丝状真菌生长的测定

一、实验目的1. 了解曲霉菌的基本特征及其生长条件。

2. 掌握曲霉菌的分离、纯化和培养方法。

3. 分析曲霉菌在不同环境条件下的生长情况。

二、实验原理曲霉菌（Aspergillus）是一种广泛分布于自然界中的丝状真菌，属于子囊菌亚门。

曲霉菌具有丰富的种类，其中许多种类在食品、制药和生物技术等领域具有重要作用。

本实验旨在通过观察曲霉菌的形态特征和生长情况，了解其生长条件，为后续研究提供基础。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 曲霉菌菌种- 马铃薯葡萄糖琼脂（PDA）培养基- 水浴锅- 灭菌锅- 显微镜- 纱布- 烧杯- 量筒- 移液管- 灭菌器2. 实验仪器：- 灭菌操作台- 高压蒸汽灭菌器- 紫外线消毒灯- 电子天平四、实验方法1. 曲霉菌的分离与纯化（1）取一小块曲霉菌菌种，用无菌镊子将其接种于PDA培养基平板中央。

（2）将平板置于28℃恒温培养箱中培养3-5天，待菌落长成后，用无菌接种环挑取单菌落，接种于新的PDA培养基平板上。

（3）重复步骤（2）2-3次，直至获得纯化的曲霉菌菌种。

2. 曲霉菌的培养与观察（1）将纯化的曲霉菌菌种接种于PDA培养基平板中央，置于28℃恒温培养箱中培养。

（2）定期观察曲霉菌的生长情况，记录菌落形态、颜色、质地等特征。

（3）利用显微镜观察曲霉菌的菌丝、分生孢子梗、分生孢子等形态特征。

3. 曲霉菌在不同环境条件下的生长情况（1）将纯化的曲霉菌菌种分别接种于不同温度（10℃、20℃、30℃、40℃）的PDA培养基平板中央。

（2）将平板置于恒温培养箱中培养，观察并记录曲霉菌在不同温度下的生长情况。

（3）重复步骤（1）和（2），分别改变培养基的湿度、pH值等条件，观察曲霉菌的生长情况。

五、实验结果与分析1. 曲霉菌的形态特征曲霉菌菌落呈放射状扩展，表面光滑，质地紧密，初期白色，后期逐渐变为灰白色或棕色。

菌丝细长，有隔膜，分生孢子梗直立，顶端产生分生孢子。

2. 曲霉菌在不同温度下的生长情况在28℃恒温条件下，曲霉菌生长旺盛，菌落直径可达5-7cm。

丝状真菌定量方法
丝状真菌定量方法是一种用于测定样品中丝状真菌数量的科学技术方法。

以下列举了几种常用的丝状真菌定量方法：
1. 真菌培养方法：将样品接种在含有适宜培养基的培养皿中，以促进真菌生长。

经过一定时间后，可以通过观察菌落数量、形态和颜色的变化，来定量检测丝状真菌数量。

2. 过滤膜法：将样品通过过滤膜，然后将过滤膜置于含有适宜培养基的培养皿中。

经过一段时间后，可以通过观察过滤膜上真菌菌落的形成情况，来定量检测丝状真菌数量。

3. 分子生物学方法：使用分子生物学技术，如PCR（聚合酶
链反应）或实时荧光定量PCR，来检测样品中丝状真菌的特
定基因序列。

根据目标基因序列的检测结果，可以定量评估丝状真菌的存在情况和数量。

4. 基于荧光信号的定量方法：使用荧光标记的探针结合真菌特定的核酸或蛋白质分子，来检测样品中的丝状真菌。

通过读取荧光信号的强度或数量，可以定量评估丝状真菌的存在和数量。

以上所列举的方法仅为常用的丝状真菌定量方法之一，实际的选择应根据具体的研究目的和样品类型来确定。

发酵菌体生长的几种检测方法微生物的检测，无论在理论研究还是在生产实践中都具有重要的意义，本文分生长量测定法，微生物计数法，生理指标法和商业化快速微生物检测简要介绍了利用微生物重量，体积，大小，生理代谢物等指标的二十余种常用的检测方法，简要介绍了这些方法的原理，应用范围和优缺点。

概述一个微生物细胞在合适的外界条件下，不断的吸收营养物质，并按自己的代谢方式进行新陈代谢。

如果同化作用的速度超过了异化作用，则其原生质的总量（重量，体积，大小）就不断增加，于是出现了个体的生长现象。

如果这是一种平衡生长，即各细胞组分是按恰当的比例增长时，则达到一定程度后就会发生繁殖，从而引起个体数目的增加，这时，原有的个体已经发展成一个群体。

随着群体中各个个体的进一步生长，就引起了这一群体的生长，这可从其体积、重量、密度或浓度作指标来衡量。

微生物的生长不同于其他生物的生长，微生物的个体生长在科研上有一定困难，通常情况下也没有实际意义。

微生物是以量取胜的，因此，微生物的生长通常指群体的扩增。

微生物的生长繁殖是其在内外各种环境因素相互作用下的综合反映。

因此生长繁殖情况就可作为研究各种生理生化和遗传等问题的重要指标，同时，微生物在生产实践上的各种应用或是对致病，霉腐微生物的防治都和他们的生长抑制紧密相关。

所以有必要介绍一下微生物生长情况的检测方法。

既然生长意味着原生质含量的增加，所以测定的方法也都直接或间接的以次为根据，而测定繁殖则都要建立在计数这一基础上。

微生物生长的衡量，可以从其重量，体积，密度，浓度，做指标来进行衡量。

生长量测定法体积测量法：又称测菌丝浓度法。

通过测定一定体积培养液中所含菌丝的量来反映微生物的生长状况。

方法是，取一定量的待测培养液（如10毫升）放在有刻度的离心管中，设定一定的离心时间（如5分钟）和转速（如5000 rpm），离心后，倒出上清夜，测出上清夜体积为v，则菌丝浓度为（10-v）/10。

菌丝浓度测定法是大规模工业发酵生产上微生物生长的一个重要监测指标。

第五章真菌的生长菌丝生长生长时向四周呈辐射状延伸，所以真菌在培养基上通常形成圆形的菌落。

曲霉菌落青霉菌落菌丝变态一、丝状真菌的生长（一）菌丝顶端生长的泡囊学说1. 菌丝顶端细胞的超微结构◆顶部区域含泡囊(vesicle)，◆泡囊与细胞质膜相融合小的、易染色的或有折射力的小球，（三）顶端生长的驱动力泡囊向顶端迁移的原因是什么？对细胞质流、微管和电位势梯度的研究解释了泡囊移动现象第一，细胞质的流动驱使和带动泡囊移向顶端；第二，泡囊借助于顶端和亚顶端区域之间水的电位势梯度而驱动第三，在菌丝细胞中，微管与菌丝生长方向平行，因此，可能微管运输泡囊到菌丝顶端，如果菌丝顶端细胞有顶体的话，可能先运输到顶体部位，然后由顶体直接运动这些泡囊到质膜。

二、真菌的分枝生长（一）真菌的分枝与真菌分枝行为有关的现象大多数菌丝的分枝是在菌丝顶端之后的某一距离发生，而且新的分枝总是向前或朝向菌落的边缘，于是菌丝的整个系统像是松柏树枝，这一规律显示了真菌的顶端优势２、菌丝的顶端彼此分离使菌丝间充满间隙，这保证了菌丝对营养的要求，同时它们会从存活菌丝营养耗尽的区域撤离。

（二）分枝是如何产生的两种基本假设来解释分枝形成的模式泡囊和特殊的细胞质区段之间的电位势引起局部的泡囊积累；当菌丝顶端泡囊与质膜合并的速率低于泡囊产生的速率时，泡囊将大量积累，那么，一旦细胞质的体积超过临界量，过量的泡囊无论在菌丝的哪个部位，都将引起产生一个新的分枝生活史的类型芽体脱落之后，形成芽体的部位上新合成的壁像汽球膨胀一样裂殖开始之前，母体的一端或两端拉长，形成一个园柱体并进行A.一旦芽体形成，芽、母体相连的部位形成隔膜。

B-C.原生质膜和初生的几丁质隔膜向心生长。

D.葡聚糖-甘露聚糖的次生隔膜在芽、母体形成。

E.在隔膜分开时，初生隔膜残留于母体形成芽痕，次生隔膜残留于芽体胎痕。

几丁质仅在隔膜上出现，近年来注意的焦点是几丁质合成机理几丁质合成是在一个特殊部位和生活循环的特殊周期被触发的啤酒酵母中几丁质的合成是限定在原生质膜上，参与合成几丁质的酶是无活性的或是以酶原的形式存在于膜上认为泡囊携带激活因子与母体和芽体接合部这个部位几丁质合成酶被激活。

微生物生长的测定方法作者：刘华来源：《神州·下旬刊》2013年第02期摘要：微生物生长情况可以通过测定单位时间里微生物数量或生物量（biomass）的变化来评价。

通过微生物生长的测定可以客观地评价培养条件、营养物质等对微生物生长的影响，或评价不同的抗菌物质对微生物产生抑制（或杀死）作用的效果，或客观地反映微生物生长的规律。

因此微生物生长的测量在理论上和实践上有着重要的意义。

关键词：微生物测定方法计数法生理指标法微生物生长的测定有计数、重量和生理指标等方法。

1、计数法此法通常用来测定样品中所含细菌、孢子、酵母菌等单细胞微生物的数量。

计数法又分为直接计数和间接计数两类。

⑴直接计数这类方法是利用特定的细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积里样品中微生物的数量。

此法的缺点不能区分死菌与活菌。

计数板是一块特制的载玻片，上面有一个特定的面积l mm2和高0.1mm的计数室，在1mm2的面积里又被刻划成25个（或16个）中格，每个中格进—步划分成16个（或25个）小格，但计数室都是由400个小格组成。

将稀释的样品滴在计数板上，盖上盖玻片，然后在显微镜下计算4-5个中格的细菌数，并求出每个小格所含细菌的平均数，再按下面公式求出每毫升样品所含的细菌数。

每毫升原液所含细菌数=每小格平均细菌数×400×l000×稀释倍数⑵间接计数法此法又称活菌计数法，其原理是每个活细菌在适宜的培养基和良好的生长条件下可以通过生长形成菌落。

将待测样品经一系列10倍稀释，然后选择三个稀释度的菌液，分别取0.2ml 故人无菌平皿，再倒人适量的已熔化并冷至45℃左右的培养基，与菌液混匀，冷却、待凝固后，放人适宜温度的培养箱或温室培养，长出菌落后，计数，按下面公式计算出原菌液的含菌数：每毫升原菌液活菌数=同一稀释度三个以上重复平皿菌落平均数×稀释倍数×5此法可因操作不熟练造成污染，或因培养基温度过高损伤细胞等原因造成结果不稳定。

2 微生物生长量的测定微生物特别是单细胞微生物，体积很小，个体生长很难测定，意义也不大。

通常测定微生物的生长是测群体的生长，而测定繁殖则都要建立在计数这一基础上。

2.1测生长量测定生长量的方法有许多种，适用于一切微生物。

2.1.1直接法2.1.1.1测体积它是一种较为粗放的方法，通常用于初步比较用。

例如将待测培养液放在刻度离心管中作自然沉降或进行一定时间的离心，然后观察沉降物的体积。

2.1.1.2 称干重采用离心法或过滤法测定，一般干重为湿重的10%~20%。

如用离心法，将待测培养液离心，再用清水洗涤离心1~5次后干燥，可用105℃、100℃或红外线烘干，也可在较低的温度（80℃或40℃）下进行真空干燥，然后称干重。

如细菌一个细胞一般重10-12~10-13g。

如为丝状真菌可用滤纸过滤，细菌可用醋酸纤维膜等滤膜进行过滤。

过滤后，细胞可用少量水洗涤，再真空干燥（40℃以下），称干重。

以乳酸菌为例，在液体培养基中，细胞的浓度大约为2×108个/ ml。

100 ml培养物可得10~70mg干重的细胞。

2.1.2间接法2.1.2.1生理指标法与生长量相平行的生理指标很多，它们均可用作生长测定的相对值。

1）测定细胞总含氮量来确定细菌浓度大多数细菌的含氮量为干重的12.5%，酵母菌为7.5%，霉菌为6.0%。

总氮量与细胞粗蛋白的含量（因其中包括了杂环氮和氧化型氮）的关系可用下式计算：粗蛋白总量=含氮量%×6.25含氮量的测定方法有很多，常用凯氏定氮法。

此法适用于细胞浓度较高的样品，同时操作过程也较麻烦，主要用于科学研究中。

2）含碳量的测定微生物新陈代谢的结果，必然要消耗或产生一定量的物质，以表示微生物的生长量。

一般生长旺盛时消耗的物质就多，或者积累的某种代谢产物也多。

将少量生物材料混入1ml水或无机缓冲液中，用2ml 2%重铬酸钾溶液在100℃下加热30分钟，冷却后，加水稀释至5ml，在580nm波长下测定光密度值（用试剂作空白对照，并用标准样品作标准曲线），即可推算出生长量。

微生物的个体生长：指细胞物质有规律地、不可逆地增加，导致细胞体积扩大的生物学过程。

繁殖：引起生命个体数量增加的生物学过程。

微生物细胞数目的检测方法：显微直接计数法：用计数板在光学显微镜下直接观察细胞并进行计数的方法。

活菌计数法：通过测定样品在培养基上形成的菌落数来间接确定其活菌的方法，计数依据是在稀释情况下一个菌落由一个活细胞繁殖形成，又称平板菌落计数法。

微生物生物量的测定方法：1、湿重法将微生物培养液离心，收集细胞沉淀物，然后称重。

2、干重法将离心得到的细胞沉淀物置于100~105℃的烘箱中干燥过夜至水分去除，然后再称重。

3、比浊法细菌培养物在其生长过程中，由于原生质含量的增加，会引起培养物混浊度的增加。

在一定浓度范围内，悬液中细胞的数量与透光量成反比，与光吸收值成正比。

因此利用分光光度计在450nm~650mn的某一波长可以测定培养物的光吸收值来确定细胞量。

4、生理指标法与微生物生长量相平行的生理指标很多，可根据实验目的和条件适当选用。

一般微生物细胞的含氮量比较稳定，故可用凯氏定氮法等测定其总氮量，再乘以系数6.25即为粗蛋白含量。

蛋白质含量越高，说明菌体数和细胞物质量越高。

1、丝状微生物菌丝长度测定法将真菌接种在琼脂平皿的中央，定时测定菌落的直径或面积。

2、培养料中菌体生长速率测定法主要测定一定时间内固体培养料中菌丝体向前延伸的距离。

3、单个菌丝顶端生长速率测定法可利用湿室培养法对丝状微生物进行培养，定时将湿室中的培养有微生物的载玻片置于显微镜下，借助目镜测微尺测定一定时间内单个菌丝的伸长长度。

微生物的同步生长与同步培养方法同步培养法：使培养物中所有的微生物细胞都处于相同的生长阶段的培养方法。

同步生长：指这种培养物中所有微生物细胞都处于同一生长阶段，并都能同时分裂的生长方式。

获得微生物同步生长的方法主要有两类：环境条件诱导法：采用物理或化学因子使微生物细胞生长进行到某个阶段停止下来，使先到该阶段的微生物细胞不能进入下个阶段，待全部群体细胞都到达该生长阶段后，再除去该因子，使全部群体细胞同时进入下个生长阶段，达到诱导微生物细胞同步生长的目的。

细菌和丝状真菌是两种不同类型的微生物，它们在生长特点上存在一些区别：
细菌的生长特点：
细菌是单细胞微生物，具有简单的细胞结构。

它们可以通过二分裂的方式进行繁殖，快速增加其数量。

细菌的生长速度相对较快，通常在适宜的环境条件下，可以在数小时到数天内繁殖成群体。

细菌的形态多样，包括球形、杆状、螺旋形等。

它们可以生长在各种环境中，包括土壤、水体、人体等。

细菌的生长对环境条件敏感，如温度、湿度、营养物质等。

它们对不同环境条件的适应性较强，可以生长在广泛的温度和pH范围内。

细菌的生长速度和代谢活动会产生代谢产物，包括酸性或碱性物质，有时会导致异味或腐败等现象。

丝状真菌（如霉菌）的生长特点：
丝状真菌是多细胞生物，由长丝和分枝组成，形成复杂的菌丝体。

丝状真菌的生长速度相对较慢，通常需要较长时间才能形成明显的菌落或菌丝网络。

丝状真菌的菌丝体可以穿透并侵入有机物质，如食物、植物、动物组织等，从中获取营养
丝状真菌的生长需要适宜的温度、湿度和营养物质。

它们对于不同的环境条件有一定的要求。

丝状真菌可以产生孢子，用于繁殖和传播。

这些孢子可以通过空气或其他载体传播到新的环境中。

细菌和丝状真菌的生长特点在不同的物种之间可能存在差异，同时它们的生长也受到环境因素的影响。

在实际应用中，了解微生物的生长特点有助于对其进行控制和管理，以维持环境的卫生和健康。