制剂及其药动学研究概述 [J], 梁雪丹;范田园;郑颖5.反相高压液相色谱法测定家猫异钩藤碱的药动学及其代谢物 [J], 余俊先;石京山因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

钩藤中钩藤碱、异钩藤碱的提取与含量测定在预后中的应用分析张恒;饶坤林【摘要】目的：：探讨钩藤中钩藤碱、异钩藤碱的提取与含量测定在预后中的应用。

方法：采取水煎液以及甲醇提取液的方式对钩藤中的钩藤碱及异钩藤碱进行提取,并使用高效液相色谱系统分别对其提取的含量进行测定。

结果：在2．5~80μg/mL的范围内钩藤碱的线性关系良好,此时的回归方程为Y=76．7170X-0．0727(r=0．9998),RSD<8．7%；在2．0 ~80μg/mL的范围内异钩藤碱的线性关系良好,此时的回归方程为Y=87．4729X-0．3666(r=0．9997),RSD<7．3%。

甲醇提取液的方式所提取钩藤碱和异钩藤碱的含量高于水煎液的方式,并且使用二十倍质量的甲醇量,24 h的冷侵时间以及60 min的超声时间最合适。

结论：使用甲醇进行提取在用于钩藤中钩藤碱及异钩藤碱中作用优异,对其质量的控制性好,重复性高,操作方法简单,可提高预后,值得在临床上应用推广。

%Objective:To explore the application of extraction and content determination in the prognosis of uncaria rhynchophyl-line and isorhynchophylline in Gambir Plant Nod. Methods:The uncaria rhynchophylline and isorhynchophylline extract was taken by water extract and methanol extract methods, and the content of the extract was determined by high performance liquid chroma-tography. Results:The good linear relationship of rhynchophylline was in the range of 2. 5~80μg/mL, the regression equation for the time Y=76. 717 0X-0. 072 7(r=0. 999 8),RSD<8. 7%; In the linear relationship between the range of 2. 0~80 μg/mL, rhynchophylline was good, the regression equation for the timeY=87. 472 9X-0. 366 6(r=0. 999 7), RSD<7. 3%. The content of rhynchophylline and isorhynchophylline extracted by methanol extraction liquid was higher than those extracted by the water. And the best way to extract the contents was under the condition of 20 times the maximum amount of methanol, 24 hours of the invasion of cold time and 60 min of sonication. Conclusion:The methanol extraction method is prominent in extracting in un-caria rhynchophylline and isorhynchophylline, with good quality control, high repeatability, simple operation, and effect of impro-ving prognosis, which is worthy of clinical application and promotion.【期刊名称】《世界中医药》【年(卷),期】2016(011)007【总页数】4页(P1331-1333,1336)【关键词】钩藤碱;异钩藤碱;提取方法【作者】张恒;饶坤林【作者单位】湖北省荆州市中心医院药学部，荆州，434020;湖北省荆州市中心医院药学部，荆州，434020【正文语种】中文【中图分类】R284.2钩藤是一种传统中药，其种类众多，有钩藤、毛钩藤、大叶钩藤、华钩藤等，有15种，属于一种茜草科植物[1-2]。

正交设计优选钩藤碱的提取工艺摘要：目的：优化钩藤中钩藤碱的提取工艺。

方法：以钩藤碱得率为检测指标, 采用L9(34)正交试验, 考察乙醇体积分数、提取时间和提取次数3个影响因素, 采用高效液相色谱法进行钩藤碱测定。

结果：提取次数和乙醇的体积分数对检测指标均有显著影响，提取时间影响不显著。

最佳提取工艺条件为90 %乙醇热回流3 次, 每次3 h。

结论：优选得到的工艺稳定、方法可行。

关键词：钩藤;钩藤碱;正交设计; 高效液相色谱法钩藤为茜草科植物钩藤（Uncaria rhynchophylla〔Miq.〕Jacks.）、大叶钩藤（Uncaria macrophylla Wall.）、毛钩藤（Uncaria hirsute Havil）、华钩藤（Uncaria sinensis〔Oliv.〕Havi.）或无柄果钩藤（Uncaria sessilifructus Roxb）的干燥带钩茎枝[1]。

具有清热平肝，息风定惊之功能。

用于头痛眩晕，感冒夹惊，惊痫抽搐，妊娠子痫[1]。

其主要有效成分为吲哚类生物碱，具有降血压、抗心律失常、镇静、抗癫痫以及对脑的保护作用[2-3]。

常规制剂中其有效成分的提取主要采用水煮浓缩法和70 %～75 %乙醇提取法[4]，本实验以此为基础，采用乙醇回流提取法提取钩藤中生物碱的正交试验优化，对不同工艺总生物碱的提取率进行考察，为钩藤的综合利用提供参考依据。

1 仪器与材料LC-6AD高效液相色谱仪（日本岛津公司）；药材粉碎机（天津市泰斯特仪器有限公司）；TG16-W微量高速离心机（长沙湘仪离心机仪器有限公司）；TG16-W微量高速离心机（长沙湘仪离心机仪器有限公司）；旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）。

钩藤药材购买于重庆天圣奇仙药业有限公司，经作者鉴定为茜草科植物钩藤（Uncaria rhynchophylla〔Miq.〕Jacks.）；钩藤碱对照品(购买于上海融禾医药科技发展有限公司，含量>99%)，甲醇为色谱纯，水为超纯水（经Millopor溶液过滤系统处理），其它试剂均为分析纯。