1175例羊水细胞培养染色体核型分析

格式：pdf
大小：150.23 KB
文档页数：2

下载文档原格式

高龄孕妇羊水染色体核型分析及拷贝数变异分析

关键词高龄；核型分析；多态性，单核苷酸；拷贝数变异；产前诊断
中图分类号 R715
文献标志码 A
doi：10.3969/j.issn.2096-3351.2021.02.010
Karyotype and copy number variation analyses of amniotic fluid cells in pregnant women with advanced maternal age
摘要目的：探讨孕中期高龄孕妇胎儿异常染色体及拷贝数变异检出情况，同时探讨染色体微阵列技术在高龄孕妇产前
诊断中的应用价值。方法：回顾性分析 2018 年 1 月至 2020 年 7 月泉州市妇幼保健院行产前诊断高龄孕妇的染色体核型及染色
体微阵列分析（chormosome microarray analysis，CMA）检测结果。结果：共 1 338 例高龄孕妇行羊水染色体核型分析，3 例培养失
败，1 335 例成功进行染色体核型分析，成功率约 99.76%。核型结果显示共检出染色体异常 159 例，染色体异常检出率为 11.91%
（159/1 335）。进一步分析高龄合并不同高危因素时染色体异常检出率显示，染色体异常检出率差异具有统计学意义（χ2=
323.113，P < 0.001），当高龄合并无创产前筛查（noninvasive prenatal testing，NIPT)高风险或两项及以上高危因素时，染色体异常
检出率最高。另外，共 207 例高龄孕妇同时行 CMA 检测，结果显示 CMA 检测较染色体核型分析额外检出 3 例致病性拷贝数变
异，核型分析较 CMA 检测多检出 2 例染色体平衡易位。结论：高龄明显差异。另外，CMA 检测技术能够提高高龄孕妇胎儿染色体异常检出率，建议用于胎儿基因分析。

孕中期羊水细胞染色体核型分析在产前诊断中的应用

孕中期羊水细胞染色体核型分析在产前诊断中的应用
化爱玲;张月莲;郑梅玲;张桂林
【期刊名称】《东方药膳》
【年(卷),期】2007(15)1
【摘要】目的利用孕中期羊水细胞染色体核型分析进行产前诊断。

方法对孕16-27w孕妇进行羊膜腔穿刺抽取羊水，做羊水细胞培养，制备染色体并分析染色体核型。

结果255例孕妇，羊水培养成功247例，成功率为96．9％。

可行染色体核型分析的247例中共发现13例染色体异常，占5．3％，其中常染色体数目异常3例，性染色体数目异常2例，嵌合体3例。

平衡易位3例。

其他结构异常2例。

结论孕中期羊水细胞培养，染色体核型分析是产前诊断胎儿染色体疾病的一种安全、有效、可靠的方法。

【总页数】2页(P34-35)
【作者】化爱玲;张月莲;郑梅玲;张桂林
【作者单位】山西医科大学第一医院妇产科遗传室
【正文语种】中文
【中图分类】R714.55
【相关文献】
1.孕中期羊水细胞染色体核型分析与产前诊断 [J], 戴美珍;干灵红;杨丽花;金敏雅;章鸯;陈雪娇
2.孕中期羊水细胞染色体核型分析在产前诊断中的应用价值体会 [J], 马彦
3.1543例孕中期高危孕妇羊水细胞染色体核型与高危产前诊断指征相关性分析[J], 赵连芳;陈俭辉;赵咏梅;景亚玲;张传英
4.1543例孕中期高危孕妇羊水细胞染色体核型与高危产前诊断指征相关性分析[J], 赵连芳; 陈俭辉; 赵咏梅; 景亚玲; 张传英
5.孕中期羊水细胞培养及染色体核型分析的应用研究 [J], 温丹霞;曾南阳;洪钦明;杨玮莉
因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

羊水穿刺羊水细胞的培养及染色体核型分析

羊水穿刺：羊水细胞的培养及染色体核型分析谢雨琪羊水穿刺，全称“羊膜腔穿刺”，是我国目前最常用的一种有创产前诊断技术，是指在超声引导下经腹羊膜腔穿刺抽取羊水后，取出羊水中含有胎儿脱落的上皮细胞进行培养，抽取其中细胞分析胎儿染色体核型的检查，主要涉及的生物技术是羊水细胞的培养及染色体核型分析。

·技术原理1）羊水细胞羊水是指怀孕时子宫羊膜腔内的液体。

在整个怀孕过程中，它是维持胎儿生命所不可缺少的重要成分。

在胎儿的不同发育阶段，羊水的来源也各不相同。

在妊娠第一个三月期，羊水主要来自胚胎的血浆成分。

之后，随着胚胎的器官开始成熟发育，其他诸如胎儿的尿液、呼吸系统、胃肠道、脐带、胎盘表面等等，也都成为了羊水的来源。

因此，羊水中会含有来自胎儿的脱落细胞，羊水细胞具有相同的遗传信息，可用于检查胎儿染色体核型。

2）分析染色体核型不同物种的染色体都有各自特定的形态结构（包括染色体的数目、长度、着丝点位置、臂比、随体大小等）特征，而且这种形态特征是相对稳定的。

经染色或荧光标记的染色体，通过一定的光学或电化学显色设备就可以清晰而直观的观察到染色体的具体形态结构，再与正常核型进行对比寻找差异，进而确定染色体的缺失、重复和倒置等现象。

通过染色体核型分析，可以根据染色体结构和数目的变异情况来判断生物是否患有某种因染色体片段缺失、重复或倒置等引起的遗传病。

如产前21三体综合征的诊断，通过核型分析可以在遗传基础上确定该疾病。

染色体结构异常核型（图片来自实用医学杂志2012年第28卷第11期第1857页）·技术应用一般是在妊娠中期约16周至24周，在超声实时监护下，用细针经腹部穿刺进针，穿过子宫壁，进入羊膜腔后抽取20ml羊水，将羊水中的胎儿细胞收集起来，培养2周后经过特殊处理，得到胎儿染色体并进行核型分析，以获取有关胎儿健康和发育情况的信息。

羊水穿刺属非强制性产前检查，主要适用于以下人群：①所有希望获得胎儿染色体明确诊断、无穿刺禁忌症的中孕期孕妇；②孕早、中期血清筛查高危的孕妇；③≥35岁的高龄孕妇；④夫妇一方为染色体病患者，或曾妊娠、生育过染色体病患儿的孕妇；⑤超声畸形筛查发现异常的孕妇；⑥无创产前DNA检测（NIPT）发现异常的孕妇。

1674例孕妇羊水细胞G显带核型与染色体微阵列结果对比分析

具优缺点,并对检出的基因组异常具有互补性,使用核型分析联合 CMA 检测方式,可减少和预防新生儿出生缺陷。
关键词
产前诊断;羊水;核型分析;染色体微阵列分析
Compa
r
a
t
i
v
eana
l
s
i
so
fG
band
i
ngka
r
o
t
eandCMAr
e
s
u
l
t
so
famn
i
o
t
i
cf
l
u
i
dc
e
l
l
si
n1674p
取 2 管共 20 ml羊
水做常规羊水细胞培养 (
2 线)及染色体制备,经培
养、换液、收获、制片、吉姆萨染色吹干后上机,采用
GSL
120 自动扫描仪捕获核型。以 I
SCN2016 为核
型分析诊断标准,使用核型分析软件计数 20 个中期
细胞核型,每线分析 3 个核型,
r
agmen
t
s.Conc
l
us
i
on:Ka
r
t
l
s
i
sand
ypeana
y
yo
ypeana
y
CMAhavet
he
i
rownadvan
t
age
sandd
i
s
advan
t
age
si
nt
hede
t
e
c
t
i
ono

羊水细胞培养染色体核型分析技术在产前诊断中的应用

羊水细胞培养染色体核型分析技术在产前诊断中的应用摘要：1966年羊水细胞培养成功同时应用在胎儿染色体疾病的产前诊断当中，从那以后这项技术在产前诊断当中已经达到了无可替代的地位，但是传统的羊水细胞培养时间长、成功率低、不能够满足临床需要，因此人们对羊水细胞培养技术进行不断的摸索，得到了更大的改进，诞生了羊水细胞培养染色体核型分析技术。

这项技术在产前诊断当中的作用和效果突出，体现出技术自身优势，因此本文主要对羊水细胞染色体核型分析技术在产前诊断当中的应用进行进一步的研究和探讨。

关键词：羊水细胞培养；染色体核型分析技术；产前诊断；应用对于产前诊断工作来说，羊水细胞的培养和染色体的制备是非常重要的一个技术。

在临床当中，羊水细胞的培养要求高、操作难度大、培养时间长、易污染、核型分裂少的问题，因此在很多医疗机构没有开展羊水产前诊断工作[1]。

近二十年来羊水细胞的培养以及染色体制片技术都得到了明显的改进，但是从客观的角度来说，羊水细胞的培养和制片依然是难以攻克的难题[2]。

基于这样的特点对羊水细胞培养体染色体核型分析技术在产前诊断当中的应用进行研究和探讨，能够明确这项技术的意义和关键点，从而也为技术的研发以及产前诊断工作的推广进行帮助。

一、产前诊断的背景和意义产前诊断保障母婴健康，提高人口出生素质，达到优生优育目的。

在这样的背景之下，结合我国的现状，明确产前实施优生健康检查在优生优育中的意义，能够在一定程度上推动我国优生优育工作的发展[3]。

通过产前诊断，人口出生质量得到提高，最终能够在国力的综合提升当中发挥着积极的作用。

我国每年新生儿出生缺陷率大约在5%，也就是说每年都会新增110万左右的先天性疾病儿童[4]。

从新生儿健康的角度出发，进行产前诊断是一种比较有效的方式，能够对影响优生优育的疾病进行及时的发现及诊断，并且采取有效的措施，使得生育的质量得到一定程度上的提高[5]。

二、染色体核型分析染色体核型分析是细胞遗传学研究得基本方法，是研究物种演化、分类及染色体结构、形态与功能之间关系所不可缺少的重要手段[6]。

羊水核型分析报告

羊水核型分析报告1. 引言羊水核型分析是一种非侵入性产前筛查技术，用于评估胎儿是否存在染色体异常。

本文将为您介绍羊水核型分析的步骤和相关信息。

2. 样本采集羊水核型分析需要采集羊水样本。

首先，医生会在母体腹部注射局部麻醉剂，然后使用超声引导下的细针穿刺技术，将针头插入母体子宫，抽取少量羊水样本。

3. 样本处理采集到的羊水样本会被送往实验室，进行细胞培养。

在培养的过程中，羊水中的细胞会增殖，形成足够数量的细胞用于后续的核型分析。

4. 细胞分离经过培养后，细胞会被分离出来。

实验室技术人员会使用适当的方法将细胞从培养物中分离出来，并制备成染色体悬液。

5. 细胞染色为了能够清晰地观察染色体的结构和数量，细胞悬液会接受染色处理。

通常使用琼脂糖凝胶滴定法或荧光原位杂交法对细胞进行染色，以突出染色体的特征。

6. 核型分析经过染色的细胞会被放置在显微镜下进行观察和分析。

实验室技术人员会根据染色体的数量、结构和大小，确定胎儿是否存在染色体异常。

常见的染色体异常包括三体综合征、唐氏综合征等。

7. 报告撰写根据核型分析的结果，医生会撰写羊水核型分析报告。

报告中将详细描述细胞染色结果、染色体的异常情况以及可能的诊断。

8. 结论羊水核型分析是一种可靠的产前筛查技术，能够帮助医生评估胎儿是否存在染色体异常。

通过对羊水样本的采集、处理和核型分析，可以提供有关胎儿健康状况的重要信息，帮助家长和医生做出更准确的决策。

9. 注意事项尽管羊水核型分析是一项安全的检查技术，但仍然存在潜在的风险。

在进行该检查前，医生会详细解释相关的风险和利益，并与患者共同做出决策。

希望本文能够帮助您了解羊水核型分析的步骤和相关信息。

如果您有任何疑问或需要进一步的咨询，请咨询您的医生。

孕中期羊水细胞培养与制备质量分析

孕中期羊水细胞培养与制备质量分析张传英;卢宗杰;赵咏梅;陈俭辉;孟君【摘要】目的:探讨孕中期羊水细胞培养的质量情况.方法:采用普通培养瓶法对1105例羊水细胞进行培养,并对培养情况进行质量分析.结果:1105例羊水标本中,一次性培养成功1093例,成功率为98.9％,对培养成功的羊水进行染色体制备及染色体核型分析,成功率为99.3％.结论:提高羊水细胞培养成功率,做出优质的染色体片供分析,为临床提供准确的报告是产前诊断工作质量的保证.对指导优生优育,提高出生人口素质具有重要意义.【期刊名称】《医学理论与实践》【年(卷),期】2018(031)014【总页数】3页(P2167-2169)【关键词】孕中期;羊水细胞培养;产前诊断;质量分析【作者】张传英;卢宗杰;赵咏梅;陈俭辉;孟君【作者单位】四川省遂宁市中心医院检验科 629000;四川省遂宁市中心医院检验科 629000;四川省遂宁市中心医院检验科 629000;四川省遂宁市中心医院检验科629000;四川省遂宁市中心医院检验科 629000【正文语种】中文【中图分类】R446;R714染色体病是导致新生儿出生缺陷的一类遗传性疾病，新生婴儿中染色体异常者约占0.5%～0.7%[1]，目前尚无特异性治疗方法，实时进行产前诊断和出生干预是减少出生缺陷的重要手段[2-3]。

孕中期羊水细胞培养及胎儿染色体核型分析仍是目前主要的产前诊断方法[4-5]，尤其对于基层产前诊断机构该技术是以诊断唐氏综合征(21-三体)为主的胎儿染色体病的方法。

该方法由于受到穿刺技术、孕周、孕妇个体差异、易污染、培养基和试剂的质量、制备技术、实验条件、环境、操作人员等因素的影响，为做出优质的染色体片供分析，本实验室技术人员经过三年的努力使本实验室的羊水细胞培养、制备技术、染色体分析能力得到了持续提高，现将本室的质量情况分析如下。

1 对象与方法1.1 对象选取2013年1月—2015年12月在我院产前诊断中心咨询，因有各种高危因素(产前筛查高风险、高龄孕妇、不良妊娠史、不良物接触史、超声异常等)接受羊膜腔穿刺术，进行羊水细胞培养与染色体核型分析的孕妇共计1 105例，羊水穿刺时间在孕周17～25周。

羊水细胞染色体核型分析在产前诊断的应用

羊水细胞染色体核型分析在产前诊断的应用作者：张昊晴等来源：《中外医学研究》2013年第11期【摘要】目的：利用羊水细胞培养行胎儿染色体核型分析，对妊娠中期高危孕妇进行产前诊断。

方法：1822例高危孕妇于妊娠18～24周在B超引导下行羊膜腔穿刺术，收集20 ml 羊水行体外培养，制备胎儿染色体行核型分析。

结果：羊水培养成功1806例，成功率99.1%，检出异常核型47例，阳性检出率2.6%。

结论：孕中期羊膜腔穿刺术是目前安全、有效、可靠的诊断胎儿染色体异常的方法。

【关键词】产前诊断；羊水细胞；染色体核型中图分类号 R714.53 文献标识码 B 文章编号 1674-6805（2013）11-0038-01羊膜腔穿刺术是目前临床应用最广泛的一种产前诊断技术，在孕中期对具有产前诊断指征的孕妇进行羊水细胞染色体核型分析能及早发现胎儿异常，作出优生优育指导。

笔者所在产前诊断中心总结了近4年来1806例羊水细胞染色体核型分析结果，现报告如下。

1 资料与方法1.1 一般资料2007年1月-2011年8月在笔者所在医院产前诊断中心行产前筛查高风险孕妇，高龄孕妇（年龄≥35岁），及经优生遗传咨询具有产前诊断指征的高危孕妇共1822例，于妊娠18～24周，实施羊膜腔穿刺术。

1.2 方法嘱孕妇术前排空膀胱，仰卧位，无菌条件下使用B超仪实时引导下行羊膜腔穿刺术，取羊水20 ml，于1500 r/min下离心10 min，弃上清，用羊水培养液将细胞混匀后分别接种于2个培养基，置37 ℃ 5%CO2培养箱中，静置培养7 d后换液，每天观察细胞生长情况，当羊水细胞贴壁生长旺盛，镜下可见多个克隆时，加秋水仙素收获细胞，常规制片，G显带后行染色体核型分析。

核型计数30个分裂相，分析3个核型，异常核型增加计数。

核型描述遵照人类细胞遗传学国际命名体制（ISCN2005）。

2 结果1822例高危孕妇经羊膜腔穿刺术均成功收集羊水，穿刺成功率100.0%，术后随访无一例发生流产及胎死宫内等手术并发症。

羊水细胞培养用于产前细胞遗传学诊断177例分析

177例羊水细胞培养成功行核型分析者中发现异常10例，异常检出率为5.6%；6例三体为主要的染色体异常，均为21三体；性染色体数目异常1例；平衡易位3例。以产前生化筛查胎儿唐氏综合征高风险为指征的，有3例检出异常核型；以高龄为指征的，有2例检出异常核型；以B超提示畸形儿为指征的，有1例检出异常核型；以平衡易位携带者为指征的，有3例检出异常核型。详细情况见表1。
1.2 穿刺时间和方法
177例孕妇羊膜腔穿刺时间在孕龄17 26周。羊膜腔穿刺术前均行B超检查了解胎儿大小、发育情况、胎盘位置等。摇腹3 min后B超定位下穿刺，抽出羊水20 ml送检。
1.3 实验室方法
抽出羊水离心后，细胞沉渣接种入培养基。培养基为杭州贝因美公司提供的羊水细胞全培养基。置5％CO2、37 ℃恒温箱中进行开放式培养，收获制片按本遗传室方法操作。G显带后镜下观察每张片子，记数分散良好的中期分裂像20 30个，分析3 5个。
2 结果
2.1 羊水细胞培养
177例羊水细胞培养成功175例，成功率98.9%，培养失败2例，表现为细胞生长不良。另外，有7例血性羊水，在换液时用生理盐水充分洗涤培养瓶，仍然获得了足够的可供分析的细胞分裂像，取得满意的诊断结果。
2.2 羊水细胞核型分析情况
表1 胎儿羊水细胞染色体核型异常情况
病例孕妇年
龄/岁孕周指征羊水细胞核型胎儿随诊情况13318产前筛查胎儿唐氏综合征高风险47，XY，+21引产，脐血检查符合羊水细胞核型22918平衡易位携带者46，XY，t(4；10）孕足月分娩，外周血检查符合羊水细胞核型32917唐氏儿分娩史46，XY，der(14;21)(q10;q10)，+21引产，脐血检查符合羊水细胞核型42919罗氏易位携带者45，XY，der(14;21)(q10;q10) 引产54218高龄孕妇47，XX，+21引产，脐血检查符合羊水细胞核型64520高龄孕妇47，XX，+21引产，脐血检查符合羊水细胞核型72921产前筛查胎儿唐氏综合征高风险47，XX，+21引产83018罗氏易位携带者45，XX，der(14;21)(q10;q10) 孕足月分娩，胎儿外观无异常92623B超提示畸形儿45，XO孕足月分娩，外周血检查符合羊水细胞核型10252刺是一种通过B超引导，经腹部穿刺羊膜腔收集羊水的方法。1966年，Mark Steele和Roy Breg首次从羊水中分离出羊水细胞且培养成功，并对经培养的细胞进行核型分析。此后，这一技术不断改进，其安全性、准确性得到了进一步提高，且适用范围日益扩大。我们在实际工作中深刻地体会到，只要严格遵循操作规范，积极探索操作方法，运用羊膜腔穿刺开展产前诊断具有非常高的临床价值。

妊娠中晚期羊水细胞核型分析

妊娠中晚期羊水细胞核型分析侯红瑛1,李小毛1,滕奔琦1,尹玉竹1,许成芳1,易翠兴2(1.中山大学附属第三医院妇产科,广州5106302.广州市妇婴医院优生优育研究所,510000)摘要:目的通过分析妊娠中、晚期胎儿羊水细胞染色体核型或白化病基因检查,了解该时期羊膜腔穿刺术的指征和安全性,总结中晚期羊膜腔穿刺价值及可行性。

方法115例有产前诊断指征的孕妇,在妊娠16~34w行羊膜腔穿刺取羊水细胞培养,检查胎儿染色体核型或白化病基因型。

结果羊膜腔穿刺115例,被检的87例妊娠中期羊水细胞培养成功率9513%;28例晚期妊娠羊水细胞成功率9614%;总成功率9516%。

无穿刺并发症。

产前诊断符合率100%。

孕妇中父、母染色体异常组出现胎儿染色体异常率最高(3715%)。

结论在妊娠中晚期行羊膜腔穿刺取羊水细胞行遗传物质分析对胎儿是否患有染色体病或白化病作出产前诊断是安全可行的。

关键词:羊水细胞;产前诊断;染色体分析;基因检查中图分类号:R714155文献标识码:B文章编号:1006-9534(2006)08-0042-03C li n ical study w ith115cases of a mn iotic ce ll karyotyping.HO U H ong-y ing,LI X i ao-mao,TE N G Ben-q i,YIN Yu-zhu, X U Cheng-fang,YI Cu i-x i ng.(D e p ar t m ent of O bstetr ic&Gyneco logy,T he T hird A ff iliated H osp ital,Sun Yat-sen Uni versity, Guangzhou,510630,Ch i na.)Abstrac t:O bjecti ve:T o i nvestigate the v al ue and the secur it y o f a m niocentesis,and resea rch t he sk ill o f amn i ocentesis.M e t h-ods:115spec i m ens(16~34w eeks)o f a m niotic ce ll go tten by a m ni o centesis we re cultured and ka ryotyped or al b i n is m genetic teste. R esu lts:T he fi na l successful rate o f spec i m ens(16~27weeks)o f amn i o ti c ce ll go tten by a m niocentesis w as9513%.The fi na l suc-cessfu l ra te of28~34w eeks was9614%.T he total successf u l rate w as9516%.There w as no comp licati on i n our study.T he confor-m i ng rate of amn i o tic cell i n trauter i ne d i agnos i s w as100%.T he h i ghest rate of feta l abnor m a l ka ryotype appeared i n the parents whose karyo type w ere abnor m a.l Conclus i on:Amn i ocentesis and karyo typ i ng are qua lified f o r prenata l d i agnos i s o f fe tal chro m osom al disease o r al b i n is m for its re liab ility and safe ty.K ey word s:Am niocentesis;P rena tal diagnosis;Chro m osom al karyotype;G en i c testing产前诊断是预防染色体病患儿出生的主要措施。

1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。

中华医学遗传学杂志２００９年１２月第２６卷第６期ＣｈｉｎＪＭｅｄＧｅｎｅｔ，Ｄｅｃｅｍｂｅｒ２００９，Ｖ０１．２６，Ｎｏ．６１１７５例羊水细胞培养染色体核型分析朱瑞芳杨滢张颖吴星许争峰茹彤胡娅莉羊膜腔穿刺术为当今最常用且安全可靠的产前诊断取材方法，已被广泛应用于羊水细胞培养诊断胎儿染色体病及胎儿畸形。

我院自８０年代起就开展了羊水细胞培养及染色体核型分析，对胎儿进行产前诊断，现将１１７５例羊水染色体核型结果分析和应用羊水细胞培养、进行产前诊断的相关问题报告如下。

１对象与方法１．１对象２００３年１月至２００６年７月，在我院产前诊断中心咨询门诊检查，因有各种高危因素接受羊膜腔穿刺术，进行羊水细胞培养与染色体核型分析的孕妇计１１７５例，年龄２２～４０岁，平均３１岁，孕周１７～３０周。

其中≤２４周者１０２２例，＞２４周者１５３例。

１．２方法在Ｂ超定位后，无菌条件下经腹壁行羊膜腔穿刺术，取羊水细胞２０ｍＬ，离心后去一ｋ清，细胞悬液接种于两个２５ｃｍ２Ｎｕｎｃ培养瓶中，置３７℃二氧化碳培养箱中原代培养，５～６ｄ换液，每天观察细胞生长情况，当羊水细胞贴壁生长旺盛，镜下见多个克隆和适量圆形、双圆形透明细胞时，加入秋水仙素，终浓度２ｐｇ／ｍＬ。

３０ｍｉｎ后，根据原瓶细胞生长情况，分别采用原位、胰酶消化或应用细胞刷等不同方法进行细胞收集。

再经过低渗、固定、制片、烤片后Ｇ显带，镜下核型分析。

核型计数不少于１５个分裂相，异常核型计数３０个分裂相以上，分析３～５个核型。

２结果２．１孕周对羊水细胞培养成功率的影响１１７５例孕中晚期羊水细胞原代培养，１１６４例一次培养成功。

５例经两次穿刺培养收获成功，３例孕周较大选择脐血管穿刺，３例放弃二次穿刺，总成功率９９．４９％（１１６９／１１７５）。

其中孕１７～２４周者１０２２例，１０１９例一次培养收获成功，孕２４周以上者１５３例，１４５例一次培养收获成功。

不同孕周羊水细胞培养成功率不同，孕２４周以上者羊水细胞培养成功率较低（Ｐ＜ｏ．０１）。

２．２孕周与羊水细胞生长时间的关系我们以７ｄ为标准，研究孕周与羊水细胞生长时间的关系。

孕１７～２４周者细胞生长时间＞７ｄ２４２例，≤７ｄ７７９例；孕周＞２４周者细胞生长时间＞７ｄ１２０例，≤７ｄ２８例。

细胞生长时间差异有统计学意义（Ｐｄ０．０１）。

孕２４周以上者，羊水细胞生长时间较长。

２．３染色体制备方法对核分裂相的影响在细胞生长良好的前提下，根据原瓶细胞生长密集程度，我们分别应用原位收获３３５例（核分裂相≥３０个２８９例，＜３０个４６例），细胞刷或胰Ｄ０ｌ：１０．３７６０／ｃｍａ．ｊ．ｉｓｓｎ．１００３—９４０６．２００９．０６．０ｉｆ３作者单位：２１０００８南京大学附属鼓楼医院产前诊断中心（朱瑞芳、杨滢、张颖、吴星、茹彤、胡娅莉）；南京市妇幼保健院（许争峰）通信作者：胡娅莉，Ｅｍａｉｌ：Ｙａｌｉ—ｈｕ＠ｈｏｔｍａｉｌ．ｃｏｒｎ・临床细胞遗传学・酶消化收获８２９例（核分裂相≥３０个７１９例，＜３０个１１０例），虽然全部获得成功，但收获的核分裂相数差异具有统计学意义（Ｐ＜０．０１），两种方法获得的有效核分裂相数明显不同。

２．４各种高危因素的异常核型检出率各种高危因素与异常核型检出率见表１。

双亲之一为结构性染色体畸变携带者，胎儿异常染色体发生率最高，为３３．３３％，本次妊娠有异常超声波检查结果者，胎儿染色体异常占第二位，生育过三体患儿者、高龄孕妇、母亲血清筛查阳性者及有畸胎史者，异常发生率在１．９６％～２．２０％之间。

表１羊水产前诊断指征与异常核型检出率２．５异常核型检出率１１７２例孕妇的羊水细胞检查，发现异常核型３２例，异常检出率为２．７３％（３２／１１７２）。

其中三体占５６．２５％，性染色体异常占第二位，见表２。

表２３２例羊水染色体异常核型３讨论３．１羊水染色体检查结果分析及在产前诊断中的应用本中心近年成功培养的１１７２例羊水染色体（含３例脐血）中，高龄万方数据中华医学遗传学杂志２００９年１２月第２６卷第６期ＣｈｉｎＪＭｅｄＧｅｎｅｔ，Ｄｅｃｅｍｂｅｒ２００９，Ｖ０１．２６，Ｎｏ．６孕妇２２７人，占羊水穿刺总数的１９．３７％，发现５例染色体异常，包括２１三体２例，１８三体２例，柯氏综合征１例，异常检出率为２．２０％，三体检出率为１．７６％，对于胎儿染色体畸变与孕妇年龄密切相关，孕妇年龄越高，卵子老化，更易致减数分裂时染色体不分离而发生三体综合征，故其生育染色体病患儿的风险越大，三体综合征尤为突出。

然而低于３５岁的高危孕妇，异常检出率为２．８５％，高于高龄孕妇的异常检出率，三体检出率为１．０６％。

提示除高龄因素外，对有其他产前诊断指征的低龄孕妇，也应进行羊水染色体检查。

异常超声波检查在产前诊断中具有重要意义，胎儿外观的异常，往往提示胎儿染色体有异常的可能。

９７例Ｂ超提示异常的孕妇，发现染色体异常６例，检出率为６．１８％，６例Ｂ超均提示：胎儿多发性畸型。

羊水染色体分析５例为１８三体。

１例核型为４６，ＸＸ，５ｐ＋，其父外周血染色体核型是４６，ＸＹ，ｔ（３；５）（ｐ２４；ｑ１５）的平衡易位携带者，其核型异常导致了胎儿遗传物质不平衡而出现表型异常，以上６例均已终止妊娠。

在我中心就诊的１８例染色体结构异常携带者中，胎儿染色体异常发生率为３３．３３％，分别为易位和倒位。

表明亲代之一染色体结构异常，其下一代染色体异常风险非常大。

Ｄｏｗｎ’Ｓ综合征筛查发现的两例结构异常胎儿，经检查其双亲之一也为携带者。

染色体平衡易位或倒位，可由双亲遗传，或生殖细胞新生突变所致，如由双亲遗传，由于遗传物质没有丢失，表型正常，故对其均选择了保留胎儿继续妊娠。

采用检测孕妇血中游离人绒毛膜促性腺激素和甲胎蛋白，再联合Ｂ超检测胎儿颈部半透明厚度的方法，筛查出的高危者６４０人，羊水染色体异常１３例，值得注意的是，除８例为三体外，其余５例均为其他异常，核型分别为超雌、超雄综合征及倒位、易位、三倍体等。

可见筛查不仅仅局限于三体征，对其他染色体异常也能给予提示，应引起重视。

３．２关于羊水细胞培养及收获方法与染色体制备的相关研究高质量的羊水细胞培养及收获技术是进行羊水染色体分析诊断的关键。

由于在细胞培养及收获方法上不断改进，羊水细胞培养成功率不断提高，培养周期缩短，并能够提供较多可供分析核型，避免嵌合体的遗漏，为染色体的分析诊断奠定了坚实的基础，也为患者节省了等待时间。

我们的研究表明，在排除细菌、霉菌等微生物污染和血性羊水影响的前提下，孕周与羊水细胞培养成功率密切相关。

≤２４周羊水细胞培养一次成功率明显高于＞２４周者，提示抽取羊水的最佳时期以不超过２４周为宜。

对于失败的１１例，除３例孕周较大选择脐血管穿刺，３例放弃外，其余５例（其中３例＞２４周）重新抽取羊水培养后，经增加换液次数、延长培养时间（１例最长达１７ｄ），也获得适量集落，并收获成功。

孕周过大不易培养成功的原因，可能是由于羊水细胞的活性降低，细胞生长的潜伏期增加，细胞不易贴壁和贴壁间距太大，使细胞不易伸展移动形成集落。

如果过早干涉，可能导致培养失败。

因而对于孕周过大，细胞生长缓慢超过平均生长周期时，只要有少量细胞贴壁就不能放弃，应继续观察和换液，往往有令人惊喜的收获。

这也印证了孕周大于２４周后，细胞生长时间相应延长，孕周与细胞生长时间密切相关。

因而，对于＞２４周有高危因素的孕妇，临床上应当灵活处理，分别告知羊水细胞培养和脐血穿刺的风险利弊，如果孕妇愿意承担脐血穿刺的风险和相对较高的费用，则应选择脐血穿刺，以减少等待诊断结果的时间。

另外需要关注的是细胞收获时机与收获方式的选择。

恰当的收获时机和合适的收获方法选择及制片技术的把握，是进行羊水染色体分析的另一项关键技术。

我们的研究结果表明，不同的收获方法在细胞生长良好的前提下，对核分裂相的数目有显著影响。

原位收获，由于对细胞几乎没有人为破坏，可以获得大量的核分裂相，但由于分散不良，故可供分析的有效核分裂相数，比实际获得的核分裂相数大为降低。

应用细胞刷或胰酶消化收获，细胞破坏程度虽因操作者的技术手法差异而有不同，核分裂相总量仍明显少于原位收获。

但由于此方法分散良好，故有效核分裂相比例高。

两种方法各有利弊，因而实际工作中，我们针对细胞贴壁生长的情况，选择不同的收获方法，均可获得满意效果。

此外，与细胞培养有关的培养基、培养瓶的选择，细胞刷及相关耗材的质量，都对细胞培养至关重要，不可忽视。

而严格无菌操作，无论在手术取材还是羊水细胞接种、换液等各个环节上均十分必要。

同时，应注意防止霉菌污染，除操作间进行定期消毒、干燥、换气外，培养箱也要定期擦拭、消毒。

参考文献１ＸｕＺＦ，ＨｕＹＬ，ＺｈｕＲＦ．Ａｓｔｕｄｙｏｎｔｈｅｉｍｐｒｏｖｅｄａｍｎｉｏｔｉｃｆｌｕｉｄｃｅｌｌｓｃｕｌｔｕｒｅｉｎｓｉｔｕｆｏｒｐｒｅｎａｔａｌｄｉａｇｎｏｓｉｓ．ＰｏｒｇＯｂｓｔｅｔＧｙｎｅｃｏｌ，２００３，１２：２７３—２７５．［许争峰，胡娅莉，朱瑞芳．改良羊水原位培养法进行产前诊断的研究．现代妇产科进展，２００３，１２：２７３—２７５．］２ＸｕＺＦ，ＨＵＹＬ，ＺｈｕＲＦ．Ｅｆｆｉｃｉｅｎｔａｍｎｉｏｔｉｃｆｌｕｉｄｃｅｌｌｃｕｌｔｕｒｅｆｏｒｐｒｅｎａｔａｌｄｉａｇｎｏｓｉｓ．ＣｈｉｎＪＯｂｓｔｅｔＧｙｎｅｃｏｌ，２００６，４１：２７５—２７６．［许争峰，胡娅莉，朱瑞芳．高效羊水细胞培养技术在产前诊断中的应用．中华妇产科杂志，２００６，４１：２７５—２７６．］（收稿日期：２００８１２１８）（本文编辑刘华）万方数据。