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1942018 年第 5 卷第 27 期2018 Vol.5 No.27临床医药文献杂志Journal of Clinical Medical黄芪多糖的免疫调节与治疗糖尿病的研究李彦泽（山西大同大学医学院14级检验一班，山西 大同 037000）【摘要】黄芪多糖（Astraglus polysaccharide ，APS ）是从中药黄芪中提取出来的多糖，因其具有免疫调节、抗肿瘤、抗病毒、调节血糖等生物活性，日益受到医药界的广泛关注，本文对其免疫调节和血糖调节两方面的研究现状做一综述，旨在为黄芪多糖的临床应用及未来的进一步研究开发提供依据和参考。
【关键词】黄芪多糖；免疫调节；调节血糖【中图分类号】R587.1 【文献标识码】A 【文章编号】ISSN.2095-8242.2018.27.194.02黄芪为豆科植物蒙古黄芪或膜荚黄芪的根，本品含有多糖、黄酮、皂苷、氨基酸和微量元素等。
其中的有效成分黄芪多糖因有增强和调节免疫，对干扰素系统有促进作用，能显著提高机体抗病力；对流感病毒等多种病毒所致的细胞病变的抑制作用；抗肿瘤作用；对血糖的双向调节等作用，因此多年来成为国内外医药工作者关注和研究的焦点之一。
1 黄芪多糖的免疫调节作用1.1 黄芪多糖激活NK 细胞NK 细胞依靠自身表面的受体识别被病毒感染细胞表面的的相应配体，以及肿瘤细胞表面的抗原，在病毒感染和肿瘤免疫方面起着重要的作用。
实验证明[1]，APS 能提高小鼠外周血中NK 细胞的活性。
1.2 黄芪多糖激活M Ф细胞单核细胞分布在血液中，随血液循环移行至组织中定位并分化成熟即为M Ф，因胞内含有溶酶体，能杀伤胞内病原体，发挥强大的吞噬功能。
M Ф也能清除体内的凋亡细胞和异物。
是机体非特异性免疫中重要的效应细胞。
APS 可与M Ф表面的多糖受体结合，参与M Ф的激活[2]。
1.3 黄芪多糖活化B 淋巴细胞和T 淋巴细胞在免疫反应过程中，体液免疫是由B 淋巴细胞介导；细胞免疫是由T 淋巴细胞介导。
黄芪对糖尿病足溃疡处成纤维细胞透明质酸合成酶ｍＲＮＡ及透明质酸的影响摘要目的：探讨黄芪对糖尿病足溃疡处成纤维细胞透明质酸合酶mRNA 及透明质酸的影响。
方法：用含／未含黄芪的培养液培养糖尿病足溃疡处成纤维细胞，RT—PCR检测透明质酸合酶mRNA表达，放免法检测培养上清液中透明质酸含量。
结果：用含黄芪的培养液培养的糖尿病足溃疡处成纤维细胞透明质酸合酶mRN表达及培养上清液中透明质酸含量高于未含黄芪的培养液培养的细胞，且差异有统计学意义(P＜0．05)。
结论：黄芪能上调糖尿病足溃疡处成纤维细胞透明质酸合酶mRNA表达和促进透明质酸的合成。
关键词黄芪糖尿病足成纤维细胞透明质酸合酶透明质酸正常伤口的修复包括炎症、增生和修复三个阶段，在伤口愈合过程中，稳定细胞和不稳定细胞都具有完全的再生能力，但能否重新构建为正常结构尚依赖细胞外基质，透明质酸作为细胞外基质的主要成分，主要由成纤维细胞分泌[1]；本实验体外用黄芪作用糖尿病足溃疡处成纤维细胞，通过检测成纤维细胞透明质酸合酶mRNA表达及透明质酸的分泌量，旨在探讨黄芪对糖尿病足溃疡处成纤维细胞功能的影响。
1材料和方法1．1 材料与主要试剂黄芪注射液(成都地奥公司)，TRizolReagent Total RNA lsolation Reagent(GiBco公司)，cDNA第一链合成Kit(上海生物工程公司)、dNTP、Tag DNA聚合酶、引物合成(上海生物工程公司)，DE-PC、DNA marker(华美生物公司)，胎牛血清(四季清公司)，异丙醇等常用化学试剂(Sigma公司或国产分析纯)；透明质酸放射免疫检测试剂盒(上海海研所)。
透明质酸合酶引物正／负链序列：5’AAACCGCTCGAA—CAAGTC3和5’AACCCTGALGC-CAATCAAA3’，GAPDH引物正／负链序列：5’TGCTTTCCGTCG—TATCCA3’和5’CACCGTCAGTAGC—CCAGT3’，扩增片段大小分别为175和221 bp。
黄芪多糖对糖尿病足溃疡渗出液成纤维细胞MMP-2、MMP-9表达的影响张正军;肖正华;陈定宇;周倩;黄春苓;何凌;徐琳【期刊名称】《中国糖尿病杂志》【年(卷),期】2007(15)4【摘要】糖尿病足溃疡渗出液中的IL-1p显著高于急性伤口,50μg/L IL-1β显著增加足溃疡渗出液中成纤维细胞MMP-2、MMP-9的活性及其蛋白表达,100 mg/L 黄芪多糖可降低MMP-2、MMP-9活性及其蛋白的表达,也可降低50μg/L IL-1p 所致的MMP-2、MMP-9高活性及其蛋白高表达.【总页数】2页(P202-203)【作者】张正军;肖正华;陈定宇;周倩;黄春苓;何凌;徐琳【作者单位】山东省济宁医学院附属医院;510180,广州市第一人民医院内分泌科;510180,广州市第一人民医院内分泌科;510180,广州市第一人民医院内分泌科;510180,广州市第一人民医院内分泌科;510180,广州市第一人民医院内分泌科;510180,广州市第一人民医院内分泌科【正文语种】中文【中图分类】R2【相关文献】1.AcSDKP对大鼠心成纤维细胞MMP-2、MMP-9活性和MMP-1表达的影响[J], 王丽平;朱曦龄;杨方;王瑞敏;李治国;王献华;孙树勋2.秋水仙碱对人瘢痕疙瘩成纤维细胞MMP-1、MMP-2及MMP-9表达的影响[J], 杜航航;张恒术3.MEBO对糖尿病溃疡大鼠创面组织中MMP-9、MMP-2、TIMP-1、TIMP-2动态表达的影响 [J], 李杰辉;卢维;刘雪琴;陈壮丽4.黄芪多糖通过AGE—RAGE途径促进糖尿病足溃疡中成纤维细胞增殖研究 [J], 邓来明;陈定宇;肖正华5.黄芪多糖对糖尿病足溃疡成纤维细胞胶原合成的影响 [J], 周倩;王燕;肖正华;陈定宇因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
治疗后明显下降（P＜0．05）；FFA下降（P＜0．001）。
治疗后CRP及FFA与对照组相比差异无统计学意义。
见表3。
（4）治疗后PAI－1明显下降（P＜0．0001），t－PA明显上升（P＜0．05）。
与对照组相比，治疗组治疗后的PAI－1及t －PA水平与对照组比较无统计学差异。
见表3。
表1治疗前后一般状况（珔xʃs）组别例（n）年龄（岁）BMI（kg/m2）腰围（cm）WHR对照组3043．40ʃ7．6023．40ʃ2．1080．70ʃ6．850．85ʃ0．05治疗组治疗前3946．38ʃ5．2527．45ʃ2．11*97．26ʃ5．91*0．94ʃ0．07*治疗后3946．38ʃ5．2525．66ʃ2．71▲92．64ʃ5．29▲▲0．91ʃ0．03▼注：与对照组比较*P＜0．0001；治疗前后比较▲P＜0．01，▲▲P＜0．001，▼P＜0．05。
表2治疗前后血糖、甘油三酯、HOMA－IR、变化（珔xʃs）组别例（n）FBG（mmol/L）TG（mmol/L）HOMA－IR对照组304．95ʃ0．481．12ʃ0．331．62ʃ1．44治疗组治疗前395．12ʃ0．401．36ʃ0．38*2．59ʃ0．84＊＊治疗后394．88ʃ0．38▲1．30ʃ0．331．87ʃ0．64▼注：与对照组比较*P＜0．01，＊＊P＜0．001；治疗前后比较▲P＜0．001▼P＜0．0001。
表3治疗前后CRP、FFA、PAI－1及t－PA变化（珔xʃs）组别例（n）CRP（mg/L）FFA（mmol/L）PAI－1（μg/L）t－PA（μg/L）对照组302．76ʃ2．180．48ʃ0．2623．70ʃ9．1021．83ʃ9．07治疗组治疗前393．97ʃ2．66*0．68ʃ0．33＊＊34．29ʃ10．55﹟16．66ʃ6．97＊＊治疗后392．81ʃ1．38▲0．46ʃ0．21▲▲23．44ʃ8．98▼20．48ʃ7．03▲注：与对照组比较*P＜0．05＊＊，P＜0．01﹟P＜0．0001；治疗前后比较▲P＜0．05，▲▲P＜0．001，▼P＜0．0001。
黄芪多糖对糖尿病足部溃疡部位成纤维细胞增殖功能的促进作用目的探讨黄芪多糖对糖尿病足部溃疡成纤维细胞增殖功能的影响。
方法选择糖尿病足部溃疡患者15例，取患者创面边缘全厚皮片，分离、培养、传代成纤维细胞。
比较不同浓度黄芪多糖对成纤维细胞增殖功能的影响。
结果各组间吸光度A值比较差异有显著统计学意义（F=21.357，P＜0.01），其中100μg/mL 组和500μg/mL组显著高于对照组，而500μg/mL组又显著高于100μg/mL组（t=3.926、7.254、4.359，P均＜0.01）。
结论黄芪多糖能够促进糖尿病足部溃疡成纤维细胞的增殖，并且随着浓度的增加，促进作用越强。
[Abstract] Objective To discuss effect of astragalus polysaccharide on proliferation of fibroblast at diabetic foot ulceration. Methods Fifteen cases with diabetic foot ulceration were selected. Full thick skin graft at edge of ulcer were cut to separate，foster and passage fibroblast. Effects of different concentration of astragalus polysaccharide on proliferation of fibroblast were compared. Results Absorbance of four groups had significant difference（F=21.357，P＜0.01）. Absorbancea of group of 100μg/mL and group of 500μg/mL were higher than control group，and that of group of 500μg/mL was higher than group of 100μg/mL（t=3.926，7.254，4.359，P all ＜0.01）. Conclusion Astragalus polysaccharide can improve roliferation of fibroblast at diabetic foot ulceration，and the effect increase with concentration of astragalus polysaccharide increasing.[Key words] Astragalus polysaccharide；Diabetic；Ulceration；Fibroblast 糖尿病足主要指初期的糖尿病患者在没有出现周围神经病变和周围血管病变前已经出现足部感染、化脓、溃烂等症状。
·论著·糖尿病足溃疡（DFUs）是糖尿病较严重并发症之一。
成纤维细胞（Fb）是创面愈合过程中的主体细胞，其生物学效应在创面修复中起着至关重要的作用。
黄芪多糖（APS）应用于糖尿病足部慢性溃疡的治疗，能在一定程度上提高溃疡的治愈率，降低截肢率和死亡率，但其详细机制不详［1］。
本研究观察APS对体外培养的糖尿病足溃疡Fb 增殖和胶原合成的影响，并探讨其可能作用机制。
1材料与方法1．1研究对象与分组经知情同意的糖尿病足病截肢患者10例，男6例，女4例，年龄（57±8．2）岁，均符合1999年WHO糖尿病诊断标准，糖尿病病程为（5．9±1．5）年，糖尿病足溃疡病程（5．8±0．8）周，FPG（9．4±1．6）mmol／L，2hPG（14．2±2．4）mmol／L，HbA1c（9．1±1．0）％，踝肱比（ABI）0．8±0．2。
对照组10例，取自年龄、性别等相匹配的非糖尿病外伤及骨科手术患者，无系统性硬化、肾病等疾病。
取皮肤Fb培养后分为6组：①对照组；②DFUs组；③DFUs加10μg／mL APS （哈尔滨生物制品一厂，批号0809054，每10mL含APS0．1g）；④DFUs加40μg／mL APS；⑤DFUs加160μg／mL APS；⑥DFUs加640μg／mL APS。
1．2研究方法1．2．1Fb的培养及鉴定将手术中切下的标本在无菌条件下去除表皮后用含有青霉素（100U／mL）和链霉素（100U／mL）的PBS反复漂洗，去除皮下脂肪组织，将组织块剪成0．5～1．0mm3大小碎块，采用组织块贴壁法置37℃、5％CO2条件下原代培养。
培养基为DMEM高糖培养基，含10％胎牛血清、青霉素（100U／mL）和链霉素（100U／黄芪多糖对糖尿病足溃疡成纤维细胞胶原合成的影响周倩，王燕，肖正华，陈定宇（广州市第一人民医院内分泌科，广东广州510180）【摘要】目的研究黄芪多糖（Astragalus Polysaccharides，APS）对糖尿病足溃疡（diabetic foot ulcers，DFUs）成纤维细胞（fibroblasts，Fb）增殖和胶原合成的影响，并探讨其与溃疡愈合的关系。
方法取非糖尿病创面及糖尿病足溃疡皮肤进行Fb培养后，分为对照组、DFUs组及APS（10、40、160、640μg／mL）组，观察Fb增殖及胶原合成的变化。
结果与对照组相比，糖尿病足溃疡处Fb增殖、胶原合成能力减退；APS在10～160μg／mL浓度范围内可促进体外培养的糖尿病足溃疡Fb增殖，增加胶原合成，且呈量效、时效依赖关系；过高浓度（≥640μg／mL）的APS对Fb增殖、胶原合成产生抑制作用。
结论在一定浓度范围内APS促进糖尿病足溃疡Fb增殖和胶原合成，过高浓度APS则产生抑制效应。
【关键词】黄芪多糖；糖尿病足溃疡；成纤维细胞；细胞增殖；胶原合成The influence of Astragalus Polysaccharides on collagen synthesis of fibroblasts from diabetic foot ulcers ZHOU Qian，WANG Yan，XIAO Zheng-hua，CHEN Ding-yu．Department of Endocrinology，Guangzhou First Municipal People’s Hospital，Guangzhou510180，China【Abstract】Objective To investigate the influence of Astragalus Polysaccharides（APS）on the proliferation and collagen synthesis of fibroblasts from diabetic foot ulcers（DFUs）．Methods Fibroblasts were isolated and cultured in vitro，and then exposed to different consistencies of APS（10，40，160，640μg／mL）respectively．The proliferation of fibroblasts was determined by MTT and the collagen synthesis was measured with the method of hydroxyproline．Results Compared with control group，the proliferation and collagen synthesis of fibroblasts derived from DFUs decreased．APS（10－160μg／mL）groups could promote it in a time-dose manner．APS640μg／mL groups could inhibit it．Conclusion APS could promote the proliferation and collagen synthesis of fibroblasts from DFUs within a certain range of consistencies，over-high consistency of APS might inhibit it．【Key words】Astragalus Polysaccharides；Diabetic foot ulcers；Fibroblasts；Proliferation；Collagen synthesis基金项目：广州市科技局应用基础研究项目（2006J1-CO261）通信作者：肖正华，E-mail：xzh2998＠126．commL）。
待组织块贴壁后，更换培养液，当细胞生长至基本融合时用0．25％胰蛋白酶消化，以1∶2比例传代。
在倒置显微镜下观察，经免疫组化抗波形蛋白和抗角蛋白染色，证实为成纤维细胞，4～6代细胞用于实验。
1．2．2Fb增殖能力的检测采用MTT比色法进行。
取对数生长期的细胞用0．25％胰酶消化，用含10％FCS的DMEM培养液制成细胞悬液，接种到96孔板中，每个孔5×104个细胞，每孔体积200μL。
每板分6组，按上述方法分组。
每个浓度3个复孔，共制作5块培养板，分别于培养后的1、3、5、7、9d取出1块，每孔加入MTT（5mg／mL）20μL，继续培养4h，弃去孔内培养液。
每孔加入100μL 的DMSO，轻轻震荡10min使结晶充分溶解。
用酶标仪在波长490nm下测定各孔吸光度A值。
1．2．3将细胞制成细胞悬液以5×104细胞／mL 浓度接种于96孔板，每孔加入1mL培养基，接种48h后按实验药物分组（如上MTT法）更换条件培养液，每一药物浓度组设计3个复孔。
分别在培养的第1、3、5、7、9天吸取上清液0．5mL，用常规氯铵T法测羟脯氨酸含量。
具体操作按羟脯氨酸（HPr）检测试剂盒说明书，检测液在加入试剂1、2、3后混匀，60℃水浴15min，冷却后取550 nm、1cm光径比色。
样品中HPr的质量浓度（μg／ml）＝（（测定管A 值－空白管A值）／（标准液A值－空白管A值）×标准管质量浓度（2μg／mL）样品中胶原的浓度（μg／mL培养基）＝样品中羟脯氨酸浓度×7．46×稀释倍数（7．46是从羟脯氨酸换算为胶原时的计算常数）1．2．4统计学分析采用SPSS11．0统计包进行统计学分析。
所有数据均采用x±s表示，组间计量资料比较采用单因素方差分析，两两比较采用LSD检验，P＜0．05为差异有统计学意义。
2结果2．1APS对糖尿病足溃疡Fb增殖的影响DFUs组培养3d，A值开始逐渐增加，9d达高峰。
APS10～160μg／mL组变化规律与DFUs组基本一致，但A值高于DFUs组，且呈现明显的量效、时效依赖关系，培养5～9d与DFUs组比较，差异有统计学意义（P＜0．01）；APS640μg／mL组培养3～9d A值较DFUs组明显下降，差异有统计学意义（P＜0．01）；对照组培养3～9d，A值高于APS160μg／mL组，差异有统计学意义（P＜0．01，表1）。
对照组DFUsDFUs加APS（10μg／mL）DFUs加APS（40μg／mL）DFUs加APS（160μg／mL）DFUs加APS（640μg／mL）1010101010101d0．150±0．0060．146±0．0090．148±0．0090．150±0．0100．148±0．0080．140±0．0113d0．281±0．0090．204±0．0060．218±0．0100．224±0．0120．250±0．011＃0．131±0．008*5d0．422±0．0230．283±0．0130．321±0．017*0．344±0．015*0．385±0．021*＃0．122±0．006*7d0．671±0．0420．352±0．0180．464±0．027*0．496±0．031*0．583±0．028*＃0．100±0．005*9d0．800±0．0490．381±0．0200．541±0．032*0．563±0．026*0．662±0．043*＃0．083±0．005*A490nm值例数表1APS对各组成纤维细胞增殖作用的量效关系（x±s）*与DFUs组相比，P＜0．01；＃与对照组相比，P＜0．012．2APS对糖尿病足溃疡Fb胶原合成的影响DFUs组培养3d胶原合成量开始逐渐增加，9d达高峰。
APS10～160μg／mL组培养5～9d胶原合成量高于DFUs组，且呈现明显的量效、时效依赖关系，差异有统计学意义（P＜0．05）；APS640μg／ml组培养3～9d胶原合成量明显低于DFUs组，差异有统计学意义（P＜0．01）；对照组培养5～9d胶原合成量高于APS160μg／mL组，差异有统计学意义（P＜0．01，表2）。
3讨论Gulan等［2］报道全球DFUs患者的死亡率为29％，4级以上而未进行手术治疗的严重患者其死亡率达54％。
