乙醇提取冷冻结晶去杂精制磷脂酰胆碱_张焱

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乙醇冷冻法纯化分离大豆磷脂酰胆碱研究

time，freezing temperature，solid–liquid ratio and alcohol concentration. The results indicated that the optimal conditions for ethanol freeze–purify were：freezing time 6 h，freezing temperature –12℃， solid–liquid ratio 1∶8 and alcohol concentration 97.5%. Moreover，a proof test w脂技术有限公司，其理化指标见表 1。
表 1 大豆粉末磷脂理化指标
酸价（mgKOH/g）
18
水分及可挥发物（%）
1.7
丙酮不溶物（%）
96.7
乙醚不溶物（%）
0.01
过氧化值（mmol/kg）
1.1
PC 含量（%）
22.8
1.2 试剂与仪器装置 1.2.1 试剂
磷脂酰胆碱标样：Sigma 公司；正己烷（色谱纯），异丙醇（色谱纯），95%乙醇，无水乙醇，氯仿，甲醇，丙酮，乙醚，碘化钾，氢氧化钾，硫代硫酸钠，韦氏试剂及常用指示剂：除说明外均为分析纯。 1.2.2 仪器装置
液比为 1 ∶ 6。
2.3.2 冷冻时间对纯化影响
按 1.3.4（2）方法，选用乙醇浓度为 95%，料液比
为 1 ∶ 8，冷冻温度 –17℃，分别选择冷冻时间 3 h、6 h、
12 h、24 h 进行实验，实验结果见图 4。
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乙醇冷冻提取法纯化磷脂酰胆碱_PC_的工艺研究_罗珍

China) A bstract:Thepurification ofphosphotidylcholine (PC)with alcoholsolution in frozen condition wasstudied. Theinfluenceofalcoholcontent,therationofm aterialtosolventandextractingtim eindifferentlevelswasperform ed by orthogonalplan and contentofPC wasdeterm ined by H PLC.The resultsshowed thatthe optim al condition forthepurificationofPC with alcoholsolution in frozen condition was1:3 of93 % alcoholsolution to thesam pleweightratio,and 8.5 h,and contentoftheobtained PC increased up to75 % ,which indicated that highcontentofPC couldbeachievedbythem ethodofextractingwithalcoholsolutioninfrozencondition. K ey w ords:phosphotidylcholine;extractingwith alcoholsolution in frozen condition;purify;orthogonalplan
图 2 表明,在同样条件下,PC 含量的变化与乙醇浓度并不呈正比, 当乙醇浓度超过 90 % 后 PC 含量反而有所降低,但下降趋势较缓,所以乙醇浓度在 90 % 左右时提取 PC 的效果较好 ,需采用正交试验对乙醇浓度进一步筛选。 3.1.3 料液比对乙醇冷冻提取的影响

丹参药渣中丹参酮IIA的分离纯化

108
大连工业大学学报
液进行 T L C 检测, 部分 T LC 检测结果, 如图 3 所示。
第 29 卷
图 4 高效液相色谱法检测丹参酮 ÒA 纯度
F ig . 4 Ex aminatio n t anshinone Ò A o n H P LC
3结论
丹 Ò A, 丹参酮 Ò A ; 次, 次甲丹参醌; 隐, 隐丹参酮标; 原, 丹参酮复合物; 1~ 35, 瓶号
高效液相色谱法: 高效液相色谱仪, 美国 Waters 2695- 2996 DAD; 色谱柱, H ypersil ODS2 ( 5 Lm , 150 m m @ 4. 6 mm ) ; 进样量, 10 LL ; 体积流量, 1. 0 m L/ min。流动相 A 为水, B 为甲醇。流动相比例如表 1 所示。
第 29 卷第 2 期 20 10 年 3月
大连工业大学学报
Journal of Dalian Polytechnic University
V ol. 29 N o. 2 Mar. 2 0 1 0
文章编号: 1674- 1404( 2010) 02- 0106- 03
丹参药渣中丹参酮 IIA 的分离纯化
1 材料和方法
1. 1 材料丹参酮 ÒA、次甲丹参醌、隐丹参酮标准品,
大连工业大学朱靖博教授提供, 纯度在 95% 以上; 硅胶, 青岛海洋化工厂生产; 薄层层析板 Silica Gel 60- F254 , 德国 M er ck 公司生产。
收稿日期: 2009-07-09. 基金项目: 辽宁省教育厅创新团队项目( 2007T 006) .
0 引言

冷冻结晶法纯化制备高纯度磷脂酰乙醇胺

冷冻结晶法纯化制备高纯度磷脂酰乙醇胺
沈晓华;曹栋
【期刊名称】《中国油脂》
【年(卷),期】2022(47)12
【摘要】为解决工厂低磷脂酰胆碱(PC)含量大豆粉末磷脂的积压问题,以及获得高纯度的磷脂酰乙醇胺(PE),以用碱性乙醇从低PC含量大豆粉末磷脂中提取的粗PE 产品为原料,通过冷冻结晶法纯化制备高纯度PE。

在单因素实验的基础上,以PE含量为指标,通过响应面实验对冷冻结晶纯化条件进行了优化。

结果表明,PE的最佳冷冻结晶纯化条件为:料液比1∶40,冷冻时间21.5 h,冷冻温度-25℃,乙醇体积分数94%,乙醇碱浓度为94%乙醇与25%氨水体积比100∶8。

在最佳条件下,产品PE 含量为76.56%,PE回收率为81.25%。

因此,冷冻结晶法纯化工艺可用于制备高纯度PE。

【总页数】5页(P141-145)
【作者】沈晓华;曹栋
【作者单位】江南大学食品学院
【正文语种】中文
【中图分类】TS229;O62
【相关文献】
1.冷冻溶剂结晶法分离纯化混合脂肪酸中的亚油酸
2.高速逆流色谱-重结晶法制备高纯度三尖杉宁碱和紫杉醇
3.二次双溶剂冷冻结晶法分离纯化橡胶籽油中α-亚麻
酸的研究4.层熔融结晶法制备高纯度磷酸5.超声辅助分步结晶法制备高纯度豆甾醇的工艺研究
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醇相体系制备高纯甘油磷脂酰胆碱的研究

醇相体系制备高纯甘油磷脂酰胆碱的研究张康逸;刘元法;周丽;钱祥云;王兴国【期刊名称】《中国粮油学报》【年(卷),期】2012(027)002【摘要】探讨了在醇相体系中甲醇钠催化制备甘油磷脂酰胆碱(L - alpha glycerylphosphorylcholine)的可行性,建立了磷脂酰胆碱(phosphatidylcholine)和L-α- GPC的HPLC - ELSD检测方法,研究了温度、料液比、甲醇钠添加量、反应时间对PC转化率和GPC得率的影响.利用Design Expert软件对工艺参数进行优化,得最佳条件:温度35℃、料液比3/20 (g/mL)、甲醇钠添加量2 mL、反应时间1.5h,GPC得率为88.2％.极差分析结果,反应条件对GPC得率影响的顺序为:甲醇钠添加量＞温度＞反应时间＞料液比.大豆粉末磷脂的醇解反应液经过硅胶柱色谱纯化,最终可以得到纯度为99.8％的L-α- GPC,回收率78.4％,这为工业级规模制备高纯L -α- GPC提供了一种好的思路和方法.【总页数】6页(P36-41)【作者】张康逸;刘元法;周丽;钱祥云;王兴国【作者单位】江南大学食品学院食品科学与技术国家重点实验室,无锡214122;江南大学食品学院食品科学与技术国家重点实验室,无锡214122;江南大学食品学院食品科学与技术国家重点实验室,无锡214122;常熟富士莱化工有限公司,苏州215558;江南大学食品学院食品科学与技术国家重点实验室,无锡214122【正文语种】中文【中图分类】TS229【相关文献】1.无水乙醇萃取联合氧化铝柱层析制备高纯磷脂酰胆碱 [J], 宋范范;张康逸;张薇薇;何梦影2.响应面法优化醇相体系制备高纯甘油磷脂酰肌醇的研究 [J], 张康逸;宋范范;张薇薇;何梦影;康志敏3.复合磷脂酶微乳体系非均相酶法制备甘油磷脂酰胆碱的研究 [J], 周雯君;张文喆;鹿保鑫4.复合磷脂酶水相体系酶法制备甘油磷脂酰胆碱的研究 [J], 张文喆;鹿保鑫5.Cu／γ-Al2O3的制备及其对纯甘油常压氢解制备1，2-丙二醇的催化性能 [J], 安华良;范立攀;耿艳楼;赵新强;王延吉因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

【CN110128467A】一种纯化甘油磷脂酰胆碱粗品的工艺方法及其得到的甘油磷脂酰胆碱【专利】

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910376147.3(22)申请日 2019.05.07(71)申请人天津康巢生物医药股份有限公司地址 300000 天津市北辰区天津医药医疗器械工业园四纬路一号（辰寰星谷孵化器内）(72)发明人刘振　杨海龙　(51)Int.Cl.C07F 9/09(2006.01)(54)发明名称一种纯化甘油磷脂酰胆碱粗品的工艺方法及其得到的甘油磷脂酰胆碱(57)摘要本发明公开了一种纯化甘油磷脂酰胆碱粗品的工艺方法，属于医药化合物精加工技术领域。

该工艺方法包括以下步骤：（a）将甘油磷脂酰胆碱粗品水溶液依次经两次溶剂萃取和脱色，得到溶液M1；（b）将溶液M1依次经脱盐和浓缩，得到浓缩物G；（c）将浓缩物G依次经溶解、结晶和干燥，得到甘油磷脂酰胆碱。

其技术方案要点是将甘油磷脂酰胆碱粗品水溶液经两次溶剂萃取去除残留的溶剂和反应原料，经脱色调节产品的颜色，经脱盐去除盐类杂质等纯化的工艺方法配合使用，具有明显减少产物的杂质含量，提高产物的纯度的优点。

本发明还公开了采用上述纯化方法制备得到的甘油磷脂酰胆碱。

权利要求书1页说明书5页CN 110128467 A 2019.08.16C N 110128467A1.一种纯化甘油磷脂酰胆碱粗品的工艺方法，其特征在于，所述工艺方法包括以下步骤：（a ）将甘油磷脂酰胆碱粗品水溶液依次经两次溶剂萃取和脱色，得到溶液M1；（b ）将溶液M1依次经脱盐和浓缩，得到浓缩物G；（c ）将浓缩物G依次经溶解、结晶和干燥，得到甘油磷脂酰胆碱。

2.根据权利要求1所述的工艺方法，其特征在于，所述步骤（a）中溶剂萃取采用的溶剂包括有机溶剂；所述有机溶剂包括丙酮。

3.根据权利要求1或2所述的工艺方法，其特征在于，所述步骤（a）中脱色工艺采用活性炭吸附；所述活性炭吸附的工艺条件包括：脱色温度40-50℃，脱色时间20-40min。

乙醇低温提取纯化磷脂酰胆碱研究

１．２．２磷脂酰胆碱提取方法
删
如
谣鹫
盐格
在一定低温条件下将大豆粉末磷脂原料３００ｇ溶于一定量乙醇溶剂中，进行搅拌萃取。萃取完成后进行过滤，得到含有磷脂酰胆碱滤液，将滤液进行减压蒸发，得到最终产品。选取提取温度、乙醇浓度、料液比和提取时间可能影响提取效果的因素进行单因素实验。考虑到工艺最终需要进行产业化验证，以制得磷脂酰胆碱纯度和得率作为评价指标。２结果与讨论２．１单因素实验２．１．１不同提取温度对纯度和得率影响以乙醇（９５％）为溶剂，在提取时间１６ｈ、液料比
时间／ｈ
图３提取时间对纯度影响
为８：１条件下，考察不同提取温度对磷脂酰胆碱纯度
和得率影响。由图１可知，随着提取温度降低，磷脂酰胆碱纯度逐渐升高，但是纯度升高趋势随温度降低趋缓。从图２可知，样品得率却随着温度降低，急剧下降。综合考虑纯度和得率要求，最终提取温度选择一ｌＯ℃ 为宜。
１．１．２主要试剂
磷脂酰胆碱标准品（纯度≥ ９９％）：美国Ｓｉｇｍａ公司；无水乙醇、９５％乙醇：分析纯，国药集团化学试剂有限公司；甲醇、冰醋酸、三乙胺、正己烷、异丙醇：
色谱纯，国药集团化学试剂有限公司。１．１．３实验原料
因素实验考察了提取温度、提取时间、乙醇浓度和料液比等因素在不同水平下对磷脂酰胆碱含量和得率影响。在综合考虑纯度和得率基础上，选取以乙醇（９５％）为溶剂，提取温度－１０ｑＣ、提取时间２０ｈ、液料比为８：ｌ条件下进行中试。中试产品磷脂酰胆碱的纯度为７１．７４％，得率为１３．４８％。

一种用树脂层析法从磷脂中分离纯化磷脂酰胆碱的方法[发明专利]

专利名称：一种用树脂层析法从磷脂中分离纯化磷脂酰胆碱的方法
专利类型：发明专利
发明人：刘元法,王兴国,金青哲,汪燕
申请号：CN200710021213.2
申请日：20070413
公开号：CN101033236A
公开日：
20070912
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：一种用树脂层析法从磷脂中分离纯化磷脂酰胆碱的方法，属于磷脂分离纯化技术领域。

本发明以醇溶磷脂为原料，配成浓度3－5mg/mL的醇溶磷脂的乙醇溶液，以1mL/min流速加入到
D113－IIIFC树脂层析柱中，再用95％乙醇以0.5－1mL/min的速度洗脱，收集洗脱液，蒸发浓缩除去溶剂，真空干燥得到淡黄色塑状体磷脂酰胆碱产品。

本发明提出了离子交换树脂分离磷脂酰胆碱的方法，而且离子交换树脂可再生重复使用，成本低、较适合大规模工业化制备等特点。

用本发明方法处理磷脂得到的产品，产品中磷脂酰胆碱(PC)含量为94.02％(wt％)，产品得率为80.74％。

申请人：江南大学
地址：214122 江苏省无锡市蠡湖大道1800号
国籍：CN
代理机构：无锡市大为专利商标事务所
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大豆磷脂酰胆碱的提取方法[发明专利]

专利名称：大豆磷脂酰胆碱的提取方法专利类型：发明专利
发明人：陈国安,杨盛荣,张显久,赵樾申请号：CN202111644058.6
申请日：20211230
公开号：CN114213452A
公开日：
20220322
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本申请涉及天然物质提取方法，具体公开了一种大豆磷脂酰胆碱的提取方法。

大豆磷脂酰胆碱的提取方法，包括混合溶剂提取：选取大豆磷脂粉添加至混合吸附剂中，所述混合吸附剂为饱和脂肪烃与乙腈的混合物，分离获得混合滤液；超声处理：将混合滤液超声处理2～10min，获得超声处理液；低温冷冻处理：将超声处理液降温至‑5～‑20℃并过滤分离,对滤液进行冷冻处理，获得冷冻处理液；沉淀离心：向冷冻处理液中添加吸附沉淀剂，搅拌并分离取沉淀物；真空干燥：使用丙酮与蒸馏水对沉淀物进行清洗，蒸发干燥得到大豆磷脂酰胆碱。

本申请的制备方法简便，能够适用于工业化生产，大豆磷脂酰胆碱的提取率和纯度高。

申请人：无锡江大百泰科技有限公司
地址：214000 江苏省无锡市新吴区锡贤路108号协丰园区13号标准厂房
国籍：CN
代理机构：北京维正专利代理有限公司
代理人：陈方
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含磷脂酰胆碱的中药制剂及其制备方法[发明专利]

专利名称：含磷脂酰胆碱的中药制剂及其制备方法专利类型：发明专利
发明人：张慈铭
申请号：CN201710436587.4
申请日：20170612
公开号：CN107334843A
公开日：
20171110
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明公开了一种含磷脂酰胆碱的中药制剂及其制备方法，其中，所述制备方法包括：1)将牛胰腺与乙醇混合后浸提，滤去滤渣，制得浸提物M1；2)向步骤1)中制得的浸提物M1中加入丙酮后振荡，而后静置，去除丙酮层，制得混合物M2；3)将步骤2)中制得的混合物M2顺次经过离子交换树脂和硅胶柱洗脱，制得含有磷脂酰丝氨酸的初产物M3；4)将金银花、荷叶、陈皮、党参和当归混合后加水煎煮，得到煎煮液；5)将初产物M3和煎煮液混合，制得含磷脂酰胆碱的中药制剂。

通过上述设计，实现了具有较好的口感，且适宜于日常食用，大大提高受众范围的效果。

申请人：芜湖福民生物药业股份有限公司
地址：241000 安徽省芜湖市弋江区星火工业园3号厂房
国籍：CN
代理机构：北京润平知识产权代理有限公司
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一种由大豆粉末磷脂提取高含量磷脂酰胆碱的方法[发明专利]

(10)申请公布号 (43)申请公布日 2014.12.24C N 104230982A (21)申请号 201410528053.0(22)申请日 2014.10.09C07F 9/10(2006.01)(71)申请人陕西源邦生物技术有限公司地址710000 陕西省西安市莲湖区高新二路一号(72)发明人祝木林赵江李艳张永利寇玉锋(54)发明名称一种由大豆粉末磷脂提取高含量磷脂酰胆碱的方法(57)摘要本发明涉及磷脂酰胆碱提取技术领域，具体公开了一种由大豆粉末磷脂提取高含量磷脂酰胆碱的方法，主要包括提取、过滤、层析纯化、浓缩干燥。

本发明优点是，操作工艺简单，收率较高，且产品含量在90％以上，同时克服现有技术存在的污染环境、安全性差和工业化生产成本高的问题。

(51)Int.Cl.权利要求书1页说明书3页附图1页(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请权利要求书1页说明书3页附图1页(10)申请公布号CN 104230982 A1.一种由大豆粉末磷脂提取高含量磷脂酰胆碱的方法，其特征在于，主要包括以下步骤：(1)提取：以大豆粉末磷脂为原料，有机溶剂对其进行分散提取，操作温度30℃-70℃，有机溶剂体积浓度为70％-95％，提取2-5小时，收集提取液；其中有机溶剂的倍量为大豆粉末磷脂重量的5倍-20倍；(2)过滤：将提取液不溶物过滤，固体不溶物作为副产物收集，滤液待使用；(3)层析纯化：将滤液经色谱柱纯化，用浓度70％-95％的有机溶剂洗脱，洗脱溶剂倍量为大豆粉末磷脂重量的5倍-10倍，收集洗脱液；(4)浓缩干燥：在40℃-80℃下真空浓缩洗脱液并干燥，得到高含量磷脂酰胆碱产品。

一种由大豆粉末磷脂提取高含量磷脂酰胆碱的方法技术领域[0001] 本发明涉及磷脂酰胆碱提取技术领域，特别是指一种由大豆粉末磷脂提取高含量磷脂酰胆碱的方法。

背景技术[0002] 磷脂酰胆碱(PhosphatidylCholine；PC)的化学名称为1,2-二脂酰基-Sn-甘油-3-磷酸胆碱，是动植物细胞的必需组分，富含于神经组织，特别是髓鞘和蛋黄中，是动物细胞膜中含量最丰富的磷脂。

一种新型甘油磷脂酰胆碱的制备方法[发明专利]

专利名称：一种新型甘油磷脂酰胆碱的制备方法专利类型：发明专利
发明人：张欣
申请号：CN201710996181.1
申请日：20171023
公开号：CN109694385A
公开日：
20190430
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：一种新型甘油磷脂酰胆碱的制备方法，属于天然药物分离纯化技术领域。

步骤：先用酸液对大孔型阳离子交换树脂浸泡，放尽酸液并用水冲洗，再用碱液浸泡，用水冲洗，再用酸液浸泡，用去离子水冲洗，再用低碳醇置换；将磷酸甘油酯加入低碳醇中，加碱反应后抽滤，用低碳醇洗涤，调pH至弱碱性，减压浓缩并冷却后转入分液漏斗中，静置，分出下层低碳醇相；将磷酸甘油酯与酚醛树脂装柱，将醇解混合液上柱吸附，用低碳醇洗涤树脂除杂，用纯水对树指洗脱；用脱色剂脱色，经减压浓缩，得到成品。

优点：工艺步骤简短，满足工业化生产要求；节约资源，降低成本；得到成品的总收率达65.47‑86.08％、外标含量达99％以上，光学纯度达99％。

申请人：张欣
地址：710000 陕西省西安市雁塔区长安南路439号3231号
国籍：CN
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或少的存在一些问题 ,例如: 单纯采用溶剂提取法最终产品的纯度不是很高 (溶剂提取法的纯度一般为 50% 左右 ) ; 金属离子沉淀法在精制过程中引入了金属离子 , 金属离子会加速磷脂的氧化 ;超临界萃取法由于对设备和操作要求很高 ,且生产成本较高于其他的精制方法 , 所以还无法实现大规模的生产 ; 柱层析法由于工艺复杂 ,处理量十分有限 ,而且要用到许多有一定毒性的有机溶剂 ,重现性较差 ,现在仅仅在制备少量高纯度的磷脂产品中使用 ,没有实现大规模的工业化生产。其他精制磷脂酰胆碱的方法还有乙酰化法、膜分离法也都存在着工艺条件不成熟 ,成本较高 ,操作复杂等制约条件 ,不利于开展大规模的工业化生产。近期 ,罗珍等初步研究了乙醇冷冻提取法纯化磷脂酰胆碱的工艺 [19 ] ,但是不完善 ,没有阐明所用工艺的原理和工艺路线。鉴于磷脂酰胆碱的应用前景和我国丰富的大豆资源以及工业生产的实际需要 ,对精制磷脂酰胆碱工艺的研究 ,有极大的现实意义和实用价值。本研究采用乙醇提取和冷冻结晶去杂的方法进行精制 , 并结合响应面分析法 ( Response Surface Regressi on)进行试验设计 ,通过对响应面的等值线分析推测出精制磷脂酰胆碱的最优工艺参数。在此基础之上 ,进行中试实验 ,以检验此工艺的可行性。
1 材料与方法
1. 1 试验材料和仪器 1. 1. 1 主要试验仪器
RE52-98 旋转蒸发器 ( 上海亚荣生化仪器厂 ) ;
22 4
农业工程学报
20 07 年
L C-10A TV P型高效液相色谱仪 ( SPD-10AVV P紫外检测器 , Shimadzu Co. , Japan) ; DFY-5 /30低温恒温反应槽 (巩义市英峪予华仪器厂 ) ; PHS-25型酸度计 (上海雷磁仪器厂 ) ; FA-2004N 型电子分析天平 (上海精密科学仪器有限公司 )。 1. 1. 2 主要试剂
图 1 冷冻温度对纯度的影响 Fig. 1 Effect of fr eezing tempera ture o n purity
2. 1. 2 溶液的 p H值对纯度的影响以乙醇 ( 95% )为溶剂 ,在冷冻温度 - 20℃、冷冻时
间为 24 h、液料比为 8∶ 1条件下 ,调节溶剂的 pH值进行试验。当 pH值低于 7时 ,磷脂中的磷脂酰肌醇 ,磷脂酸、磷脂酰丝氨酸大多数以阴离子形式存在。而磷脂酰
张焱 ,高文远 ,谷克仁 ,等 .乙醇提取冷冻结晶去杂精制磷脂酰胆碱 [ J].农业工程学报 , 2007, 23( 3): 223- 227. Zhang Yan, Ga o Weny ua n, Gu Ker en, et a l. Phospholipids purifica tio n with alcohol so lutio n and r emov al impurity by r efrig era ting c rystal [ J]. T ransactio ns o f the CSA E, 2007, 23( 3): 223- 227. ( in Chinese with English abstract )
采用美国油脂化学家学会推荐的高效液相的方
法。 [20 ] 色谱柱: Li Chrosorb Si-60( 4. 6 mm× 250 mm , 5μm ) ; 流动相: 正己烷、异丙醇、醋酸缓冲液 ( 73. 5 m L 0. 2 mol / L的醋酸溶液和 26. 5 m L 0. 2 mo l / L 的醋酸钠溶液混合 ,调节 pH值到达 p H 4. 2)体积比为 8∶ 8∶ 1; 检测波长 206 nm;流速 2 m L /min; 进样量 20μL。柱温 40℃。 1. 2. 2 冷冻结晶溶剂的选择
第 23卷第 3期
2 00 7年
3月
农业工程学报 Tr ansactions of the CSAE
V ol. 23 N o. 3 M ar. 2007 223
乙醇提取冷冻结晶去杂精制磷脂酰胆碱
张焱 1 , 高文远 1※ , 谷克仁2 , 陈海霞1
( 1.天津大学药物科学与技术学院 ,天津 300072; 2.河南工业大学化学化工学院 ,郑州 450052)
在冷冻温度 - 20℃、冷冻时间为 24 h、液料比为 8∶ 1条件下 ,参考文献 [7 ]选择常用的乙醇 ( 95% )和甲醇作为溶剂 ,进行结晶试验 ,结果显示乙醇 ( 95% )为溶剂时得到的磷脂酰胆碱的纯度 ( 68. 9% )高于甲醇为溶剂时得到的磷脂酰胆碱的纯度 ( 64. 7% ) ,又考虑到甲醇具有毒性 ,故选择乙醇 ( 95% )作为溶剂。 1. 2. 3 精制方法和工艺路线
磷脂酰胆碱标准品 (纯度 ≥ 98% , 美国 sigma 公司 ) ; 无水乙醇、乙醇 ( 95% )、磷酸、醋酸钠、正己烷等试剂均为分析纯 ,异丙醇为色谱纯。 1. 1. 3 试验原料
大豆粉末磷脂 (黑龙江省建三江农垦油脂有限责任公司 )。为浅黄色粉末 ,丙酮不溶物≥ 98% ; 水份及挥发物≤ 1. 0% ; 乙醚不溶物≤ 0. 1% ; 酸价≤ 30 mg /g , 以 KO H 计 ; 过氧化值 ≤ 3 mmo l /kg; 磷脂酰胆碱含量 24. 6% 。 1. 2 试验方法 1. 2. 1 磷脂酰胆碱的测定方法
度、液料比 5个可能影响提取效果的因素做单因素试验 ,以确定相关因素及各因素的合适范围。 1. 2. 5 响应面试验
根据单因素试验结果 ,对磷脂酰胆碱纯度影响较大的因素采用正交设计试验 ,做冷冻温度、冷冻时间、料液比 3因素共 15个试验点 ( 5个中心点 )的响应面分析试验 , 运用 SASRSREG( Response surf ace reg ressi on)程序对 15个试验点的响应值进行回归分析。对最终结果进行评定 ,推测出最佳工艺参数和得到产品的纯度。
磷脂酰胆碱的应用范围非常广泛 ,近几年磷脂酰胆碱特别是高纯度的磷脂酰胆碱的市场需求急剧扩大 ,研究一种适合中国现状的生产工艺有极高的应用价值。目前常用的精制磷脂酰胆碱的方法有溶剂提取法 [5- 7 ] ,金属离子沉淀法 [8, 9 ] , 超临界萃取法 [10- 12 ] , 柱层析法 [13- 15 ] ,乙酰化法 [ 16]、膜分离法 [17, 18 ]等等。但是都或多
第 3期
张焱等: 乙醇提取冷冻结晶去杂精制磷脂酰胆碱
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胆碱和磷脂酰乙醇胺无论在碱性还是酸性条件下都呈两性状态。当温度降低时 ,磷脂酰肌醇 ,磷脂酸、磷脂酰丝氨酸以晶体的方式析出 ,从而使磷脂酰胆碱得到精制。而理论上讲 ,当溶液呈酸性时 ,因为磷脂中的磷脂酰肌醇 ,磷脂酸、磷脂酰丝氨酸以阴离子形式和氢离子结合 ,达到静电平衡 ,从而使结晶时的静电排斥达到最小 , 有利于结晶的生成。由图 2可以看出当 p H值降低时时 ,磷脂酰胆碱的纯度有所提高 ,但是幅度不大 ,当溶液的 pH值达到 3时 ,在回收溶剂过程中 ,磷脂发生分解 , 颜色变成深褐色。且由于产品中加入了酸 ,导致产品酸值过大 ,最终产品不易保存、易氧化酸败。故在生产中不考虑降低溶剂 p H值以提高磷脂酰胆碱的纯度。
2 结果与讨论
2. 1 单因素试验 2. 1. 1 冷冻温度对纯度的影响
以乙醇 ( 95% )为溶剂 ,在冷冻时间 24 h、液料比为 8∶ 1 ,溶剂的 p H值为初始值的条件下 ,选取不同的冷冻温度进行试验。由图 1可以看出 ,随着结晶温度的降低 ,磷脂酰胆碱的纯度逐渐升高 ,但是纯度升高的趋势随着温度的降低趋缓。考虑到实际生产中因降低温度增加的能耗 ,最低冷冻温度的选择为 - 20℃。
收稿日期: 2006-06-28 修订日期: 2007-01-07 基金项目: 河南省重点科技攻关项目 ( 001060004) 作者简介: 张焱 ( 1979- ) ,男 ,山东茌平人 ,博士生 , 主要从事天然产物化学与保健功能方面的研究。天津天津大学药物科学与技术学院 , 300072。 Email: cpzyyan@ hot mai l. com ※通讯作者: 高文远 ( 1965- ) , 男 , 教授 ,博士生导师 , 主要从事中药以及天然产物方面的研究。天津天津大学药物科学与技术学院天然药物学系 , 300072。 Em ail: ph armgao@ tju. edu. cn
本试验采用乙醇提取和低温结晶去杂相结合的方法 ,即利用在低温条件下非磷脂酰胆碱成分易结晶析出的方法对磷脂酰胆碱进行精制 ,以最终制得的磷脂酰胆碱的纯度为评价指标 , (本试验的目的是为了得到更高纯度的磷脂酰胆碱 ,所以在结果评定中 ,磷脂酰胆碱纯度所占的权重大 ,而得率所占的权重小 ,因为变化不是很大 (在单因素试验中 ,磷脂酰胆碱的最大和最小得率相差在 10% 范围内 ) ,所以得率和得率权重的乘积所占的比例在整个评价指标中所占的比例很小。又因为在试验中 ,经过冷冻得到的晶体 (虽然含有少量磷脂酰胆碱成分 )还可以再次用来精制。所以为了最终计算方便且更能直观地说明问题 ,在结果评定中仅以磷脂酰胆碱的纯度作为指标 )评定试验效果 ,确定最优条件。
摘要: 该文研究了在低温条件下 ,用乙醇作为溶剂 ,通过冷冻结晶去杂 ,从粗制大豆磷脂中精制磷脂酰胆碱的方法。通过单因素试验确定了影响磷脂酰胆碱纯度的相关因素。用响应面试验对精制条件进行了优化 ,结果表明冷冻时间、冷冻温度、液料比都对磷脂酰胆碱的纯度产生一定的影响。其中冷冻时间 ,冷冻温度的影响最为显著。经响应面分析优化得到了最佳工艺条件为: 温度为 - 20℃、冷冻时间为 23. 56 h、液料比为 8. 73∶ 1 ( V /m )。在此条件下得到磷脂酰胆碱的预测纯度为 70. 73% 。经过验证实验和高效液相法检测 ,实测在此条件下: 磷脂酰胆碱的纯度为 70. 1% ,得率为 23. 0% 。中试结果为: 磷脂酰胆碱的纯度为 68. 8% ,得率为 22. 7% 。表明此方法简单可行 ,适宜于工业化生产。关键词: 结晶 ; 磷脂酰胆碱 ; 响应面试验中图分类号: T S201. 1 文献标识码: A 文章编号: 1002-6819( 2007) 3-0223-05