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凡盐析产品所获得的粗蛋白质中均含有硫酸铵等盐类，这些将影响以后的纯化，所以纯化前均应除去，此过程称为“脱盐”。
脱盐常用透析法和凝胶过滤法。
前者透析后样品的终体积较小，所需时间较长，盐不易除尽。
常用的办法是透析，即把蛋白质溶液装入秀析袋内（常用的是玻璃纸），用缓冲液进行透析，并不断的更换缓冲液，因透析所需时间较长，所以最好在低温中进行。
此外也可用葡萄糖凝胶G-25或G-50过柱的办法除盐，所用的时间就比较短。
试剂与器材(1)奈氏（Nessler）试剂：于500ml锥形瓶内加入碘化钾150g，碘110g，汞150g及蒸馏水100ml。
用力振荡7－15分钟，至碘的棕色开始转变时，混合液温度升高，将此瓶侵入冷水内继续振荡，直到棕色的碘转变为绿色的碘化钾汞液为止。
将上清液2000ml量筒内，加蒸馏水至2000ml，混均备用。
应用时取母液150ml，加10％氢氧化钠溶液700ml。
蒸馏水150ml，混均即可。
若发生混浊，可静置1日，取上清液使用。
（2）20％（W/V）磺基水杨酸溶液（3）白比色磁盘。
操作（1）透析袋准备：商品透析袋制成管状，其扁平宽度为23 mm～50 mm不等。
为防干裂，出厂时都用10％的甘油处理过，并含有极微量的硫化物、重金属和一些具有紫外吸收的杂质，它们对蛋白质和其它生物活性物质有害，用前必须除去。
可先用50％乙醇煮沸1小时，再依次用50％乙醇、0.01 mol/L碳酸氢钠和0.001 mol/L EDTA溶液洗涤，最后用蒸馏水冲洗即可使用。
实验证明，50％乙醇处理对除去具有紫外吸收的杂质特别有效。
使用后的透析袋洗净后可存于4℃蒸馏水中，若长时间不用，可加少量NaN2，以防长菌。
洗净凉干的透析袋弯折时易裂口，用时必须仔细检查，不漏时方可重复使用。
新透析袋如不作如上的特殊处理，则可用沸水煮五至十分钟，再用蒸馏水洗净，即可使用。
使用时，一端用橡皮筋或线绳扎紧，也可以使用特制的透析袋夹夹紧，由另一端灌满水，用手指稍加压，检查不漏，方可装入待透析液，通常要留三分之一至一半的空间，以防透析过程中，透析的小分子量较大时，袋外的水和缓冲液过量进入袋内将袋涨破。
动物生物化学实验1. 引言动物生物化学实验是研究动物体内生物分子的组成、结构和功能的重要手段。
通过实验可以深入了解动物体内的代谢过程、蛋白质合成、酶活性以及相关疾病的发生机制等。
本文将介绍一系列常用的动物生物化学实验方法和实验步骤。
2. 蛋白质含量测定实验2.1 实验原理蛋白质含量是衡量细胞或组织中蛋白质水平的重要指标。
常用的蛋白质含量测定方法有Lowry 法、Bradford法和BCA法等。
其中，BCA法是一种基于铜离子和比色反应的测定方法，具有灵敏度高、稳定性好的特点。
2.2 实验步骤•步骤1：制备待测样品。
将待测组织样品加入磷酸缓冲溶液中，用均匀器均匀打碎组织，使得细胞内的蛋白质充分溶解。
•步骤2：制备标准曲线。
选取一系列已知浓度的蛋白质标准品，分别加入不同浓度的BCA试剂，混匀后在37摄氏度下孵育一段时间，最后测定吸光度。
•步骤3：测定待测样品。
将待测样品加入BCA试剂中，混匀后在37摄氏度下孵育一段时间，最后测定吸光度。
•步骤4：计算蛋白质含量。
将待测样品的吸光度值与标准曲线相比较，根据吸光度值的差异计算待测样品中的蛋白质含量。
3. 酶活性测定实验3.1 实验原理酶活性测定是评估酶功能和酶水平的重要方法。
常用的酶活性测定方法有过氧化物酶（POD）活性测定、超氧化物歧化酶（SOD）活性测定和碱性磷酸酶（ALP）活性测定等。
3.2 实验步骤以POD活性测定为例：•步骤1：制备待测样品。
将待测组织样品加入磷酸缓冲液中，通过离心等方法使得细胞内的酶充分溶解。
•步骤2：制备标准曲线。
选取一系列已知浓度的酶标准品，分别加入过氧化氢溶液和柱剂，混匀后在一定时间内测定吸光度。
•步骤3：测定待测样品。
将待测样品加入过氧化氢溶液和柱剂中，混匀后在一定时间内测定吸光度。
•步骤4：计算酶活性。
将待测样品的吸光度值与标准曲线相对比，根据吸光度值的差异计算酶的活性。
4. 代谢产物检测实验4.1 实验原理代谢产物是动物体内代谢过程的关键物质，其含量和比例变化可以反映动物的代谢状态。
（生物科技行业）动物生物化学实验讲义动物生物化学实验讲义东北农业大学动物生化教研室实验项目1γ–球蛋白的分离实验项目2γ–球蛋白含量测定（光度分析法）实验项目3凝胶柱层析法（γ–球蛋白纯化）实验项目4SDS–聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS–PAGE）实验项目5动物组织中DNA的制备实验项目6多聚酶链反应（PCR扩增反应）实验项目7琼脂糖凝胶电泳分离DNA实验项目8转氨酶GPT活性的测定实验项目9氨基酸薄层层析实验项目10琥珀酸脱氢酶及丙二酸的抑制作用实验一γ–球蛋白的分离【原理】中性盐（如硫酸铵、硫酸钠、氯化钠、硫酸镁等）对球状蛋白质的溶解度有显著影响。
随着中性盐浓度的增加，离子强度也增加。
当溶液离子强度增加到一定数值时，溶液中蛋白质的溶解度开始下降。
离子强度增加到足够高时，蛋白质可从水溶液中沉淀出来，这种现象叫做盐析。
各种蛋白质的溶解度不同，因而可利用不同浓度的高浓度盐溶液来沉淀分离各种蛋白质。
蛋白质是一种生物大分子，它具有不能通过半透膜的性质。
透析就是利用这种性质使之与其它小分子物质如无机盐、单糖等分开。
本次实验应用的是脱盐透析，即盐析后，将含大量盐类的蛋白质溶液放在半透膜的袋内，再将透析袋浸入蒸馏水中。
经过一段时间，袋内的盐类浓度即逐渐降低。
若经常更换袋外的液体，最后即可使袋内的蛋白质溶液中所含的盐类除净，从而达到脱盐的目的。
应用不同浓度硫酸铵分段盐析法将血清中γ–球蛋白及α、β球蛋白分离，最后用透析法脱盐，即可得到纯度较高的γ–球蛋白。
【试剂和器材】一试剂1．pH7.2，0.01mol/L磷酸盐缓冲液生理盐水（简称PBS）：取0.2mol/LNa2HPO4溶液36.0ml，0.2mol/LNaH2PO4溶液14.0ml混合，加NaCl8.5克，用蒸馏水稀释至1000ml。
0.2mol/LNa2HPO4溶液：取28.4gNa2HPO4或71.6gNa2HPO4·12H2O用蒸馏水溶解稀释至1000ml。
实验讲义（霍金龙老师）实验一实验基本知识与基本操作，血液样品的处理及组织匀浆的制备实验二考马斯亮蓝法测定蛋白质含量实验三琥珀酸脱氢酶的作用及其竞争性抑制的观察实验四血液葡萄糖的测定（福林—吴宪氏法）实验五核酸的定量测定（紫外吸收法）实验六全血基因组DNA的提取（离心柱型试剂盒提取法）实验七PCR扩增基因实验八琼脂糖凝胶电泳实验九凝胶层析法分离血红蛋白和胰岛素实验十生物化学实验技术理论讲授核酸蛋白层析分离系统实验工作流程一，准备工作1，核酸蛋白检测仪（紫外检测仪） 1台2，色谱采集器 1套3，自动部分收集器 1台4，恒流泵 1台5, 层析柱 1支6，溶液容器和试剂样品二，开机调试1，核酸蛋白检测仪应提前开机半小时预热，然后按仪器使用说明书来调整仪器的透光度，灵敏度，使其稳定在：“100”或“0”上。
2，设定自动部分收集器收集样品的所需时间。
3，设定恒流泵的所需流量。
三，进行实验前的洗脱工作等仪器都设置完成，检测仪工作稳定后，进行样品池实验冲洗，并调整透过率（T100%）和灵敏度A在0.5上检测仪显示读数为“0”（基线）。
四，数据采集及计算分析把样品加入层析柱进行实验，并连接电脑（或记录仪），打开信号采集器，打开电脑上装入电脑层析的应用软件，并进行记录保存。
然后再对实验所记录的数据进行分析和计算。
以上为一个完整的实验操作过程实验一实验基本知识与操作一.目的1.熟悉实验室规则及常用生化仪器。
2.掌握各种仪器的正规操作。
3.清点洗刷实验用具。
二．实验内容（一）常用生化仪器量器：量筒、容量瓶、吸量管、离心管、微量取液器玻璃仪器容器：烧杯、试管、锥形瓶、滴管仪器：离心机、水浴箱、电泳仪、分光光度计等（二）玻璃仪器的洗涤1、初用的玻璃仪器的清洗：表面附有碱性物质，先用去污粉洗，再用自来水冲洗干净，然后浸于盐酸溶液浸泡过夜，再用自来水反复冲洗干净，最后用蒸馏水冲洗1－2次，80℃烤干备用。
2、使用过的玻璃仪器洗涤（1）一般非计量玻璃仪器或粗容量仪器，如烧杯、试管、量筒等先用肥皂水刷洗，再用自来水冲洗干净，最后用蒸馏水冲洗1－2次，洗净之器皿倒置干净处晾干或烘箱烤干（量筒不可烘烤）。
动物生物化学实验教程正式实验一血清蛋白质含量测定牛血清蛋白：BSA。
血浆：指血液的液体成分，淡黄色（因含胆红素）。
含白蛋白、球蛋白、纤维蛋白原。
血液经抗凝处理、离心沉淀后，获得的液体部分。
血清：血液凝固后，释出的液体。
不含纤维蛋白原及游离钙离子。
蛋白质定量分析是动物生物化学和其他生命科学研究中经常用到的实验项目。
蛋白质是生物体内最为重要的生物大分子之一，其种类繁多、结构多样、功能各异，而且分子量相差很大，所以很难建立一个理想而通用的蛋白质定量分析方法。
目前测定蛋白质含量的方法很多，常用的测定方法有Folin—酚法（Lowry法）、紫外吸收法、凯氏定氮法、考马斯亮蓝染料结合法等，每种方法在实践中都有其优点和局限性。
本实验采用考马斯亮蓝染料结合法（Bradford法）。
(灵敏度最高)一、实验目的1．掌握分光光度法测定的原理，分光光度计的结构和基本操作要点（光源-单色器-样品室-检测器-显示器）2．掌握考马斯亮蓝染料结合法测定蛋白质含量的原理和操作方法3．掌握微量移液器的使用方法4．了解蛋白质含量测定中标准曲线的制作方法二、实验原理染料考马斯亮蓝G-250（R250，结合后可以解离）在游离状态下呈红色，最大吸收峰为465nm。
它能与蛋白质的疏水微区结合，形成蓝色复合物，该复合物的最大吸收峰为595nm，在一定浓度范围内（为什么在一定范围内），其吸光度值与蛋白质含量成正比，故可用于蛋白质含量的测定。
三、实验操作步骤表1-1考马斯亮蓝染料结合法测定蛋白质含量试管号稀释的血清样品（mL）0.9%NaCl溶液（mL）考马斯亮蓝G-250溶液（mL）空白管-0.15样品管0.1-5室温静置5min，于波长595nm处，以空白管调“0”，测定样品管的吸光度值，查标准曲线，吸光度测定值所对应的蛋白质浓度就是稀释样品的蛋白质含量，然后乘以血清的稀释倍数（10倍），可得血清中蛋白质的含量。
四、实验试剂1．考马斯亮蓝G-250溶液（0.01%）：称取考马斯亮蓝G-250100mg，溶于50mL95%乙醇中，再加入100mL85%(W/V)浓磷酸，然后用蒸馏水定容至1000mL，置棕色瓶过夜（如有不容物，可用二层滤纸过滤）。
动物生物化学实验教程胡兰版目录第一章动物生物化学实验常识第一节动物生化实验技术发展简史第二节动物生化实验室常识与规则一、实验室规则二、实验室安全及防护知识第三节生化实验基本操作一、玻璃仪器的洗涤二、刻度吸管的使用三、微量移液器的使用四、试管中液体的混匀法第四节常用实验样品的处理一、血液样品的采集二、血清的制备三、全血及血浆的制备四、无蛋白血滤液的制备五、生物大分子的基本制备技术第五节实验报告的撰写规范一、实验记录二、定性实验报告书写格式三、定量实验报告书写格式第二章常用生化实验技术原理及应用第一节离心技术的原理及应用一、离心技术的基本原理二、离心机的主要类型三、常用的离心分离方法四、离心操作的注意事项第二节光度测定法的原理及应用一、分光光度法的基本原理二、光度法的计算三、使用分光光度计的注意事项四、自动生化分析技术第三节电泳技术的原理及应用一、影响电泳迁移率的因素二、几种常用的电泳法第四节层析技术的原理及应用一、层析技术的常用术语二、层析技术的分类三、常用的层析方法四、柱层析的基本装置五、柱层析的基本操作第五节DNA重组技术一、多聚酶链式反应（PolymeraseChainReaction，PCR）的基本过程二、DNA重组技术（RecombinantDNATechnology）三、DNA重组技术的基本步骤第三章酶学实验内容实验一唾液淀粉酶活性观察实验二转氨酶活性测定——King氏法实验三琥珀酸脱氢酶的作用及竞争性抑制的观察第四章糖类实验内容实验四血糖的测定1.福林一吴宪氏法2.葡萄糖氧化酶法实验五肝糖原的提取和鉴定第五章脂类实验内容实验六血清总脂含量测定（香草醛法）实验七肝组织的生酮作用实验八血清游离脂肪酸测定（一次提取比色法）实验九血清总胆固醇测定（胆固醇氧化酶法）第六章蛋白质实验内容实验十醋酸纤维薄膜电泳法分离血清蛋白质实验十一蛋白质的含量测定Ⅰ.双缩脲法Ⅱ.Folin-酚试剂法Ⅲ.紫外光吸收法Ⅳ.考马斯亮蓝结合法实验十二血清尿素氮（BUN）的测定（二乙酰一肟法）实验十三氨基酸纸上层析第七章核酸实验内容实验十四动物组织DNA提取实验十五DNA的定量测定（二苯胺法）实验十六动物肝脏总RNA的制备实验十七RNA的定量测定（地衣酚法）实验十八紫外吸收法测定核酸的含量第八章维生素实验内容实验十九维生素B2的定量测定（荧光法）第九章综合性实验内容附录参考文献。
