利用原生质体育种技术获得优良酵母菌设计实验路线

酵母菌的分离纯化酵母菌的分离纯化实验方案导读:就爱阅读网友为您分享以下“酵母菌的分离纯化实验方案”资讯，希望对您有所帮助，感谢您对的支持!酵母菌的分离纯化实验目的1. 了解培养基的配置与灭菌技术;2. 无菌操作技术;3. 工业微生物的分离与纯化技术;4. 工业微生物的检测及保藏。

基本原理1、培养基是人工配置的用于培养、分离、鉴定和保存各种微生物的营养基质。

也适合微生物在生命活动中积累各种代谢产物。

由于微生物种类不同，营养类型各异以及实验目的不同，因此培养基的种类也很多。

不同微生物对营养的要求不同，在配置时根据微生物对PH的要求选择合适的PH。

1由于本次实验主要是分离纯化酵母菌，所以配置的培养基是适合酵母菌生长麦芽汁平板培养基，同时添加抗生素抑制霉菌及其它菌的生长。

2、接种和培养过程中必须保证不被其它微生物所污染，关键在于严格进行正确的无菌操作，但是绝对无菌是不可能的，只能人工创造相对无菌的环境。

所以本次实验无菌操作是在超净工作台的酒精灯火焰旁进行。

3、把特定微生物从混杂的微生物群体中分离出来而获得某一种或某一株微生物的过程叫微生物的分离与纯化。

首先根据其生长特性设计只利于此菌生长的条件，再根据各种稀释法使他们在固体培养基上单独长成菌落。

分离纯化的方法通常有:稀释混合倒平板法、稀释涂布平板法和平板划线。

此次实验采用梯度稀释涂布平板法。

4、微生物检测项目最常用的是细胞数的检测，方法比较多，主要有显微镜直接计数法、平板菌落计数法(CFU)、光电比浊计数法等。

本次实验设计酵母菌的数量检测，选用显微镜直接计数法和平板菌落计数法。

实验器材仪器设备恒温水浴锅、电热干燥箱、蒸汽灭菌锅、超净工作台、恒温培养箱、恒温摇床、水浴锅、电炉、铜锅、酒精灯、接种环、电子天平、研钵、光学显微镜、血细胞计数器玻璃器2皿烧杯、锥形瓶、大小试管、培养皿、漏斗、三角涂棒、吸管、试管架、玻璃涂棒、盖玻片试剂与材料苹果、大麦芽、琼脂、蒸馏水、碘液、抗生素、染色液其它纱布、滤纸实验内容及操作步骤(一)、样品的选择酵母菌一般在果园的土壤中或者水果的表面含量较多，因此选择苹果为样品。

酵母菌的纯培养实验原理酵母菌是一种单细胞真核生物，广泛存在于自然界中，常见于土壤、果皮和发酵食品等环境中。

酵母菌的纯培养实验是一种常用的实验手段，通过这种实验可以得到纯净的酵母菌培养物，为后续的研究提供了可靠的基础。

酵母菌的纯培养实验主要包括以下几个步骤：酵母菌的分离、酵母菌的培养和酵母菌的纯化。

酵母菌的分离是实验的第一步。

我们可以从自然界中采集到含有酵母菌的样品，比如果皮、土壤等。

将样品放入培养基中，利用其富含的养分和适宜的温度等条件，促使酵母菌开始生长。

然后，通过显微镜观察，可以看到培养基中存在着许多酵母菌细胞。

选取单个酵母菌细胞，将其转移到另一个培养基中，再次进行培养。

经过多次的分离，我们可以得到纯净的酵母菌培养物。

酵母菌的培养是纯培养实验的关键步骤。

酵母菌的培养基一般由碳源、氮源、矿物质和维生素等组成，提供了酵母菌生长所需的养分。

培养基的配制需要根据酵母菌的需求来确定，以确保酵母菌能够正常生长和繁殖。

在培养过程中，温度和氧气供应也是需要注意的因素。

一般情况下，酵母菌的最适生长温度为28-30摄氏度，过高或过低的温度都会对其生长产生不利影响。

此外，酵母菌对氧气的需求较高，需要提供充足的氧气供应。

酵母菌的纯化是实验的最后一步。

在酵母菌培养物中，可能会存在其他微生物的杂菌。

为了获得纯净的酵母菌培养物，我们可以采用多种方法，如温度选择法、抗生素选择法和营养选择法等。

这些方法可以通过调节培养基中的温度、添加抗生素或改变培养基中的营养成分，来选择性地培养酵母菌，排除其他微生物的干扰。

通过以上的步骤，我们可以得到纯净的酵母菌培养物。

这些纯净的酵母菌培养物可以用于研究酵母菌的生理特性、代谢途径、基因表达和蛋白质功能等方面的问题。

同时，纯培养的酵母菌也为酵母菌在工业生产中的应用提供了基础。

总结起来，酵母菌的纯培养实验是一种重要的实验手段，通过分离、培养和纯化等步骤，可以得到纯净的酵母菌培养物。

这些纯净的酵母菌培养物可以为酵母菌的研究提供可靠的基础，也为酵母菌在工业生产中的应用提供了有力支持。

原生质体融合育种摘要原生质体融合育种克服了远缘杂交不亲和的障碍，可以提高重组频率，使得遗传物质的交换、传递更完整，成为微生物育种的一种重要方式。

其过程包括原生质体制备和再生、原生质体融合以及融合体检出等步骤。

在每个步骤中均要考虑到其应注意的因素，从而提高原生质体育种的效率，达到快速育种的目的。

因原生质体融合育种的优势，其在多功能菌种选育、工程菌选育和工业生产育种等方面应用广泛。

关键词原生质体制备融合育种原生质体再生融合体检出引言传统的杂交育种具有一定的局限性，需要受到亲和力的影响，并且要求亲本有性的分化，而原生质体育种则克服了这些缺点。

当细菌细胞壁被剥离，剩下由原生质膜包围的原生质部分称为原生质体。

原生质体融合是指通过人为的方法，使遗传性状不同的两个细胞的原生质体进行融合，借以获得兼有双亲遗传性状的稳定重组子的过程。

[1]原生质体融合不受种属限制，能够完整的传递遗传物质，使得重组几率提高进而提高育种速度。

[1-2]育种步骤可分为五大步骤：直接亲本及其遗传标记的选择、双亲本原生质体制备和再生、亲本原生质体诱导融合、融合重组体分离、遗传标记分析和测定。

1.亲本遗传标记的选择进行原生质体融合的双亲本一般要携带遗传标记，以顺利地筛选到融合子。

常用营养缺陷型、抗性、荧光染色、温度敏感性、孢子颜色、菌落形态等作为标记。

其中营养缺陷型是常用而有效的选择手段。

[3]2.原生质体制备制备原生质体是融合育种的前提，为了制备原生质体，需要将包围细胞的细胞壁去除掉。

去壁的方法很多，主要有机械法、酶法和非酶法，现在使用较多的是酶法。

[4]2.1酶法制备原生质体的条件（1）菌体年龄微生物的生理状态决定了原生质体的形成，而菌龄明显影响了原生质体的形成率，菌龄过长不利于释放原生质体，过短则菌丝体容易破裂。

丝状真菌一般选择年轻的尖端生长点的菌丝；细菌与霉菌一般采用对数生长期，而放线菌以对数期到静止期的转换期为好。

[5]（2）稳定剂原生质体由于失去了细胞壁因此对环境十分敏感，渗透压尤为重要。

一、实验名称酵母发酵实验二、实验目的1. 了解酵母在发酵过程中的作用。

2. 掌握酵母发酵的基本原理和实验操作方法。

3. 培养学生的实验操作技能和观察能力。

三、实验原理酵母是一种单细胞真菌，在适宜的条件下，酵母能够将糖类物质转化为酒精和二氧化碳。

本实验通过观察酵母发酵过程中酒精和二氧化碳的产生，验证酵母的发酵作用。

四、实验材料与试剂1. 实验材料：酵母粉、葡萄糖、琼脂、蒸馏水、烧杯、试管、酒精灯、酒精、滴管、pH试纸、碘液、锥形瓶、玻璃棒等。

2. 实验试剂：酵母粉、葡萄糖、琼脂、蒸馏水、碘液、酒精等。

五、实验步骤1. 准备实验材料：将琼脂加入蒸馏水中，加热溶解后，冷却至室温备用。

2. 配制培养基：将葡萄糖加入琼脂溶液中，搅拌均匀，倒入锥形瓶中，待凝固后，制成固体培养基。

3. 接种酵母：用无菌滴管将酵母粉接种于固体培养基上，用玻璃棒轻轻搅拌，使酵母均匀分布。

4. 观察酵母发酵：将接种后的培养基置于37℃恒温培养箱中培养，每隔一定时间观察酵母菌的生长情况和酒精、二氧化碳的产生。

5. 测定pH值：用pH试纸测定发酵过程中培养基的pH值变化。

6. 验证二氧化碳产生：将装有发酵培养基的锥形瓶倒置，观察瓶底是否有气泡产生。

7. 验证酒精产生：用碘液检测发酵过程中酒精的产生。

六、实验注意事项1. 实验过程中要保持无菌操作，避免污染。

2. 实验过程中要严格遵守实验操作规程，确保实验结果准确。

3. 注意观察实验现象，做好实验记录。

七、实验报告要求1. 实验报告应包括实验目的、原理、材料与试剂、实验步骤、实验结果、实验讨论等内容。

2. 实验结果应包括酵母菌的生长情况、pH值变化、二氧化碳和酒精的产生情况等。

3. 实验讨论应结合实验结果，分析酵母发酵过程中的变化和原因。

八、实验拓展1. 探究不同温度、不同浓度的葡萄糖对酵母发酵的影响。

2. 研究其他微生物的发酵作用，如乳酸菌、醋酸菌等。

3. 了解发酵技术在食品、医药、化工等领域的应用。

生物实验教案：中学生物实验《酵母发酵条件探究》设计一、引言中学生物实验在培养学生科学实验能力的同时，也有助于提高他们的科学思维和研究兴趣。

本教案旨在设计一项生物实验，名为《酵母发酵条件探究》，通过改变不同条件下的酵母发酵情况，让学生了解酵母发酵的基本原理和影响因素，并培养学生的实验设计和数据分析能力。

本教案将对实验的目的、所需材料、实验步骤、数据记录和实验结果分析进行详细描述。

二、实验目的本实验的目的是让学生了解酵母发酵的条件以及不同条件对酵母发酵效果的影响。

通过实验，学生将学会如何设计并进行实际操作，以便最大限度地掌握实验技能，培养他们的科学思维和创新能力。

三、实验材料1. 酵母粉2. 砂糖3. 盐4. 温水5. 温度计6. 量杯7. 实验管8. 密封瓶9. 实验记录表格四、实验步骤1. 准备工作：a) 将酵母粉、砂糖和盐分别称量好b) 准备一定量的温水c) 温水的温度应在实验开始前测量并记录2. 实验设计：a) 将4个实验管标记为A、B、C、Db) 在A实验管中加入10ml温水和5g酵母粉，搅拌均匀c) 在B实验管中加入10ml温水、5g酵母粉和5g砂糖，搅拌均匀d) 在C实验管中加入10ml温水、5g酵母粉和5g盐，搅拌均匀e) 在D实验管中加入10ml温水、5g酵母粉、5g砂糖和5g盐，搅拌均匀3. 实验操作：a) 将实验管A、B、C、D放置在温度恒定的环境中，定时观察酵母发酵的情况b) 在实验过程中，要记录温度的变化以及酵母的发酵状态5. 数据记录：a) 记录每个实验管中酵母的发酵时间和产生的气体量b) 使用实验记录表格记录数据，确保准确性和规范性6. 实验结果分析：a) 比较不同条件下酵母发酵的时间和产生的气体量b) 分析酵母发酵所需的最佳温度、理想的盐浓度以及糖对发酵的影响七、实验结果与讨论通过对实验结果的观察和数据分析，我们可以得出一些结论：1. 酵母发酵的最佳温度为X摄氏度，超过或低于该温度将会影响酵母发酵效果。

实验设计方案从环境中分离酵母菌班级：10级生科（2）班组员:刘楠楠: 201008010222潘婷: 201008010225李炜昊：201008010221马森:201008010224实验：从环境中分离出酵母菌实验设计方案一、采样采样的理由：1、酵母菌与人类的关系密切酵母菌是一类单细胞真菌的俗称，分类学上分属于子囊菌纲半知菌类特征:1. 个体一般以单细胞状态存在；2. 多数营出芽生殖，有的裂殖；3. 能发酵糖类产能；4. 细胞壁常含有甘露聚糖；5. 喜在含糖量较高、酸度较大的水生环境中生长。

酵母菌分布：主要生长在偏酸的含糖环境中，在水果、蜜饯的表面和果园土壤中最为常见。

种类：据1982年的资料，已知的酵母有56属，500多种。

酵母菌与人类的关系极其密切。

千百年来，人类几乎天天离不开酵母菌，例如酒类的生产，面包的制作，乙醇和甘油发酵，石油及油品的脱蜡，饲用、药用等的生产。

2、酵母菌细胞的形态和构造电子显微镜下的酿酒酵母细胞结构示意图细胞直径比细菌粗10倍左右，如Saccharomyces cerevisiae细胞的宽度为2.5~10μm，长度为4.5~21μm。

因此在光学显微镜下可以模糊地看到它们细胞内的各种结构分化。

酵母菌细胞的形态通常有球状、卵圆状、椭圆状、柱状或香肠状等多种。

细胞壁：酵母细胞壁呈“三明治”结构外层：甘露聚糖（约占30%，以α-糖苷键联结（并非所有酵母菌都有）内层：葡聚糖（约占30-40%，由D-葡萄糖以β-糖苷键联结）中间层：蛋白质（含6-8%，多为酶类）细胞膜：酵母菌的细胞膜与原核生物的基本相同。

但有的酵母菌如酿酒酵母中含有固醇类（甾醇）、VitD的前体----麦角固醇，这在原核生物是罕见的。

细胞核:核膜：核孔40～70nm ，透性比任何生物膜都大。

•染色体:由DNA和组蛋白牢固结合而成，呈线状, 数目因种而异。

•核仁：核内有一或几个区域rRNA含量很高，这一区域为核仁，是合成核糖体的场所。

酵母菌细胞融合实验一、实验目的学习酵母菌原生质体制备和再生技术，为了解酵母菌为材料的外源基因转移等技术奠定基础。

二、实验原理酵母菌如酿酒酵母，在遗传学和分子生物学的研究中有很大作用，尤其是近些年来，随着科技的进步，酵母菌的遗传操作如转化、基因克隆和外源基因在酵母受体中的表达等技术都有了突破性的进展。

作为受体系统的酵母菌原生质体在这些技术中有独特的地位。

这种经溶菌酶处理脱壁后的细胞（脱壁不完全者称原生质球）既可以作为不同种属间细胞融合的母体，实现细胞器等大结构的转移，又可作为外源基因转移的受体，大大提高基因转移的效率。

这些新技术不仅促进了酵母菌遗传学的发展，而且很多已应用到构建新的酿酒业酵母。

本实验以酿酒酵母为材料，进行原生质体的分离制备和再生。

酵母菌原生质体的制备一般采用蜗牛酶、酵母溶菌酶或其它细胞壁溶解酶类。

分离制备过程受许多因素的影响，如不同菌株的生长期、细胞浓度、溶菌酶类型和用量、处理时间和温度等。

所以整个实验过程设计应综合考虑各种因素，才能获得较好的效果。

分离制备的原生质体在适当的再生培养基上培养时，可以再生出细胞壁而恢复完整细胞状态，即完成再生过程，这也是以原生质体为受体的所有实验技术最终能实现的一个关键步骤。

在原生质体制备中，应选用适当生长时期的菌体作为分离的材料。

一般来说，对数生长期的酵母菌细胞易脱壁，静止期细胞较难甚至不可能形成原生质体。

而不同菌种的生长对数期也略有差异，一般在12～16小时之间（108细胞/ml）。

制成的原生质体悬浮液在0℃条件下保存4～6小时，不会影响融合再生率。

所以欲进行原生质体融合，应在制备后尽快进行，以免时间过长，影响再生。

分离过程中采用的β-巯基乙醇可使细胞壁组分中的二硫键破坏，使蜗牛酶易于分解细胞壁。

此外，渗透压的调节可用0.8mol/L山梨醇、16％蔗糖，或者0.6mol/L KCl溶液。

三、实验材料菌种：酿酒酵母SP-48、L-酵母：器具和试剂：恒温摇床、恒温水浴、显微镜、台式离心机、培养皿、试管、过滤灭菌装置。

从土壤中分离提纯高效的酵母菌主要内容：利用各种微生物实验技术，从土壤中分离并提纯酵母菌，再通过检测酵母菌发酵速率，从而筛选出高效的酵母菌。

关键词：分离提纯高效酵母菌在土壤中分离酵母菌，因此土壤的采样地点在果树下较好。

采集好土壤，将土壤配制成10^-2悬液，主要方法是称取1g土壤，放入三角瓶，迅速倒入99ml无菌水，震荡5-10min即成所需的土壤悬液。

1.由于土壤中酵母菌含量较低，因此在分离前要先进行富集培养24h。

2.接下来是配制培养基，由于要分离的是酵母菌，配制马丁氏培养基。

3.对培养基进行灭菌放入高压蒸汽灭菌锅115℃/30min4.取出后待50℃以下是加入链霉素，每一百克三毫升5.队超净台消毒，点燃酒精灯6.在酒精灯旁倒平板。

7.接种，画线。

8.放入26℃保温箱3-4d。

9.取生长较好的六个菌落分别接入0.05mol/L4ml的六个试管中，编号1-6。

10.3d后检测葡萄糖含量。

11.配置新制的氢氧化铜0.5mol/L50ml12.将强氧化铜分别放入六个试管中每个4ml。

摇匀加热。

13. 5min后比较六个试管的颜色深浅。

编号颜色1褐色'++褐色+2褐色'--3褐色-4褐色+5褐色6结论：三号试管的颜色最浅，所含葡萄糖最少，所以三号试管的酵母菌效率最高。

结果讨论：实验比较成功，但是培养基的菌株较少，这可能和富集培养的时间太短有关系，忘了设置对照试验。

选取高校教务军，可以重复做这个实验，选出比较高效的酵母菌。

注意:1.注意培养基的灭菌2.注意紫外线只能在无人的时候开启3.注意接种环要灼烧彻底4.注意在培养箱中放培养技师要倒置5.注意统一变量。