动物生物化学实验

一、实验目的1. 掌握动物生化实验的基本操作方法。

2. 了解动物生化实验中常用的实验原理和实验技术。

3. 通过实验，熟悉动物生化指标的正常范围及其临床意义。

二、实验原理动物生化实验是研究动物生理、病理和生物化学变化的重要手段。

通过检测动物体内的生化指标，可以了解动物的营养状况、生长发育、健康状况等。

本实验主要检测以下指标：1. 血清总蛋白（TP）：反映机体蛋白质代谢和营养状况。

2. 白蛋白（ALB）：反映肝脏合成蛋白质的能力。

3. 球蛋白（GLB）：反映机体免疫功能。

4. 谷丙转氨酶（ALT）：反映肝细胞损伤程度。

5. 谷草转氨酶（AST）：反映肝细胞损伤程度。

6. 肌酸激酶（CK）：反映肌肉损伤程度。

三、实验材料与试剂1. 实验动物：小鼠2. 仪器：离心机、酶标仪、电热恒温水浴锅等3. 试剂：血清总蛋白、白蛋白、球蛋白、ALT、AST、CK试剂盒，EDTA-Na2、肝素钠、生理盐水等四、实验步骤1. 实验动物处死，取血液样本。

2. 将血液样本加入EDTA-Na2或肝素钠抗凝剂，混匀后离心分离血清。

3. 按照试剂盒说明书，分别测定血清总蛋白、白蛋白、球蛋白、ALT、AST、CK含量。

五、实验结果与分析1. 血清总蛋白（TP）：正常范围为60-80g/L，本实验小鼠血清总蛋白含量为70g/L，处于正常范围内。

2. 白蛋白（ALB）：正常范围为35-55g/L，本实验小鼠白蛋白含量为45g/L，处于正常范围内。

3. 球蛋白（GLB）：正常范围为20-30g/L，本实验小鼠球蛋白含量为25g/L，处于正常范围内。

4. 谷丙转氨酶（ALT）：正常范围为5-40U/L，本实验小鼠ALT含量为20U/L，处于正常范围内。

5. 谷草转氨酶（AST）：正常范围为8-40U/L，本实验小鼠AST含量为15U/L，处于正常范围内。

6. 肌酸激酶（CK）：正常范围为30-200U/L，本实验小鼠CK含量为100U/L，处于正常范围内。

动物生物化学实验1. 引言动物生物化学实验是研究动物体内生物分子的组成、结构和功能的重要手段。

通过实验可以深入了解动物体内的代谢过程、蛋白质合成、酶活性以及相关疾病的发生机制等。

本文将介绍一系列常用的动物生物化学实验方法和实验步骤。

2. 蛋白质含量测定实验2.1 实验原理蛋白质含量是衡量细胞或组织中蛋白质水平的重要指标。

常用的蛋白质含量测定方法有Lowry 法、Bradford法和BCA法等。

其中，BCA法是一种基于铜离子和比色反应的测定方法，具有灵敏度高、稳定性好的特点。

2.2 实验步骤•步骤1：制备待测样品。

将待测组织样品加入磷酸缓冲溶液中，用均匀器均匀打碎组织，使得细胞内的蛋白质充分溶解。

•步骤2：制备标准曲线。

选取一系列已知浓度的蛋白质标准品，分别加入不同浓度的BCA试剂，混匀后在37摄氏度下孵育一段时间，最后测定吸光度。

•步骤3：测定待测样品。

将待测样品加入BCA试剂中，混匀后在37摄氏度下孵育一段时间，最后测定吸光度。

•步骤4：计算蛋白质含量。

将待测样品的吸光度值与标准曲线相比较，根据吸光度值的差异计算待测样品中的蛋白质含量。

3. 酶活性测定实验3.1 实验原理酶活性测定是评估酶功能和酶水平的重要方法。

常用的酶活性测定方法有过氧化物酶（POD）活性测定、超氧化物歧化酶（SOD）活性测定和碱性磷酸酶（ALP）活性测定等。

3.2 实验步骤以POD活性测定为例：•步骤1：制备待测样品。

将待测组织样品加入磷酸缓冲液中，通过离心等方法使得细胞内的酶充分溶解。

•步骤2：制备标准曲线。

选取一系列已知浓度的酶标准品，分别加入过氧化氢溶液和柱剂，混匀后在一定时间内测定吸光度。

•步骤3：测定待测样品。

将待测样品加入过氧化氢溶液和柱剂中，混匀后在一定时间内测定吸光度。

•步骤4：计算酶活性。

将待测样品的吸光度值与标准曲线相对比，根据吸光度值的差异计算酶的活性。

4. 代谢产物检测实验4.1 实验原理代谢产物是动物体内代谢过程的关键物质，其含量和比例变化可以反映动物的代谢状态。

实验讲义（霍金龙老师）实验一实验基本知识与基本操作，血液样品的处理及组织匀浆的制备实验二考马斯亮蓝法测定蛋白质含量实验三琥珀酸脱氢酶的作用及其竞争性抑制的观察实验四血液葡萄糖的测定（福林—吴宪氏法）实验五核酸的定量测定（紫外吸收法）实验六全血基因组DNA的提取（离心柱型试剂盒提取法）实验七PCR扩增基因实验八琼脂糖凝胶电泳实验九凝胶层析法分离血红蛋白和胰岛素实验十生物化学实验技术理论讲授核酸蛋白层析分离系统实验工作流程一，准备工作1，核酸蛋白检测仪（紫外检测仪） 1台2，色谱采集器 1套3，自动部分收集器 1台4，恒流泵 1台5, 层析柱 1支6，溶液容器和试剂样品二，开机调试1，核酸蛋白检测仪应提前开机半小时预热，然后按仪器使用说明书来调整仪器的透光度，灵敏度，使其稳定在：“100”或“0”上。

2，设定自动部分收集器收集样品的所需时间。

3，设定恒流泵的所需流量。

三，进行实验前的洗脱工作等仪器都设置完成，检测仪工作稳定后，进行样品池实验冲洗，并调整透过率（T100%）和灵敏度A在0.5上检测仪显示读数为“0”（基线）。

四，数据采集及计算分析把样品加入层析柱进行实验，并连接电脑（或记录仪），打开信号采集器，打开电脑上装入电脑层析的应用软件，并进行记录保存。

然后再对实验所记录的数据进行分析和计算。

以上为一个完整的实验操作过程实验一实验基本知识与操作一.目的1.熟悉实验室规则及常用生化仪器。

2.掌握各种仪器的正规操作。

3.清点洗刷实验用具。

二．实验内容（一）常用生化仪器量器：量筒、容量瓶、吸量管、离心管、微量取液器玻璃仪器容器：烧杯、试管、锥形瓶、滴管仪器：离心机、水浴箱、电泳仪、分光光度计等（二）玻璃仪器的洗涤1、初用的玻璃仪器的清洗：表面附有碱性物质，先用去污粉洗，再用自来水冲洗干净，然后浸于盐酸溶液浸泡过夜，再用自来水反复冲洗干净，最后用蒸馏水冲洗1－2次，80℃烤干备用。

2、使用过的玻璃仪器洗涤（1）一般非计量玻璃仪器或粗容量仪器，如烧杯、试管、量筒等先用肥皂水刷洗，再用自来水冲洗干净，最后用蒸馏水冲洗1－2次，洗净之器皿倒置干净处晾干或烘箱烤干（量筒不可烘烤）。

动物生物化学实验教程正式实验一血清蛋白质含量测定牛血清蛋白：BSA。

血浆：指血液的液体成分，淡黄色（因含胆红素）。

含白蛋白、球蛋白、纤维蛋白原。

血液经抗凝处理、离心沉淀后，获得的液体部分。

血清：血液凝固后，释出的液体。

不含纤维蛋白原及游离钙离子。

蛋白质定量分析是动物生物化学和其他生命科学研究中经常用到的实验项目。

蛋白质是生物体内最为重要的生物大分子之一，其种类繁多、结构多样、功能各异，而且分子量相差很大，所以很难建立一个理想而通用的蛋白质定量分析方法。

目前测定蛋白质含量的方法很多，常用的测定方法有Folin—酚法（Lowry法）、紫外吸收法、凯氏定氮法、考马斯亮蓝染料结合法等，每种方法在实践中都有其优点和局限性。

本实验采用考马斯亮蓝染料结合法（Bradford法）。

(灵敏度最高)一、实验目的1．掌握分光光度法测定的原理，分光光度计的结构和基本操作要点（光源-单色器-样品室-检测器-显示器）2．掌握考马斯亮蓝染料结合法测定蛋白质含量的原理和操作方法3．掌握微量移液器的使用方法4．了解蛋白质含量测定中标准曲线的制作方法二、实验原理染料考马斯亮蓝G-250（R250，结合后可以解离）在游离状态下呈红色，最大吸收峰为465nm。

它能与蛋白质的疏水微区结合，形成蓝色复合物，该复合物的最大吸收峰为595nm，在一定浓度范围内（为什么在一定范围内），其吸光度值与蛋白质含量成正比，故可用于蛋白质含量的测定。

三、实验操作步骤表1-1考马斯亮蓝染料结合法测定蛋白质含量试管号稀释的血清样品（mL）0.9%NaCl溶液（mL）考马斯亮蓝G-250溶液（mL）空白管-0.15样品管0.1-5室温静置5min，于波长595nm处，以空白管调“0”，测定样品管的吸光度值，查标准曲线，吸光度测定值所对应的蛋白质浓度就是稀释样品的蛋白质含量，然后乘以血清的稀释倍数（10倍），可得血清中蛋白质的含量。

四、实验试剂1．考马斯亮蓝G-250溶液（0.01%）：称取考马斯亮蓝G-250100mg，溶于50mL95%乙醇中，再加入100mL85%(W/V)浓磷酸，然后用蒸馏水定容至1000mL，置棕色瓶过夜（如有不容物，可用二层滤纸过滤）。

动物生物化学实验浙江农林大学智慧树知到答案2024年第一章测试1.生物化学是一门实验科学，每一次新实验技术的产生都有利于理论研究的进展。

（）A:错 B:对答案:B2.实施动物生化实验的过程中，不涉及团队合作的问题。

（）A:对 B:错答案:B3.撰写实验报告时不必考虑实际操作，照抄实验指导书上的内容即可（）A:错 B:对答案:A4.本门课程没有安排（）的实验。

A:蛋白质B:DNAC:酶D:RNA答案:D5.撰写实验报告时，文字输入方面应注意（）等问题。

A:区分mL与μLB:数字与单位之间留1个空格C:使用小四或五号字体D:正确使用特殊字母答案:ABCD第二章测试1.一把移液枪可以完全满足量取0.1~1000 μL液体的目的。

（）A:对 B:错答案:B2.玻璃比色皿适用于波长为可见光时，石英比色皿适用于波长为紫外光线时。

（）A:错 B:对答案:B3.离心机只能分离溶液和不溶物质。

（）A:对 B:错答案:B4.分析天平分为2个侧门和1个顶门。

侧门适用于称量固体粉末试剂。

（）A:对 B:错答案:A5.可用于血清快速析出、凝固的实验室恒温设备是（）A:电热恒温箱B:恒温水浴锅C:恒温培养振荡箱D:恒温金属浴答案:D第三章测试1.从动物组织纯化DNA的实验中使用的细胞裂解液中含有蛋白酶K（Proteinase K）。

（）A:对 B:错答案:A2.Tris-饱和酚分层明显，取酚时应取上层溶液。

（）A:错 B:对答案:A3.利用不同物种间染色体相关基因的特异性表达往往可以用来鉴别真假牛羊肉。

（）答案:B4.三步法PCR的第一步是变性，即在（）℃高温下，使双链DNA变成单链。

A:65B:95C:75D:85答案:D5.DNA琼脂糖凝胶电泳最常用的电泳液是（），根据情况也可以使用TBE。

A:1×TAEB:0.5×TAEC:0.5×TBED:1×TBE答案:A第四章测试1.蛋白质的高级结构包括（）。

《动物生物化学实验原理与技术》实验指导实验目录一、动物血浆（清）IgG的分离纯化二、醋酸纤维薄膜电泳鉴定纯化的IGg三、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）四、Western blot五、动物组织中基因组DNA的提取六、细胞总RNA的提取及反转录合成cDNA七、PCR基因扩增八、琼脂糖凝胶电泳检测DNA九、质粒DNA的小抽提一、动物血浆（清）IgG的分离纯化[实验目的]1. 了解蛋白质分离纯化的一般思路。

2. 掌握硫酸铵盐析、凝胶过滤、DEAE-纤维素离子交换层析等技术的原理与方法[实验原理]分离纯化蛋白质的方法是利用不同蛋白质的某些物理、化学性质(如在一定条件下带电的情况、分子量、溶解度等)不同而建立起来的，其中有盐析、离子交换层析、凝胶过滤、亲和层析、制备电泳及离心等。

在分离纯化时，要根据具体情况选用几种方法相互配合才能达到分离纯化某一种蛋白质的目的。

血浆（清）蛋白质多达70余种，免疫球蛋白（Immunoglobulin，简称Ig）是血浆球蛋白的一种，免疫球蛋白G（Immunoglobulin G，简称IgG）又是免疫球蛋白的主要成分之一。

IgG的相对分子量约为15～16万，沉降系数约为7S。

要从血浆中分离出IgG，首先要尽可能除去血浆中的其他蛋白质成分，即进行粗分离，使IgG在样品中的比例大为增高，然后再精制纯化而获得IgG。

IgG作为被动免疫制剂，在兽医临床上具有广泛的应用价值。

本实验主要采用硫酸铵盐析、凝胶过滤脱盐及DEAE-纤维素离子交换层析等方法，从家畜血浆（清）中分离纯化IgG。

1、用盐析法制备血浆（清）IgG粗制品的原理在溶液中加入中性盐使生物大分子沉淀析出的过程称为“盐析”。

除了蛋白质和酶以外，多肽、多糖和核酸等也都可以用盐析法进行沉淀分离。

不同的蛋白质在同一浓度盐溶液中的溶解度不同，可利用不同浓度的盐溶液使每个蛋白质成分分别析出，通常称为蛋白质的盐析。

因此在蛋白质中加入不同浓度的中性盐可使不同蛋白成分分别析出，从而达到分离纯化抗体的目的。

《动物生物化学实验》教学大纲一、基本信息二、教学目标及任务《动物生物化学》是为高等农业院校动物医学、动物药学、动物科学和水产养殖等专业本专科开设的重要的专业基础课，也是一门重要的实验性课程。

通过本课程的系统学习和实验，使学生掌握动物生化实验的基本知识,基本理论和基本实验技能,掌握熟悉常用生化仪器的原理和使用方法,了解有关电泳，色谱，制备，透析等基本的生化实验手段,培养理论联系实际的学风和动手能力。

三、学时分配教学课时分配四、实验内容及教学要求实验一：蛋白质的沉淀反应和两性反应，蛋白质透析脱盐。

本实验重点、难点：生化实验常用的仪器的使用；理解蛋白质的一般理化性质；盐析、透析的概念。

本实验教学要求：教育学生对生化实验的认识；了解生化实验常用的仪器及使用方法；理解蛋白质的沉淀、两性反应及透析脱盐的原理；掌握蛋白质盐析和透析等操作技术。

实验二：蛋白质的定量分析------双缩脲法测定蛋白质浓度；分光光度计的使用和注意事项；Excel软件制作标准曲线。

本实验重点、难点：分光光度法测定蛋白质的浓度的原理；标准曲线的制作。

本实验教学要求：了解蛋白质含量测定的原理和方法；掌握分光光度法的原理及分光光度计的使用方法和注意事项；用标准曲线法准确测定未知样品中蛋白质的含量；学习使用Excel软件制作标准曲线。

实验三：动物心脏、肝脏中琥珀酸脱氢酶的制备和活性鉴定*；动物血清和组织匀浆液的制备；附：玻璃匀浆器、离心机的使用。

本实验重点、难点：制备血清和组织匀浆液；观察琥珀酸脱氢酶竞争性抑制的基本原理；玻璃匀浆器、离心机的正确使用。

本实验教学要求：了解琥珀酸脱氢酶竞争性抑制的实验原理；掌握动物血清和组织匀浆液的制备，匀浆器、离心机的使用等方法。

实验四：电泳的概念和一般原理；醋酸薄膜电泳分离血清蛋白；电泳分离条带的扫描及软件分析*。

本实验重点、难点：电泳的概念和一般原理；电泳分析动物血清中各种蛋白组分。

本实验教学要求：了解电泳的概念和一般原理；掌握醋酸纤维薄膜电泳的操作技术和操作要点；学会用电脑软件分析动物血清中各种蛋白组分实验五：盘状聚丙烯酰胺凝胶电泳分离血清蛋白*。

动物生物化学实验一、动物生物化学实验特点1．实验材料新鲜2．被测成分在动物组织、细胞中含量很少3．体外操作应尽量模拟生理环境条件4．在绝大多数条件下，生物分子是溶解在溶液中，很难直接看到所研究的内容二、注意事项1.工作服；严禁吸烟、饮水、进食；废液缸、冲稀、废物桶2.铬酸洗液；10%-20%尿素；硝酸3.恰当的吸管，减少误差三、离心机1．利用离心力把溶液中比重不同的固液分离。

分为常速、高速和超速离心机。

2．液体要加到三分之二左右、严格配平、不要超过最大转速、防止过热。

四、酶活性的观察1酶：活细胞产生，对特异底物有高效催化能力的生物催化剂，化学本质多数蛋白质。

影响酶活性：PH、温度、激活剂和抑制剂激活剂、抑制剂：能（升高）降低酶的活性，但又不使酶失活的物质《对酶有选择性》（区别于酶的失活）2淀粉在唾液淀粉酶的催化下会水解，水解程度随时间的延长而增加。

利用碘液指示水解程度：淀粉（蓝色）——糊精（深褐色、深红色）——麦芽糖、葡萄糖（棕黄色，碘液本身的颜色）337摄氏度、PH6.8（磷酸缓冲液中PH6.6）、激活剂0.5%NaCl、抑制剂1%CuSO44注意：温度对酶的影响中沸水浴后要冷却；酶反应的特异性检验中加斑氏试剂后沸水浴先砖红色沉淀；酶的活性通常是以测定酶作用的底物或产物在酶作用前后的变化来进行观察。

五、琥珀酸脱氢酶的作用及其竞争性抑制的观察1琥珀酸脱氢酶是三羧酸循环中的一个重要的酶，位于线粒体中，可使琥珀酸脱氢而生成延胡索酸。

在缺氧的条件下，适当的受氢体也可接受脱氢酶从底物上脱下的氢。

当甲烯蓝（蓝色）作为受氢体甲烯蓝被脱下的氢还原成甲稀白（无色物质）。

【甲稀白易氧化用液体石蜡液封】2酶的竞争性抑制作用：丙二酸化学结构与琥珀酸相似，可与琥珀酸竞争性的结合琥珀酸脱氢酶的活性中心，若已与丙二酸结合，则不能再催化琥珀酸脱氢，此现象称为酶的竞争性抑制作用。

解除酶的竞争性抑制作用：加大底物浓度的方法3研磨应充分；滴加试剂时，最后滴加心脏制备液。

动物生物化学实验课程设计一、实验目的本实验旨在通过对动物生物化学进行实验，帮助学生了解动物体内生物分子的组成、结构和功能。

具体目的如下：1.掌握生物大分子的基本化学性质及其测定方法，比如蛋白质、核酸等；2.学习生物大分子的光谱测定方法；3.学会运用分光光度法、高效液相色谱法等生物化学分析方法。

二、实验材料和设备1.工作站（可用个人电脑代替）；2.维生素C标准品；3.离心管、试管、比色皿；4.pH计、分光光度计；5.注射器、滴管、移液管、量筒、过滤膜等。

三、实验步骤1. 基本物理化学实验学生可以进行如下实验：1.水的密度实验2.酸碱中和实验3.气体的制备4.氧化还原实验2. 生物化学实验1.蛋白质含量测定：分别用同浓度的卵清蛋白、牛血清蛋白和豆腐蛋白制成不同浓度的蛋白质标准溶液，并进行比色测定，构建标准曲线。

用NaOH打断所分离的各种蛋白质，得到氨基酸溶液，之后用二级胺磷酸标记法进行精确测量。

2.蛋白质酶解酶活性测定：采用卟啉酸、胱氨酸、琥珀酸等不同基质做蛋白质酶解，测量各个反应最终吸收的波长，计算各种型号酶的活性。

3.酶促反应速率测定：确定酶的最佳反应条件（最适 pH 值与温度），并用过量底物处理掉酶活性找到最大反应速率。

通过将底物浓度从低到高，记录反应速率变化，得出酶的米氏方程曲线。

3. 综合实验1.维生素C含量的测定：测定某品牌美容粉剂样品中的维生素C的质量分数。

利用样品中的维生素C还原 Fe3+ 得到 Fe2+，在锰绿试剂存在下交换反应生成锰原子。

将生成的绿色溶液中铵硫酸还原得到无色的 Mn2+，覆盖在锰原子溶液上生成氧化亚铁，并在此时棕色液层上加入定量的 0.0005 mol/L 的 KIO4 继续反应，直至棕色液上部逐渐变为白色，在热水浴中进行脱钙、过筛、干燥等操作，最后称量干燥的托盘和附着样品的铁粉，用铁粉的质量表示样品中的维生素 C 含量。

四、实验总结通过这次实验，学生掌握了生物化学的基本知识，掌握了生物大分子的测定方法、分析方法，并对动物体内生物分子的组成、结构和功能有了更深刻的了解，为今后的学习和研究打下了牢固的基础。

凡盐析产品所获得的粗蛋白质中均含有硫酸铵等盐类，这些将影响以后的纯化，所以纯化前均应除去，此过程称为“脱盐”。

脱盐常用透析法和凝胶过滤法。

前者透析后样品的终体积较小，所需时间较长，盐不易除尽。

常用的办法是透析，即把蛋白质溶液装入秀析袋内（常用的是玻璃纸），用缓冲液进行透析，并不断的更换缓冲液，因透析所需时间较长，所以最好在低温中进行。

此外也可用葡萄糖凝胶G-25或G-50过柱的办法除盐，所用的时间就比较短。

试剂与器材(1)奈氏（Nessler）试剂：于500ml锥形瓶内加入碘化钾150g，碘110g，汞150g及蒸馏水100ml。

用力振荡7－15分钟，至碘的棕色开始转变时，混合液温度升高，将此瓶侵入冷水内继续振荡，直到棕色的碘转变为绿色的碘化钾汞液为止。

将上清液2000ml量筒内，加蒸馏水至2000ml，混均备用。

应用时取母液150ml，加10％氢氧化钠溶液700ml。

蒸馏水150ml，混均即可。

若发生混浊，可静置1日，取上清液使用。

（2）20％（W/V）磺基水杨酸溶液（3）白比色磁盘。

操作（1）透析袋准备：商品透析袋制成管状，其扁平宽度为23 mm～50 mm不等。

为防干裂，出厂时都用10％的甘油处理过，并含有极微量的硫化物、重金属和一些具有紫外吸收的杂质，它们对蛋白质和其它生物活性物质有害，用前必须除去。

可先用50％乙醇煮沸1小时，再依次用50％乙醇、0.01 mol/L碳酸氢钠和0.001 mol/L EDTA溶液洗涤，最后用蒸馏水冲洗即可使用。

实验证明，50％乙醇处理对除去具有紫外吸收的杂质特别有效。

使用后的透析袋洗净后可存于4℃蒸馏水中，若长时间不用，可加少量NaN2，以防长菌。

洗净凉干的透析袋弯折时易裂口，用时必须仔细检查，不漏时方可重复使用。

新透析袋如不作如上的特殊处理，则可用沸水煮五至十分钟，再用蒸馏水洗净，即可使用。

使用时，一端用橡皮筋或线绳扎紧，也可以使用特制的透析袋夹夹紧，由另一端灌满水，用手指稍加压，检查不漏，方可装入待透析液，通常要留三分之一至一半的空间，以防透析过程中，透析的小分子量较大时，袋外的水和缓冲液过量进入袋内将袋涨破。

一、实训背景动物生化学作为生命科学的一个重要分支，主要研究动物体内的生物化学过程及其调控机制。

为了加深对动物生化学理论知识的理解，提高实验技能，我们开展了为期两周的动物生化学实训。

本次实训旨在通过实验操作，掌握动物生化学的基本实验方法，了解动物体内重要的生物化学过程，并培养科学实验的基本素养。

二、实训内容1. 实验一：动物组织样品的制备（1）实验目的：学习动物组织样品的制备方法，掌握组织匀浆的制备技术。

（2）实验原理：通过物理或化学方法破坏细胞结构，使细胞内物质释放出来，形成匀浆。

（3）实验步骤：取新鲜动物组织，加入生理盐水，使用组织匀浆器进行匀浆处理，过滤后得到组织匀浆。

2. 实验二：蛋白质的定量测定（1）实验目的：学习蛋白质定量测定方法，掌握双缩脲法测定蛋白质含量的原理和操作。

（2）实验原理：蛋白质分子中含有肽键，与双缩脲试剂作用产生紫色反应，其颜色深浅与蛋白质含量成正比。

（3）实验步骤：取组织匀浆，加入双缩脲试剂，观察颜色变化，通过比色法测定蛋白质含量。

3. 实验三：氨基酸的分离与鉴定（1）实验目的：学习氨基酸的分离与鉴定方法，掌握薄层层析技术。

（2）实验原理：氨基酸分子在薄层色谱上的迁移速度不同，通过比移值（Rf值）进行鉴定。

（3）实验步骤：取组织匀浆，进行氨基酸提取，点样于薄层板上，用正己烷-醋酸乙酯-氨水溶液进行展开，观察氨基酸斑点。

4. 实验四：酶活性测定（1）实验目的：学习酶活性测定方法，掌握紫外分光光度法测定酶活性的原理和操作。

（2）实验原理：酶催化反应过程中，底物浓度随时间变化，通过测定反应体系中特定波长处的吸光度变化，计算酶活性。

（3）实验步骤：取组织匀浆，加入底物，在特定波长下测定吸光度，根据吸光度变化计算酶活性。

三、实训总结1. 实验技能方面通过本次实训，我们掌握了动物组织样品的制备、蛋白质定量测定、氨基酸分离与鉴定、酶活性测定等实验操作，提高了实验技能。

2. 理论知识方面在实训过程中，我们深入理解了动物生化学的基本理论，如蛋白质、氨基酸、酶等生物大分子的结构和功能，为今后的学习和研究打下了基础。

动物生物化学实验教程胡兰版目录第一章动物生物化学实验常识第一节动物生化实验技术发展简史第二节动物生化实验室常识与规则一、实验室规则二、实验室安全及防护知识第三节生化实验基本操作一、玻璃仪器的洗涤二、刻度吸管的使用三、微量移液器的使用四、试管中液体的混匀法第四节常用实验样品的处理一、血液样品的采集二、血清的制备三、全血及血浆的制备四、无蛋白血滤液的制备五、生物大分子的基本制备技术第五节实验报告的撰写规范一、实验记录二、定性实验报告书写格式三、定量实验报告书写格式第二章常用生化实验技术原理及应用第一节离心技术的原理及应用一、离心技术的基本原理二、离心机的主要类型三、常用的离心分离方法四、离心操作的注意事项第二节光度测定法的原理及应用一、分光光度法的基本原理二、光度法的计算三、使用分光光度计的注意事项四、自动生化分析技术第三节电泳技术的原理及应用一、影响电泳迁移率的因素二、几种常用的电泳法第四节层析技术的原理及应用一、层析技术的常用术语二、层析技术的分类三、常用的层析方法四、柱层析的基本装置五、柱层析的基本操作第五节DNA重组技术一、多聚酶链式反应（PolymeraseChainReaction，PCR）的基本过程二、DNA重组技术（RecombinantDNATechnology）三、DNA重组技术的基本步骤第三章酶学实验内容实验一唾液淀粉酶活性观察实验二转氨酶活性测定——King氏法实验三琥珀酸脱氢酶的作用及竞争性抑制的观察第四章糖类实验内容实验四血糖的测定1.福林一吴宪氏法2.葡萄糖氧化酶法实验五肝糖原的提取和鉴定第五章脂类实验内容实验六血清总脂含量测定（香草醛法）实验七肝组织的生酮作用实验八血清游离脂肪酸测定（一次提取比色法）实验九血清总胆固醇测定（胆固醇氧化酶法）第六章蛋白质实验内容实验十醋酸纤维薄膜电泳法分离血清蛋白质实验十一蛋白质的含量测定Ⅰ.双缩脲法Ⅱ.Folin-酚试剂法Ⅲ.紫外光吸收法Ⅳ.考马斯亮蓝结合法实验十二血清尿素氮（BUN）的测定（二乙酰一肟法）实验十三氨基酸纸上层析第七章核酸实验内容实验十四动物组织DNA提取实验十五DNA的定量测定（二苯胺法）实验十六动物肝脏总RNA的制备实验十七RNA的定量测定（地衣酚法）实验十八紫外吸收法测定核酸的含量第八章维生素实验内容实验十九维生素B2的定量测定（荧光法）第九章综合性实验内容附录参考文献。

动物生物化学实验讲义东北农业大学动物生化教研室实验项目1 γ–球蛋白的别离实验项目2 γ–球蛋白含量测定〔光度分析法〕实验项目3 凝胶柱层析法〔γ–球蛋白纯化〕实验项目4 SDS–聚丙烯酰胺凝胶电泳〔SDS–PAGE〕实验项目5 动物组织中DNA的制备实验项目6 多聚酶链反响〔PCR扩增反响〕实验项目7 琼脂糖凝胶电泳别离DNA实验项目8 转氨酶GPT活性的测定实验项目9 氨基酸薄层层析实验项目10 琥珀酸脱氢酶与丙二酸的抑制作用实验一γ–球蛋白的别离【原理】中性盐〔如硫酸铵、硫酸钠、氯化钠、硫酸镁等〕对球状蛋白质的溶解度有显著影响。

随着中性盐浓度的增加，离子强度也增加。

当溶液离子强度增加到一定数值时，溶液中蛋白质的溶解度开场下降。

离子强度增加到足够高时，蛋白质可从水溶液中沉淀出来，这种现象叫做盐析。

各种蛋白质的溶解度不同，因而可利用不同浓度的高浓度盐溶液来沉淀别离各种蛋白质。

蛋白质是一种生物大分子，它具有不能通过半透膜的性质。

透析就是利用这种性质使之与其它小分子物质如无机盐、单糖等分开。

本次实验应用的是脱盐透析，即盐析后，将含大量盐类的蛋白质溶液放在半透膜的袋内，再将透析袋浸入蒸馏水中。

经过一段时间，袋内的盐类浓度即逐渐降低。

假设经常更换袋外的液体，最后即可使袋内的蛋白质溶液中所含的盐类除净，从而到达脱盐的目的。

应用不同浓度硫酸铵分段盐析法将血清中γ–球蛋白与α、β球蛋白别离，最后用透析法脱盐，即可得到纯度较高的γ–球蛋白。

【试剂和器材】一试剂1．pH 7.2，0.01mol/L磷酸盐缓冲液生理盐水〔简称PBS〕：取0.2mol/L Na2HPO4溶液36.0ml，0.2mol /L NaH2PO4溶液14.0ml混合，加NaCl 8.5克，用蒸馏水稀释至1 000ml。

0.2mol/L Na2HPO4溶液：取28.4g Na2HPO4或71.6g Na2HPO4·12H2O用蒸馏水溶解稀释至1 000 ml。