一株产酸性α-淀粉酶产生菌的分离鉴定及所产酶学特性的初步研究

大理学院学报JOURNAL OF DALI UNIVERSITY 第12卷第10期2013年10月Vol.12No.10Oct.2013［DOI］10.3969/j.issn.1672-2345.2013.10.011α-淀粉酶（α-amylase），编号：EC3.2.1.1，作用于淀粉时从淀粉分子的内部随机切开α-1，4糖苷键，是一种只能催化水解直链淀粉的液化酶〔1〕。

通常采用酶活力（enzyme activity）来表示酶催化一定化学反应的能力〔2〕。

一般情况下，α-淀粉酶的作用温度范围60~90℃，最适宜作用温度为60~70℃，作用pH值范围5.5~7.0，最适pH值为6.0。

α-淀粉酶主要存在于人的唾液和胰脏中，也存在于麦芽、蟑螂涎腺、芽孢杆菌、枯草杆菌、黑曲霉和米曲霉中。

α-淀粉酶酶制剂大量应用于粮食加工、食品工业、酿造、发酵、纺织品工业和医药行业等，占酶制剂市场份额的25%左右〔3-4〕。

目前，工业生产上都以微生物发酵法大规模生产α-淀粉酶，最常用的方法是从自然界中筛选出可以产这种酶的目的菌种，大致可以分为以下4个步骤：采样、增殖培养、纯种分离和性能测定〔5-6〕。

土壤是微生物生活的大本营，是发掘微生物资源的重要基地，可以从中分离、纯化得到期望中的菌株，再对菌株进行发酵培养，生产出所需的酶〔7〕。

由于我国的α-淀粉酶制剂的品种和生产菌株都很单一，α-淀粉酶酶活力相对于国外同行业的较低〔8〕。

本研究旨在从富含淀粉类物质的土壤中分离纯化出产α-淀粉酶的菌株，通过水解圈直径和菌落直径的比值，结合酶活力大小进行比较，筛选出产酶活力较强的菌株，并对其所产的酶进行初步的酶学性质研究。

研究结果可为α-淀粉酶的生产提供种质资源，同时也为生产实践提供数据支持和理论参考。

1材料土壤中产α-淀粉酶菌株的分离和筛选杨杨，刘毕琴，张发，廖光辉，杨晓燕*（大理学院农学与生物科学学院，云南大理671003）［摘要］目的：从土壤中筛选产α-淀粉酶活力较强的菌株并对其酶学性质进行初步研究。

一株产α-淀粉酶菌株的分离筛选、鉴定及酶学性质研究赵淑琴;杨孝朴【期刊名称】《中国酿造》【年(卷),期】2018(037)002【摘要】为了更加经济、更高产量的分离出高纯酶,该实验从富含淀粉的土壤中筛选出1株高产淀粉酶的菌株LZ-10,通过菌落形态观察、生理生化特性实验、16S rDNA序列和gyrB基因序列分析对其进行鉴定.采用硫酸铵盐析,DEAE-52阴离子交换纤维素纯化,用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测蛋白分子质量.结果表明,菌株LZ-10鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis).纯化后的淀粉酶比活力为59.91 U/mg,纯化倍数为4.53,回收率为60.5％,分子质量为55.4 kDa.对其酶学性质进行研究,得出菌株LZ-10所产淀粉酶最大酶活力为41.6 U/mL,最适作用温度为50℃,在50～70℃温度环境下其稳定性较高;最适pH值为7.0,在pH=5.0～7.0的环境条件下稳定性较高;Ca2+、Mg2+、Na+、K+对淀粉酶有激活作用;乙二胺四乙酸(EDTA)、Fe2+、Zn2+对淀粉酶有抑制作用.【总页数】6页(P60-65)【作者】赵淑琴;杨孝朴【作者单位】甘肃农业大学基础实验教学中心,甘肃兰州730070;甘肃农业大学动物医学院,甘肃兰州730070【正文语种】中文【中图分类】Q93-331【相关文献】1.一株蜡状芽孢杆菌α-淀粉酶产生菌株的分离鉴定及酶学性质研究 [J], 刘洋;陈爱萍;朱小顺;鲁水龙;刘玉东;王龙;刘莉2.一株产耐酸性α-淀粉酶菌株的鉴定及其酶学性质研究 [J], 杨艳红;李世川;兰世玉;朱巍3.一株新型产淀粉酶中度嗜热菌的分离鉴定及酶学性质研究 [J], 王治宾;薛蓓;杜丽琴;庞宗文;黄日波;韦宇拓4.一株产α-淀粉酶菌株的分离、鉴定及酶学特性分析 [J], 赵淑琴;杨孝朴5.南极磷虾产低温淀粉酶菌株的筛选、鉴定及酶学性质研究 [J], 王文娟; 刘志东; 宁喜斌因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

酸性α-淀粉酶的分离纯化与酶学性质研究胡元森;潘涛;李翠香【摘要】纯化了枯草芽胞杆菌xm-1菌株酸性α-淀粉酶,并对其酶学性质进行了研究.通过硫酸铵沉淀和Sephadex G-75凝胶层析将酸性α-淀粉酶粗酶液纯化了32.5倍,活力回收率为10.0%.酶性质测定结果表明,该酸性α-淀粉酶分子量约为60 kD,最适反应温度为45℃、最适作用pH5 0,该酶在pH3 4-6 0下稳定,高温耐受性差.Cu~(2+)、Zn~(2+)、EDTA对酶有不同程度的抑制作用,Ca~(2+)和Mn~(2+)对酶具有较强的激活作用.【期刊名称】《生物技术通报》【年(卷),期】2010(000)003【总页数】4页(P199-202)【关键词】酸性α-淀粉酶;蛋白纯化;酶学性质【作者】胡元森;潘涛;李翠香【作者单位】河南工业大学生物工程学院,河南工业大学粮油重点实验室与工程中心,郑州,450052;河南工业大学生物工程学院,河南工业大学粮油重点实验室与工程中心,郑州,450052;河南工业大学生物工程学院,河南工业大学粮油重点实验室与工程中心,郑州,450052【正文语种】中文目前,国内外市场中两类常用的淀粉酶为中温和高温α-淀粉酶,其适用 pH范围为6-7,在酸性条件下其酶活性明显降低[1]。

酸性α-淀粉酶在低 pH条件下以随机方式切断淀粉分子内的α-1,4-糖苷键,能满足一些酸性条件下淀粉原料的深加工工艺要求[2]。

此外,酸性α-淀粉酶因其具有在酸性条件下发挥作用的特性,可广泛应用于发酵饮料、青贮饲料、医药等多种领域。

自 1963年日本研究者发现 Aspergillus niger可以产酸性α-淀粉酶以来,许多学者开始对其进行研究。

例如,刘永乐等[3]筛选到一株产酸性淀粉酸的黑曲霉菌株AS-Y,并对其固态发酵条件进行了优化。

陈波等[4]从土壤中分离到一株产酸性α-淀粉酶的青霉菌株,最适作用 pH4.4,最适作用温度为60℃。

·研究报告·生物技术通报BIOTECHNOLOGY BULLETIN2014年第4期α-淀粉酶可从淀粉分子内部切开α-1，4糖苷键，生成糊精、低聚糖和单糖，广泛用于粮食加工、酿造、纺织品工业、制药、纺织及石油开采等行业［1］，在工业生产中占有极其重要的地位，是目前用途较广泛的一种酶制剂［2-4］。

目前，国内市场中常用的中温和高温α-淀粉酶的适用pH 范围一般为6.0-8.0，在酸性条件下其酶活性明显降低，已不能满足一些酸性条件下淀粉原料的深加工工艺的要求，因此，酸性α-淀粉酶的开发与生产势在必行。

耐酸性α-淀粉酶是一类可以在较低pH 值条件收稿日期：2013-10-23基金项目： 天津科技大学实验室开放基金项目（1204A211），国家自然科学基金资助项目（31101219），国家高技术研究发展计划（“863”计划）项目（2013AA102106-07）作者简介：王建玲，女，研究员，研究方向：酶与应用微生物；E -mail ：wjl01@通讯作者：路福平，男，教授，研究方向：酶与应用微生物；E -mail ：lfp@ 产耐酸性α-淀粉酶菌株的分离、鉴定、酶学特性研究及发酵培养基的优化王建玲 陈志鑫 刘逸寒 路福平（天津科技大学生物工程学院 工业发酵微生物教育部重点实验室，天津 300457）摘 要： 从富含淀粉的土壤中筛选获得多株产耐酸性α-淀粉酶的菌株，将酶活最高的一株经16S rDNA 鉴定为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis ），命名为Bacillus subtilis A -7，其所产的耐酸性α-淀粉酶最适温度和pH 分别为60℃和4.5。

通过单因素筛选及正交试验优化发酵培养基，得到最佳配方为可溶性淀粉 2%，蛋白胨 2%，CaCl 2 0.07%，Na 2HPO 4 0.8%，在此条件下耐酸性α-淀粉酶活力达到221 U/mL，是未优化条件下的2.3倍。