α-葡萄糖苷酶抑制活性的测定方法

α 葡萄糖苷酶抑制实验原理
α-葡萄糖苷酶抑制实验的原理主要基于酶的抑制作用。

在适宜的温度和酸碱环境中，α-葡糖苷酶能够催化水解4-硝基苯基-D-吡喃葡萄糖苷，生成对硝基苯酚。

这个过程可以通过酶标仪在420nm处检测到对硝基苯酚的吸光度，从而计算出产物量的变化。

当多酚与α-葡糖苷酶结合生成多酚α--葡糖苷酶络合物时，该络合物引起
α-葡糖苷酶的构象发生改变，改变构象的α-葡糖苷酶对4-硝基苯基-D-吡
喃葡萄糖苷的催化水解作用减弱或消失，从而减少了对硝基苯酚的生成。

通过酶标仪检测吸光度的变化，可以计算出多酚对α-葡糖苷酶的抑制率。

以上信息仅供参考，如需了解更多信息，建议查阅相关文献或咨询专业人士。

热带作物学报2021, 42(5): 1455 1461Chinese Journal of Tropical Crops槟榔多酚提取物对α-葡萄糖苷酶活性的抑制动力学研究宋菲1,2，陈开健3，唐敏敏1,2，陈华1,2*，李永东41. 中国热带农业科学院椰子研究所，海南文昌 571339；2. 海南省槟榔产业工程研究中心，海南文昌 571339；3. 海南热带海洋学院食品科学与工程学院，海南三亚 572022；4. 海南雨林椰创科技开发有限公司，海南文昌 571339摘要：为了研究槟榔多酚提取物对α-葡萄糖苷酶活性的影响，以75%乙醇为提取溶剂，利用超声波辅助法提取槟榔多酚（槟榔籽和槟榔壳多酚），采用S-8大孔树脂对粗提物进行纯化，探讨纯化前后的槟榔多酚提取物对α-葡萄糖苷酶活性的抑制作用，通过动力学实验判断对酶活性的抑制类型，同时对添加不同浓度槟榔多酚提取物的α-葡萄糖苷酶的荧光光谱和同步荧光光谱进行分析。

结果表明：槟榔籽多酚提取物纯化前后的IC50分别为(0.34±0.12)、(0.33±0.10) μg/mL，槟榔壳多酚提取物纯化前后的IC50分别为(1.73±0.31)、(0.14±0.09)mg/mL，纯化后的槟榔壳多酚提取物对α-葡萄糖苷酶活性的抑制作用显著增强。

动力学实验表明，槟榔多酚提取物对α-葡萄糖苷酶活性的抑制作用类型为竞争性与非竞争性的混合型抑制。

荧光光谱和同步荧光光谱分析结果显示，槟榔多酚提取物对α-葡萄糖苷酶内源性荧光具有淬灭作用，但对酶的构象没有影响。

槟榔籽和槟榔壳多酚提取物对α-葡萄糖苷酶活性的抑制作用均较强，可为天然α-葡萄糖苷酶抑制剂的开发提供参考。

关键词：槟榔多酚；纯化；α-葡萄糖苷酶；活性抑制；动力学；荧光淬灭中图分类号：S792.91 文献标识码：AInhibition Kinetics of Polyphenol Extracts from Areca Nut on α-Glucosidase ActivitySONG Fei1,2, CHEN Kaijian3, TANG Minmin1,2, CHEN Hua1,2*,LI Yongdong41. Coconut Research Institute, Chinese Academy of Tropical Agricultural Sciences, Wenchang, Hainan 571339, China;2. Hainan Engineering Research Center of Arecanut Industry, Wenchang, Hainan 571339, China;3. College of Food Science and Engineering, Hainan Tropical Ocean University, Sanya, Hainan 572022, China;4. Hainan Yulin Coconut Technology Develop-ment Co., Ltd., Wenchang, Hainan 571339, ChinaAbstract: Areca seed and areca shell polyphenols were extracted using the ultrasonic assisted method with 75% ethanol as extraction solvent and purified by S-8 macropore resin. The inhibitory effect of polyphenol extracts from areca nut on α-glucosidase activity before and after purification was studied. The inhibitory type on α-glucosidase activity was de-termined by kinetic experiments, and the fluorescence spectrum and synchronous fluorescence spectrum of α-glucosidase with different concentrations of areca nut polyphenol extracts were analyzed. The results showed that the IC50 of areca seed polyphenol extracts before and after purification was (0.34±0.12) and (0.33±0.10)μg/mL, respectively, and the IC50 of areca shell polyphenol extracts before and after purification was (1.73±0.31) and (0.14±0.09)mg/mL, respectively, indicating that the inhibition on α-glucosidase activity was enhanced after purification of areca shell poly-phenol extracts. Kinetic experiments showed that the inhibition of areca nut polyphenol extracts on α-glucosidase activ-ity belonged to the mixed type of competition and non-competition. The fluorescence spectrum and synchronous fluo-rescence spectrum analysis showed that areca nut polyphenol extracts had quenching effect on the endogenous fluores-cence of α-glucosidase, but had no effect on the conformation of α-glucosidase. In conclusion, areca seed and areca shell 收稿日期 2020-06-24；修回日期 2020-07-22基金项目 海南省自然科学基金面上项目（No. 219MS080）；中国热带农业科学院基本科研业务费专项（No. 1630152017017，No. 1630152020007）；农业农村部农业科技创新与推广项目“槟榔食用安全性研究及健康新产品开发与示范”。

4种海星的α-葡萄糖苷酶抑制活性研究张改云;范林;侯忠海;张玉便;杨艳柳【摘要】目的：寻找具有降糖活性作用的海星并确定其活性部位。

方法首先采用正常和糖尿病小鼠口服糖耐量试验，比较4种海星粗提物改善口服糖耐量的作用，然后利用体外α-葡萄糖苷酶抑制剂模型进一步确定具有改善口服糖耐量作用的海星中抑制α-葡萄糖苷酶的活性部位。

结果罗氏海盘车粗提物对正常小鼠和糖尿病小鼠餐后0．5、1 h血糖均有显著降低作用，其中的正丁醇部位具有很强的α-葡萄糖苷酶抑制活性。

结论罗氏海盘车的正丁醇部位具有α-葡萄糖苷酶抑制作用。

%Objective To search for starfishes with hopoglycemic activity and orientate the bioactive fractions .Methods Firstly, the crude extracts of four starfishes were subjected to oral glucose tolerance test on normal and diabetic mice .And then the in vitroα-glucosidase activity assay was introduced to confirm the bioactive fractions .Results The crude extract of Asterias rollestoni could lower the blood glucose of normal and diabetic mice after 0.5 h and 1 h.Furthermore, its n-BuOH fraction exhibited potent α-glucosidase inhibitoary activity .Conclusion The n-BuOH extract of Asterias rollestoni had a potent α-glucosidase inhibitoary activity .【期刊名称】《药学实践杂志》【年(卷),期】2014(000)004【总页数】4页(P284-287)【关键词】海星;罗氏海盘车;糖耐量;α-葡萄糖苷酶;四氧嘧啶【作者】张改云;范林;侯忠海;张玉便;杨艳柳【作者单位】国家海洋局第三海洋研究所生物遗传资源重点实验室，福建厦门361005;东华大学化学化工与生物工程学院，上海201620;东华大学化学化工与生物工程学院，上海201620;国家海洋局第三海洋研究所生物遗传资源重点实验室，福建厦门361005;国家海洋局第三海洋研究所生物遗传资源重点实验室，福建厦门361005【正文语种】中文【中图分类】R282.74糖尿病是以持续高血糖为基本生化特征的一种常见的内分泌代谢性疾病。

◆论著◆中药研究青果不同溶剂提取物对α-葡萄糖苷酶抑制作用研究张震宇1，刘雅欣2，刘国香1，邵文卓1，张德成1，林桂涛1（1.山东中医药大学药学院，山东 济南 250355； 2.北京学校，北京 101100）［摘要］ 目的：探究青果不同溶剂提取物的成分差异及对α-葡萄糖苷酶的抑制效果。

方法：使用水、50%乙醇、70%乙醇、95%乙醇对青果进行提取，分别测定不同提取物对α-葡萄糖苷酶的抑制作用，明确其抑制类型，并检测不同提取液中没食子酸、鞣花酸、总黄酮含量。

结果：各溶剂提取物均对α-葡萄糖苷酶有不同程度的抑制作用，其抑制类型为可逆性非竞争性抑制作用；70%乙醇提取物抑制效果最佳，半抑制浓度（IC 50）为9.914×103 μg/mL ，没食子酸、鞣花酸、总黄酮含量分别为（5.33±0.03）mg/g 、（12.61±0.12）mg/g 、（19.05±0.02）mg/g 。

结论：青果提取液成分中没食子酸对提取溶剂不敏感，鞣花酸及总黄酮水溶性不佳；对α-葡萄糖苷酶的抑制效果总体以70%乙醇提取液最佳，酶抑制率最高，此为青果开发提供了依据。

［关键词］ 青果；α-葡萄糖苷酶；酶抑制；没食子酸；鞣花酸；总黄酮［中图分类号］ R289.1 ［文献标志码］ A ［文章编号］ 1007-659X （2024）03-0348-07 DOI ：10.16294/ki.1007-659x.2024.03.013Inhibition of α-Glucosidase by Different Solvent Extracts of Qingguo （Canarii Fructus ）ZHANG Zhenyu 1，LIU Yaxin 2，LIU Guoxiang 1，SHAO Wenzhuo 1，ZHANG Decheng 1，LIN Guitao 1（1.School of Pharmacy ，Shandong University of Traditional Chinese Medicine ，Jinan 250355，China ；2.Beijing School ，Beijing 101100，China ）Abstract Objective ：To explore the composition differences of different solvents extracts of Qingguo （CanariiFructus ） and their inhibitory effects on α-glucosidase. Methods ：Qingguo was extracted with water ，50% ethanol ，70% ethanol and 95% ethanol. The inhibitory effects of different extracts on α-glucosidase were determined to clarify their inhibitory types. The contents of gallic acid ，ellagic acid and total flavonoids in different extracts were detected. Results ：The solvent extracts had different degrees of inhibitory effects on α-glucosidase ，andtheir inhibitory types were reversible noncompetitive inhibitory effects. The 70% ethanol extract had the bestinhibitory effect ，with IC 50 of 9.914×103 μg/mL. The contents of gallic acid ，ellagic acid and total flavonoidswere （5.33±0.03） mg/g ，（12.61±0.12） mg/g and （19.05±0.02） mg/g ，respectively. Conclusions ：Thegallic acid in Qingguo extracts is not sensitive to extraction solvents ，and the ellagic acid and totalflavonoids are poorly water soluble. The 70% ethanol extract had the best inhibition effect on α-glucosi⁃dase ，and the enzyme inhibition rate was the highest ，which provided a basis for the development of［收稿日期］ 2022-10-10［基金项目］ 山东省重点研发计划项目（编号：2016CYJS08A01-10）［作者简介］ 张震宇（1992—），男，山东济南人，2021年级硕士研究生，研究方向：中药新制剂、新技术研究。

α-糖苷酶抑制剂抑制活性测定实验原理：食物中的淀粉（多糖）经口腔唾液、胰淀粉酶消化成含少数葡萄糖分子的低聚糖（或称寡糖）以及双糖与三糖，进入小肠经α- 葡萄糖苷酶作用下分解为单个葡萄糖，为小肠吸收。

在生理状态下，小肠上，中、下三段均存在α- 葡萄糖苷酶，在服用α- 葡萄糖苷酶抑制剂后上段可被抑制, 而糖的吸收仅在中、下段，故吸收面积减少，吸收时间后延，从而对降低餐后高血糖有益, 在长期使用后亦可降低空腹血糖, 估计与提高胰岛素敏感性有关。

对硝基苯-α-D-葡萄糖苷（pNPG）经α-葡萄糖苷酶水解可产生对硝基苯酚，其在405nm呈特异性吸收，因此可以通过检测对硝基苯酚的生成量检测α-葡萄糖苷酶的活性。

仪器与试剂缓冲液：0.1M的磷酸钠缓冲液（pH6.8）--每100ml中1mol/l磷酸氢二钠4.6 ml，1mol/l磷酸二氢钠5.4 ml。

酵母α-葡萄糖苷酶：将100U/ml酶原液用0.1M的磷酸钠缓冲液（pH6.8）稀释为1U/ml的酶溶液，冷冻备用。

底物pNPG配制：2mM的pNPG溶解于0.1M的磷酸钠缓冲液中。

阿卡波糖抑制剂配制：200μg/ml溶于0.1M的磷酸钠缓冲液中。

实验内容1.分组：空白对照组、阴性对照组、阳性对照组、阳性对照组空白、待测样品大、中、小剂量组、待测样品组空白空白对照：170μl缓冲液+30μl 2mM的pNPG阴性对照组：10μl酶溶液+160μl缓冲液+30μl 2mM的pNPG阳性对照：10μl酶溶液+60μl缓冲液+100μl阿卡波糖抑制剂+30μl 2mM的pNPG阳性对照空白：10μl酶溶液+90μl缓冲液+100μl阿卡波糖抑制剂待测样品组：10μl酶溶液+60μl缓冲液+100μl待测样品+30μl 2mM的pNPG 待测样品空白：10μl酶溶液+90μl缓冲液+100μl待测样品2.实验步骤96孔酶标板上依次加入除底物外的所有反应液，37℃温浴10分钟，然后迅速加入底物,并测定反应初始吸光值（405nm）；之后，用塑料膜密封酶标板，37℃保温，每隔15分钟测定一次吸光值，以吸光值对时间做反应曲线。

2.3α-淀粉酶抑制测定
此法是根据工作进行由Apostolidis和李19稍作修改。

简单地说，添加200μL的样品用200μL的α-淀粉酶（13 U毫升-1，在0.02M的磷酸盐缓冲液，pH 6.9，0.006 M氯化钠）在1.5毫升的Eppendorf管中混合。

后在37℃下温育30分钟后，200微升的0.25％（重量/体积）淀粉（在0.02M的磷酸盐缓冲液，pH 6.9）溶液，将混合物再在37℃下温育30分钟，接着加入400μLDNS显色剂。

通过在沸水浴中加热5分钟，使反应终止。

冷却至室温后，测定吸光度，在540nm处，用分光光度计（U-1800日立公司，东京，日本）。

2.4α-葡萄糖苷酶抑制测定
此法是根据工作进行由Apostolidis和李19稍作修改。

简单地说，将50μL的样品混合，用100μL的α-葡萄糖苷酶（2学分毫升-1次，在0.1M磷酸盐缓冲液，pH 值6.9）在1.5毫升的Eppendorf管中，然后在37℃下孵育10分钟。

后，加入50μL 的5mM的PNPG（在0.1M磷酸盐缓冲液，pH值6.9），将混合物再在37℃下温育10分钟。

在100℃下通过加热使反应终止，然后用1毫升的去离子水稀释。

使用分光光度计（U-1800日立公司，东京，日本）在405nm处测定吸光度。

·基础研究·△［基金项目］　国家重点研发计划项目（２０１７ＹＦＣ１７０２４００）［通信作者］　陈志元，高级工程师，研究方向：中药现代化；Ｔｅｌ：（０７１４）３１８８７７９，Ｅ ｍａｉｌ：５７８０１３７＠ｑｑ ｃｏｍ桑不同药用部位总生物碱对α 葡萄糖苷酶活性的抑制作用△李名洁，孙代华，王泽霞，胡辉，成焕波，陈志元劲牌持正堂药业有限公司／湖北省中药配方颗粒工程技术研究中心，湖北　黄石　４３５１００［摘要］　目的：比较桑不同药用部位（桑叶、桑枝、桑白皮）总生物碱对α 葡萄糖苷酶活性的抑制作用。

方法：采用采用蒸发光散射检测器（ＥＬＳＤ） 高效液相色谱法（ＨＰＬＣ）测定桑不同药用部位总生物碱中１ 脱氧野尻霉素（ＤＮＪ）含量；以半数抑制浓度（ＩＣ５０）为评价指标，以阿卡波糖为阳性对照，以对 硝基苯基 α Ｄ 吡喃葡萄糖苷为底物，采用体外抑制模型评价桑不同部位总生物碱对α 葡萄糖苷酶活性的抑制作用。

结果：桑不同药用部位总生物碱中ＤＮＪ质量分数为桑白皮生物碱（３０ １％）＞桑枝生物碱（２５ ８％）＞桑叶生物碱（２１ ４％）。

桑不同药用部位总生物碱对α 葡萄糖苷酶抑制作用强度为桑枝生物碱＞桑叶生物碱＞桑白皮生物碱＞阿卡波糖。

结论：在桑枝、桑叶、桑白皮总生物碱中，以桑枝总生物碱对α 葡萄糖苷酶活性抑制作用最强，为桑资源开发辅助降血糖的药品和保健食品提供依据。

［关键词］　桑；药用部位；生物碱；１ 脱氧野尻霉素；α 葡萄糖苷酶［中图分类号］　Ｒ２８５ ［文献标识码］　Ａ ［文章编号］　１６７３ ４８９０（２０２１）０２ ０２９０ ０４ｄｏｉ：１０ １３３１３／ｊ ｉｓｓｎ １６７３ ４８９０ ２０２００３１１００１ＳｔｕｄｙｏｎＩｎｈｉｂｉｔｏｒｙＥｆｆｅｃｔｏｆＡｌｋａｌｏｉｄｓｏｆＤｉｆｆｅｒｅｎｔＭｅｄｉｃｉｎａｌＰａｒｔｓｆｒｏｍＭｏｒｕｓａｌｂａｏｎＡｃｔｉｖｉｔｉｅｓｏｆαＧｌｙｃｏｓｉｄａｓｅＬＩＭｉｎｇ ｊｉｅ，ＳＵＮＤａｉ ｈｕａ，ＷＡＮＧＺｅ ｘｉａ，ＨＵＨｕｉ，ＣＨＥＮＧＨｕａｎ ｂｏ，ＣＨＥＮＺｈｉ ｙｕａｎＪｉｎｇＢｒａｎｄＣｈｉｚｈｅｎｇｔａｎｇＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＣｏ ，Ｌｔｄ ，ＨｕｂｅｉＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅＦｏｒｍｕｌａＧｒａｎｕｌｅＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ＆ＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙＲｅｓｅａｒｃｈＣｅｎｔｅｒ，Ｈｕａｎｇｓｈｉ４３５１００，Ｃｈｉｎａ［Ａｂｓｔｒａｃｔ］　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：ＴｏｃｏｍｐａｒｅｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙｅｆｆｅｃｔｓｏｆａｌｋａｌｏｉｄｓｏｆｄｉｆｆｅｒｅｎｔｍｅｄｉｃｉｎａｌｐａｒｔｓｆｒｏｍＭｏｒｕｓａｌｂａ（ｌｅａｆ，ｒｏｏｔａｎｄｔｗｉｇ）ｏｎｔｈｅａｃｔｉｖｉｔｉｅｓｏｆα ｇｌｙｃｏｓｉｄａｓｅ Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｏｆ１ ｄｅｏｘｙｎｏｊｉｒｉｍｙｃｉｎ（ＤＮＪ）ｉｎｔｈｅｔｏｔａｌａｌｋａｌｏｉｄｓｉｎｄｉｆｆｅｒｅｎｔｍｅｄｉｃｉｎａｌｐａｒｔｓｆｒｏｍＭ ａｌｂａｗｅｒｅｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄｂｙｅｖａｐｏｒａｔｉｖｅｌｉｇｈｔｓｃａｔｔｅｒｉｎｇｄｅｔｅｃｔｏｒ（ＥＬＳＤ） ｈｉｇｈｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅｌｉｑｕｉｄｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ（ＨＰＬＣ）；Ｕｓｉｎｇｈａｌｆ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｖａｌｕｅ（ＩＣ５０）ａｓｅｖａｌｕａｔｉｏｎｉｎｄｅｘ，ａｃａｒｂｏｓｅａｓｐｏｓｉｔｉｖｅｃｏｎｔｒｏｌ，ｔｈｅｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙｅｆｆｅｃｔｓｏｆａｌｋａｌｏｉｄｓｏｆｄｉｆｆｅｒｅｎｔｐａｒｔｓｆｒｏｍＭ ａｌｂａｏｎｔｈｅａｃｔｉｖｉｔｉｅｓｏｆα ｇｌｙｃｏｓｉｄａｓｅｗｅｒｅｅｖａｌｕａｔｅｄｗｉｔｈｉｎｖｉｔｒｏｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎｍｏｄｅｌ Ｒｅｓｕｌｔｓ：ＴｈｅｍａｓｓｆｒａｃｔｉｏｎｏｆＤＮＪｉｎｔｏｔａｌａｌｋａｌｏｉｄｓｉｎｄｉｆｆｅｒｅｎｔｍｅｄｉｃｉｎａｌｐａｒｔｓｆｒｏｍＭ ａｌｂａｉｓＭｏｒｉＣｏｒｔｅｘａｌｋａｌｏｉｄ（３０ １％）＞ＭｏｒｉＦｏｌｉｕｍａｌｋａｌｏｉｄ（２５ ８％）＞ＭｏｒｉＲａｍｕｌｕｓａｌｋａｌｏｉｄ（２１ ４％） Ｉｎｔｈｅα ｇｌｕｃｏｓｉｄａｓｅｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙａｃｔｉｖｉｔｙｔｅｓｔ，ｔｈｅｏｒｄｅｒｏｆｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙａｃｔｉｖｉｔｙｗａｓＭｏｒｉＲａｍｕｌｕｓａｌｋａｌｏｉｄ＞ＭｏｒｉＦｏｌｉｕｍａｌｋａｌｏｉｄ＞ＭｏｒｉＣｏｒｔｅｘａｌｋａｌｏｉｄ＞ａｃａｒｂｏｓｅ Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：ＡｍｏｎｇｄｉｆｆｅｒｅｎｔｐａｒｔｓｏｆＭ ａｌｂａｓｕｃｈａｓＭｏｒｉＦｏｌｉｕｍ，ＭｏｒｉＣｏｒｔｅｘａｎｄＭｏｒｉＲａｍｕｌｕｓ，ＭｏｒｉＲａｍｕｌｕｓａｌｋａｌｏｉｄｓｈｏｗｓｔｈｅｓｔｒｏｎｇｅｓｔｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙｅｆｆｅｃｔｓｏｎｔｈｅａｃｔｉｖｉｔｉｅｓｏｆα ｇｌｕｃｏｓｉｄａｓｅ，ｗｈｉｃｈｈａｓｔｈｅｖａｌｕｅｏｆｂｅｉｎｇｄｅｖｅｌｏｐｅｄｆｏｒｔｈｅｔｒｅａｔｍｅｎｔｏｆｄｉａｂｅｔｅｓｏｒｈｅａｌｔｈｆｏｏｄ［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］　ＭｏｒｕｓａｌｂａＬ ；ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｍｅｄｉｃｉｎａｌｐａｒｔ；ａｌｋａｌｏｉｄｓ；１ ｄｅｏｘｙｎｏｊｉｒｉｍｙｃｉｎ；α ｇｌｙｃｏｓｉｄａｓｅ糖尿病已成为严重危害人类健康的公共卫生问题，而我国是糖尿病患病率增长较快的国家之一。