马铃薯茎尖脱毒及组培快繁技术

马铃薯脱毒试管苗快繁技术马铃薯是我国重要的经济作物之一，但是也受到各种病毒的威胁，其中普通马铃薯Y 病毒和葡萄叶病毒对产量和品质的影响尤为严重。

因此，马铃薯脱毒试管苗快繁技术应运而生，成为解决马铃薯病毒问题的有效途径。

马铃薯脱毒技术主要应用于普通马铃薯Y病毒、葡萄叶病毒、马铃薯卷叶病毒和马铃薯花叶病毒等病毒的控制。

试管苗快繁技术是指将受病毒侵染的母株去除外在病毒污染，通过组织培养技术培养出无病毒的试管苗，再进行大规模繁殖。

该技术有以下优点：一、保证马铃薯品种的纯度和优质性马铃薯试管苗快繁技术可以去除试管苗体内外病毒，降低病毒对马铃薯产量和品质的影响，保证马铃薯品种的纯度和优质性。

二、促进马铃薯种薯产业的发展和壮大马铃薯试管苗快繁技术可以大规模繁殖马铃薯健康种苗，提高种薯产量和品质，促进马铃薯种薯产业的发展和壮大。

三、降低耕地污染和农业用药量马铃薯试管苗快繁技术可以去除病毒，降低马铃薯的病害发生率，从而减少对土壤和水的污染，降低农业用药量，保护生态环境。

四、提高农民收益马铃薯试管苗快繁技术可以提高马铃薯产量和品质，增加农民的收益，改善农民的生活水平。

一、选择底薯并进行消毒。

选用优质种薯作为材料，切割成小块，进行消毒处理，去除外在污染细菌。

二、组织培养获得试管苗。

采取组织培养技术，将马铃薯底薯比如去除病毒后得到的组织块，放在含有营养物质的试管中，在适宜的温度、光照和湿度下培养，最终获得无病毒的马铃薯试管苗。

三、快速繁殖无病毒试管苗。

将无病毒马铃薯试管苗通过快繁技术进行扩繁，获得大量无病毒的马铃薯试管苗，再进行与土壤直接接触的育苗培育。

四、田间移栽。

无病毒的马铃薯试管苗经过特殊处理后，移栽到田间进行培育，获得无病毒的马铃薯种质资源。

总之，马铃薯脱毒试管苗快繁技术是一项有效的马铃薯病毒控制技术，可以保证马铃薯种质资源的纯度和优质性，为马铃薯种薯产业的发展和壮大提供了有力支撑，也对保护生态环境和提高农民收益具有重要意义。

目录1 茎尖脱毒技术操作规程 (1)1.1 设备条件 (1)1.1.1 试剂配置室 (1)1.1.2 洗涤及灭菌室 (2)1.1.3 无菌室 (2)1.1.4 培养室 (2)1.2 材料的选择 (2)1.3 类病毒和病毒的检测 (2)1.3. 1 类病毒的检测 (2)1.3.2 病毒检测 (9)1.3.3 脱毒材料热处理 (13)1.4 培养基的制备 (13)1.4.1 培养基母液配制 (13)1.4.2 培养基配制 (15)1.5 外植体灭菌 (17)1.6 茎尖剥离前消毒 (17)1.7 茎尖剥离与接种 (17)1.8 培养 (17)1.9病毒检测筛选脱毒苗 (17)1.10 品种典型性鉴定 (18)2 脱毒苗快繁技术操作规程 (18)2.1 茎切段培养基繁殖 (19)2.1.1 扩繁前的准备工作 (19)2.1.2 茎切段和接种 (19)2.1.3 培养 (19)2.2 扦插苗扩繁 (21)2.2.1 培养基础苗 (21)2.2.2 基础苗移栽 (21)2.2.3 基础苗剪切 (21)2.2.4 基础苗切段后的管理 (22)2.2.5 扦插苗 (22)2.2.6 扦插苗管理 (23)马铃薯茎尖脱毒及脱毒苗快繁技术操作规程1 马铃薯茎尖脱毒技术操作规程马铃薯健康种薯的生产方法主要有利用茎尖脱毒快繁技术生产无病毒种薯、田间系选生产良种和实生种子生产无毒实生薯等，其中植物茎尖分生组织培养脱毒技术（即茎尖脱毒）在实际的农业生产中应用最为广泛并取得了巨大成功。

茎尖脱毒技术是根据病毒在植物体内分布不均和茎尖分生组织带毒少的原理，结合使用钝化病毒的热处理方法，通过剥离茎尖分生组织进行培养获得脱毒植株。

这一技术具有周期短、效率高、能与组织培养快速繁殖相结合等特点。

目前除一些类病毒外，绝大多数植株病毒都可以通过茎尖脱毒技术进行脱除。

经茎尖分生组织培养获得的植株经病毒检测并确认其不带病毒后可进一步利用，对仍带有病毒的株系进行淘汰或再脱毒。

67《农机市场》 2024年第2期马铃薯是泸水市片马镇的主要粮食作物之一。

2023年，全镇马铃薯种植面积813.3亩，占全镇粮食作物播种面积4435.59亩的18%，实现总产886700 kg，平均单产1090.3 kg/亩。

主要种植品种是中甸红、合作88。

为实现马铃薯高产稳产，增加马铃薯种植收益，近年来，片马镇积极推行马铃薯的脱毒与快繁技术，以促进当地马铃薯种植产业的良好可持续健康发展。

1. 马铃薯脱毒技术1.1 建立无菌体系1.1.1 材料选择与处理马铃薯外植体材料的来源可分为三种；一是将大田中处于生长季节的马铃薯植株移植至温室内，并将新生长出的嫩芽收集为外植体。

二是从大田中的马铃薯植株上切取一部分的茎段，扦插于营养液中培植一段时间后，将新生长出的嫩芽收集为外植体备用。

三是将马铃薯块茎放置在室内使其自然发芽，在收集嫩芽为外植体时先将室内温度提升至38℃处理15d后再进行。

马铃薯脱毒与快繁技术胡伍军云南省泸水市片马镇人民政府农业农村综合服务中心，云南 泸水 673207作者简介：胡伍军（1977—），男，汉族，云南泸水人，本科，高级农艺师，研究方向：农业技术推广。

在培养外植体时，可使用72%多菌灵可湿性粉剂2000倍液、农用链霉素1500倍液混合均匀喷施外植体，可起到杀菌效果。

当外植体植株上携带有病毒，可采取热处理或茎尖培养的方式进行消毒。

马铃薯外植体新芽多为2cm左右，收集后用清水冲洗干净后，运用75%酒精对外植体表面灭菌处理30～60s。

随后使用0.1%升汞灭菌5～8min，最后使用无菌水冲洗3～10次，单次冲洗时间为5min，完成处理 [1]。

1.1.2 茎尖剥离与接种马铃薯外植体茎尖较小，将茎尖组织灭菌后，放置在10～40倍解剖镜下使用专用镊子剥离嫩叶组织，裸露出半圆形生长点。

保留1～2个马铃薯叶原基，并接种至空白培养基。

1.1.3 初代培养茎尖初代培养以液体培养基为主，配方为MS+IAA0.1mg/L+GA30.1mg/L，pH值为5.8。

马铃薯脱毒试管苗快繁技术马铃薯是一种重要的作物，全球范围内都有大量的种植。

由于土壤中存在的病毒和细菌的侵害，马铃薯的产量和质量往往受到一定的影响。

为了解决这一问题，马铃薯脱毒试管苗快繁技术应运而生。

本文将为大家介绍马铃薯脱毒试管苗快繁技术的原理、方法和应用前景。

一、原理马铃薯脱毒试管苗快繁技术是一种利用组织培养和生物技术手段快速产生无病毒的马铃薯试管苗的技术。

它的原理主要是通过选择健康无病毒的马铃薯组织，将其进行无菌培养，促进组织再生和植株生长，最终获得大量的无病毒马铃薯试管苗。

二、方法1. 选择健康的母株：首先需要选择健康的母株作为试管苗快繁的材料。

这些母株应该是没有明显的病害和病毒感染的，以保证脱毒后的试管苗是健康的。

2. 组织培养：将选取的健康组织（例如茎、叶或芽）进行消毒处理，然后进行无菌培养。

在无菌条件下，利用培养基和植物生长调节剂促进组织再生和植株生长。

3. 病毒检测：在组织培养过程中，需要对脱毒后的试管苗进行病毒检测，确保其无病毒。

通常采用ELISA法和PCR法等技术进行检测。

4. 试管苗生根：经过病毒检测合格的试管苗，可以进行生根处理，促进其根系的形成和长成。

5. 扩繁：经过生根的试管苗可以进行扩繁，通过分株或离体再生等方法，迅速繁殖大量的无病毒试管苗。

三、应用前景马铃薯脱毒试管苗快繁技术在马铃薯种植中有着广阔的应用前景。

通过脱毒试管苗快繁技术，可以及时有效地消除马铃薯中的病毒和细菌，保证种子的健康。

这样不仅可以提高马铃薯的产量和质量，还可以减少农药的使用，对环境保护具有积极意义。

脱毒试管苗快繁技术可以加快马铃薯种苗的繁殖速度，满足市场需求。

传统的种苗繁殖需要时间较长，而脱毒试管苗快繁技术可以大大减少这一时间，提高种苗的产量和质量。

脱毒试管苗快繁技术还可以为育种工作提供良好的材料。

利用这一技术，可以快速繁殖无病毒的马铃薯试验材料，为马铃薯新品种的选育提供更多可能。

马铃薯脱毒试管苗快繁技术是一种十分重要的新技术，它将对马铃薯生产和种植起到重要的促进作用。

马铃薯脱毒种薯繁殖技术马铃薯采用无性繁殖，生育期间容易被病毒侵染引起种性退化、产量下降，因此，开发和推广脱毒种薯快繁技术，从根本上抑制病毒病的发生和蔓延，是解决其种性退化、产量下降、品质变劣，留种困难的有效途径。

微型薯是利用茎尖脱毒生产的原原种，繁殖原种、一级种薯、是保证大田生产用种的主要方法。

一脱毒种薯繁殖技术1、建立繁殖基地：脱毒种薯繁殖基地应选择在土地平整、交通方便、具有排灌条件的高山区，蚜虫分布稀疏和不利于蚜虫迁飞降落区。

原种繁殖应建立在1300m高海拔冷凉地区，一级种薯繁殖基地在1200米以上海拔地区。

2、建立隔离保护区：原种基地周围建立隔离区，隔离区周围1000米内不种植茄科、十字花科、蔷薇科等作物，以防蚜虫传播。

3、催芽：微型薯一般单粒为5～10g，出苗较慢。

采用沙床催芽，沙床应选择背风向阳地方，将床底铲平后，每铺1层湿沙（湿沙以手握成团，松开后松散为宜）摆放一层微型薯，铺3～5层薯块，最后在沙子上面盖1层草苫。

苗床上起好竹拱，盖严薄膜，四周用土压好。

经8～10天，芽长达0.5厘米左右即可炼芽播种。

二脱毒种薯栽培技术1、选择地块，精细整地：繁殖种薯应选土壤肥沃，便于排灌的沙壤土。

冬前深翻保墒，播种时整地起垄，垄宽2尺，垄高6寸，每垄种2行。

2、施足底肥，集中深施：马铃薯应重施底肥，一般亩施农家肥3000公斤，尿素20公斤，二铵30公斤或薯类专用肥60公斤。

底肥一次施足，垄中线开沟集中条施为好。

3、适时播种，合理密植：种子繁殖田应适当增加密度，以多产小薯为主，一般播种密度为4000-5000株/亩，行距1.5～1.8尺，株距6～8寸。

微型薯适宜播种期为3月上中旬，一级种薯适宜播种期为2月下旬到3月上旬。

4、土壤处理，开沟点播：每亩用3%地虫一扫光颗粒剂2～3公斤，多菌灵3～4公斤/亩，拌细土30公斤进行土壤处理。

在整好地块上沿水平开沟摆放种薯，肥料施入种薯间，然后用细土覆盖2～3寸为宜。

农业工程技术·综合版 2022年5月刊39植保与田间管理DOI:10.16815/ki.11-5436/s.2022.14.023佳；添加少量VC 可以有效抑制褐化现象，提高茎尖存活率。

3、环境因素光照在组织培养中是非常重要的环境因素，光照时间和强度对细胞的增殖及器官分化有很大影响。

马铃薯脱毒苗喜长日照强光，光照时间以每天16 h 为宜，光照强度为2000～2500 Lx。

一定的昼夜温差有利于脱毒苗健壮生长，马铃薯脱毒苗较适宜的温度为白天18～22℃、夜间16～20℃。

培养室相对湿度45%～60%为宜，湿度过低时，培养瓶的内外差异大，会使培养基内的水分迅速丧失，不利于脱毒苗生长发育；湿度过高会造成真菌孢子快速繁殖，易引起霉菌污染。

4、生长调节剂生长调节剂对马铃薯脱毒苗的健康生长有着十分重要的影响[3]。

添加IBA、IAA 以及NAA 后，腋芽萌发期有所推迟，生长素过量时易出现愈伤组织，生根十分缓慢；继续观察可知，平均根条数增加，根系更加粗壮。

相同培养基中，顶芽生根比腋芽早，并且生长形势更好，此现象在不加任何生长添加剂的培养基中表现较明显。

马铃薯茎尖脱毒中常用的津引8号对NAA 培养基十分敏感，浓度过高时切断基会产生较多愈伤组织，进而抑制马铃薯根的初期生长，导致根部生长缓慢。

相同时间内，津引8号马铃薯茎段生长效率不明显，展开的叶片数较少。

二、马铃薯病毒检测鉴定方法马铃薯病毒可导致种质退化，引起产量急剧下降，是制约马铃薯生产的主要因素之一。

培养马铃薯幼苗经过第1次扩繁后必须展开严格的病毒检测工作，保证获取的脱毒苗质量。

目前，最为常见的病毒鉴定法有酶联免疫吸附测定法和分子生物学鉴定法。

1、酶联免疫吸附测定法（ELISA）酶联免疫吸附测定法原理是将抗原和抗体的免疫反应和酶的高效催化反应进行有机结合，通过化学手段将酶和抗体融合在一起，从而形成酶抗体。

ELISA 比传统生物学检测方法灵敏度高，但仍然存在不易检测含量极少的韧皮部病毒等缺陷[4]。