结合态淀粉合成酶(GBSS)活性检测试剂盒说明书 微量法

NADP-苹果酸酶（NADP-ME）活性检测试剂盒说明书微量法货号：UPLC-MS-4365规格：100T/96S产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。

试剂名称规格保存条件提取液液体110mL×1瓶4℃保存试剂一液体20mL×1瓶4℃保存试剂二粉剂×1瓶4℃保存试剂三粉剂×1支4℃保存试剂四粉剂×1支-20℃保存溶液的配制：1、试剂二：用时加入10mL提取液充分溶解备用；2、试剂三：用时加入用时每支加1mL双蒸水充分溶解备用；3、试剂四：用时每支加500μL双蒸水充分溶解备用；4、工作液：在7.5mL试剂二中加入1mL试剂三和0.5mL试剂四，可以根据比例现用现配。

产品说明：ME广泛存在于微生物、培养细胞、动物和植物胞浆中，尤其在植物组织中活性较高。

ME催化苹果酸氧化脱羧的可逆反应，产生丙酮酸和CO2，以及伴随NAD(P)+的还原反应，是苹果酸代谢的关键酶。

ME活性与生物合成和抗氧化密切相关。

近年来植物ME活性测定较多，已经成为抗氧化研究的热点。

根据辅酶专一性和对底物特异性的不同，可将ME分为NAD-ME(EC1.1.1.38)和NADP-ME(EC1.1.1.40)。

NADP-ME催化NADP+还原成NADPH，在340nm下测定NADPH增加速率。

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。

如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：紫外分光光度计/酶标仪、低温离心机、水浴锅、可调节移液器、微量石英比色皿/96孔UV板、研钵/匀浆器和蒸馏水。

操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）1、细菌、细胞或组织样本的制备：细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，弃上清，按照每500万细菌或细胞加入1mL提取液，超声波破碎细菌或细胞（功率20%，超声3s，间隔10s，重复30次）。

α-淀粉酶测定试剂盒（CNPG3底物法）适用范围：本试剂用于体外定量测定人血清中α-淀粉酶的活性。

1.1规格液体单剂型试剂(R)：60mL×2 ；试剂(R)：80mL×2。

1.2规格划分说明根据净含量划分规格。

1.3主要组成成分试剂盒由试剂（R）液体组成。

1.3.1 试剂（R）液体主要组分：2-（N-吗啉基）-乙磺酸（MES）50mmol/L2-氯-对硝基苯-α-D-麦芽三糖（CNPG3）1.8 mmol/LNaCl350 mmol/L醋酸钙 6 mmo/L 硫氰酸钾900 mmol/L 叠氮钠0.01% 2.1 外观试剂(R)应为无色或浅黄色透明溶液，无杂质、无絮状物，外包装完整无破损。

2.2净含量液体试剂净含量应不少于标示值。

2.3试剂空白吸光度在波长405nm(400nm～420nm)处（光径1cm），试剂空白吸光度（A）应≤0.350,试剂空白吸光度变化率（△A/min）应≤0.002。

2.4 准确度测定GBW(E)090593,相对偏差应不超过±10％。

2.5 分析灵敏度对应于浓度为 85U/L的淀粉酶所引起的吸光度变化率（△A/min）的绝对值应在0.006～0.040的范围内。

2.6 重复性重复测定血清样本，变异系数（CV）应≤5%。

2.7 批间差测定血清样本，批间差（R）应≤10%。

2.8 线性范围在[5，2000]U/L检测范围内，线性相关系数（r）应≥0.990。

在(50,2000]U/L范围内，线性相对偏差应不超过±10％；在[5,50]U/L范围内，线性绝对偏差应不超过± 5U/L。

2.9 稳定性2.9.1效期稳定性原包装的试剂盒在2℃～8℃避光贮存，有效期为12个月。

试剂有效期满后2个月以内，试剂性能应符合2.1、2.3、2.4、2.5、2.6、2.8的要求。

2.9.2开盖稳定性试剂开盖后，在2℃～8℃避光保存，可稳定30天；开盖稳定期满后1天内，试剂性能应符合2.1、2.3、2.4、2.5、2.6、2.8的要求。

α-淀粉酶测定试剂盒(EPS底物法)适用范围：用于体外定量测定人血清或尿液中α-淀粉酶的活性。

1.1规格a) 试剂1：2×50ml，试剂2：2×10ml；b) 试剂1：4×50ml，试剂2：4×10ml；c) 试剂1：2×400ml，试剂2：2×80ml；d) 试剂1：12×20ml，试剂2：12×4ml；e) 试剂1：1×50ml，试剂2：1×10ml；f) 试剂1：2×45ml，试剂2：2×9ml。

1.2 组成试剂主要组分见表1：表1 试剂主要组分2.1 外观试剂1应为无色透明溶液；试剂2应为淡黄色透明溶液。

2.2 净含量应不低于试剂瓶标示装量。

2.3 试剂空白2.3.1试剂空白吸光度测定试剂空白吸光度，应≤0.35；2.3.2试剂空白吸光度变化率试剂空白吸光度变化率△A/min≤0.002。

2.4 分析灵敏度测定浓度为1000U/L的样品，吸光度变化率△A/min应不低于0.01。

2.5 线性2.5.1在[5,2400]U/L范围内，线性回归的相关系数应不低于0.990；2.5.2测试浓度[200,2400]U/L的样品，相对偏差应不超过±10%；测试浓度[5,200)U/L的样品，绝对偏差应不超过±20U/L。

2.6 重复性2.6.1 批内重复性变异系数(CV)应不超过5%。

2.6.2 批间差对同一份样品进行重复测定，相对极差(R)应不超过10%。

2.7 准确度回收率应在85%～115%范围内。

2.8 稳定性取在2℃～8℃条件下贮存达到18个月但未超过24个月的试剂检测，应符合本技术要求2.1、2.3、2.4、2.5、2.6.1、2.7之规定。

颗粒结合型淀粉合成酶研究进展时岩玲;田纪春【期刊名称】《麦类作物学报》【年(卷),期】2003(23)3【摘要】本文综述了小麦胚乳中合成直链淀粉的关键酶——颗粒结合型淀粉合成酶(GBSS)的研究进展,展望了GBSS的研究前景。

小麦中的GBSS基因在种子中特异表达;控制3个Waxy位点的基因Wx-A_1、Wx-B_1和Wx-D_1,分别位于7AS、4AL和7DS上;六倍体小麦和二倍体小麦中3个GBSS的DNA序列从起始密码子到终止密码子,Wx-A_1为2781bp,Wx-B_1为2794bp,Wx-D_1为2862bp。

基因的完全编码区含有11个外显子和10个内含子,在核苷酸序列上三个糯基因彼此之间有惊人的同源性;研究表明,直链淀粉含量和淀粉糊化特性受Wx-B_1的影响最大,其次是Wx-_D1缺失蛋白,Wx-A_1缺失蛋白的影响最小。

GBSS的鉴定技术包括I_2-KI染色、电泳和分子标记技术鉴定。

【总页数】4页(P119-122)【关键词】颗粒结合型淀粉合成酶;小麦;胚乳;直链淀粉;序列特征;签定技术;种类;基因表达【作者】时岩玲;田纪春【作者单位】山东农业大学小麦品质育种研究室【正文语种】中文【中图分类】S512.1【相关文献】1.淀粉颗粒结合蛋白质研究进展 [J], 罗明昌2.植物颗粒结合淀粉合成酶（GBSS）基因的表达调控机制研究进展 [J], 苗红霞;孙佩光;张凯星;金志强;徐碧玉3.玉米颗粒结合型淀粉合成酶(GBSS)基因cDNA的克隆及植物表达载体的构建 [J], 乔光明;张明浩;李忠诚;陈正华4.香蕉叶片颗粒结合性淀粉合成酶Ⅰ和可溶性淀粉合成酶Ⅲ基因的克隆与序列分析[J], 匡云波;赖钟雄5.不同颗粒结合型淀粉合成酶Ⅰ亚基组合对小麦淀粉含量及面条品质的影响分析[J], 邓志英;李文淑;郭迎新;赵云哲;陈广凤;王德华;王冠颖;田纪春因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

淀粉含量检测试剂盒说明书微量法UPLC-MS-4133100T/96S试剂名称规格保存条件试剂一液体65mL×1瓶2-8℃保存试剂二液体65mL×1瓶2-8℃保存试剂三粉剂×2瓶2-8℃保存标准品粉剂×1支2-8℃保存溶液的配制：1、标准品：临用前加入1mL 蒸馏水使其溶解，制备10mg/mL 葡萄糖标准液，2-8℃保存两周。

2、工作液的配制：临用前取1瓶试剂三加入2.625mL 蒸馏水后，缓慢加入14.875mL 浓硫酸，不断搅拌，充分溶解，待用，用不完的试剂可以2-8℃保存一周。

淀粉是植物中糖的主要储存形式，其含量测定对于评价食品营养价值和调查植物体内糖代谢都有重要意义。

利用80%乙醇可以把样本中可溶性糖与淀粉分开，进一步采用酸水解法分解淀粉为葡萄糖，采用蒽酮比色法测定葡萄糖含量，即可计算淀粉含量。

StarchH 2SO 4Glucose H 2SO 45-Hdroxymethylfurfural AnthroneFurfural Derivatives最低检出限：0.0074mg/mL 线性范围：0.008-0.7mg/mL注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。

如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、可调式移液器、微量玻璃比色皿或者96孔板、研钵、冰、浓硫酸（不允许快递）、蒸馏水。

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）1、称取约0.03g 样本于研钵中研碎，加入0.6mL 试剂一，充分匀浆后转移到EP 管中，80℃水浴提取30min ，3000g ，常温离心5min ，弃上清，留沉淀。

2、沉淀中加入0.3mL 双蒸水，放入沸水浴中糊化15min （盖紧，以防止水分散失）。

3、冷却后，加入0.6mL 试剂二，放入沸水浴中提取15min ，振荡3-5次。

4、冷却后，8000g ，常温离心15min ，取上清液待测。

土壤漆酶活性检测试剂盒说明书微量法注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。

货号：UPLC-MS-4009规格：100T/48S产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。

试剂名称规格保存条件试剂一液体30mL×1瓶2-8℃保存试剂二粉剂×2瓶2-8℃保存试剂三液体3mL×1瓶常温保存溶液的配制：1、试剂二：临用前取1瓶加7.5mL试剂一溶解，现用现配，并且尽快使用，用不完的试剂2-8℃可保存一周；若试剂变色则不能使用。

2、试剂三：若有白色物质析出，放于37℃中溶解即可。

产品说明：土壤漆酶（SL）是一种含铜的多酚氧化酶，属于铜蓝氧化酶家族，广泛分布于真菌和高等植物中，具有较强的氧化还原能力，在纸浆生物漂白，环境污染物降解和木质纤维素降解以及生物检测方面有非常广泛的应用。

漆酶分解底物ABTS产生ABTS自由基，在420nm处的吸光系数远大于底物ABTS，测定ABTS自由基的增加速率，可计算得漆酶活性。

SLABTS ABTS Radical(420nm)注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。

如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、天平、低温离心机、恒温培养箱/水浴锅、可调式移液器、震荡仪、研钵、30-50目筛。

操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）新鲜土样自然风干或37℃烘箱风干，过30~50目筛。

二、测定步骤1.分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长到420nm，分光光度计蒸馏水调零。

2.加样表：试剂名称测定管对照管土样（g）0.030.03试剂一（μL）135135试剂二（μL）150-置于37℃水浴锅或37℃恒温培养箱准确反应10min。

试剂三（μL）1515试剂二（μL）-1504℃，12000g离心15min，取200μL上清于420nm测定其吸光值，分别记为A测定管、A对照管，计算ΔA测定=A测定管-A对照管。

（1）Hepes-NaOH（pH=7.5）1L的配法：50mM HEPES：11.915g Hepes；5 mM EDTA：1.4613g EDTA；1 mM DTT：0.1543g DTT；2mM KCl：0.149g KCl；1%PVP（K30）：10g PVP；0.2N NaOH：大约需要150ml用来调pH值为7.5。

尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶( UDPGPPase) ,腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶( ADPGPPase) ,可溶性淀粉合成酶( SSS) ,淀粉粒结合淀粉合成酶( GBSS)。

1、不同小麦品种籽粒淀粉组分及相关酶活性的差异赵俊晔于振文* 孙慧敏马兴华孙强*【粗酶液的提取】取10~20个小麦籽粒，记数称重后加8 mL pH 7.5的Hepes-NaOH缓冲液，冰浴研磨。

取30 u L 匀浆液, 加 1. 8 mL 缓冲液1 000×g冷冻离心3 min, 沉淀物经Hepes-NaOH缓冲液悬浮后用于GBSS 活性的测定。

其余匀浆液20000×g 4℃离心10 min, 上清液用于测定UDPGP -Pase、ADPGPPase和SSS 的活性。

【UDPGPPase、ADPGPPase 活性测定】10μL 5 mmol/ L UDPG(或ADPG)加50μL 50 mmol/ LMgCl2, 100μL缓冲液, 20μL酶提取液(ADPGPPase活性测定用50μL) ,加100μL 20mmol/L PPi起始反应, 15 min 后,沸水浴1 min 终止反应, 冷却,加100μL 6 mmol/L NADP, 1.5 IU P -gucomutase, 0.25 IUG6P -dehydrogenase, 0.3 mL 缓冲液, 30℃反应10 min后, 340 nm 波长比色, 用G-1 -P做标准曲线。

【SSS、GBSS 活性测定】0.35mL反应介质(最终浓度50mmol/ L Hepes -NaOH, 16mmol/L ADPG, 15 mmol/ L DTT, 0.7 mg Amylopectin, pH 7. 5)30℃保温5 min, 加入50μL 酶提取液, 反应20 min后,沸水浴1 min 终止反应, 冷却后加入0.35 mLADP-ATP 反应介质(含50 mmol/ L Hepes -NaOH, 4mmol/ L PEP, 200 mmol/ L KCl , 10 mmol/L MgCl2, 1.2units Pyruvate Kinase, pH 7. 5) , 30℃反应30 min, 用FG -300 型发光光度计测定ATP 生成量。

直链淀粉含量检测试剂盒说明书微量法直链淀粉含量检测试剂盒说明书微量法注意：正式测定之前选择2-3个预期差异⼤的样本做预测定。

货号：BC4265规格：100T/96S产品简介：直链淀粉是D-葡萄糖基以α-(1,4)糖苷键链接的多糖链，直链淀粉含量影响着⾷品的⾷⽤品质和外观品质，与⾷品安全息息相关。

直链淀粉和碘形成蓝⾊络合物，利⽤⼄醇分开样品中的可溶性糖和淀粉，再⽤碘与其反应得到直链淀粉含量。

试验中所需的仪器和试剂：可见分光光度计/酶标仪、天平、台式离⼼机、微量玻璃⽐⾊⽫/96孔板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、⼄醚、⽆⽔⼄醇、EP 管。

产品内容：试剂⼀：液体110mL×1瓶，4℃保存；试剂⼆：⼄醚100mL×1瓶，⾃备；试剂三：液体55mL×1瓶，4℃保存；O=9mL：91mL混匀，现⽤现配，4℃保存半年。

试剂四：将试剂三：H2试剂五：液体0.5mL×1⽀，4℃保存；粉剂⼀：粉剂×1瓶，4℃保存；粉剂⼆：粉剂×1瓶，4℃保存；试剂六的配制：将粉剂⼀倒⼊粉剂⼆，⽤蒸馏⽔定容⾄10mL，4℃避光保存⼀个⽉。

标准品：10mg直链淀粉×1⽀，4℃避光保存。

临⽤前加⼊0.1mL⽆⽔⼄醇和0.9mL试剂三，混匀后封⼝膜封⼝，沸⽔浴⾄溶解，即10mg/mL的直链淀粉。

吸取0.1mL加⼊0.9mL蒸馏⽔配制为1mg/mL的标准溶液待⽤。

操作步骤：⼀、直链淀粉的提取：称取0.005g烘⼲样本于研钵中研碎，加⼊1mL试剂⼀，充分匀浆后转移到EP管中，80℃⽔浴提取30min，3000g，25℃离⼼5min，弃上清，留沉淀，加⼊1mL试剂⼆（⼄醚）振荡5min，3000g，25℃离⼼5min，弃上清，留沉淀，加⼊5mL试剂四充分溶解，90℃⽔浴10min，冷却后3000g，25℃离⼼5min，取上清待测。

⼆、测定步骤：1、分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节双波长⾄550nm和485nm，蒸馏⽔调零。

支链淀粉含量检测试剂盒说明书微量法注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

货号：BC4275规格：100T/96S产品简介：支链淀粉又称胶淀粉，一般由几千个葡萄糖残基组成，淀粉中直链淀粉和支链淀粉的比例和含量对淀粉产品的加工、物化特性、糊化温度等有着直接的影响。

支链淀粉和碘形成红紫色络合物，利用乙醇分开样品中的可溶性糖和淀粉，再用碘与其反应得到支链淀粉含量试验中所需的仪器和试剂：可见分光光度计/酶标仪、天平、台式离心机、微量玻璃比色皿/96孔板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、乙醚、无水乙醇、EP管。

产品内容：试剂一：液体110mL×1瓶，4℃保存；试剂二：乙醚100mL×1瓶，自备；试剂三：液体55mL×1瓶，4℃保存；O=9mL：91mL混匀，现用现配，4℃保存半年。

试剂四：将试剂三：H2试剂五：液体2mL×1瓶，4℃保存；粉剂一：粉剂×1瓶，4℃保存；粉剂二：粉剂×1瓶，4℃保存；试剂六的配制：将粉剂一倒入粉剂二，用蒸馏水定容至10mL，4℃避光保存一个月。

标准品：10mg支链淀粉×1支，4℃避光保存。

临用前加入0.1mL无水乙醇和0.9mL试剂三，混匀后封口膜封口，沸水浴至溶解，即10mg/mL的支链淀粉。

吸取0.1mL加入0.9mL蒸馏水配制为1mg/mL的标准溶液待用。

操作步骤：一、支链淀粉的提取：称取0.005g烘干样本（建议称取约0.01g）于研钵中研碎，加入1mL试剂一，充分匀浆后转移到EP 管中，80℃水浴提取30min，3000g，25℃离心5min，弃上清，留沉淀，加入1mL试剂二（乙醚）振荡5min，3000g，25℃离心5min，弃上清，留沉淀，加入5mL试剂四充分溶解，90℃水浴10min，冷却后3000g，25℃离心5min，取上清待测。

二、测定步骤：1、分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节双波长至530nm和755nm，蒸馏水调零。

可溶性淀粉合成酶（SSS）活性检测试剂盒说明书紫外分光光度法注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

货号：BC1850规格：50T/48S产品内容：提取液：液体50mL×1瓶，4℃保存。

试剂一：液体40mL×1瓶，4℃保存。

试剂二：粉剂×2瓶，4℃保存。

试剂三：粉剂×2瓶，-20℃保存。

试剂四：粉剂×2瓶，-20℃保存；临用前每支加入5mL试剂一。

试剂五：粉剂×2瓶，-20℃保存；临用前每支加入8mL试剂一。

试剂六：粉剂×2支，-20℃保存；临用前每支加入416μL双蒸水，充分溶解备用，用不完的试剂4℃保存。

试剂七：液体250μL×3支，-20℃保存，可分装后-20℃保存，不可反复冻融。

试剂八：液体12.5μL×2瓶，4℃保存；每支临用前加入溶解好的4mL试剂四。

反应液Ⅰ的配制：临用前在试剂二中加入7mL试剂一，缓慢加热，逐渐升温使其溶解，冷却后加入试剂三混合溶解。

这样可以分两批配制并且测定。

产品说明：SSS（EC 2.4.1.21）通常以游离态存在于质体基质中，催化淀粉链延长，主要负责支链淀粉的合成。

SSS催化ADPG与淀粉引物(葡聚糖)反应，将葡萄糖分子转移到淀粉引物上，同时生成ADP，在反应体系中添加的丙酮酸激酶、己糖激酶和6-磷酸葡萄糖脱氢酶依次催化NADP+还原为NADPH，NADPH生成量与前一步反应中ADP生成量呈正比，340nm下测定NADPH增加量即可计算SSS活性。

需自备的的仪器和用品：紫外分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1mL石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

操作步骤：一、粗酶液制备称取约0.1g组织加入1mL提取液，冰浴中匀浆。

10000g，4℃离心10分钟，取上清，置冰上待测。

二、测定步骤1、紫外分光光度计预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。

（1）Hepes-NaOH（pH=7.5）1L的配法：50mM HEPES：11.915g Hepes；5 mM EDTA：1.4613g EDTA；1 mM DTT：0.1543g DTT；2mM KCl：0.149g KCl；1%PVP（K30）：10g PVP；0.2N NaOH：大约需要150ml用来调pH值为7.5。

尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶( UDPGPPase) ,腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶( ADPGPPase) ,可溶性淀粉合成酶( SSS) ,淀粉粒结合淀粉合成酶( GBSS)。

1、不同小麦品种籽粒淀粉组分及相关酶活性的差异赵俊晔于振文* 孙慧敏马兴华孙强*【粗酶液的提取】取10~20个小麦籽粒，记数称重后加8 mL pH 7.5的Hepes-NaOH缓冲液，冰浴研磨。

取30 u L 匀浆液, 加 1. 8 mL 缓冲液1 000×g冷冻离心3 min, 沉淀物经Hepes-NaOH缓冲液悬浮后用于GBSS 活性的测定。

其余匀浆液20000×g 4℃离心10 min, 上清液用于测定UDPGP -Pase、ADPGPPase和SSS 的活性。

【UDPGPPase、ADPGPPase 活性测定】10μL 5 mmol/ L UDPG(或ADPG)加50μL 50 mmol/ LMgCl2, 100μL缓冲液, 20μL酶提取液(ADPGPPase活性测定用50μL) ,加100μL 20mmol/L PPi起始反应, 15 min 后,沸水浴1 min 终止反应, 冷却,加100μL 6 mmol/L NADP, 1.5 IU P -gucomutase, 0.25 IUG6P -dehydrogenase, 0.3 mL 缓冲液, 30℃反应10 min后, 340 nm 波长比色, 用G-1 -P做标准曲线。

【SSS、GBSS 活性测定】0.35mL反应介质(最终浓度50mmol/ L Hepes -NaOH, 16mmol/L ADPG, 15 mmol/ L DTT, 0.7 mg Amylopectin, pH 7. 5)30℃保温5 min, 加入50μL 酶提取液, 反应20 min后,沸水浴 1 min 终止反应, 冷却后加入0.35 mLADP-A TP 反应介质(含50 mmol/ L Hepes -NaOH, 4mmol/ L PEP, 200 mmol/ L KCl , 10 mmol/L MgCl2, 1.2units Pyruvate Kinase, pH 7. 5) , 30℃反应30 min, 用FG -300 型发光光度计测定A TP 生成量。

β-淀粉酶（β-AL）活性检测试剂盒说明书（DNS显色法）微量法UPLC-MS-4172100T/48S试剂名称规格保存条件试剂一液体35mL×1瓶常温保存试剂二液体10mL×2瓶2-8℃保存试剂三粉剂×2支2-8℃保存标准品粉剂×1支2-8℃保存溶液的配制：1、试剂一：若有黄色晶体析出，需加热溶解后再用；2、试剂二：临用前取取1支试剂三加入到1瓶试剂二中，置于常温水中并加热至煮沸，期间不断搅拌粉剂至溶解，用不完的试剂2-8℃保存4周；3、标准品：10mg无水葡萄糖。

临用前加入1mL蒸馏水配制成10mg/mL的标准溶液，2-8℃保存两周。

淀粉酶负责水解淀粉，主要包括α-淀粉酶和β-淀粉酶。

β-淀粉酶(EC3.2.1.2)从淀粉的非还原端切开α-1,4糖苷键，生成葡萄糖、麦芽糖、麦芽三糖、糊精等还原糖。

还原糖还原3,5-二硝基水杨酸生成棕红色物质。

α-淀粉酶不耐酸，β-淀粉酶不耐热。

根据上述特性，钝化其中之一，就可测出另一种淀粉酶的活力。

Starchα-AL Reducing SugarReducing Sugar+3,5-dinitrosalicylic acid3-Amino-5-Nitrosalicylate(540nm)注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。

如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、离心机、可调式移液器、96孔板/微量玻璃比色皿、研钵/匀浆器和蒸馏水。

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）称取约0.1g样本，加入0.8mL蒸馏水，研磨匀浆；将匀浆倒入离心管中，提取液在室温下放置提取15min，每5min振荡1次，使其充分提取；6000g，常温离心10min，取上清液加蒸馏水定容至10mL，摇匀，即淀粉酶原液。

吸取上述淀粉酶原液1mL，加入4mL蒸馏水，摇匀，即为淀粉酶稀释液，用于（α+β）淀粉酶总活力的测定。

糖原合成酶（GCS）活性检测试剂盒说明书微量法注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

货号：BC3335规格：100T/96S产品简介：糖原合成酶（Glycogen synthase,GCS）将UDPG的糖基加到原有糖原或是糖原蛋白的非还原端，以α-1,4糖苷键连接。

GCS是动物机体糖原合成过程的限速酶，同时也是胰岛素作用的主要靶酶，在糖代谢及维持血糖相对稳定的过程中有着重要作用。

GCS催化UDPG和葡萄糖残基生成糖原和UDP，丙酮酸激酶和乳酸脱氢酶进一步依次催化NADH生成NAD+，在340nm下测定NADH的下降速率，即可反映GCS活性。

试验中所需的仪器和试剂：紫外分光光度计/酶标仪、低温台式离心机、水浴锅、微量石英比色皿/96孔UV板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

产品内容：提取液：液体100mL×1瓶，4℃保存。

试剂一：液体18mL×1瓶，4℃保存。

试剂二：液体7.5mL×1瓶，4℃保存。

试剂三：液体14μL×1支，4℃避光保存。

试剂四：粉剂×1支，-20℃保存。

试剂五：粉剂×1支，-20℃保存。

试剂六：液体48μL×1支，4℃避光保存。

试剂七：粉剂×1支，-20℃保存。

试剂八：粉剂×1瓶，4℃避光保存。

工作液的配制：临用前将试剂三、试剂四和试剂五转移到试剂一中混合溶解后待用；用不完的试剂分装后-20℃保存，避免反复冻融。

-20℃保存2周。

试剂八的配制：临用前在试剂八中加入5mL试剂二充分溶解，再将试剂六和试剂七转移到试剂八中混合溶解后待用；用不完的试剂分装后-20℃保存，避免反复冻融。

-20℃保存1周。

操作步骤：一、粗酶液提取：组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1:5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液）进行冰浴匀浆，然后，8000g，4℃离心10min，取上清置于冰上待测。

线粒体复合体Ⅳ活性检测试剂盒说明书微量法注意：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定。

货号：BC0945规格：100T/96S产品内容：提取液：液体75mL×2瓶，4℃保存；试剂一：液体21mL×1瓶，4℃保存；试剂二：粉剂×1支，-20℃保存；试剂三：粉剂×1支，4℃保存；工作液的配制：临用前取试剂一、试剂二、试剂三各一支，将试剂二和试剂三依次转移到试剂一中混合溶解。

产品说明：线粒体复合体Ⅳ又称细胞色素C氧化酶，也是线粒体呼吸电子传递链主路和支路的共有成分，负责催化还原型细胞色素C的氧化，并最终把电子传递给氧生成水。

还原型细胞色素C在550nm有特征光吸收，线粒体复合体Ⅳ催化还原型细胞色素C生成氧化型细胞色素C，因此550nm光吸收下降速率能够反映线粒体复合体Ⅳ酶活性。

需自备的仪器和用品：可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

操作步骤：一、复合体Ⅳ的提取：1称取约0.1g组织或收集500万细胞，加入1.0mL提取液，用冰浴匀浆器或研钵匀浆。

24℃600g离心10min。

3将上清液移至另一离心管中，4℃11000g离心15min。

4上清液即胞浆提取物，可用于测定从线粒体泄漏的复合体Ⅳ（此步可选做，可以判断线粒体提取效果）。

5在沉淀中加入400uL提取液，超声波破碎（功率20％，超声5秒，间隔10秒，重复15次），用于复合体Ⅳ酶活性测定，并且用于蛋白含量测定。

二、测定步骤：1、可见分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至550nm，蒸馏水调零。

2、样本测定（1）将工作液置于37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）孵育15min；用不完的试剂4℃可保存一周；（2）在微量玻璃比色皿/96孔板中分别加入试剂名称测定管空白管样品（μL）10-蒸馏水（μL）-10工作液（μL）200200立即混匀，分别记录测定管和空白管550nm处初始吸光值A1和1min后的吸光值A2，测定管的记为A1测定管，A2测定管，空白管的记为A1空白管，A2空白管。

结合态淀粉合成酶（GBSS）活性检测试剂盒说明书微量法注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。

货号：UPLC-MS-4165规格：100T/96S产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。

试剂名称规格保存条件提取液液体100mL×2瓶4℃保存试剂一液体35mL×1瓶4℃保存试剂二粉剂×1瓶4℃保存试剂三粉剂×1瓶-20℃保存试剂四粉剂×2瓶-20℃保存试剂五粉剂×1瓶-20℃保存试剂六粉剂×3支-20℃保存试剂七液体250μL×2支-20℃保存试剂八液体12.5μL×2支4℃保存溶液的配制：1、试剂四：临用前每支加入5mL试剂一。

2、试剂五：临用前每支加入10mL试剂一。

3、试剂六：临用前取1支加入208μL双蒸水，充分溶解备用，用不完的试剂4℃保存。

4、试剂八：每支临用前加入溶解好的4mL试剂四。

1、反应液Ⅰ的配制：临用前在试剂二中加入14mL试剂一，缓慢加热，逐渐升温至水沸腾使其溶解，冷却后加入试剂三混合溶解，这样可以分两批配制并且测定。

产品说明：GBSS（EC2.4.1.21）以束缚态存在于淀粉体中，催化淀粉链的加长反应，主要负责直链淀粉的合成。

GBSS 催化ADPG与淀粉引物(葡聚糖)反应,将葡萄糖分子转移到淀粉引物上，同时生成ADP；进一步通过反应体系中添加的丙酮酸激酶、己糖激酶和6-磷酸葡萄糖脱氢酶依次催化NADP+还原为NADPH，其中NADPH生成量与前一步反应生成的ADP数量呈正比，通过340nm下测定NADPH的增加量，可以计算GBSS活性。

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。

如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：紫外分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板（UV板）、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

淀粉酶(AMS)检测试剂盒（碘-淀粉微板法）简介：淀粉酶(Amylae，AMS)又称1，4-α-D-葡聚糖水解酶，是水解淀粉和糖原的酶类总称。

淀粉酶测定方法主要分为天然淀粉底物方法和确定底物方法，前者的方法有碘-淀粉法，后者有以麦戊糖底物的方法，以4-NP-G 为底物的方法。

Leagene淀粉酶(AMS)检测试剂盒(碘-淀粉微板法)其检测原理是血清或血浆等样本中α-淀粉酶催化淀粉分子中的α-1,4糖苷键水解，产生葡萄糖、麦芽糖以及糊精等，碘液与未被水解的淀粉结合，生成蓝色复合物，其蓝色深浅与未经酶促反应的空白管比较，可计算出淀粉酶的活力单位。

该试剂盒通过酶标仪检测吸光度值，可用于检测细胞或组织的裂解液或匀浆液、血浆、血清、尿液等样品中内源性的淀粉酶活性。

如果采用分光光度计，则检测的样本数较少。

该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。

组成：自备材料：1、96孔板2、生理盐水3、蒸馏水4、酶标仪1、KI工作液：取出KISolution恢复至室温，按KISolution：蒸馏水=1:9的比例混匀，即为KI工作液。

4℃避光可保存一个月。

2、准备样品：①细胞或组织样品：取恰当细胞或组织裂解液，如果有必要需进行适当匀浆，低速离心取上清，冻存，用于AMS的检测。

②血浆、血清和尿液样品：血浆、血清按照常规方法制备，用生理盐水稀释后，可以直接用于本试剂盒的测定，尿液通常也可以直接用于测定，冻存，但为了消除样品本身颜色的干扰，需设置加了血浆或血清但不加底物的对照。

③高活性样品：如果样品中含有较高活性的AMS，可以使用生理盐水或PBS等进行稀释，也可以采用AMSAaybuffer稀释。

④样品准备完毕后可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度，以便于后续计算单位蛋白重量组织或细胞内的AMS含量。

3、AMS检测：按照下表设置空白管、测定管、待测样本，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免产生气泡。

如果样品中的淀粉酶活性过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定。