β-半乳糖苷酶(β-Galactosidase, β-GAL)试剂盒使用说明

华越洋⽣生物提供 QQ: 1733351176LacZ染⾊色试剂盒使⽤用说明书β-­‐Galactosidase S taining K it M annual编号 名称 产品规格北京华越洋生物RS3601-­‐23 LacZ染色试剂盒 250次分析基本信息：大肠杆菌中的LacZ基因是应用极广的报告基因之一，被用来检测表达载体介导的基因转移效率，也用于基因启动子研究。

LacZ编码β-­‐半乳糖苷酶，该物质非常稳定，能抵抗蛋白酶的水解，并且可以利用许多底物，包括X-­‐gal。

X-­‐Gal是β-­‐半乳糖苷酶（β-­‐galactosidase）的显色底物，在β-­‐半乳糖苷酶的催化下会产生蓝色产物，所以可以轻易的检测出LacZ基因的表达。

The LacZ gene from E. coli is one of the most commonly used reporter genes f or t esting t he e fficiency o f e xpression v ector m ediated g ene t ransfer and for studying the regulation of promoters of genes. The LacZ gene encodes the enzyme β-­‐galactosidase, which is very stable, resistant to proteolytic d egradation, c an u tilize a v ariety o f s ubstrates a nd c an b e e asily assayed in situ. The β-­‐Galactosidase staining kit utilizes X-­‐gal as the substrate.产品说明：华越洋的β-­‐半乳糖苷酶染色试剂盒利用X-­‐gal作为底物，配合试剂盒内提供的其他试剂，可以完成250次染色反应。

小鼠β半乳糖苷酶(βGAL)ELISA试剂盒使用说明书本本试剂仅供研究使用标本：血清或血浆本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定人血清，血浆及相关液体样本中β半乳糖苷酶(βGAL)的含量。

试验原理：βGAL试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知βGAL浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。

先将βGAL和生物素标记的抗体同时温育。

小鼠β半乳糖苷酶ELISA试剂盒洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。

再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。

产生颜色。

颜色的深浅和样品中βGAL的浓度呈比例关系。

试剂盒组成：自备材料蒸馏水。

加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。

振荡器及磁力搅拌器等。

安全性避免直接接触终止液和底物A、B。

一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。

实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。

不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。

操作注意事项试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。

稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。

实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。

不用的其它试剂应包装好或盖好。

不同批号的试剂不要混用。

保质前使用。

使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。

使用干净的塑料容器配置洗涤液。

使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。

洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。

底物A应挥发，避免长时间打开盖子。

底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。

避免用手接触，有毒。

实验完成后应立即读取OD值。

加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。

按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。

样品收集、处理及保存方法血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。

使用不含热原和内毒素的试管。

收集血液后，1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。

衰老相关β-半乳糖苷酶染色细胞衰老β-半乳糖苷酶染色试剂盒产品编号产品名称规格BL133A细胞衰老β-半乳糖苷酶染色试剂盒100 T产品简介：细胞衰老时，SA-β-Gal (senescence-associated β-galactosidase)活性水平会上调，此时本试剂盒可以对衰老的细胞或组织进行染色检测。

正常细胞经过有限次数的分裂后停止分裂，出现不可逆的生长停滞，此时细胞仍然是存活的，但是细胞形态和生理代谢活性发生明显变化，通常表现为细胞体积变大，与衰老相关的β-半乳糖苷酶为活化状态。

β-半乳糖苷酶是细胞溶酶体内的水解酶，通常在pH 4.0时表现活性，但在衰老细胞内该酶在pH 6.0条件下表现活性。

本试剂盒即是基于此现象及原理，以X-Gal为底物，衰老细胞特异性β-半乳糖苷酶催化该底物生成蓝色产物，表现为细胞胞质有蓝色沉积物，在光学显微镜下即可很容易观察到变成蓝色的表达β-半乳糖苷酶的细胞或组织。

本试剂盒可以用于培养细胞的衰老检测，也可以用于组织切片的衰老检测。

本试剂盒仅染色衰老细胞，对衰老前的细胞(presenescent cells)、静止期细胞(quiescent cells)、永生细胞(immortal cells)或肿瘤细胞等不会染色。

产品组成:组分名称规格BL133A-1β-半乳糖苷酶染色固定液100 mLBL133A-2β-半乳糖苷酶染色液A100 mLBL133A-3β-半乳糖苷酶染色液B 1.2 mLBL133A-4DMF（二甲基甲酰胺） 5 mlBL133A-5X-Gal（粉末）100 mg使用方法：见说明书注意事项：1、X-Gal粉末配制成溶液后，分装成小份-20℃保存，3个月内有效，X-Gal溶液需室温完全解冻混匀后再使用。

2、β-半乳糖苷酶染色液A和B需提前恢复至室温后再使用，配制好的染色工作液需充分混匀无沉淀方可使用。

3、衰老细胞β-半乳糖苷酶染色反应依赖于特定的pH条件，不能在CO2培养箱中进行孵育显色，否则会影响染色工作液的pH，导致染色失败。

动物细胞β-半乳糖苷酶活性化学发光法定量检测试剂盒产品说明书（中文版）主要用途动物细胞β-半乳糖苷酶活性化学发光法定量检测试剂是一种旨在使用化学方法，快速有效地裂解动物细胞，通过高速离心，获得澄清细胞裂解悬液，在β-半乳糖苷酶反应体系里，以人工合成的二恶二酮类化合物作为发光底物，水解所产生的发光产物，通过发光探测仪（Luminometer）测定其相对冷光单位（RLU）的变化，以此进行测算酶活性的权威而经典的技术方法。

该技术经过精心研制、成功实验证明的。

广泛应用于基因组学、蛋白质组学和其它分子生物学研究。

其适用于转基因后的活体细胞外源性以及衰老细胞内源性半乳糖苷酶活性分析。

产品即到即用，性能稳定，参数优化，操作简便、高度敏感。

技术背景大肠杆菌的标志基因Lac Z编码β-半乳糖苷酶（β-galactosidase ；β-gal），在其催化作用下，半乳糖可从乳糖的水解作用中得到。

β-半乳糖苷酶非常稳定，对蛋白水解降解作用抗性强，且容易测试。

因此β-半乳糖苷酶成为目前最常用的报告基因，以评价载体转染的效果。

在衰老细胞内，显示β-半乳糖苷酶活性。

甲氧基二恶二酮氯代金刚烷苯基吡喃半乳糖苷（3- (4-methoxyspiro [1, 2-dioxetane-3, 2'- (5'-chloro) tricyclo [3.3.1.13,7]-decan]-4-yl-phenyl -ß-D-galacto pyranoside），是一种二恶二酮（dioxetane）类发光底物，以替代乳糖，在β-半乳糖苷酶（pH7.8）的催化下，去糖基化后，产生二恶二酮，进而在多聚苯甲基乙烷乙烯基苯甲氯化铵和荧光素钠（poly (benzyldimethylvinylbenzyl) ammonium chloride and sodium fluorescein）的启动反应作用下，同时pH调整到12，由此二恶二酮分解，发出冷光，在冷光仪（475nm波长）下，检测发光信号，来测定β-半乳糖苷酶的活性。

β-半乳糖苷酶（β-gal）ELISA试剂盒使用方法本试剂盒仅供研究使用。

检测范围：96T0.8 pg/ml -35pg/ml使用目的：本试剂盒用于测定微生物样本中β-半乳糖苷酶（β-gal）含量。

实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中β-半乳糖苷酶（β-gal）水平。

用纯化的β-半乳糖苷酶（β-gal）体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入β-半乳糖苷酶（β-gal），再与HRP标记的β-半乳糖苷酶（β-gal）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。

TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的β-半乳糖苷酶（β-gal）呈正相关。

用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中β-半乳糖苷酶（β-gal）浓度。

1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。

若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

操作步骤1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。

在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。

加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。

7.温育：操作同3。

8.洗涤：操作同5。

9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10分钟.10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

β-半乳糖苷酶活性测定方法β-半乳糖苷酶活性测定（β-galactosidase assays）1、将过夜培养的菌液按1%接种量到新鲜培养基中培养，待OD600至0.6时取出，放置于冰上；（或可检测不同OD600时，菌的酶活性）2、取50-100μl 菌液至1.5 ml 的离心管中，加370-420μl Z buffer；3、加20 μl 氯仿和10 μl 0.1% SDS，振荡混匀，裂解细胞，放置于冰上30分钟；4、向离心管中加入100 μl 浓度4 mg/ml 的ONPG，混匀后立即置于30℃反应30-60分钟；5、待颜色变黄后，加入250 μl 1 M Na2CO3中止反应，准确记录变色反应的时间；6、取200μl上清，测定420 nm 和550 nm 处的吸光度；7、计算β-半乳糖苷酶酶活力：Miller Units = 1,000×[(OD420－ 1.75×OD550)] / (t×V×OD600)，其中，OD420和OD550----显色后的反应液读数；OD600----用于显色分析的培养液的细菌密度；t ----显色反应时间(单位min)；V ----用于显色分析的培养液体积(单位ml)。

Z buffer (总体积100 ml)：Na2HPO4·12H2O 100mM 3.5814 gNaH2PO4·H2O 40mM 0.624gKCl 10mM 0.07455gMgSO4·7H2O1mM 0.0246gβ-mercaptoethanol 5.4μl / ml 540μl加水到总体积90 ml，待试剂溶解后调pH 至7.0，最后定容到100 ml，4℃储存。

Substrate solution(总体积10ml)----现用现配Na2HPO4·12H2O 60mM 0.215 g NaH2PO4·H2O 40mM 0.0624g ONPG 4mg/ml 0.04g终止液（100ml）：Na2CO3 1M 10.6g。

β-半乳糖苷酶染色（组织）检测原理：一般认为绝大多数正常细胞仅有有限的分裂能力，在不能分裂后就进入衰老(senescence)状态。

此时细胞仍然是存活的，但细胞的基因和蛋白的表达谱发生了很大改变。

衰老的细胞不能在一些常规的刺激下再诱导细胞分裂，并且衰老细胞的细胞周期分布也比较特殊，不同于一些损伤诱导的细胞休眠，也不同于细胞生长接触抑制的情况。

衰老细胞通常体积变大，并表达在pH6.0时有高酶活性的β-半乳糖苷酶(β-galactosidase)。

细胞衰老也被认为是生物体抑制肿瘤的一种方式，同时也是生物体老化(aging)的一种潜在原因。

由此以X-Gal为底物，在衰老特异性的β-半乳糖苷酶催化下会生成深蓝色产物。

从而在光学显微镜下很容易观察到变成蓝色的表达β-半乳糖苷酶的细胞。

操作步骤：（1）将石蜡组织切片置于65°C恒温箱，烤片1h左右。

（2）脱蜡：二甲苯I 10min→二甲苯II 10min →梯度酒精（由高到低）各5min。

（3）1×PBS 洗涤3次，每次 5min。

注：对于冷冻切片直接按照以下步骤进行。

（4）加入适当体积的β-半乳糖苷酶染色固定液，以充分盖住组织为宜，室温固定不少于 15min。

（5）1×PBS 洗涤3次，每次 5min。

（6）加入适当量的染色工作液。

（7）37℃孵育过夜，最好把整个切片浸泡在染色工作液中。

注：37℃孵育不能在二氧化碳培养箱中进行。

（8）1×PBS 洗涤3次，每次 5min。

（9）脱水：梯度酒精（由低到高）各5min → 二甲苯I 10min→ 二甲苯 II 10min。

（10）加上封片液封片后4℃可以保存较长时间。

（11）普通光学显微镜下观察。

光学显微镜下很容易观察到变成蓝色的表达β-半乳糖苷酶的细胞。

注：所用试剂按照β-半乳糖苷酶染色试剂盒说明配制。

β-半乳糖苷酶染色试剂盒市面上有很多种，但检测方法几近相同，具体还是要参照相应的试剂说明书来操作。

β-半乳糖苷酶染色试剂盒使用说明产品简介：β-半乳糖苷酶染色试剂盒(β-Galactosidase Staining Kit)是一种基于衰老时SA-β-Gal(senescence-associatedβ-galactosidase)活性水平上调而对衰老细胞或组织进行染色检测的试剂盒。

在普通的光学显微镜下就可以观测到细胞或组织的衰老情况。

绝大多数正常细胞被认为仅有有限的分裂能力，在不能分裂后就进入衰老状态。

此时细胞仍然是存活的，但细胞的基因和蛋白的表达谱发生了很大改变。

衰老细胞不能在一些常规的刺激下再诱导细胞分裂，并且衰老细胞的细胞周期分布也比较特殊，不同于一些损伤诱导的细胞休眠，也不同于细胞生长接触抑制的情况。

衰老细胞通常体积变会大，表达pH 6.0时有高酶活性的β-半乳糖苷酶。

细胞衰老也被认为是生物体抑制肿瘤的一种方式，同时也是生物体老化(aging)的一种潜在原因。

本试剂盒可以用于培养细胞的衰老检测，也可以用于组织切片的衰老检测。

β-半乳糖苷酶染色试剂盒以X-Gal为底物，在衰老特异性的β-半乳糖苷酶催化下会生成深蓝色产物，光学显微镜下很容易观察到变成蓝色的表达β-半乳糖苷酶的细胞或组织。

本试剂盒仅染色衰老细胞，对衰老前的细胞(presenescent cells)、静止期细胞(quiescent cells)、永生细胞(immortal cells)或肿瘤细胞等不会染色。

对于组织切片或组织块，可以检测的样品数量视样品的大小而定，对于普通的切片也至少足够检测100个样品，使用6孔板测定，足够测定100个样品。

产品组成：试剂(C):β-半乳糖苷酶染色液A1ml4℃避光试剂(D):β-半乳糖苷酶染色液B1ml4℃避光试剂(E):β-半乳糖苷酶染色液C100ml4℃避光使用说明书1份自备材料：1、PBS或HBSS2、细胞培养器皿3、显微镜操作步骤(仅供参考)：(一)贴壁细胞染色：1、对于6孔板中培养的细胞，吸除细胞培养液，用PBS或HBSS洗涤1次，加入1ml β-半乳糖苷酶染色固定液，室温固定15min。

β―半乳糖苷酶标记试剂
β—半乳糖苷酶标记试剂
β—半乳糖苷酶已被广泛用于酶标记免疫分析，但主要用于免疫细胞化学。

一种较好的底物是5—溴—4—氯—3—吲哚—β—D—吡喃型半乳糖苷(BCIG)，它可以产生一种深蓝色的产物。

此产物在乙醇和水中稳定，不溶解。

1．需要的溶液、试剂和特殊设备
BCIG；
N，N—二甲基甲酰胺；
1mmol／LMgCl2；
3mmol／L亚铁氰化钾用溶解，DPX。

光学显微镜(通常带有照相机以便于记录结果)。

2．操作步骤
(1)用0．1mlDMF溶解4．9mgBCIG。

(2)加0．1mlBCIG溶液至10ml含有1 mmol／L MgCl2 3retool／L亚铁氰化钾的中。

(3)滤纸过滤。

(4)加此溶液至标本，在室温孵育10～40min，用水冲洗终止反应。

(5)优化：如果需要，进行复染。

(6)用DPX封片。