食品过敏原的检测与分析
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食品过敏原的检测与分析食品过敏现已成为一个新兴的公众性健康问题,特别是在发达国家,调查显示全世界范围内有1%~2%的成年人对食品过敏,而低于三岁的儿童中有8%以上对食品过敏。
产生的临床症状包括皮肤反应(荨麻疹、血管性水肿、湿疹),呼吸症状(哮喘、鼻炎),肠胃症状(呕吐、腹泻、肠胃痉挛),系统反应(心血管症状包括过敏性休克)等。
在过去的几十年中,食品过敏的发病率和流行情况日益增加,给临床变态反应学和食品工业造成了巨大的压力。
加上现在人们生活习惯的改变,饮食面的快速拓宽,特别是转基因食品的大量涌现,过敏症状亦趋于多样化、复杂化和严重化。
因此,对食品过敏原的检测与分析就是一个极其重要的问题。
一般来说,食品过敏原为分子量介于10000~70000之间的蛋白或糖蛋白,占食品总蛋白的极小一部分,分别属于不同的蛋白家族。
但是微量的食品过敏原蛋白即可引起严重的过敏反应。
系统全面、精确可靠的食品过敏原检测和分析技术体系正在形成,本文对这一研究领域的研究进展进行了详细的综述性分析。
1.利用人血清特异性lgE检测食品过敏原过敏原与lgE结合是过敏原体现其生物活性的中心环节,因此食品过敏原检测过程中特异性lgE的血清学检测必不可少。
对于能够引起50%病人产生过敏反应的主要食品过敏原必须测定特异性lgE与食品过敏原结合的能力,包括引发过敏反应的频率,热稳定性和水解稳定性等。
但是这种方法不能解决食品过敏原的交叉致敏问题,因为它是用单个过敏病人的血清进行检测的。
1.1RAST抑制实验和EAST抑制实验自从lgE成功纯化及抗lgE抗体的制备后,放射过敏原吸附实验( radio allergosorben t test RAST)得以设计应用。
之后改进的酶标记过敏原吸附实验(enzyme linked allergos orbent assays,EAST)及荧光和化学发光标记的检测技术也均已建立。
这些方法均是检测特异性lgE与过敏原相互作用的免疫分析方法。
食品中的致敏物质如何判断食物中的过敏原食物过敏是一种常见的免疫反应,当人体暴露于某些特定食物中的过敏原时,免疫系统会产生过度反应,导致过敏症状的发生。
因此,准确判断食物中的过敏原对于过敏患者的诊断和预防具有重要意义。
本文将介绍一些常见的判断食物中过敏原的方法。
1. 就诊医院进行过敏测试有一些特定的过敏测试可以帮助确定食物中的过敏原。
常见的过敏测试包括皮肤刺激试验和血清特异IgE检测。
皮肤刺激试验通过在皮肤表面施加过敏原来观察反应程度,用来确定个体对某种食物的敏感程度。
血清特异IgE检测则通过检测血液中特异性IgE抗体的水平来确定过敏原。
就诊医院进行过敏测试能够提供准确的过敏原信息。
2. 进行食物排除法食物排除法是通过逐步排除潜在过敏食物来确定过敏原的方法。
在这个过程中,需要将可能引发过敏症状的食物从饮食中剔除,并观察症状的变化。
如果在某个食物被移除后,过敏症状减轻或消失,那么这个食物很有可能是过敏原。
3. 记录食物过敏症状当出现食物过敏症状时,及时记录下来可以帮助确定食物中的过敏原。
在记录时,需要详细描述发生过敏反应的时间、症状的种类和持续时间等信息。
这些记录可以帮助医生或过敏专家进行分析,找出可能的过敏原。
4. 使用食物过敏测试工具现在市面上有一些专门用于测试食物过敏的工具,例如食物过敏测试盒。
这些测试工具可以通过检测食物中的特异性抗体来确定食物过敏原。
但需要注意的是,这些测试工具的准确性和可靠性有待考证,最好在专业医师指导下进行使用。
5. 了解食品标签食品标签上会列出成分,对于某些常见的食物过敏原,如花生、坚果、鸡蛋、牛奶等,其成分在食品标签中应该能够清楚地显示出来。
因此,仔细阅读食品标签可以帮助过敏患者了解食物中是否含有潜在过敏原。
总结起来,判断食物中的过敏原需要借助专业过敏测试、排除法、记录过敏症状、食物过敏测试工具以及食品标签等方法。
通过对过敏原进行准确判断,过敏患者可以采取相应的预防措施,避免不必要的过敏反应。
食品中致敏物质的检测与控制技术分析随着生活水平的提高,人们对食品安全的关注度也越来越高。
在食品安全领域,致敏物质的检测与控制成为一个重要的研究方向。
本文将介绍食品中致敏物质的检测与控制技术,包括常见的致敏物质、检测方法及控制措施。
一、致敏物质的种类食品中常见的致敏物质包括过敏原和过敏诱导因子。
过敏原是指导致过敏反应的物质,如花生、鸡蛋、牛奶、海鲜等。
过敏诱导因子是指导致过敏反应的因素,如温度、光照、酸碱度等。
二、致敏物质的检测方法1. 生物学方法生物学方法是常见的食品致敏物质检测方法之一。
该方法利用生物学分析技术,通过检测生物体对致敏物质的反应来判断食品中是否存在致敏物质。
例如,针对花生过敏原,可以采用酶联免疫吸附法(ELISA)来检测食品中的花生过敏原含量。
2. 化学方法化学方法是一种常用的食品致敏物质检测方法。
这种方法利用化学分析技术,通过检测食品中致敏物质的化学特性来判断其含量。
例如,针对鸡蛋过敏原,可以采用高效液相色谱法(HPLC)来检测食品中的鸡蛋过敏原含量。
3. 毛细管电泳法毛细管电泳法是一种新兴的食品致敏物质检测方法。
该方法利用毛细管电泳技术,快速、高效地分离和检测食品中的致敏物质。
例如,针对牛奶过敏原,可以采用毛细管电泳法来检测食品中的牛奶过敏原含量。
三、致敏物质的控制措施1. 加强生产管理生产环节是控制食品中致敏物质的重要环节。
生产者应加强质量管理,遵守食品安全法规,禁止使用有致敏性的添加剂和原料。
同时,应建立健全的标准化生产流程,确保食品中致敏物质的含量控制在安全范围内。
2. 合理选择原料合理选择原料是控制食品中致敏物质的重要措施之一。
生产者应选择优质、无添加剂的原料,尽量避免使用致敏物质含量高的原料。
此外,对于已知的致敏物质,应及时通报给消费者,以便其做出明智的选择。
3. 提高加工工艺加工工艺是控制食品中致敏物质的关键环节。
生产者应采用科学、规范的加工工艺,确保致敏物质在加工过程中得到充分降解和去除。
食品中的过敏原检测与控制技术研究导言:食品过敏是一种常见的免疫反应,会导致不适甚至危及生命。
因此,对于食品中的过敏原进行检测与控制显得尤为重要。
本文将介绍目前常用的食品中的过敏原检测技术以及控制技术,并评估其优缺点。
一、食品中的过敏原检测技术1. 基于免疫学原理的检测方法随着生物技术的发展,基于免疫学原理的检测方法成为了主要手段之一。
例如,酶联免疫吸附试验(ELISA)能够通过检测特定过敏原抗体与食品中的过敏原结合的程度来判断食品的过敏原含量。
这种方法具有高灵敏度和特异性,但也存在着检测时间较长、成本高等问题。
2. 分子生物学检测方法分子生物学检测方法通过对食品中的DNA或RNA进行分析,可以快速准确地检测出过敏原的存在。
例如,聚合酶链反应(PCR)技术可以检测食品中微量的过敏原基因,具有高灵敏度和高特异性的特点。
不过,该方法对样本的纯度要求较高,且在实际应用中还存在一定的局限性。
3. 色谱分析技术色谱分析技术是一种有效的食品中过敏原检测方法,如气相色谱-质谱联用技术(GC-MS)。
该方法通过分离和鉴定样品中的化合物,能够准确地检测到食品中的过敏原。
然而,该方法需要专业设备和操作技术,并且对样品的处理和前期准备较为繁琐。
二、食品中的过敏原控制技术1. 过敏原替代过敏原替代是一种常见的过敏原控制技术,旨在通过替代原料中的过敏原来减少过敏原的风险。
例如,在烘焙制品中,可以使用豆浆或其他纯植物性材料替代牛奶,从而避免乳糖过敏。
然而,过敏原替代有时会对产品的质感和口感产生影响,并且寻找合适的替代品也是一个挑战。
2. 过敏原标识过敏原标识是通过在食品包装上明确标注过敏原的存在来提醒过敏人士及时避免,以减少过敏反应的发生。
这在许多国家已经成为法律规定。
然而,过敏原标识要求制造商严格执行并确保准确性,以避免因失误导致误导或危险的情况发生。
3. 过敏原去除/去除技术过敏原去除是一种通过物理或化学方法将过敏原从食品中去除的技术。
食品过敏原检测方法的研究与应用食品过敏源检测方法的研究与应用引言:食物过敏是一种常见的健康问题,它会导致轻微的不适,甚至危及生命。
随着人们对健康的关注程度的增加,食物过敏源检测方法的研究和应用成为食品科学领域的一个热点。
本文将介绍几种常见的食品过敏源检测方法以及它们的应用。
一、免疫学方法免疫学方法是一种常见的食物过敏源检测方法。
其中,免疫原性和免疫力决定了食物过敏的发生。
常用的免疫学方法包括皮肤刺激试验、血清免疫学检测和细胞免疫学检测。
1. 皮肤刺激试验皮肤刺激试验是一种食物过敏源检测的常见方法。
该方法通过将含有潜在过敏原的物质直接刺激到皮肤上,观察是否出现异常反应。
虽然皮肤刺激试验简单易行,但对检测不同过敏原的敏感性各不相同。
2. 血清免疫学检测血清免疫学检测是一种通过检测患者血液中的特定抗体(IgE)来诊断食品过敏的方法。
通过检测食品特异性IgE的水平,可以确定患者对特定食物过敏原的过敏反应。
这种方法具有较高的敏感性和特异性,但需要专业的实验室设备和技术的支持。
3. 细胞免疫学检测细胞免疫学检测是一种检测食品过敏源的T细胞反应的方法。
该方法基于T细胞对特定过敏原的敏感性,通过体外实验检测患者的T细胞反应。
它可以检测多种食品过敏原,但需要专业的设备和技术支持。
二、分子生物学方法分子生物学方法是食品过敏源检测的新兴技术。
该方法通过检测食品中特定基因或蛋白质的存在和表达,来确定食品中是否含有潜在过敏源。
1. PCR技术PCR(聚合酶链反应)技术是一种分子生物学方法,可以通过扩增食品中潜在过敏原的基因序列,从而快速检测食品中的过敏原。
这种方法具有高度的敏感性和特异性,但需要基因序列的先验信息。
2. 蛋白质分析技术蛋白质分析技术是一种通过检测食品中过敏原蛋白的存在和含量来确认食物中的过敏原的方法。
常用的蛋白质分析技术包括SDS-PAGE、Western blot和质谱分析等。
这种方法可以定量检测食品中过敏原的蛋白质含量,但需要复杂的实验操作和设备的支持。
临床分析食物过敏原检测食物过敏是一种常见的免疫反应,会引起人体对某些食物成分的过敏反应。
为了准确地检测食物过敏原,临床上常采用食物过敏原检测的方法。
本文将对食物过敏原检测进行分析,并探讨其在临床应用中的作用。
一、食物过敏原检测的种类食物过敏原检测可以根据检测的原理和方法进行分类。
主要的检测种类包括:1. 皮肤测试:这是最常用的食物过敏原检测方法之一。
通过在患者的皮肤表面刺激少量的食物过敏原,观察是否出现皮肤反应。
皮肤测试可以进一步细分为划痕试验和补丁试验。
2. 血清学检测:这是一种通过检测患者的血清中特定的免疫球蛋白E(IgE)水平来诊断食物过敏的方法。
血清学检测可以通过ELISA、放射免疫测定等技术来进行。
3. 挑战试验:这是一种直接给患者食用可能引起过敏的食物以观察是否出现过敏反应的方法。
挑战试验需要在临床专业人员的指导下进行,以确保安全性。
二、食物过敏原检测的准确性食物过敏原检测的准确性是保证诊断的关键。
然而,目前尚无一种检测方法可以100%准确地确定食物过敏原。
各种检测方法都存在一定的误诊率和漏诊率。
其中,皮肤测试是一种广泛使用的方法,具有较高的敏感性和特异性。
然而,皮肤测试结果可能受到很多因素的干扰,如药物的干扰、皮肤病变等。
血清学检测可以检测免疫球蛋白E的水平,但其结果受到许多因素的影响,如患者的免疫状态、用药情况等。
因此,医生需要结合患者的病史和其他检测结果进行综合判断。
挑战试验是一种直接观察患者是否出现过敏反应的方法,但其操作复杂,需要临床专业人员的指导和监测,同时也存在一定的安全风险。
三、食物过敏原检测在临床中的应用食物过敏原检测在临床中的应用非常广泛,主要包括以下几个方面:1. 诊断过敏症状:对于表现为不明原因过敏症状的患者,食物过敏原检测可以帮助确定是否存在食物过敏反应。
通过明确过敏原,可以有针对性地进行治疗。
2. 确定适宜饮食:对于已知食物过敏的患者,食物过敏原检测可以帮助确定哪些食物应避免食用,从而降低过敏反应的发生。
食品中致敏原的检测与管理近年来,食品过敏问题越来越受到人们的关注。
食品中存在的致敏原既给过敏人群带来健康问题,也给食品行业带来了挑战。
因此,对于食品中致敏原的检测与管理变得至关重要。
本文将探讨食品中致敏原的检测方法和管理措施。
一、致敏原的常见类型和影响食品中常见的致敏原主要包括麸质、乳制品、坚果、大豆、鸡蛋、贝壳类海产品等。
这些致敏原可引发过敏反应,包括过敏性哮喘、荨麻疹、皮肤红肿等。
过敏反应的严重程度因人而异,但任何一种过敏反应都可能对个体的健康和生活质量产生负面影响。
二、食品中致敏原的检测方法1. 实验室检测方法实验室检测方法是目前最常用的食品中致敏原检测方法之一。
它主要包括酶联免疫吸附法(ELISA)、聚合酶链式反应法(PCR)等。
这些方法能够快速、准确地识别食品中的致敏原物质,为食品生产企业提供科学依据,帮助其采取相应的措施,保证产品质量和安全。
2. 快速检测方法随着技术的发展,快速检测方法在食品行业中得到广泛应用。
快速检测方法主要包括免疫色谱法、质谱法、生物传感器等。
这些方法具有操作简便、响应迅速的特点,可以在短时间内获得食品中致敏原的检测结果,提高生产效率和产品安全性。
三、食品企业的致敏原管理措施食品企业应该制定相应的致敏原管理措施,以保证产品质量和食品安全。
1. 原料采购食品企业应选择可靠的供应商,并与其建立稳定的合作关系。
在原料采购过程中,应对供应商的产品进行严格检查,确保其符合质量要求并避免致敏原的混入。
2. 生产过程控制食品企业应对生产过程进行全面控制,包括原料储存、调配、加工、包装等环节。
严格遵守卫生要求,避免致敏原的交叉污染和混入。
3. 标签标识食品企业应在产品包装上明确标识食品中的致敏原物质,帮助消费者做出正确的选择。
标签信息应准确、清晰可见,以避免误食和过敏反应的发生。
4. 员工培训食品企业应对员工进行全面的致敏原知识培训,使其了解致敏原的类型、检测方法和管理措施。
提高员工的食品安全意识和职业素养,减少致敏原的风险。
食品中过敏原成分检测与控制技术食品过敏是一种常见的食品安全问题,其表现为人体对某些食物成分产生过敏反应。
对于过敏患者来说,食品中的过敏原成分可能会导致严重的健康问题,甚至危及生命。
因此,食品中过敏原成分检测与控制技术的研究与应用显得尤为重要。
一、食品中过敏原成分的检测技术食品中的过敏原成分往往以微量存在,因此需要先进的检测技术来进行准确的检测。
目前,常用的食品过敏原成分检测技术主要包括以下几种:1.酶联免疫吸附测定法(ELISA)ELISA技术是目前最常用的食品过敏原检测方法之一。
该方法通过特异性抗体与目标过敏原成分结合,形成免疫复合物,并通过酶的作用使底物产生显色反应,从而达到检测的目的。
ELISA技术具有灵敏度高、准确度高的特点,适用于各种食品中过敏原成分的检测。
2.聚合酶链式反应(PCR)PCR技术是一种基于DNA分子的检测技术,可以通过扩增目标DNA序列的方法来检测食品中的过敏原成分。
PCR技术的优势在于其高度特异性、高度敏感性以及扩增速度快的特点,能够在短时间内获取大量的目标DNA序列,从而实现过敏原成分的快速检测。
3.质谱分析法质谱分析法是一种基于物质的质量-电荷比进行分析的技术,可以对食品中的过敏原成分进行快速、准确的检测。
质谱分析法不仅可以定性检测目标物质的存在与否,还可以定量检测目标物质的含量,具有高度敏感性和高分辨率的特点。
二、食品中过敏原成分的控制技术除了检测技术的应用,食品中过敏原成分的控制也是保证食品安全的重要环节。
以下介绍几种常用的食品过敏原成分控制技术:1.原料筛查食品生产企业可以通过对供应的原料进行过敏原成分的筛查,确保原料本身不含过敏原成分或过敏原成分的含量低于安全限量。
这样可以从源头上控制食品中的过敏原成分含量,减少食品过敏引起的食品安全问题。
2.制程控制在食品生产过程中,通过控制温度、时间、pH值等制程参数,可以减少过敏原成分的活性或分解,从而降低过敏原成分的含量。
食品过敏原成分分析与检测技术研究近年来,随着人们对健康的关注日益增加,食品过敏问题也逐渐引起了广泛关注。
食品过敏原成分分析与检测技术的研究就成为了食品安全领域的重要课题之一。
许多人对某些食物的过敏反应可能导致严重的健康问题,因此,了解食品中的过敏原成分并进行有效的检测是保障食品安全的关键。
食品过敏源种类繁多,主要包括坚果、鱼类、贝类、蛋类、乳制品、小麦和大豆等。
对于过敏原成分的分析,一个重要的挑战是食品中存在许多其他生物成分,而过敏原成分只是其中之一,因此必须采用高度敏感和选择性的检测方法。
常用的检测方法主要包括基于免疫学的方法、基于DNA的方法和基于质谱的方法等。
基于免疫学的方法是目前常用的食品过敏原检测方法之一。
这种方法利用抗原和抗体的特异性结合进行检测。
其中最常用的方法是ELISA,即酶联免疫吸附测定法。
ELISA方法是一种快速、灵敏且经济实用的方法,可广泛应用于食品过敏原的检测。
然而,该方法存在一些局限性,如仅能检测单一过敏原、存在交叉反应等。
因此,在实际应用中需要进行多种方法的补充和验证。
相比之下,基于DNA的方法在食品过敏原成分分析中也具有广泛的应用前景。
这些方法主要通过检测食品中的过敏原基因序列来确定食品中的过敏原成分。
重点研究的是PCR技术,即聚合酶链反应技术。
PCR技术具有高灵敏度和高特异性,能够在食品中检测到非常低浓度的过敏原,甚至比传统方法更有效。
此外,PCR技术还可结合DNA芯片等新兴技术,提高食品过敏原检测的准确性和效率。
基于质谱的方法是当前食品过敏原分析技术的新热点。
质谱技术利用样品分子质量与电荷比的特性进行检测和分析。
其中,质谱成像和串联质谱是常用的技术手段。
质谱成像将样品表面的分子质谱信息进行空间定位,从而实现对过敏原成分的准确定位及相对含量的测定。
而串联质谱则通过分析样品中的分子质量以确定过敏原成分,并能鉴定和定量各种有机物。
这些质谱技术具有高灵敏度、高分辨率和高通量的特点,可以对复杂食品样品进行全面分析和鉴定。
临床分析食物过敏的检测方法与过敏原分析食物过敏是一种常见的免疫系统反应,当人体对某种特定食物产生过敏反应时,会引发一系列不适症状。
为了正确诊断和管理食物过敏,临床上采用一系列的检测方法和过敏原分析技术。
本文将对食物过敏的检测方法和过敏原分析进行详细介绍。
一、临床检测方法1. 特定IgE抗体检测特定IgE抗体检测是目前最常用的食物过敏检测方法之一。
该方法通过检测血液中特定食物的IgE抗体水平来判断是否存在过敏反应。
它具有简单、快速、准确的特点,可以同时检测多种食物过敏原。
常见的特定IgE抗体检测方法包括酶联免疫吸附法(ELISA)和免疫荧光法。
2. 皮肤测试皮肤测试是一种常用的食物过敏筛查方法。
它通过在患者皮肤上施加一小剂食物过敏原,观察皮肤的反应来判断是否存在过敏反应。
皮肤测试包括皮肤划痕试验和皮肤内反应试验。
它相对便宜、快速,但结果可能受到多种因素的干扰,需要由经验丰富的医生进行解读。
3. 挑战试验挑战试验是一种直接性的食物过敏测试方法,通过给患者逐渐增加含有可疑食物过敏原的食物量来观察是否出现过敏反应。
挑战试验对于确诊食物过敏以及评估过敏程度非常有价值,但需要在医疗机构中进行,并由专业医生监护。
二、过敏原分析技术1. 多肽筛选法多肽筛选法是一种基于食物蛋白质结构的过敏原分析技术。
它通过将食物样品中的蛋白质分解为多肽,然后检测这些多肽与过敏原特异性IgE抗体之间的结合能力。
多肽筛选法可以准确识别食物中的多个过敏原,并确定其过敏原性。
2. 质谱分析质谱分析是一种高灵敏度的过敏原分析技术。
它可以通过测量食物样品中的蛋白质质谱图谱来鉴定过敏原。
质谱分析不仅可以识别食物过敏原的蛋白质序列和结构,还可以确定过敏原的含量和特征肽段。
3. DNA技术DNA技术是一种新颖且快速的过敏原分析方法。
它通过检测食物样品中的过敏原蛋白编码基因序列来鉴定过敏原。
DNA技术可以准确识别不同食物过敏原的基因型,并区分不同种类的食物。
食品过敏原的检测与分析双击自动滚屏时间:2010-4-26 来源:热带医学杂志作者:浏览:159次【字体:大中小】食品过敏现已成为一个新兴的公众性健康问题,特别是在发达国家,调查显示全世界范围内有1%~2%的成年人对食品过敏,而低于三岁的儿童中有8%以上对食品过敏。
产生的临床症状包括皮肤反应(荨麻疹、血管性水肿、湿疹),呼吸症状(哮喘、鼻炎),肠胃症状(呕吐、腹泻、肠胃痉挛),系统反应(心血管症状包括过敏性休克)等。
在过去的几十年中,食品过敏的发病率和流行情况日益增加,给临床变态反应学和食品工业造成了巨大的压力。
加上现在人们生活习惯的改变,饮食面的快速拓宽,特别是转基因食品的大量涌现,过敏症状亦趋于多样化、复杂化和严重化。
因此,对食品过敏原的检测与分析就是一个极其重要的问题。
一般来说,食品过敏原为分子量介于10000~70000之间的蛋白或糖蛋白,占食品总蛋白的极小一部分,分别属于不同的蛋白家族。
但是微量的食品过敏原蛋白即可引起严重的过敏反应。
系统全面、精确可靠的食品过敏原检测和分析技术体系正在形成,本文对这一研究领域的研究进展进行了详细的综述性分析。
1.利用人血清特异性lgE检测食品过敏原过敏原与lgE结合是过敏原体现其生物活性的中心环节,因此食品过敏原检测过程中特异性lgE的血清学检测必不可少。
对于能够引起50%病人产生过敏反应的主要食品过敏原必须测定特异性lgE与食品过敏原结合的能力,包括引发过敏反应的频率,热稳定性和水解稳定性等。
但是这种方法不能解决食品过敏原的交叉致敏问题,因为它是用单个过敏病人的血清进行检测的。
1.1RAST抑制实验和EAST抑制实验自从lgE成功纯化及抗lgE的制备后,放射过敏原吸附实验(radio allergosorbent test RAST)得以设计应用。
之后改进的酶标记过敏原吸附实验(enzyme linked allergosorbent assays,EAST)及荧光和化学发光标记的检测技术也均已建立。
这些方法均是检测特异性lgE与过敏原相互作用的免疫分析方法。
特异性lgE与食品过敏原的结合在固相载体表面进行并被检测,是体外食品过敏诊断的一种已标准化的方法,得到广泛使用。
在此基础上进一步建立了放射过敏原吸附抑制实验(radio allergosorbent test RAST 抑制实验)和酶标记过敏原吸附抑制实验技术(enzyme linked allergosorbent assays,EAST抑制实验)。
在体外过敏原检测实验中,这些方法是目前国际上变态反应临床及科研人员使用最广泛、最灵敏的方法,也是评价过敏原总致敏活性的关键技术。
其优点是全自动荧光酶联免疫技术,避免人工实验操作带来的误差,保证了它的灵敏性和准确性,同时解决了不同食品过敏原的交叉致敏问题。
因此在国际上不同实验室之间,RAST抑制实验技术和统计分析方法按统一的程序进行,每年还有定期的全球质量控制检测以保证仪器正常运行和结果可靠。
目前,在国外大医院、主要过敏原生产企业基本都使用法玛西亚公司UniCAP系统进行RAST抑制实验。
此外,RAST抑制实验还是过敏原生产厂商比较每一批过敏原制剂和内部参考品差异的主要方法。
RAST和EAST抑制实验已经被用来检测和分析一系列食品的致敏性,如生海鲜和比萨饼中的鳕鱼过敏原;含有花生的食品和花生油等相关产品的致敏性;大豆相关食品的致敏性;榛实过敏原的热稳定性和水解稳定性研究;坚果类食品的交叉致敏作用等。
RAST和EAST抑制实验的一个主要不足是对人血清的依赖性,血清是很难保证一致的,因此这方法也难以标准化。
尽管它们可以很好的检测食品过敏原,但是人lgE特异性的不确定性大大限制了这些方法在更宽领域的应用。
此外,商业化的食品过敏原固相载体与lgE的结合能力也不尽相同。
所有这些都限制了RAST和EAST抑制实验在食品过敏原定量检测中的应用。
总体上来说,RAST和EAST抑制实验是检测各种形式的食品过敏原蛋白(蛋白粗提物,纯化的过敏原样品,不同物种、食品中过敏原)与lgE结合能力的较为理想的方法。
1.2IEF-PAGE和SDS-PAGE免疫印迹实验通过等电聚焦(IEF)和SDS-PAGE电泳(双向电泳也包括在内)结合免疫印迹分析可以进行单个食品过敏原的分离。
SDS-PAGE免疫印迹目前可以用于几乎所有的食品过敏原的分析。
双向电泳常用于检测分子量相近但等电点、氨基酸序列不同的同源性蛋白分子。
与RAST和EAST类似,免疫印迹方法同样可以通过lgE抑制实验来消除不同来源的不同食品过敏原之间的交叉反应。
2用单克隆或多克隆检测食品过敏原为了克服用人血清lgE检测食品过敏原的不足,依赖于兔、鼠、绵羊、山羊、鸡等的动物抗血清免疫分析方法逐渐发展起来。
这些检测激发免疫作用抗的效果要比过敏原好。
2.1双免疫扩散实验(Ouchterlony)这是一种比较或以上食品过敏原的定性检测分析方法。
将和各种不同的样品蛋白同时放进孔中,令其相互向对方自由扩散,在达到平衡时会形成一条沉淀线。
双免疫扩散实验可以区分一致的、不一致的和部分一致的蛋白样品。
MALMHEDENYMAN等利用双免疫扩散实验检测分析了意大利面食和荞麦食品中的麦麸蛋白。
该方法的不足是不能进行定量分析,灵敏度较低,而且比较费时(24~48h)。
2.2点免疫印迹实验最近报道了点免疫印迹实验在各种食品中检测花生过敏原中的应用。
将样品滴在预先用花生蛋白包埋的一张聚酯底物上,再用二抗进行免疫检测即可检测到已经结合的花生蛋白。
这种方法灵敏度很高而且使用成本较低。
2.3火箭免疫电泳实验(RIE)该分析方法是通过含有的凝胶进行检测分析的。
样品中的蛋白根据各自的电泳移动速率进行移动,直到按照/抗的比例常数在凝胶上形成“火箭”状的沉淀。
火箭状沉淀区的颜色的深浅与样品中蛋白的丰度直接相关。
所形成的沉淀既可以用考马斯亮蓝染色也可以用免疫染色(后者的灵敏度更高)。
RIE应用于食品过敏原检测的报道较为少见。
MALMHEDENYMAN等用RIE检测了各种食品中鸡蛋、牛奶、榛实和花生蛋白的存在,但是没有指出数据的回收率和重现性。
RIE的不足就是实际操作过程中制胶和染色的操作复杂。
2.4酶联免疫吸附实验(ELISA)ELISA是一种酶免疫方法,20世纪90年代末期ELISA技术发展迅速,加以全自动酶标分析仪的应用,使ELISA的特异性和灵敏度有了很大的提高,在食品检测领域中的应用大大扩展。
ELISA的特点是抗或的固相化和酶标记,在目前最常用的ELISA中,要结合在固相载体的表面与样品蛋白(抗)自由反应。
和抗反应后用另外一种用酶标记的(二抗)来检测已经反应结合在固相载体表面的样品蛋白(抗)。
结合在固相载体表面的一定时,与之结合的样品蛋白(抗)越多,酶标记的的颜色反应就越强,同时血清的浓度越高,ELISA显色也越强。
为了能够检测痕量的食品过敏原ELISA中使用了生物素标记的二抗和含有过氧化物酶的链霉亲和素。
[Page]在食品安全方面ELISA技术已广泛应用于兽药残留、农药残留、疫情、有害微生物、动植物毒素等的快速检测分析,并取得了较好的效果。
随着人们对食品过敏认识的深入和重视程度的加强,现在发展了很多种ELISA方法用于食品过敏原总蛋白提取物和特殊食品过敏原的检测和定量分析。
ELISA已经成为一种系列化、微量化、商品化的食品安全快速检测方法,是目前应用最广泛的生物检测技术之一。
3PCR分析食品过敏原检测的一个新靶标就是特殊食品蛋白的cDNA。
DNA分子可以通过PCR技术扩增,在PCR过程中DNA分子的引物也得到了扩增。
产物即可利用分子量的大小在琼脂糖电泳上进行分离。
一般来说通过引物的选择可以使具有一定同源性的DNA分子之间的交叉反应降低到最低程度,尽可能的避免假阳性结果的产生。
PCR扩增技术一般用来对各种食品中经基因修饰的成份(如转基因大豆和转基因玉米)的检测和定量分析。
而直到现在,只有PCR方法专门针对食品过敏原(榛实和小麦)的检测(表1)。
方法均具有很高的灵敏度,都可以达到0.001%。
3.1研究食品的DNA性质(质量)尽管麦片中麦胶蛋白的检测限度低于0.2mg/100g,但是用小麦PCR系统分析燕麦糠制造的酸乳酪布丁样品时只有二分之一的结果显示阳性,麦胶蛋白含量大于1mg/100g。
因此,与小麦PCR检测方法的高灵敏度相比,对这些样品用ELISA检测试剂盒更为合适。
HOLZHAUSER等〔11〕对烤榛实(140℃,30min)中低丰度主要榛实过敏原Cora1(0.001%)的DNA进行了扩增(与巧克力和其他不同的食品中榛实蛋白的含量一致)。
而且不同的食品类型也大大影响了过敏原DNA的定量检测限度。
也有人应用PCR技术研究了食品处理过程相关参数对面包类食物中转基因大豆和转基因玉米成分检测的影响〔13〕。
结果发现在研究的食品(面包和蛋糕)中含量低于0.5%转基因玉米的DNA是检测不到的,而经过各个加工步骤(包括200℃烤30min)后得到的白面包中加入的0.3%转基因大豆的DNA是可以检测的。
这就说明在用PCR技术检测过敏原DNA时一定要考虑食品处理过程中过敏原DNA的降解。
3.2与ELISA的对比ELISA可以检测食品样品中已知来源(包含过敏原)的蛋白,而PCR可以在相关蛋白不存在的情况下检测其DNA的存在。
因此,PCR技术增加了食品中存在过敏原假阳性测定结果的机率。
PCR方法的优点是比较快,如果要研究已知序列的DNA,这个分析过程只需要7~10d。
对于一个已经纯化的过敏原,ELISA分析要用一个月甚至更长时间,此外,制备其特异性的要再加一个月。
PCR技术是以简单、确定的DNA序列为基础的,而ELISA分析却要依赖于质量稳定的动物。
将来重组将有助于抗血清的标准化。
加工食品中DNA和蛋白的稳定性都是要考虑的重要因素。
总之,PCR技术适合于复杂食品中过敏原的定量分析,在这方面应该得到大力推广。
4组胺释放实验(HRT)组胺释放实验(histaminereleasingtest,HRT)主要是通过食品过敏原激发致敏的靶细胞,引起细胞释放组胺,组胺含量可应用荧光测定法、放射免疫法等方法测定,与适宜参照进行比较,确定组胺释放率阳性标准,从而进行过敏原活性测定及鉴定的一类方法。
通常用抗IgE作阳性参照,以样品介质(如PBS)为阴性参照,以排除实验过程中组胺的非特异性释放。
此外,某些待测过敏原或提取物本身含有组胺,并且待检过敏原或其共存物可能具有靶细胞毒性,引起组胺非特异释放,因此,必须设样品对照及非致敏靶细胞对照。
为了排除生物胺如尸胺、腐胺对荧光法测定组胺的干扰,有报道利用玻璃纤维包被的微量滴定板(glass-fibrecoatedmicrotiterplate)来分离组胺与干扰成分。