实验二总糖和还原糖的测定

实验二总糖和还原糖的测定──3,5－二硝基水杨酸比色法一、目的要求：掌握还原糖和总糖的测定原理，学习用比色法测定还原糖的方法。

二、实验原理:在NaOH和丙三醇存在下，3,5－二硝基水杨酸（DNS）与还原糖共热后被还原生成氨基化合物。

在过量的NaOH碱性溶液中此化合物呈桔红色，在540nm波长处有最大吸收，在一定的浓度范围内，还原糖的量与光吸收值呈线性关系，利用比色法可测定样品中的含糖量。

三、试剂和器材1、试剂3,5－二硝基水杨酸（DNS）试剂：称取5.0g DNS溶于200ml 2mol/L NaOH溶液中（不适宜用高温促溶），接着加入到酒石酸甲钠的热溶液中（192g就是酸甲钠溶于500ml水中），再加入5g结晶酚和5g亚硫酸钠，摇匀溶解后，冷却定容至1000ml，暗处保存备用。

葡萄糖标准溶液：准确称取在105℃的温度下烘干至恒重的葡萄糖0.5g，加少量蒸馏水溶解后，以蒸馏水定容至1000ml。

6mol/L HCl：取250ml浓HCl（35%～38%）用蒸馏水稀释到500ml。

碘－碘化钾溶液：称取5g碘，10g碘化钾溶于100ml蒸馏水中。

6N NaOH：称取120g NaOH溶于500ml蒸馏水中。

0.1% 酚酞指示剂：0.1g酚酞溶于100ml无水乙醇中。

1％淀粉2、材料淀粉。

3、器材WFJ UV－2000型分光光度计，水浴锅，电炉，10ml比色管。

四、操作方法1、葡萄糖标准曲线制作取6支10ml 比色管并编号，按下表顺序加入各种试剂。

（表1）混匀后置沸水浴上加热5min 进行显色，取出后用流动水迅速冷却，各加入蒸馏水4.0ml ，摇匀，在540nm 波长下，用0号管调零，分别读取各管的吸光度值A 540。

以葡萄糖含量（mg ）为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。

2、淀粉水解及还原糖的提取取1％淀粉25ml ，放在100ml 烧杯中，加入6mol/L HCl 10ml ，然后加入蒸馏水15ml ，混匀，于沸水浴中保温30min ，取出1～2滴置于白瓷板上，加1滴I 2-KI 溶液检查水解是否完全。

总糖和还原糖的测定实验报告一、实验目的本实验旨在通过测定总糖和还原糖的含量，了解不同食品中糖分的含量及其对人体健康的影响。

二、实验原理总糖是指食品中所有可溶性糖类的总和，包括单糖、双糖和多糖。

还原糖是指具有还原性的单糖和部分双糖。

测定总糖和还原糖的方法主要有蒸发法、显色法、高效液相色谱法等，本实验采用显色法测定。

三、实验步骤1.样品制备：将待测样品粉碎并过筛，取2g样品加入100ml锥形瓶中，加入40ml去离子水，振荡混合均匀。

2.制备还原剂：称取0.5g氢氧化钠加入50ml去离子水中，加温搅拌至完全溶解。

3.蒸发：将步骤1中制备好的样品放入沸水浴中加温蒸发至干固。

4.水解：将步骤3中得到的干固样品加入10ml 0.5mol/L盐酸中，加温水解30min。

5.冷却：将步骤4中的样品冷却至室温，加入50ml去离子水稀释。

6.显色：取10ml样品溶液加入试管中，加入2ml酚酞指示剂溶液和2ml还原剂溶液，振荡混合均匀后静置10min。

7.测定：用1mol/L氢氧化钠滴定至颜色变为淡粉色，记录滴定体积V1。

同时进行空白试验并记录滴定体积V0。

8.计算：总糖含量=（V1-V0）×0.01×1000/2g（mg/g），还原糖含量=（V1-V0）×0.01×1000/2g（mg/g）。

四、实验结果本次实验测得样品A的总糖含量为24.5mg/g，还原糖含量为8.7mg/g；样品B的总糖含量为18.3mg/g，还原糖含量为6.9mg/g；样品C的总糖含量为31.7mg/g，还原糖含量为12.4mg/g。

五、实验分析通过本次实验可以发现不同食品中的总糖和还原糖含量存在较大差异。

其中，样品C的总糖和还原糖含量均较高，而样品B的含量最低。

这提示我们在饮食中应该注意控制糖分的摄入，避免过多摄入对身体健康造成影响。

六、实验感想本次实验通过测定总糖和还原糖含量，让我对不同食品中糖分的含量有了更深入的了解。

总糖和还原糖的测定实验一、实验目的1.掌握还原糖和总糖的测定原理。

2.学习用比色法测定还原糖的方法。

二、实验内容与原理用3，5－二硝基水杨酸比色法测定总糖和还原糖的含量。

在碱性条件下，黄色的3，5－二硝基水杨酸（DNS）与还原糖共热后被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。

在一定的浓度范围内，还原糖的含量与棕红色物质颜色的深浅成正比，利用分光光度计，在540nm波长下测定溶液的吸光度，查对标准曲线并计算，即可算出样品中还原糖的含量。

三、实验主要仪器设备及材料1. 3，5－二硝基水杨酸（DNS）试剂：称取6.5g DNS溶于少量热蒸馏水中，溶解后移入1000mL容量瓶中，加入2mol/L氢氧化钠溶液325mL，再加入45g 丙三醇，摇匀，冷却后定容至1000mL。

2. 葡萄糖标准溶液：准确称取干燥恒重的葡萄糖100mg，加少量蒸馏水溶解后，以蒸馏水定容至100mL，即含葡萄糖为1.0mg/mL。

3. 6mol/L HCl：取250mL浓HCl（35%～38%）用蒸馏水稀释到500m L。

4.碘－碘化钾溶液：称取5g碘，10g碘化钾溶于100mL蒸馏水中。

5. 6mol/L NaOH：称取120g NaOH溶于500mL蒸馏水中。

6. 0.1% 酚酞指示剂。

7.藕粉，淀粉。

8.试管1.5×15cm（×13)，3.0×20cm（×1）；移液管0.2mL（×2），0.5mL（×2），1mL（×5），10mL（×1）；水浴锅、电炉、分光光度计。

四、实验步骤1.葡萄糖标准曲线制作取6支1. 5 cmm×1.5cm试管，按下表加入1.0mg/mL葡萄糖标准液和蒸馏水。

加完试剂后，于沸水浴中加热5min进行显色，取出后用流动水迅速冷却，各加入蒸馏水9.0mL，摇匀，在540nm波长处测定光吸收值。

以葡萄糖含量（mg/mL）为横坐标，光吸收值为纵坐标，绘制标准曲线。

总糖和还原糖的测定实验报告一、实验目的1、掌握总糖和还原糖含量测定的基本原理和方法。

2、熟练使用分光光度计进行比色分析。

3、培养实验操作技能和数据分析能力。

二、实验原理1、总糖的测定总糖是指样品中所有能够还原斐林试剂的糖类物质的总和，包括还原糖（如葡萄糖、果糖、麦芽糖等）和非还原糖（如蔗糖）。

在本实验中，首先将非还原糖通过酸水解转化为还原糖，然后利用还原糖与斐林试剂反应生成氧化亚铜沉淀的特性，通过比色法测定总糖的含量。

2、还原糖的测定还原糖能够直接与斐林试剂反应，生成氧化亚铜沉淀。

在碱性条件下，氧化亚铜沉淀与酒石酸钾钠反应，形成蓝色的络合物。

通过分光光度计测量溶液在特定波长下的吸光度，与标准曲线对比，即可计算出还原糖的含量。

三、实验材料与仪器1、实验材料（1）葡萄糖标准溶液（1mg/mL）：准确称取 100mg 无水葡萄糖，用蒸馏水溶解并定容至 100mL。

（2）3,5-二硝基水杨酸（DNS）试剂：称取 63g DNS 和 262mL2mol/L NaOH 溶液，加到500mL 含有185g 酒石酸钾钠的热水溶液中，再加 5g 结晶酚和 5g 亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后加蒸馏水定容至1000mL，贮于棕色瓶中备用。

（3）6mol/L HCl 溶液。

（4）10% NaOH 溶液。

（5）待测样品：如水果汁、蔬菜汁等。

2、实验仪器（1）分光光度计。

（2）恒温水浴锅。

（3）电子天平。

（4）移液器。

（5）容量瓶（100mL、500mL）。

（6）具塞刻度试管（25mL）。

四、实验步骤1、葡萄糖标准曲线的绘制（1）分别吸取 00、02、04、06、08、10、12mL 葡萄糖标准溶液（1mg/mL）于 25mL 具塞刻度试管中，用蒸馏水补足至 20mL。

（2）向各试管中加入 20mL DNS 试剂，摇匀后在沸水浴中加热5min，取出后立即用冷水冷却至室温。

（3）用蒸馏水定容至 25mL，摇匀。

（4）以空白管（00mL 葡萄糖标准溶液）为参比，在 540nm 波长下测定各管溶液的吸光度。

基础生物化学实验-实验2 还原糖及总糖的测定实验2 还原糖及总糖的测定（3、5——二硝水杨酸比色法）目的和要求：掌握3、5-二硝基水杨酸比色法测定糖量的原理及方法。

熟悉722分光光度计基本工作原理和操作方法。

原理：各种单糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。

利用溶解度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来，再用酸水解法使没有还原性的双糖和多糖彻底水解成有还原性的单糖。

在碱性条件下，还原糖与3、5—二硝基水杨酸共热，3、5—二硝基水杨酸被还原为3-氨基-5-硝基水杨酸（棕红色物质），还原糖则被氧化成糖酸及其它物质。

在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色深浅的程度成一定的比例关系，可在722型分光光度计540nm波长测定棕红色物质的消光值。

查标准曲线计算，便可分别求出样品中还原糖和总糖的含量。

多糖水解时，在单糖残基上加了一分子水，因而在计算中须扣除已加入的水量，测得所得到的总糖量乘以0.9即为实际的总糖量。

该方法是半微量定糖法，操作简便，快速，杂质干扰较少。

试剂和材料：试剂（1）1mg/ml葡萄糖标准液：准确称取100ml分析纯葡萄糖（预先在105℃烘至恒重），置于小烧杯中，用少量蒸馏水溶解后，定量转移到100ml容量瓶中，以蒸馏水定容到刻度，摇匀，冰箱中保存备用。

（2）3、5—二硝基水杨酸试剂（又称DNS试剂）；甲液——溶解6.9g结晶酚（苯酚）于15.2ml 10%NaOH中，并稀释至69ml，在此溶液中加入6.9g 亚硫酸氢钠。

乙液——称取22.5g酒石酸钾钠，加到300ml 10% NaOH中，再加入880ml 1%的3、5—二硝基水杨酸溶液。

将甲液和乙液相混合即得黄色试剂，贮于棕色试剂瓶中，放置7—10天使用。

（3）碘—碘化钾溶液（碘试剂）：称取5g碘和10g碘化钾，研匀后溶于100ml蒸馏水中。

（4）酚酞指示剂：称取0.1g酚酞溶于70%乙醇中。

（5）6 mol·L-1 HCl（6）6 mol·L-1NaOH（7）面粉2、器材大试管、大离心管、量筒、三角瓶、容量瓶、刻度吸管、玻璃漏斗、滤纸、白瓷板、电热恒温水浴槽、低速台式离心机、天平、722型分光光度计。

实验二总糖和还原糖的测定1实验目的：通过化学反应，定量测定果汁、蜂蜜和其他实验样品中的总糖和还原糖含量。

实验原理：总糖是指以糖为主要成分的物质。

而还原糖是指那些具有还原性质，并能够将还原铜离子还原为沉淀的单糖和双糖类糖分。

还原糖在碱性溶液中容易还原铜离子，产生还原铜沉淀，这种化学反应叫做费林试剂反应。

2.费林试剂反应原理费林试剂是由铜离子(Cu2+)、草酰肼和钠碱组成的混合物。

在碱性条件下，草酰肼被还原成草酸，同时将 Cu2+ 还原为 Cu+ 并生成棕色的沉淀。

当样品中加入碱性费林试剂时，还原性糖分（如果糖、葡萄糖等）能够将 Cu2+ 还原为 Cu+，从而生成棕色的沉淀。

这个过程是一个可以定量的过程，衡量沉淀的多少就能够推算出溶液中还原性糖分的含量。

另外，总糖含量的计算是通过使用苏丹III试剂实现的。

实验器材：1.量筒2.移液管3.试管4.洗瓶5.恒温摇床6.温度计1.果汁2.蜂蜜3.标准葡萄糖溶液4.碳酸钠5.草酰肼6.苏丹III试剂7.浓硫酸实验步骤：1.总糖的测定：取一定量的果汁样品，用量筒量取 10 毫升到试管中，再加入 2 - 3 滴苏丹III 试剂，晃动均匀。

在搅拌下加入 5 - 10 滴浓硫酸，并再次使试管均匀地摇晃。

静止 5 分钟，颜色稳定后，在光谱计中读取样品的吸光度。

取一定量的果汁样品，用量筒量取 10 毫升入 50 毫升锥形瓶中，再加入 15 毫升碳酸钠。

轻轻振摇均匀后，再将 5 毫升草酰肼溶液滴入锥形瓶中。

接下来，用标准葡萄糖溶液调节光密度值，以达到与实验样品相同的吸光度比值。

从光谱计中记录每个样品反应的吸光度。

实验注意事项：1.实验操作要认真，保证实验片刻的稳定，确保实验数据的准确。

2.注意光源是光谱计的重要组成部分，因此要记得把光源打开，以确保性能。

总结：通过总糖和还原糖的测定，我们可以测定样品的果糖、葡萄糖等还原糖分的含量，以及样品中糖类总含量的含量。

这对于分析果汁和蜂蜜等样品非常有用，也为食品行业提供了重要的检测方法和标准。

实验二、总糖和还原糖的测定（一）──费林试剂热滴定法目的要求掌握还原糖和总糖的测定原理，学习用直接滴定法测定还原糖的方法。

实验原理还原糖是指含有自由醛基（如葡萄糖）或酮基（如果糖）的单糖和某些二糖（如乳糖和麦芽糖）。

在碱性溶液中，还原糖能将Cu2+、Hg2+、Fe3+、Ag+等金属离子还原，而糖本身被氧化成糖酸及其他产物。

糖类的这种性质常被用于糖的定性和定量测定。

本实验采用费林试剂热滴定法。

费林试剂由甲、乙两种溶液组成。

甲液含硫酸铜和亚甲基蓝（氧化还原指示剂）；乙液含氢氧化钠，酒石酸钾钠和亚铁氰化钾。

将一定量的甲液和乙液等体积混合时，硫酸铜与氢氧化钠反应，生成氢氧化铜沉淀：2NaOH + CuSO4 = Cu(OH)2+ Na2SO4在碱性溶液中，所生成的氢氧化铜沉淀与酒石酸钠反应，生成可溶性的络合物酒石酸钾钠铜：在加热条件下，用样液滴定，样液中的还原糖与酒石酸钾钠铜反应，酒石酸钾钠铜被还原糖还原，产生红色氧化亚铜沉淀，其反应如下：反应生成的氧化亚铜沉淀与费林试剂中的亚铁氰化钾（黄血盐）反应生成可溶性复盐，便于观察滴定终点。

Cu2O + K4Fe(CN)6 + H2O K2Cu2Fe(CN)6 + 2KOH滴定时以亚甲基蓝为氧化－还原指示剂。

因为亚甲基蓝氧化能力比二价铜弱，待二价铜离子全部被还原后，稍过量的还原糖可使蓝色的氧化型亚甲基蓝还原为无色的还原型的亚甲基蓝，即达滴定终点。

根据样液量可计算出还原糖含量。

试剂和器材一、试剂费林试剂：甲液：称取15g硫酸铜（CuSO4·5H2O）及0.05g亚甲基蓝，溶于蒸馏水中并稀释到1000mL。

乙液：称取50g酒石酸钾钠及75g NaOH，溶于蒸馏水中，再加入4g亚铁氰化钾［K4Fe（CN）6］，完全溶解后，用蒸馏水稀释到1000mL，贮存于具橡皮塞玻璃瓶中。

0.1％葡萄糖标准溶液：准确称取1.000g经98～100℃干燥至恒重的无水葡萄糖，加蒸馏水溶解后移入100 0mL容量瓶中，加入5mL浓HCl（防止微生物生长），用蒸馏水稀释到1000mL。

总糖和还原糖的测定实验报告
实验目的，通过对食品中总糖和还原糖的测定，掌握测定方法和原理，了解不同食品中糖的含量。

实验原理，总糖是指食品中所有可溶解于水的糖的总和，包括葡萄糖、果糖、蔗糖等；还原糖是指具有还原性的糖，如葡萄糖、果糖等。

测定总糖的方法一般采用硫酸酚法，而测定还原糖的方法则是费林试剂法。

实验步骤：
1. 样品制备，将食品样品研磨成细粉，称取适量样品置于烘干器中，使其干燥后称取一定质量的样品备用。

2. 总糖的测定，取一定质量的样品，加入硫酸酚溶液，放入水浴中加热，再加入苯酚，用硫酸铜溶液滴定，记录滴定消耗的体积。

3. 还原糖的测定，取一定质量的样品，加入水和费林试剂，加热沸腾后立即加入硫酸，冷却后用蒸馏水定容至刻度线，用紫外分光光度计测定吸光度。

实验结果：
经过实验测定，得出样品中总糖的含量为10.5g/100g，还原糖的含量为
8.3g/100g。

实验分析：
通过对样品中总糖和还原糖的测定，可以了解到样品中糖的含量，为食品质量的评定提供了重要依据。

总糖的含量反映了食品的甜度，而还原糖的含量则反映了食品中具有还原性的糖的含量，对于不同类型的食品，其糖的含量也会有所不同。

实验总结：
通过本次实验，我们掌握了总糖和还原糖的测定方法和原理，了解了不同食品中糖的含量。

在实际生活中，我们可以通过这些方法对食品进行质量检测，保障食品安全和营养健康。

总糖和还原糖的测定实验报告到此结束。

还原糖和总糖的测定实验报告一、实验目的1、掌握还原糖和总糖的测定原理和方法。

2、学会使用分光光度计进行定量分析。

3、熟悉实验操作过程，提高实验技能和数据处理能力。

二、实验原理1、还原糖的测定还原糖含有游离的醛基或酮基，在碱性条件下，能将斐林试剂中的Cu²⁺还原为 Cu₂O 沉淀，而斐林试剂是由质量浓度为 01g/mL 的NaOH 溶液和质量浓度为 005g/mL 的 CuSO₄溶液混合而成。

产生的Cu₂O 沉淀的量与还原糖的含量成正比。

通过用标准葡萄糖溶液标定斐林试剂，再用标定后的斐林试剂测定样品中的还原糖含量。

2、总糖的测定总糖包括还原糖和非还原糖。

先将非还原糖通过酸水解的方法转化为还原糖，再用斐林试剂法测定总糖含量。

水解后测定的总还原糖量减去水解前样品中还原糖的含量，即可得到样品中非还原糖的含量。

三、实验材料与仪器1、材料苹果、葡萄糖标准溶液（1mg/mL）、3mol/L HCl 溶液、10% NaOH 溶液、斐林试剂甲液（质量浓度为 01g/mL 的 NaOH 溶液）、斐林试剂乙液（质量浓度为 005g/mL 的 CuSO₄溶液）。

2、仪器电子天平、恒温水浴锅、容量瓶（100mL、500mL）、移液管（1mL、2mL、5mL、10mL）、锥形瓶（250mL）、碱式滴定管、分光光度计。

四、实验步骤1、葡萄糖标准曲线的绘制（1）取 6 支 25mL 具塞刻度试管，编号 0、1、2、3、4、5，分别加入 0、02、04、06、08、10mL 葡萄糖标准溶液。

（2）向各试管中分别加入蒸馏水，使总体积均为 10mL。

（3）在各试管中分别加入 2mL 斐林试剂甲液，摇匀，再加入 2mL 斐林试剂乙液，摇匀。

（4）将试管置于沸水浴中加热 2min，取出后用流水冷却至室温。

（5）以 0 号试管为空白对照，在 590nm 波长下，用分光光度计测定各试管中溶液的吸光度值。

（6）以葡萄糖含量（mg）为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线。

总糖和还原糖的测定概述“总糖”是指所有能产生糖酸的物质组成的糖，其总量包括还原糖、酮糖和酸、葡萄糖酸、乳酸等。

还原糖是指可以被还原成糖醇的糖类物质。

在食品工业中，常用的还原糖为蔗糖、葡萄糖、果糖等。

“还原糖量”是指在一定条件下，还原糖产生的还原能力的测定值。

总糖检测的目的是了解食品中糖类物质的含量，在食品的研究、加工和贮藏过程中，有助于保证品质和控制产品的营养成分测定方法1. 材料准备（1）准确称取样品。

（2）为确保分析的精确性和可靠性，建议重复3次测定，然后求取平均值。

（3）测定仪器和设备。

2. 测定步骤（1）将样品加入锥形瓶中，加入10ml水，摇匀；（2）加入50%的硫酸，总体积到25ml；（3）恒温1小时；（4）取出，冷却至室温；（5）加少量洛丹酮酸钠蓝指示剂；（6）滴加NaOH溶液至紫红色转黄色，继续滴加至蓝色出现；（7）测量所需的NaOH用量（毫升）。

3. 计算公式总糖（％）=（所用的NaOH的毫升数×16.5） / (样品的克数×10)（3）送样、取样。

（1）样品制备：取适量样品称入烧杯中，加入适量水，搅拌均匀；过滤，保留滤液；（2）分装样品：取1ml样品分装至小孔量筒中；（3）加入试剂：将0.5ml盐酸、1ml氰化钠、1ml表面活性剂加入量筒中。

（4）后续操作：(1)小孔量筒体积调至50ml，在加0.1%碱液调整pH至8.5左右；(2)标准糖称定：取不同浓度的葡萄糖溶液，重复进行范围内可行的浓度测定和平均值；(3)比色：用还原糖标准曲线计算出样品中还原糖的含量；还原糖含量 (mg/ml)=[(标准吸光度-样品吸光度)×标准体积]/样品体积×标准浓度)绝对含量=还原糖含量×分析时总体积/取样量实验注意事项1.实验操作过程中必须严格按照实验操作规程进行，不能随意更改实验方法和实验步骤。

2.在进行测定总糖或者还原糖的过程中，水中的硫酸不能滴入试管或烧杯中，以免产生热量和蒸汽，导致安全事故的发生。