食品中防腐剂苯甲酸和山梨酸的测定.

吸光光度法同时测定食品中的苯甲酸和山梨酸

作者：白海鑫 刘小花 陈华梅

来源：《江苏农业科学》2019年第19期

摘要：基于吸光度的加和性原理，在选定波长254、224 nm下，通过对苯甲酸/山梨酸的吸光度与浓度间的标准曲线进行线性回归分析所得的斜率，建立了苯甲酸和山梨酸吸光度D与浓度C的关系方程组，最终获得起1种无需分离即可同时测定食品中的苯甲酸和山梨酸含量的方法。结果表明：苯甲酸的回收率为91.83%～102.10%，RSD（相对标准偏差）为0.885%，最小检出限为0.13 mg/L，山梨酸的回收率为91.81%～92.67%，RSD为3.01%，最小检出限为0.096 mg/L，除了具有成本低、操作简单、快速、高效、重现性好等优点外，该方法最大的优点是可不经分离而直接测定混合样品中的苯甲酸与山梨酸的浓度。

关键词：吸光光度法;同时测定;苯甲酸;山梨酸

中图分类号： TS255.7 文献标志码： A

文章编号：1002-1302（2019）19-0224-03

收稿日期：2018-07-21

基金项目：国家自然科学基金（编号：31501213）;河南省高等学校青年骨干教师资助计划（编号：2014GGJS-083）。

作者简介：白海鑫（1973—），男，河南中牟人，博士，副教授，主要从事吸收光谱及荧光光谱的分析方法研究。E-mail：haixin_bai@。

通信作者：刘小花，博士，副教授，主要从事光谱分析与材料化学方面的研究。E-mail：xiaohualiu78@。

科学技术的迅速发展使食品工业快速崛起，食品添加剂得以广泛应用。部分商家为追求食品的色、香、味俱全，延长保质期，往往会在食品中添加大量食品添加剂。《食品添加剂使用卫生标准》对食品添加剂用量和使用范围都有严格的规定和要求[1]。但仍有厂家为了降低生产成本和延长保质期等，在食品中加入过量食品添加剂，而食品添加剂摄入过量会危及人体健康。苯甲酸和山梨酸是较常用的食品添加剂，它们在食品中含量的测定方法的研究显得尤其重要。测定苯甲酸和山梨酸含量的方法有气相色谱法[2-3]、高效液相色譜法[4-6]、薄层色谱法[7]、滴定法[8]、吸光光度法[9-10]。虽然气相色谱法和高效液相色谱法被较多地用于食品中苯甲酸与山梨酸的测定，但其仪器昂贵，分析成本高和操作繁杂等，不利于其应用与普及。鉴于吸光光度法操作简单、快速、成本低等优点[11-13]，本研究通过对不同选定波长下的吸光度与浓度间的标准曲线进行线性回归分析，并基于吸光光度法中吸光度具有加和性原理建立了对样品中的苯甲酸和山梨酸不经分离而直接同时测定的方法。

Dec.2022 CHINA FOOD SAFETY 63分析检测高效液相色谱法测定食品中山梨酸、苯甲酸、糖精钠的基质干扰分析及定性确证丁　梅（梅河口市食品药品检验检测中心，吉林梅河口 135000）摘　要：目的：分析食品中山梨酸、苯甲酸、糖精钠测定的基质干扰峰及定性确证。方法：采用高效液相色谱法测定食品中的山梨酸、苯甲酸、糖精钠，当以乙酸铵溶液（20 mmol·L-1）+甲醇（95+5）为流动相出现可疑峰时，再以甲酸-乙酸铵溶液（2 mmol·L-1甲酸-20 mmol·L-1乙酸铵）+甲醇（92+8）为流动相分析可疑峰，在两种流动相（不同pH值）洗脱下，比较标液中目标峰与样品中可疑峰保留时间的一致性，定性确认样品中的可疑峰是否为目标峰。结果：基质复杂的样品，单一以一种流动相的保留时间定性，容易出现假阳性情况，而以两种流动相保留时间综合定性验证，才能使样品检测结果更可靠。结论：采用两种流动相洗脱下的保留时间进行综合定性分析，可有效避免样品基质干扰出现假阳性样品。关键词：高效液相色谱法；山梨酸；苯甲酸；糖精钠；基质干扰峰；定性确证Analysis and Qualitative Confirmation of Matrix Interference in the Determination of Sorbic Acid, Benzoic Acid, and Saccharin Sodium in Foods by High Performance Liquid ChromatographyDING Mei(Meihekou Food and Drug Testing Center, Meihekou 135000, China)Abstract: Objective: To analyze the matrix interference peaks in the determination of sorbic acid, benzoic acid and saccharin sodium in foods and to qualitatively confirm them. Method: The sorbic acid, benzoic acid and saccharin sodium in foods were determined by HPLC. When the suspicious peak appeared in the mobile phase of ammonium acetate solution (20 mmol·L-1)+methanol (95+5), and then the mobile phase of formic acid-ammonium acetate solution (2 mmol·L-1 formic acid-20 mmol·L-1 ammonium acetate)+methanol (92+8) was used to analyze the suspicious peak. Compare the consistency of retention time between the target peak in the standard solution and the suspicious peak in the sample, and qualitatively confirm whether the suspicious peak in the sample is the target peak. Result: For samples with complex matrix, the retention time of one mobile phase alone can easily lead to false positive. However, the comprehensive qualitative verification of the retention time of two mobile phases can make the sample test results more reliable. Conclusion: Using the retention time under the elution of two mobile phases for comprehensive qualitative analysis can effectively avoid the false positive sample caused by sample matrix interference.Keywords: high performance liquid chromatography; sorbic acid; benzoic acid; sodium saccharin; matrix interference peak; qualitative confirmation苯甲酸、山梨酸、糖精钠是食品中应用最广泛、最常见的食品添加剂，在《食品安全国家标准 食品添加剂使用标准》（GB 2760—2014）[1]中明确规定了其使用范围和限量，被国家食品安全监管部门列作者简介：丁梅（1970—），女，吉林梅河口人，大专，高级工程师。研究方向：食品检验与分析。Copyright©博看网. All Rights Reserved. 64 食品安全导刊 2022年12月（下）分析检测为重点监测的检测项目。目前食品中苯甲酸、山梨酸、糖精钠测定方法有液相色谱法[2-8]和气相色谱法[8-10]和超高效液相色谱串联质谱法[11]，其中高效液相色谱法因检验成本低、前处理简单、设备通用性和普及性好而成为主要检测方法之一。目前色谱分析主要是以保留时间进行定性，对于基质复杂的样品，相同保留时间段常有基质干扰峰出现，尤其是以一种流动相洗脱下的保留时间进行定性往往会出现假阳性样品。本文根据目标物的出峰时间会随着流动相pH值的不同而发生改变这一现象[12-13]，研究以乙酸铵溶液+甲醇（95+5）为流动相出现可疑峰时，再以（甲酸-乙酸铵溶液）+甲醇（92+8）为流动相分析可疑峰，通过不同pH的两种流动相洗脱下的保留时间进行综合定性分析，可以有效避免由样品基质干扰出现假阳性样品，在实际检测工作中效果 较好。1　材料与方法1.1　仪器与试剂LC20AT高效液相色谱仪（配紫外检测器，日本岛津公司）；重载数显型涡旋混合器（美国Talboys公司）；KQ-500DE超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；KH20R-Ⅱ高速冷冻离心机（湖南凯达科学仪器有限公司）。甲醇、甲酸（色谱纯，上海安谱实验科技股份有限公司）；标准物质苯甲酸、山梨酸、糖精钠（德国Dr.Ehrenstorfer公司）。20 mmol·L-1乙酸铵溶液：称取1.54 g优级纯乙酸铵（Alfa Aesar），加1 000 mL水溶解，过0.22 μm滤膜后备用。甲酸-乙酸铵溶液（2 mmol·L-1甲酸-20 mmol·L-1乙酸铵）：在1 000 mL乙酸铵溶液（20 mmol·L-1）中加入75.2 μL甲酸，混合后过0.22 μm滤膜后备用。1.2　色谱条件色谱柱：Shimpack VP-ODS（5 μm，250 mm× 4.6 mm）；检测波长：230 nm；柱温：30 ℃；进样量：20 μL；流速：1.0 mL·min-1；流动相1：20 mmol·L-1乙酸铵溶液+甲醇（95+5）；流动相2：甲酸-乙酸铵溶液（2 mmol·L-1甲酸-20 mmol·L-1乙酸铵）+甲醇（92+8）。1.3　标准溶液配制苯甲酸、山梨酸、糖精钠标准储备溶液：分别准确称取标准物质各0.01 g于10 mL容量瓶中，分别用甲醇溶解并定容，配制的储备液浓度均为 1 mg·mL-1。苯甲酸、山梨酸、糖精钠混合标准溶液：分别准确吸取苯甲酸、山梨酸、糖精钠标准储备溶液适量，用超纯水逐级稀释配制混合标准溶液，其浓度为 5 μg·mL-1。1.4　样品处理称取样品2 g（精确至0.001 g）于50 mL具塞刻度试管中，加入25 mL水，涡旋1 min，超声30 min，加亚铁氰化钾溶液和乙酸锌溶液各2 mL，混匀，加水定容至刻度，静置30 min。取适量上清液于 10 000 r·min-1离心5 min，过0.22 μm滤膜备用。1.5　定性分析以乙酸铵溶液+甲醇（95+5）为流动相，分别进样混标液和样液，经色谱柱分离后以保留时间定性，若出现可疑色谱峰时，再以甲酸-乙酸铵溶液+甲醇（92+8）为流动相分析可疑峰，采用两种流动相洗脱下的保留时间进行综合定性分析，进一步定性验证样品中可疑色谱峰是否为目标峰。2　结果与分析2.1　以乙酸铵溶液+甲醇为流动相的检测结果随机选取市售肉千子、蛋糕、冷面、红方样品，经前处理后，以乙酸铵溶液+甲醇（95+5）为流动相（流动相1）进行色谱分析，并与混合标准溶液色谱图进行比较。以保留时间定性可知，肉千子中检出山梨酸，未检出苯甲酸、糖精钠（图1）；蛋糕中检出糖精钠，未检出苯甲酸、山梨酸（图2）；冷面中检出山梨酸，未检出苯甲酸、糖精钠（图3）；红方中检出苯甲酸，未检出山梨酸、糖精钠（图4）。-10 0000.05.010.015.020.025.030.0min混合标准溶液（浓度5 μg·mL-1）肉千子样品-5 00005 00010 00015 00020 00025 000山梨酸苯甲酸糖精钠30 00035 00040 00045 00050 000uV图1　肉千子样品和混合标准溶液色谱图（流动相1）Copyright©博看网. All Rights Reserved. Dec.2022 CHINA FOOD SAFETY 65分析检测

气相色谱法测定食品中的山梨酸、苯甲酸

邓燕

雅安职业技术学院

【摘要】本文介绍了采用氢火焰离子检测器及毛细管柱气相色谱测定食品中山梨酸、苯甲酸的快速检测方法。采用无水乙醚提取样品中的山梨酸、苯甲酸，反复振荡提取两次，经氯化钠酸性溶液盐析，无水硫酸钠脱水，旋转蒸发仪蒸干，丙酮定容后待测。用外标法定量，取1ul待测样，HP-FFAP石英毛细管柱内分离后进入FID检测器验证。结果表明100ug/ml浓度与峰面积有着良好的线性关系，相关系数大于0.999，山梨酸、苯甲酸的检出限为1.0mg/kg，回收率为82.4%~92.0%，相对偏差为6.1%。此方法具有检出限低，检测快速，定量准确，操作性强，适用于山梨酸、苯甲酸的检测工作。

【关键词】气相色谱；山梨酸；苯甲酸；食品；测定

食品的保鲜和保存通常主要依赖于防腐剂，山梨酸又是被国际粮农组织和世界卫生组织重点推荐的，低毒、高效的防腐剂，主要用于儿童食品等新兴食品领域，而传统领域还在大量使用苯甲酸及其钠盐1。并且，每年山梨酸的需求量可达6500t,苯甲酸的需求也很可观2。并且，大量的毒理学试验表明：防腐剂成分用量过多会对人体肝脏产生危害，甚至致癌。因此，对山梨酸、苯甲酸的检测技术的研究已成为一种必然。目前，对其进行检测主要方法有气相色谱法、高效液相色谱法及毛细管电泳法等。3本文选用气相色谱法测定食品中的山梨酸、苯甲酸，探求有效提取食品中的山梨酸、苯甲酸的有效方法，确定检测的最佳线性关系及最低检测限值。

1实验方法

1.1主要仪器和试剂 美国Agilent7890A气相色谱仪，配置有自动进样器，附有FID检测器，选配Agilent的HP-FFAP(30m×0.32mm×0.25um)毛细柱。瑞士旋转蒸发仪、50ml的比色管。

丙酮（色谱纯）、无水乙醚（分析纯）、氯化钠（分析纯）、无水硫酸钠（分析纯）、浓盐酸、山梨酸、苯甲酸的标准品均购自德国Dr.Ehrenstorfer公司。

Ｖｏ１．１７，２０１０，Ｎｏ．３　Ｃ掀ｅｒｅａｌ　ａ　ｎｄ　Ｆｏｏｄ品工Ｉｎｄｕｓ业ｔｒｙ　标准与检测　

Ｈ　ＰＬＣ／ＭＳ测定食品中的　

苯甲酸、山梨酸、甜蜜素、糖精钠　

胡梅，王骏　，祝建华　山东省产品质量监督检验研究院　（济南　２５０１００）　

摘　要：建立了测定食品中苯甲酸、山梨酸、甜蜜素、糖精钠的ＨＰＬＣ／ＭＳ分析方法。样品中　的添加剂用水提取，经ＨＰＬＣ分离后，在ＥＳＩ负离子模式下检测。４种添加剂测定的线性范围均为　

１０～５　０００　ｎｇ／ｍＬ，检出限均优于０．１　ｍｇ／ｋｇ；各组分加标回收率分别为：苯甲酸９２．１　＂－－９６．７　，　山梨酸９２．３％～９４．４　，糖精钠９４．０　～９７．３　９／６，甜蜜素９５．１％～９６．９　９／５。　

关键词：ＨＰＬＣ／ＭＳ；食品；山梨酸；苯甲酸；甜蜜素；糖精钠　中图分类号：Ｔ￥２０２．３　文献标识码：Ｂ　文章编号：１６７２—５０２６（２０１０）Ｏ３—００６０—０３　

Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｂｅｎｚｏｉｃ　ａｃｉｄ，ｓｏｒｂｉｃ　ａｃｉｄ　ｓｏｄｉｕｍ　ｃｙｃｌａｍａｔｅ　ａｎｄ　

ｓａｃｃｈａｒｉｎ　ｓｏｄｉｕｍ　ｉｎ　ｆｏｏｄ　ｂｙ　ＨＰＬＣ／ＭＳ　

Ｈｕ　Ｍｅｉ，Ｗａｎｇ　Ｊｕｎ，Ｚｈｕ　Ｊｉａｎｈｕａ　Ｓｈａｎｄｏｎｇ　Ｓｕｐｅｒｖｉｓｉｏｎ　ａｎｄ　Ｉｎｓｐｅｃｔｉｏｎ　Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　ｆｏｒ　Ｐｒｏｄｕｃｔ　Ｑｕａｌｉｔｙ（Ｊｉｎａｎ　２５０１００）　

Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ａ　ｍｅｔｈｏｄ　ｏｆ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｆｏｒ　ｂｅｎｚｏｉｃ　ａｃｉｄ、ｓｏｒｂｉｃ　ａｃｉｄ、ｓｏｄｉｕｍ　ｃｙｃｌａｍａｔｅ　ａｎｄ　ｓａｃ—　ｃｈａｒｉｎ　ｓｏｄｉｕｍ　ｉｎ　ｆｏｏｄｓ　ｂｙ　ＨＰＬＣ／ＭＳ　ｉｓ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ．Ｔｈｅ　ｆｏｏｄ　ａｄｄｉｔｉｖｅｓ　ｗｅｒｅ　ｅｘｔｒａｃｔｅｄ　ｆｒｏｍ　ｔｈｅ　

ｓａｍｐｌｅ　ｂｙ　ｗａｔｅｒ，ａｆｔｅｒ　ｓｅｐａｒａｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ａ　ＨＰＬＣ　ｃｏｌｕｍｎ，ｄｅｔｅｃｔｅｄ　ｕｎｄｅｒ　ＥＳＩ　ｎｅｇａｔｉｖｅ　ｉｏｎ　ｍｏｄｅｓ．　Ｔｈｅ　ｃａｌｉｂｒａｔｉｏｎ　ｃｕｒｖｅｓ　ｏｆ　ｔｈｉｓ　ｆｏｕｒ　ｆｏｏｄ　ａｄｄｉｔｉｖｅｓ　ａｒｅ　ｌｉｎｅａｒ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｒａｎｇｅ　ｏｆ　１０－－５　０００　ｎｇ／ｍＬ，ａｎｄ