动物生物化学实验

一、实验目的1. 掌握动物生化实验的基本操作方法。

2. 了解动物生化实验中常用的实验原理和实验技术。

3. 通过实验，熟悉动物生化指标的正常范围及其临床意义。

二、实验原理动物生化实验是研究动物生理、病理和生物化学变化的重要手段。

通过检测动物体内的生化指标，可以了解动物的营养状况、生长发育、健康状况等。

本实验主要检测以下指标：1. 血清总蛋白（TP）：反映机体蛋白质代谢和营养状况。

2. 白蛋白（ALB）：反映肝脏合成蛋白质的能力。

3. 球蛋白（GLB）：反映机体免疫功能。

4. 谷丙转氨酶（ALT）：反映肝细胞损伤程度。

5. 谷草转氨酶（AST）：反映肝细胞损伤程度。

6. 肌酸激酶（CK）：反映肌肉损伤程度。

三、实验材料与试剂1. 实验动物：小鼠2. 仪器：离心机、酶标仪、电热恒温水浴锅等3. 试剂：血清总蛋白、白蛋白、球蛋白、ALT、AST、CK试剂盒，EDTA-Na2、肝素钠、生理盐水等四、实验步骤1. 实验动物处死，取血液样本。

2. 将血液样本加入EDTA-Na2或肝素钠抗凝剂，混匀后离心分离血清。

3. 按照试剂盒说明书，分别测定血清总蛋白、白蛋白、球蛋白、ALT、AST、CK含量。

五、实验结果与分析1. 血清总蛋白（TP）：正常范围为60-80g/L，本实验小鼠血清总蛋白含量为70g/L，处于正常范围内。

2. 白蛋白（ALB）：正常范围为35-55g/L，本实验小鼠白蛋白含量为45g/L，处于正常范围内。

3. 球蛋白（GLB）：正常范围为20-30g/L，本实验小鼠球蛋白含量为25g/L，处于正常范围内。

4. 谷丙转氨酶（ALT）：正常范围为5-40U/L，本实验小鼠ALT含量为20U/L，处于正常范围内。

5. 谷草转氨酶（AST）：正常范围为8-40U/L，本实验小鼠AST含量为15U/L，处于正常范围内。

6. 肌酸激酶（CK）：正常范围为30-200U/L，本实验小鼠CK含量为100U/L，处于正常范围内。

动物生物化学实验1. 引言动物生物化学实验是研究动物体内生物分子的组成、结构和功能的重要手段。

通过实验可以深入了解动物体内的代谢过程、蛋白质合成、酶活性以及相关疾病的发生机制等。

本文将介绍一系列常用的动物生物化学实验方法和实验步骤。

2. 蛋白质含量测定实验2.1 实验原理蛋白质含量是衡量细胞或组织中蛋白质水平的重要指标。

常用的蛋白质含量测定方法有Lowry 法、Bradford法和BCA法等。

其中，BCA法是一种基于铜离子和比色反应的测定方法，具有灵敏度高、稳定性好的特点。

2.2 实验步骤•步骤1：制备待测样品。

将待测组织样品加入磷酸缓冲溶液中，用均匀器均匀打碎组织，使得细胞内的蛋白质充分溶解。

•步骤2：制备标准曲线。

选取一系列已知浓度的蛋白质标准品，分别加入不同浓度的BCA试剂，混匀后在37摄氏度下孵育一段时间，最后测定吸光度。

•步骤3：测定待测样品。

将待测样品加入BCA试剂中，混匀后在37摄氏度下孵育一段时间，最后测定吸光度。

•步骤4：计算蛋白质含量。

将待测样品的吸光度值与标准曲线相比较，根据吸光度值的差异计算待测样品中的蛋白质含量。

3. 酶活性测定实验3.1 实验原理酶活性测定是评估酶功能和酶水平的重要方法。

常用的酶活性测定方法有过氧化物酶（POD）活性测定、超氧化物歧化酶（SOD）活性测定和碱性磷酸酶（ALP）活性测定等。

3.2 实验步骤以POD活性测定为例：•步骤1：制备待测样品。

将待测组织样品加入磷酸缓冲液中，通过离心等方法使得细胞内的酶充分溶解。

•步骤2：制备标准曲线。

选取一系列已知浓度的酶标准品，分别加入过氧化氢溶液和柱剂，混匀后在一定时间内测定吸光度。

•步骤3：测定待测样品。

将待测样品加入过氧化氢溶液和柱剂中，混匀后在一定时间内测定吸光度。

•步骤4：计算酶活性。

将待测样品的吸光度值与标准曲线相对比，根据吸光度值的差异计算酶的活性。

4. 代谢产物检测实验4.1 实验原理代谢产物是动物体内代谢过程的关键物质，其含量和比例变化可以反映动物的代谢状态。

实验讲义（霍金龙老师）实验一实验基本知识与基本操作，血液样品的处理及组织匀浆的制备实验二考马斯亮蓝法测定蛋白质含量实验三琥珀酸脱氢酶的作用及其竞争性抑制的观察实验四血液葡萄糖的测定（福林—吴宪氏法）实验五核酸的定量测定（紫外吸收法）实验六全血基因组DNA的提取（离心柱型试剂盒提取法）实验七PCR扩增基因实验八琼脂糖凝胶电泳实验九凝胶层析法分离血红蛋白和胰岛素实验十生物化学实验技术理论讲授核酸蛋白层析分离系统实验工作流程一，准备工作1，核酸蛋白检测仪（紫外检测仪） 1台2，色谱采集器 1套3，自动部分收集器 1台4，恒流泵 1台5, 层析柱 1支6，溶液容器和试剂样品二，开机调试1，核酸蛋白检测仪应提前开机半小时预热，然后按仪器使用说明书来调整仪器的透光度，灵敏度，使其稳定在：“100”或“0”上。

2，设定自动部分收集器收集样品的所需时间。

3，设定恒流泵的所需流量。

三，进行实验前的洗脱工作等仪器都设置完成，检测仪工作稳定后，进行样品池实验冲洗，并调整透过率（T100%）和灵敏度A在0.5上检测仪显示读数为“0”（基线）。

四，数据采集及计算分析把样品加入层析柱进行实验，并连接电脑（或记录仪），打开信号采集器，打开电脑上装入电脑层析的应用软件，并进行记录保存。

然后再对实验所记录的数据进行分析和计算。

以上为一个完整的实验操作过程实验一实验基本知识与操作一.目的1.熟悉实验室规则及常用生化仪器。

2.掌握各种仪器的正规操作。

3.清点洗刷实验用具。

二．实验内容（一）常用生化仪器量器：量筒、容量瓶、吸量管、离心管、微量取液器玻璃仪器容器：烧杯、试管、锥形瓶、滴管仪器：离心机、水浴箱、电泳仪、分光光度计等（二）玻璃仪器的洗涤1、初用的玻璃仪器的清洗：表面附有碱性物质，先用去污粉洗，再用自来水冲洗干净，然后浸于盐酸溶液浸泡过夜，再用自来水反复冲洗干净，最后用蒸馏水冲洗1－2次，80℃烤干备用。

2、使用过的玻璃仪器洗涤（1）一般非计量玻璃仪器或粗容量仪器，如烧杯、试管、量筒等先用肥皂水刷洗，再用自来水冲洗干净，最后用蒸馏水冲洗1－2次，洗净之器皿倒置干净处晾干或烘箱烤干（量筒不可烘烤）。

动物生物化学实验教程正式实验一血清蛋白质含量测定牛血清蛋白：BSA。

血浆：指血液的液体成分，淡黄色（因含胆红素）。

含白蛋白、球蛋白、纤维蛋白原。

血液经抗凝处理、离心沉淀后，获得的液体部分。

血清：血液凝固后，释出的液体。

不含纤维蛋白原及游离钙离子。

蛋白质定量分析是动物生物化学和其他生命科学研究中经常用到的实验项目。

蛋白质是生物体内最为重要的生物大分子之一，其种类繁多、结构多样、功能各异，而且分子量相差很大，所以很难建立一个理想而通用的蛋白质定量分析方法。

目前测定蛋白质含量的方法很多，常用的测定方法有Folin—酚法（Lowry法）、紫外吸收法、凯氏定氮法、考马斯亮蓝染料结合法等，每种方法在实践中都有其优点和局限性。

本实验采用考马斯亮蓝染料结合法（Bradford法）。

(灵敏度最高)一、实验目的1．掌握分光光度法测定的原理，分光光度计的结构和基本操作要点（光源-单色器-样品室-检测器-显示器）2．掌握考马斯亮蓝染料结合法测定蛋白质含量的原理和操作方法3．掌握微量移液器的使用方法4．了解蛋白质含量测定中标准曲线的制作方法二、实验原理染料考马斯亮蓝G-250（R250，结合后可以解离）在游离状态下呈红色，最大吸收峰为465nm。

它能与蛋白质的疏水微区结合，形成蓝色复合物，该复合物的最大吸收峰为595nm，在一定浓度范围内（为什么在一定范围内），其吸光度值与蛋白质含量成正比，故可用于蛋白质含量的测定。

三、实验操作步骤表1-1考马斯亮蓝染料结合法测定蛋白质含量试管号稀释的血清样品（mL）0.9%NaCl溶液（mL）考马斯亮蓝G-250溶液（mL）空白管-0.15样品管0.1-5室温静置5min，于波长595nm处，以空白管调“0”，测定样品管的吸光度值，查标准曲线，吸光度测定值所对应的蛋白质浓度就是稀释样品的蛋白质含量，然后乘以血清的稀释倍数（10倍），可得血清中蛋白质的含量。

四、实验试剂1．考马斯亮蓝G-250溶液（0.01%）：称取考马斯亮蓝G-250100mg，溶于50mL95%乙醇中，再加入100mL85%(W/V)浓磷酸，然后用蒸馏水定容至1000mL，置棕色瓶过夜（如有不容物，可用二层滤纸过滤）。

动物生物化学实验浙江农林大学智慧树知到答案2024年第一章测试1.生物化学是一门实验科学，每一次新实验技术的产生都有利于理论研究的进展。

（）A:错 B:对答案:B2.实施动物生化实验的过程中，不涉及团队合作的问题。

（）A:对 B:错答案:B3.撰写实验报告时不必考虑实际操作，照抄实验指导书上的内容即可（）A:错 B:对答案:A4.本门课程没有安排（）的实验。

A:蛋白质B:DNAC:酶D:RNA答案:D5.撰写实验报告时，文字输入方面应注意（）等问题。

A:区分mL与μLB:数字与单位之间留1个空格C:使用小四或五号字体D:正确使用特殊字母答案:ABCD第二章测试1.一把移液枪可以完全满足量取0.1~1000 μL液体的目的。

（）A:对 B:错答案:B2.玻璃比色皿适用于波长为可见光时，石英比色皿适用于波长为紫外光线时。

（）A:错 B:对答案:B3.离心机只能分离溶液和不溶物质。

（）A:对 B:错答案:B4.分析天平分为2个侧门和1个顶门。

侧门适用于称量固体粉末试剂。

（）A:对 B:错答案:A5.可用于血清快速析出、凝固的实验室恒温设备是（）A:电热恒温箱B:恒温水浴锅C:恒温培养振荡箱D:恒温金属浴答案:D第三章测试1.从动物组织纯化DNA的实验中使用的细胞裂解液中含有蛋白酶K（Proteinase K）。

（）A:对 B:错答案:A2.Tris-饱和酚分层明显，取酚时应取上层溶液。

（）A:错 B:对答案:A3.利用不同物种间染色体相关基因的特异性表达往往可以用来鉴别真假牛羊肉。

（）答案:B4.三步法PCR的第一步是变性，即在（）℃高温下，使双链DNA变成单链。

A:65B:95C:75D:85答案:D5.DNA琼脂糖凝胶电泳最常用的电泳液是（），根据情况也可以使用TBE。

A:1×TAEB:0.5×TAEC:0.5×TBED:1×TBE答案:A第四章测试1.蛋白质的高级结构包括（）。

《动物生物化学实验原理与技术》实验指导实验目录一、动物血浆（清）IgG的分离纯化二、醋酸纤维薄膜电泳鉴定纯化的IGg三、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）四、Western blot五、动物组织中基因组DNA的提取六、细胞总RNA的提取及反转录合成cDNA七、PCR基因扩增八、琼脂糖凝胶电泳检测DNA九、质粒DNA的小抽提一、动物血浆（清）IgG的分离纯化[实验目的]1. 了解蛋白质分离纯化的一般思路。

2. 掌握硫酸铵盐析、凝胶过滤、DEAE-纤维素离子交换层析等技术的原理与方法[实验原理]分离纯化蛋白质的方法是利用不同蛋白质的某些物理、化学性质(如在一定条件下带电的情况、分子量、溶解度等)不同而建立起来的，其中有盐析、离子交换层析、凝胶过滤、亲和层析、制备电泳及离心等。

在分离纯化时，要根据具体情况选用几种方法相互配合才能达到分离纯化某一种蛋白质的目的。

血浆（清）蛋白质多达70余种，免疫球蛋白（Immunoglobulin，简称Ig）是血浆球蛋白的一种，免疫球蛋白G（Immunoglobulin G，简称IgG）又是免疫球蛋白的主要成分之一。

IgG的相对分子量约为15～16万，沉降系数约为7S。

要从血浆中分离出IgG，首先要尽可能除去血浆中的其他蛋白质成分，即进行粗分离，使IgG在样品中的比例大为增高，然后再精制纯化而获得IgG。

IgG作为被动免疫制剂，在兽医临床上具有广泛的应用价值。

本实验主要采用硫酸铵盐析、凝胶过滤脱盐及DEAE-纤维素离子交换层析等方法，从家畜血浆（清）中分离纯化IgG。

1、用盐析法制备血浆（清）IgG粗制品的原理在溶液中加入中性盐使生物大分子沉淀析出的过程称为“盐析”。

除了蛋白质和酶以外，多肽、多糖和核酸等也都可以用盐析法进行沉淀分离。

不同的蛋白质在同一浓度盐溶液中的溶解度不同，可利用不同浓度的盐溶液使每个蛋白质成分分别析出，通常称为蛋白质的盐析。

因此在蛋白质中加入不同浓度的中性盐可使不同蛋白成分分别析出，从而达到分离纯化抗体的目的。

《动物生物化学实验》教学大纲一、基本信息二、教学目标及任务《动物生物化学》是为高等农业院校动物医学、动物药学、动物科学和水产养殖等专业本专科开设的重要的专业基础课，也是一门重要的实验性课程。

通过本课程的系统学习和实验，使学生掌握动物生化实验的基本知识,基本理论和基本实验技能,掌握熟悉常用生化仪器的原理和使用方法,了解有关电泳，色谱，制备，透析等基本的生化实验手段,培养理论联系实际的学风和动手能力。

三、学时分配教学课时分配四、实验内容及教学要求实验一：蛋白质的沉淀反应和两性反应，蛋白质透析脱盐。

本实验重点、难点：生化实验常用的仪器的使用；理解蛋白质的一般理化性质；盐析、透析的概念。

本实验教学要求：教育学生对生化实验的认识；了解生化实验常用的仪器及使用方法；理解蛋白质的沉淀、两性反应及透析脱盐的原理；掌握蛋白质盐析和透析等操作技术。

实验二：蛋白质的定量分析------双缩脲法测定蛋白质浓度；分光光度计的使用和注意事项；Excel软件制作标准曲线。

本实验重点、难点：分光光度法测定蛋白质的浓度的原理；标准曲线的制作。

本实验教学要求：了解蛋白质含量测定的原理和方法；掌握分光光度法的原理及分光光度计的使用方法和注意事项；用标准曲线法准确测定未知样品中蛋白质的含量；学习使用Excel软件制作标准曲线。

实验三：动物心脏、肝脏中琥珀酸脱氢酶的制备和活性鉴定*；动物血清和组织匀浆液的制备；附：玻璃匀浆器、离心机的使用。

本实验重点、难点：制备血清和组织匀浆液；观察琥珀酸脱氢酶竞争性抑制的基本原理；玻璃匀浆器、离心机的正确使用。

本实验教学要求：了解琥珀酸脱氢酶竞争性抑制的实验原理；掌握动物血清和组织匀浆液的制备，匀浆器、离心机的使用等方法。

实验四：电泳的概念和一般原理；醋酸薄膜电泳分离血清蛋白；电泳分离条带的扫描及软件分析*。

本实验重点、难点：电泳的概念和一般原理；电泳分析动物血清中各种蛋白组分。

本实验教学要求：了解电泳的概念和一般原理；掌握醋酸纤维薄膜电泳的操作技术和操作要点；学会用电脑软件分析动物血清中各种蛋白组分实验五：盘状聚丙烯酰胺凝胶电泳分离血清蛋白*。

动物生物化学实验一、动物生物化学实验特点1．实验材料新鲜2．被测成分在动物组织、细胞中含量很少3．体外操作应尽量模拟生理环境条件4．在绝大多数条件下，生物分子是溶解在溶液中，很难直接看到所研究的内容二、注意事项1.工作服；严禁吸烟、饮水、进食；废液缸、冲稀、废物桶2.铬酸洗液；10%-20%尿素；硝酸3.恰当的吸管，减少误差三、离心机1．利用离心力把溶液中比重不同的固液分离。

分为常速、高速和超速离心机。

2．液体要加到三分之二左右、严格配平、不要超过最大转速、防止过热。

四、酶活性的观察1酶：活细胞产生，对特异底物有高效催化能力的生物催化剂，化学本质多数蛋白质。

影响酶活性：PH、温度、激活剂和抑制剂激活剂、抑制剂：能（升高）降低酶的活性，但又不使酶失活的物质《对酶有选择性》（区别于酶的失活）2淀粉在唾液淀粉酶的催化下会水解，水解程度随时间的延长而增加。

利用碘液指示水解程度：淀粉（蓝色）——糊精（深褐色、深红色）——麦芽糖、葡萄糖（棕黄色，碘液本身的颜色）337摄氏度、PH6.8（磷酸缓冲液中PH6.6）、激活剂0.5%NaCl、抑制剂1%CuSO44注意：温度对酶的影响中沸水浴后要冷却；酶反应的特异性检验中加斑氏试剂后沸水浴先砖红色沉淀；酶的活性通常是以测定酶作用的底物或产物在酶作用前后的变化来进行观察。

五、琥珀酸脱氢酶的作用及其竞争性抑制的观察1琥珀酸脱氢酶是三羧酸循环中的一个重要的酶，位于线粒体中，可使琥珀酸脱氢而生成延胡索酸。

在缺氧的条件下，适当的受氢体也可接受脱氢酶从底物上脱下的氢。

当甲烯蓝（蓝色）作为受氢体甲烯蓝被脱下的氢还原成甲稀白（无色物质）。

【甲稀白易氧化用液体石蜡液封】2酶的竞争性抑制作用：丙二酸化学结构与琥珀酸相似，可与琥珀酸竞争性的结合琥珀酸脱氢酶的活性中心，若已与丙二酸结合，则不能再催化琥珀酸脱氢，此现象称为酶的竞争性抑制作用。

解除酶的竞争性抑制作用：加大底物浓度的方法3研磨应充分；滴加试剂时，最后滴加心脏制备液。