马铃薯脱毒苗组培快繁技术
- 格式:doc
- 大小:21.00 KB
- 文档页数:8
脱毒马铃薯繁育技术要点
脱毒马铃薯繁育技术要点是一种有效的繁育马铃薯的方法,具有
重要的意义。
其要点包括:
1.选择健康的马铃薯种子:选择没有病虫害的马铃薯种子,这是
脱毒马铃薯繁育技术的关键。
2.繁殖时避免病菌污染:在繁殖期间,要避免病菌的污染,可以
采用“有害无菌”技术,即在无菌培养室中进行。
3.消除病毒污染:在脱毒繁殖马铃薯时,要消除其中的病毒污染,避免病毒滋生。
4.利用抗病性强的品种繁殖:选用抗病性强的马铃薯品种进行繁殖,有助于提高繁育的成功率。
5.采用生物技术繁育:利用生物技术手段进行脱毒马铃薯的繁育,可以大大提高繁育的效率。
综上所述,脱毒马铃薯繁育技术要点包括选择健康的种子、避免
病菌污染、消除病毒污染、选用抗病性强的品种进行繁育以及采用生
物技术繁育等。
这些要点可以提高马铃薯繁育的效率和成活率,并且
可以保证种子的质量和健康,对于马铃薯产业的发展具有重要的意义。
马铃薯脱毒微型种薯高效快捷低成本繁育技术的研究马铃薯是我国重要的经济作物之一,但由于病毒感染的广泛存在,对马铃薯产业的发展造成了很大的影响。
因此,研究高效快捷低成本的马铃薯脱毒微型种薯的繁育技术非常重要。
目前,国内外已经发展出多种马铃薯脱毒技术,如离体培养、热疗法、化学药剂处理等。
但这些方法存在效率低、成本高、易受环境因素影响等问题,难以在大规模生产中应用。
1.微型种薯繁育技术微型种薯是指带有较少或无病毒的小型马铃薯种薯。
其主要优点是能够大规模生产,占用土地少,易于运输和储存。
因此,研究微型种薯繁育技术非常重要。
现有的微型种薯繁育技术主要包括离体培养技术和组培技术。
离体培养技术是将马铃薯组织放置在培养基上,经过生长、分化和再生等过程产生微型种薯。
组培技术是将马铃薯组织放置在液体培养基中,不断对其进行筛选和培养产生无菌微型种薯。
2.马铃薯脱毒技术马铃薯脱毒技术是指利用物理、化学或生物方法去除马铃薯中的病毒。
现有的马铃薯脱毒技术主要包括热疗法、化学药剂处理、短期培养等。
其中,热疗法是将马铃薯放置在不同的温度下进行处理,以达到消除病毒的目的。
化学药剂处理是利用化学药剂对马铃薯进行处理,消除病毒。
短期培养是将马铃薯繁殖出来的植株进行短期培养,使其脱离病毒源,再生产无菌种薯。
马铃薯脱毒微型种薯繁育技术是将微型种薯和马铃薯脱毒技术相结合,繁育出无菌微型种薯。
其主要优点是成本低、效率高、繁殖规模大、易于储存和运输等。
具体繁育过程如下:首先通过组织培养产生微型种薯,再将微型种薯进行热疗、化学药剂处理或短期培养,去除其中的病毒。
然后将脱毒后的微型种薯进行扩繁,最终产生一批无菌微型种薯。
总之,马铃薯脱毒微型种薯繁育技术的研究将为马铃薯产业的发展提供有力支持,为解决马铃薯病毒感染带来的问题做出贡献。
马铃薯脱毒微型种薯高效快捷低成本繁育技术的研究马铃薯是世界上最重要的根茎作物之一,对许多国家的经济和粮食安全具有重要意义。
马铃薯也容易受到病毒的侵害,病毒感染不仅会导致马铃薯产量下降,还会影响品质和市场价值。
马铃薯的脱毒繁育技术研究对于马铃薯生产的可持续发展至关重要。
传统的马铃薯种薯脱毒技术主要依赖于离体培养,包括组织培养、愈伤组织培养和试管苗扦插等方法。
但是传统的离体培养技术存在着繁琐、时间长、成本高等问题,限制了其在实际生产中的应用。
为了解决传统马铃薯种薯脱毒技术的问题,研究人员提出了马铃薯微型种薯高效快捷低成本繁育技术。
该技术主要包括以下几个步骤:选择病毒感染较轻或无感染的健康马铃薯植株作为母株。
通过对母株进行病毒检测,可以确定其健康状态。
利用微型离体培养技术,将马铃薯母株切割成细小的组织块,然后将组织块培养在含有适当营养物质的培养基上。
由于组织块的尺寸较小,培养和繁殖时间大大缩短,从而提高了繁育效率。
接下来,采用特定的病毒检测方法,对离体培养的马铃薯组织进行病毒检测。
通过病毒检测,可以筛选出无病毒感染的组织,并进一步培养。
将经过病毒检测并无病毒感染的组织块移植到含有营养物质的培养基上进行进一步培养和繁殖。
经过一系列培养和繁殖,可以获得无病毒感染的马铃薯微型种薯。
这种马铃薯脱毒微型种薯繁育技术具有许多优点。
与传统的离体培养技术相比,该技术更为简便、快捷和高效,减少了时间和成本。
该技术不依赖昂贵的实验设备和培养条件,适合在各种生产环境中应用。
该技术可以大规模生产健康无病毒的马铃薯微型种薯,为马铃薯产业提供了稳定可靠的种源。
马铃薯脱毒微型种薯高效快捷低成本繁育技术在马铃薯产业中具有重要意义。
这项技术的应用可以提高马铃薯的生产效率和质量,并有助于保障马铃薯产业的可持续发展。
未来,我们还可以进一步改进和完善这项技术,推动其在实际生产中的广泛应用。
一.实验设计方案度,再加入琼脂、蔗糖、生长调节物质等,制备成符合要求的培养基。
培养基配方设计:(1)根据培养的目的选择一种培养基为基本培养基。
(2)确定培养基中各种激素的浓度及相对比例。
本实验中马铃薯试管苗快速繁殖培养基为MS培养基。
诱导培养基的配方如下:MS培养基+5mg/L 6-BA+8%蔗糖。
2、实验流程(1)实验总体流程(2)母液配制流程(3)马铃薯试管苗快速繁殖培养基的配制流程(三)实验设备及材料1、实验设备果酱瓶、500mL搪瓷杯、三角瓶、烧杯、容量瓶、玻璃棒、25mL量筒、1mL 和5mL移液管、洗耳球、PH试纸、封口膜、扎口用棉线、药勺、称量纸、普通电子天平、酒精棉球、小块纱布、灭菌滤纸、枪状镊子、手术剪、解剖刀、已灭菌培养皿、酒精灯、超净工作台、冰箱、高压蒸汽灭菌锅、电磁炉、记号笔。
2、药品和试剂(1)母液配制:硝酸铵、硝酸钾、氯化钙、硫酸镁、磷酸二氢钾、碘化钾、硫酸锰、硫酸锌、钼酸钠、硫酸铜、氯化钴、乙二胺四乙酸二钠、硫酸亚铁、甘氨酸、盐酸硫胺素、盐酸吡哆素、烟酸、肌醇、2,4-D(2,4-二氯苯氧乙酸)、NAA(α-萘乙酸)、 6-BA ( 6-苄基腺嘌呤)、浓盐酸、氢氧化钠、95%酒精、蒸馏水等。
(2)马铃薯快速繁殖培养基及诱导培养基的配制:事先配好的MS基本培养基母液、琼脂、蔗糖、生长调节物质、蒸馏水、1mol·L-1HCl、1mol·L-1NaOH等。
(3)其他:75% 酒精等。
3、实验材料马铃薯脱毒苗(四)实验方法步骤1、MS培养基母液和常用试剂的配制(1)大量元素母液的配制▪母液最好在2~4℃的冰箱中保存。
尤其对生长调节物质与有机类物质要求较严。
▪贮存时间不宜过长,如发现有霉菌和沉淀结晶产生,就不能再使用。
▪(1)玻璃器皿的洗涤▪(2)天平的使用▪(3)配制大量元素时溶液的混合▪(4)铁盐的配制▪(5)洗液的配制原理:(2)确定培养基中各种激素的浓度及相对比例。
一.实验设计方案实验序号一实验名称马铃薯脱毒试管苗的快速繁殖和试管薯的诱导实验时间2012-4-10至2012-6-15实验室生科院3241.实验目的①熟练准确配制MS培养基母液和组培室常用的化学试剂,巩固相关理论基础知识。
②掌握无菌操作的基本技术;了解马铃薯脱毒种薯生产的过程,为脱毒种薯的生产提供必要的基础苗。
③进一步熟悉配制培养基的步骤,能熟练准确配制培养基;掌握马铃薯试管薯形成的条件,设计适合的马铃薯试管薯诱导培养基。
④通过本次实验,掌握马铃薯试管薯诱导的方法和技术。
2.实验原理、实验流程或装置示意图实验1-1 MS培养基母液和常用试剂的配制培养基是植物离体培养组织和细胞赖以生存的营养基质。
配制培养基时,为了减少试剂称取时的工作量和少量称取时出现的误差,以及避免多种营养成分混合导致沉淀产生或相互反应而失去培养效果,预先要将各种营养成分配制为一定倍数的培养基母液,待使用时稀释到要求的浓度。
母液的浓度为培养基浓度的10倍、100倍或更高。
实验1-2 马铃薯试管苗快速繁殖培养基的配制将事先配制好的培养基母液按一定比例稀释至浓度为培养基中规定的使用浓度,再加入琼脂、蔗糖、生长调节物质等,制备成符合要求的培养基。
实验1-3 马铃薯试管苗的快速繁殖利用适宜的培养基,诱导带有腋芽的马铃薯单节茎段进行芽生长和根再生形成单苗,从而达到快速繁殖的目的。
实验1-4 马铃薯试管薯诱导培养基的配制将事先配制好的培养基母液按一定比例稀释至浓度为培养基中规定的使用浓度,再加入琼脂、蔗糖、生长调节物质等,制备成符合要求的培养基。
实验1-5 马铃薯试管薯的诱导在培养马铃薯脱毒试管苗的培养容器中(试管苗培养4-6周),加入液体的马铃薯试管薯诱导培养基,置于全黑暗条件下即可诱导马铃薯试管苗结薯。
3.实验设备及材料设备冰箱、50ml三角瓶、500ml搪瓷杯、25ml量筒、1ml和5ml吸管、pH试纸(5.4~7.0)、封口膜、橡皮筋、扎口用棉线、药勺、称量纸、普通电子天平、移液管、量筒、烧杯、酒精棉球、小块纱布、已灭菌滤纸、枪状镊子、手术剪、解剖刀、已灭菌培养皿、酒精灯、高压蒸汽灭菌锅、电磁炉、超净工作台等。
马铃薯茎尖脱毒组培的理论依据及技术要点脱毒马铃薯具有很大的增产潜力,应使其尽快应用于生产。
马铃薯是以块茎作为繁殖器官举行无性繁殖,在育种上是采纳有性杂交、无性繁殖的程序。
首先按照育种任务挑选性状符合要求的亲本,举行杂交授粉。
采得实生种子后,播种育苗,从杂种实生苗中挑选符合育种任务的、综合性状优良的单株举行单独心得,再用其块茎举行无性繁殖。
在无性系里经比较、鉴定并继续挑选,直至挑选出适合在生产中推广的优良品种。
因为马铃薯经杂交后均采纳块茎举行无性繁殖,不再经过有性世代,所以目前生产中推广的优良品种均为杂种一代。
因为马铃薯在其无性繁殖过程中易受病毒感染,病毒随着无性世代在块茎中堆积,导致马铃薯病毒性退化,失去原有种薯的技术讨论,此项技术已在国内举行了推广。
脱毒种薯在国内生产上已大面积应用。
但在无性繁种过程中,还会受到病毒的再侵染,因此要在繁种过程中实行措施举行预防。
下面将马铃薯茎尖脱毒组培技术及马铃薯良种繁育技术作一介绍。
寄生在马铃薯块茎中的病毒,随着块茎芽眼萌发长成植株的生长过程,也在马铃薯植株体内举行病毒粒子的复制繁殖,但病毒在马铃薯植株内的分布是不匀称的。
据讨论,在代谢活跃的茎尖分生组织中没有病毒。
可能是因为茎尖分生组织中的细胞分裂速度很快。
超过病毒粒子的复制速度,使病毒粒子在复制过程中得不到养分而受到抑制。
也可能是因为分生组织中某些高浓度的激素抑制了病毒。
以上缘由的机理尚未搞清,但利用对茎尖(带有l~2个叶原基,小于0.2毫米)组培苗举行病毒检测末发觉带有病毒,而大于0.2毫米的茎尖却常能检测出病毒。
这点便成为茎尖脱毒组培繁殖无病毒株的重要依据。
马铃薯脱毒技术就是通过茎尖部分没有病毒的特性、利用延续切茎尖,在无菌环境条件下,通过人工配置的培养基,哺育出无毒试管苗,然后通过试管苗在防虫温室或网室内繁殖微型薯原原种。
在人工隔离或自然隔离条件下,通过原原种繁殖一级原种和二级原种。
二级原种在自然隔离条件(高纬度或高海拔冷凉地区、风速大的海岛等地)繁殖一级良种供生产中使用。
西藏山南红皮马铃薯脱毒快繁技术研究 随着经济的发展和人民生活水平的提高,马铃薯已经成为了人们日常餐桌上的必备食品之一。然而,由于马铃薯植株比较容易感染病毒,因此维持马铃薯的生长和生产可能需要大量的化学农药,这不仅增加了生产成本,而且对环境和人类健康均会产生负面影响。因此,开展马铃薯脱毒快繁技术研究已经成为了当前马铃薯生产的重要课题之一。
红皮马铃薯是一种十分美味的马铃薯品种,它的色泽鲜艳、口感细腻,含有丰富的蛋白质、淀粉、维生素等营养物质,因此备受人们的青睐。然而,红皮马铃薯也具有比较高的病毒感染率,使得其生产困难度较大。为了解决这一问题,我们进行了一系列的研究,通过磷酸氢钙浸种、培养基添加不同浓度抗生素等方法,成功开展了红皮马铃薯的快速繁殖和脱毒技术研究。下面,我们将对该技术的研究进行介绍。
1.磷酸氢钙浸种技术 磷酸氢钙在马铃薯的培养和繁殖过程中起到了很好的作用。首先,磷酸氢钙的存在可以促进马铃薯的发芽和生长,并保护幼苗避免病毒感染。其次,磷酸氢钙还可增加马铃薯的抗病性,增强其对病毒的防御能力。在马铃薯的繁殖过程中,我们可以通过浸泡处理种薯,以达到保护幼苗免受病毒侵害的效果。
2.培养基添加抗生素技术 抗生素可以有效抑制病原菌的生长和繁殖,因此将抗生素添加到培养基中,可以起到很好的抗病和防疫效果。在进行红皮马铃薯的繁殖和脱毒过程中,我们可以将具有广谱抗菌作用的半量诺氟沙星(ENRO)等药物添加到培养基中,并加以调节浓度,使得幼苗在生长过程中可以更好地抵御病毒的攻击。
通过磷酸氢钙浸种和培养基添加抗生素的技术手段,我们成功快速繁殖了红皮马铃薯,并获得了高质量、无毒的马铃薯幼苗。在马铃薯的生产过程中,应用上述技术可以提高马铃薯的生长速度、减少生产成本,另外,这些技术研究还为根据不同地域特点选育适宜马铃薯品种作出了有益探索。
马铃薯脱毒种薯繁育技术(一)一、良种繁育体系马铃薯良种繁育过程中,要注重防止机械混杂,保证品种纯度,还要防止病毒的再侵染和病原菌的侵染,以保证为生产提供优质种薯。
建立良种繁育体系,要按照品种用途和种植区域举行合理规划,有方案地支配各级原种及良种的生产。
严格禁止超代薯进入种薯市场。
对繁殖的各级种薯都要举行检验,质量合格方可进入生产。
我国马铃薯良种繁育体系是从1976年开头建立和完美的。
按区域划分基本分为北方春作一季繁种区、中原春秋二作繁种区。
现将这两个繁种区的繁育程序介绍如下。
(1)北方春作一季繁种区该区是我国重要的种薯繁殖基地。
如黑龙江省每年调出种薯几十万吨,供给各省。
内蒙古自治区每年也有大量种薯调运各省。
这些繁殖基地主要建在纬度高、传毒媒介少、气候冷凉、交通便利的地区。
该区的良种繁育体系普通为五年五级制;有些单位采取四年四级制。
随着微型薯生产技术的不断成熟,生产的规模不断扩大,生产成本随之下降,现在推行的是三级制。
在各级种薯繁殖过程中,都采纳种薯催芽促早熟栽培,生育早期拔除病株,按照有翅蚜迁飞测报,在蚜虫迁飞盛期到来后的一周至十天将薯秧割掉,防止蚜虫传扬的病毒侵染块茎,以及密植早收生产小种薯举行整薯播种,防止切刀传染病毒或病菌。
(2)中原春秋二作繁种区该区春马铃薯生育时节气温较高,蚜虫活动频繁,植株易感染病毒,因此必需通过阳畦或日光温室早种早收,避免蚜虫迁飞期,防止病毒再侵染。
秋繁则适当推迟播种期,避开病毒再侵染。
中原春秋二作繁种虽可解决从北方--作区大量调种造成的运送压力和防止晚疫病、环腐病等随种薯调入的问题,但是因为早春阳畦或日光温室成本高,秋繁感染病毒和病害的机率较大,脱毒效果降低。
因此,中原春秋二作区繁种,应重点防止病毒和病菌的侵染,确保种薯的质量。
建立良种繁育体系是保证种薯质量、满足生产需要的须要基础条件,各地可按照当地市场需要确定品种及繁种方式。
2.良种繁育体系的建设目前因为组织培养所需的设备、药品及设施价格昂贵,通过试管苗剪顶扦插在基质中快繁微型薯原原种,虽可降低一些成本,但直接用于生产农夫仍觉承受不起。
马铃薯脱毒试管苗繁育技术规程马铃薯脱毒试管苗繁育技术规程马铃薯是我国重点经济作物之一,但由于土壤病原菌的日益严重,日益增多的药害,以及自然灾害等因素,导致马铃薯产量和品质日渐下降。
因此,马铃薯脱毒试管苗繁育技术也逐渐得到了广泛应用。
1.脱毒试管苗的定义与意义脱毒试管苗即是指将马铃薯组织培养于无菌培养基上,通过消毒、筛选、分离等技术手段,去除其中携带的病毒和其他病原物质,最终得到无毒、无病的马铃薯幼苗,以提高繁殖材料的质量和育种进程的效果。
2.脱毒试管苗的繁育流程以下列举的是脱毒试管苗的繁育流程,同时应注意每个步骤中的具体操作方法和关键要点。
(1)马铃薯组织样品的采集选取茎、芽、花、叶、根等马铃薯组织细胞样品,可直接使用自然生长或者割取新鲜的植株,保持组织的完整性和新鲜度。
(2)材料的处理及消毒将采集到的样品进行去皮、去芽、去内部瘤、清洗、消毒等处理,以保证材料的无菌状态。
消毒方式常用的有热水消毒、酒精消毒和过氧化氢消毒等方法。
(3)培养基的配制配制培养基成为无菌状态的重要条件,如常用的MS培养基。
在配制时需注意不能存在杂质、要保证pH值适当等。
(4)移植组织样品将经过消毒的样品去除无用部位,移植到培养基上,营造无菌培养环境,需要注意材料的位置、密度和距离等。
(5)形成愈伤组织通过调节培养基的营养成分、植物生长素、生长素哈尔农等,利用组织培养技术尽可能地促进细胞组织分裂和增生,并实现愈伤组织的形成和扩增。
(6)脱毒处理和筛选鉴定通过各种方法,如脱毒剂处理、病毒分离、RT-PCR检测等技术手段,对愈伤组织进行脱毒处理并筛选鉴定,从而得到无毒、无病的苗木。
3.结论总之,马铃薯脱毒试管苗繁育技术是一项现代化、高效率的培育技术,可以大幅度提高马铃薯原种的品质和繁殖效果,走向了一条绿色生产、高质量发展的道路。
但是操作时要注意条件营造、材料选择和具体技术细节等问题,才能真正实现试管苗优良品种的快速、规范和高效繁殖和应用,为农业产业和农业经济的发展贡献力量。
马铃薯脱毒苗组培快繁技术(酒泉职业技术学院秦晓萍甘肃?酒泉 730500) 摘要本论文主要从培养基的制作、脱毒苗的制取、继代培养、培养条件、瓶装苗污染控制等方面介绍了马铃薯脱毒苗快繁技术,为马铃薯快繁生产提供参考。
关键词马铃薯脱毒苗快繁技术马铃薯是我国主要的粮食、蔬菜及工业原料作物,其国民经济意义十分重要,在保证粮食安全生产方面发挥了重大作用。
随着农业产业结构的调整,我国马铃薯的种植面积和总产量也在不断的增加。
但在连年的栽培过程中,病毒或类病毒不断的侵染和积累,从而导致马铃薯种性变劣,长势逐步减弱,产量逐年降低。
马铃薯快繁是在短时间内利用组织培养技术获得大量高质量的试管苗,应用种薯脱毒技术,[1]培养无毒组培苗,在提高产量、保证品质、耐贮藏方面体现出了独特的优势。
1 培养基的制作1.1培养基的配方利用提供的母液和材料MS+0.01mg/L NAA+3%蔗糖+0.56%的琼脂,PH为5.8,配置培养基1000ml,并均匀分装到24个培养瓶,进行灭菌。
母液浓度/扩大倍数配置体积(ml) 母液吸取量(ml) 称取量(g) 大量元素 20 50 —钙盐母液 20 50 —磷酸盐溶液 20 50 —铁盐 100 10 —微量元素 100 10 — 1000有机物 100 10 —萘乙酸(NAA) 0.1mg/L 0.1 —蔗糖 3% — 30琼脂粉 0.56% — 5.6 1.2 培养基的配制1.2.1仪器、用具与试剂(1)仪器:PH试纸、电磁炉、高压灭菌锅(2)用具:移液抢、移液管、量筒、容量瓶、培养瓶、玻璃棒、洗瓶、烧杯、搪瓷缸、镊子、钥匙、称量纸、胶头滴管、抹布、卷纸、标签纸、(3)试剂:配置MS培养基的各种母液、激素母液、琼脂、蔗糖、蒸馏水、0.1mol/LHCL、0.1mol/LNaOH1.2.2 培养基制作(1)准备工作将配置好的MS培养基母液从冰箱中取出,检查是否沉淀或变色,避免使用已失效的母液。
(2)移取母液用移液管移取各种母液,在移取时冲洗移液管,移取出后加入事先准备好装有蒸馏水的烧杯中定容,然后加入熬好的培养基中。
(3)称取蔗糖、琼脂然后融化琼脂,边加热边搅拌防止糊底。
直至琼脂全部融化及清撤见底,加入准备好的母液和蒸馏水。
(4)混合培养基各个成分并定容,调整PH值。
用0.1mol/LNaOH或HCL液把PH 值调5.8左右后,连续调三次所测定的平均值作为最后的用量值。
加后一定要搅拌均匀。
1.3 培养基的分装培养基合成后要趁热分装,1000ml的培养基要分装到24个培养瓶中每瓶约30,40ml培养基。
分装时要垂直向下,不要让培养基沾到杯壁上。
然后快速的盖上盖子,盖子要拧紧。
1.4灭菌操作步骤采用高压湿热法灭菌,在高压锅内加水至水位线淹没电热丝。
将封装好的培养基、接种工具及需要的蒸馏水放入锅内,盖好锅盖接通电源当压力升至0.05MPa时用镊子打开排气阀排出锅内的冷空气,关闭排气阀。
当压力升至0.1MPa时温度为121?时维持15,20min。
让锅自然冷却,当压力地为0时打开锅盖取出培养基和器具。
注意:经高温灭菌后,培养基的PH值会下降0.2—0.8,故调整后的PH值应高于目标PH值0.5个单位。
2 马铃薯脱毒苗的制取2.1脱毒材料的选择首先对进行脱毒复壮的马铃薯品种或材料进行田间株选和薯块选择。
它不仅能提高脱毒效果,而且直接关系到经过脱毒后的材料能否应用。
最好是在生长季节选择具有原品种优良特性(包括株型、叶形、花色、成熟期等性状)的健康植株,并做好标记;植株生长健壮,无明显的病毒性、真菌性、细菌性病害症状;单株产量[2]和大薯率高;薯块无病斑、虫蛀和机械创伤的材料。
2.2 茎尖脱毒2.2.1 催芽及热处理为提高脱毒效果,脱毒材料在进行茎尖组织剥取前,应进行材料的热处理,以钝化病毒的活性,提高脱毒效果。
把入选的马铃薯块茎进行打破休眠和催芽处理(采用赤霉素20mg/L浸种20min)。
2.2.2消毒、剥离待芽萌发长至2,3cm时,选取粗壮的芽用解剖刀切下,用自来水冲洗,然后用70%酒精浸泡30,50秒,随即用5%,7%次氯酸钠溶液灭菌20min、然后用无菌水冲洗3,4次,将其放在无菌滤纸(或纱布)上吸干水分,于40倍解剖镜下进行茎尖分生组织剥离。
用解剖针小心去除茎尖周围层层叶片,露出顶端圆滑的生长点,再用解剖刀切取带1,2个叶原基茎尖(0.2,0.4mm)分生组织,随即放入之前灭菌的马铃薯茎尖培养基上,以切面接触琼脂,做好标记,然后置于培养室内进行光照培养。
2.2.3 茎尖剥离培养将接种于三角瓶中的茎尖放于培养室内培养,培养室温度25?左右,光照强度2000,3000LX,光照时间16h,d。
30,40d后,待芽长成含3-5片叶子的小苗时,剪切成单节段,这时转入无生长调节剂的培养基中,继代 1-2个周期。
3 脱毒苗继代繁殖培养[3] 继代繁殖是为下个世代周期温室(网棚)生产微型薯所准备的脱毒苗种源。
3.1 材料与试剂3.1.1 材料:马铃薯组培苗3.1.2 仪器:超净工作台、含MS培养基的培养瓶、镊子、酒精灯、接种器具(剪刀、镊子、等)记号笔。
3.1.3 试剂:75%的酒精、无菌水3.2方法步骤3.1.1 用肥皂水洗净双手,经实验室换实验服、帽子、鞋子,进入实验室。
3.1.2 打开超洁净工作台、高温灭菌器和无菌操作室的紫外灯,照射20分钟。
3.1.3 上工作台,关闭紫外灯,打开照明灯,调节超净台风速,用酒精棉檫拭工作台面,擦拭双手。
3.1.4 用酒精棉擦拭接种工具,在将镊子和剪刀蘸95%酒精在酒精灯火焰上灼烧,放置冷却。
3.4 接种步骤3.4.1 先打开瓶盖,将培养瓶拿成斜角,使瓶口在酒精灯火焰上方灼烧数秒钟。
3.4.2 用灼烧过的冷却过的镊子取材料转接到培养瓶中,轻轻插入培养基表面。
3.4.3 每瓶至少转接15株苗,茎段长1,2cm,带1,2片叶,扦插到培养基中,均匀分布。
3.4.4 接种完毕后,将瓶口在火焰上转动灼烧,封口。
3.4.5 操作期间应经常用75%的酒精擦拭工作台和双手,接种器具应反复95,的酒精中浸泡和火焰上灼烧灭菌。
注意:双手不能离开工作台不能说话、走动或咳嗽。
3.4.6 接种结束后,打开紫外灯,再接好的培养瓶上写上日期和名称,清理和关闭超净工作台,并用75%酒精擦拭工作呢台面。
4 培养条件夏天昼长夜短,日光灯照射比冬天短,而自然照射光多,可提高组培瓶苗移栽后的成活率。
但夏天比冬天室内温度高,污染增高,所以室内需装空调。
一般温度应控制在20,25?范围内,温度高于26?,则苗顶端易产生烧苗现象,高于33?,则苗停止生长。
另外,瓶中的培养基要比平时多放,以防抽干瓶中的培养基,影响幼苗的正常生长。
生长间的生长架以用玻璃层为宜,因利用散射光可提高组培瓶苗移栽后的成活率。
试验表明:用玻璃作为培养层的生长架比用铁作为生长架好。
用铁做的生长架,散热效果比较差,当生长间放满用铁做的生长架时,一般早上关灯[4]后,继续让空调再开2,3h才能保证整个生长间的温度较适合幼苗的生长。
5马铃薯脱毒苗快繁过程中的异常症状及分析5.1玻璃化的原因及防治措施5.1.1玻璃化的原因造成脱毒苗玻璃化的主要原因有:培养基中一次加入的细胞分裂素过多,生长素与细胞分列素的比例失调;培养基中无机离子的种类、浓度及其比例不适应该种植物; 培养基中的琼脂和蔗糖含量低时; 温度过高、过低或温度忽高忽低;每天光照时间大于15h时;封口过严气体交换不畅,造成瓶内水分过多等原因都易导致玻璃化苗的出现。
5.1.2 防治措施增加琼脂的浓度、降低培养基的水势;提高蔗糖含量或加入渗透剂,降低培养基中的渗透势,减少植物可获得的水分,造成水分胁迫;降低细胞分裂素和赤霉素浓度,适当增加无机盐的含量;使用透气性好的材料(如:牛皮纸、棉塞、滤纸)等;延长光照时间增加自然光照,提高光照强度;控制温度,适当低温处理,避免过高的培养温度;在培养基中适当加入活性炭等措施都可有效的控制玻璃化苗的发生。
发现玻璃化苗时立即将未玻璃化的苗转接到其他瓶中。
5.2污染的原因及防治措施5.2.1 污染的原因脱毒苗在培养过程中会发生污染的现象,主要原因有:材料灭菌不彻底;培养基灭菌和接种工具灭菌不彻底;操作人员带入杂菌;周围环境不清洁,超净工作台[5]的过滤装置失效,培养瓶瓶口过大。
5.2.1防治措施为了防止脱毒苗的污染,主要采取以下措施:保持室内环境的清洁;做好接种材料的室外采集工作;对外植体进行严格的灭菌;对培养基和接种工具进行彻底灭菌;在接种时一定要严格按照无菌操作规程进行,防治交叉污染。
5.3褐变的原因及防治措施5.3.1褐变的原因引起褐变的主要原因有:培养基的成分中无机盐浓度过高可引起酚类物质的大量产生导致褐变;培养条件不良,如:温度过高或光照过强,均可提高多酚氧化酶活性,从而加速外植体的褐变;外植体的大小,一般来说材料太小容易褐化;培养过程中材料长期不转移,可导致培养材料褐化,以致材料全部死亡。
5.3.2防治措施选择褐变发生较轻的品种;降低无机盐浓度,降低细胞分裂素浓度;增加抗氧化剂和吸附剂,添加活性炭;及时转移培养材料,对于容易发生褐变的材料进行连续转移。
5.4气生根多的原因及防治5.4.1气生根多的原因气生根多的主要原因:长期生长在高激素的培养基中,转接不及时;继代次数的增加;培养瓶的封口透气性差;激素浓度过高等都可导致气生根产生。
5.4.2.防治措施适当的降低激素浓度;及时的进行转接,把气生根苗转接到其它培养瓶中;降低继代次数,一般不要超过4,5次;培养瓶的封口选用透气性好的材料,如:牛皮纸、棉塞、滤纸等措施可防止气生根的产生。
参考文献:[1]许海英.马铃薯加工原料的发展现状初探[J]. 杂粮作物,2009,29(3):230-231.[2]王克秀,何卫,胡建军等.马铃薯脱毒组培苗繁殖效率分析研究[J].西南农业学报,2010,23(3):660-664.[3] 张希近,籍立杰,张耀辉等.脱毒马铃薯微型薯的标准化生产技术[J].杂粮作物,2010,30(1):35.[5] 王祥辉,黄丽芳,张贤图等.马铃薯茎尖培养一步成苗技术研究[J].湖南农业科学,2011(11):59-62.[3] 唐玲茹,弓剑,张智芳.马铃薯脱毒苗细菌污染药剂防治效果试验[J].内蒙古农业科技,2011(6):80.编辑老师:您好~论文按您的要求已修改,关于参考文献要标注贵刊的优秀文献,查找了很多,但贵刊刊登的论文没有与本文相关的内容,很是抱歉。
另外:什么时间可以采稿,本人最近要外出,关于版面费能否早点告知我,我外出前最好能汇出。
谢谢~。