戊二醛交联壳聚糖固定化青霉素G酰化酶及其性质研究
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活 ６ ／ ） ４ Ｕ ｍＬ 华东理 工 大 学鲁 华 生 物 技术 研 究所
惠赠 ； 其余 试剂 均 为分 析纯 ． ７０ ２０型分光 光度计 ， 上海 精 密科 学仪 器公 司 ；
Ｓ Ｂ一Ⅲ循环水 式多用 真 空泵 ， Ｈ 郑州 长城 科工 贸公 司 ；Ｈ Ｃ水浴 恒温振荡 器 ， Ｓ Ａ— 金坛市恒 丰仪器厂．
酰化 酶显 得尤 为 重要 ． 双功 能试 剂 戊 二 醛 的 醛基
将 壳 聚糖用 去离 子 水 浸 泡 洗 涤 ， 并且 轻 轻 搅 拌 ， 混 匀后静 置 ２ ｈ后抽 滤 ． 理后 壳 聚糖 在不 待 处 同浓度 的戊 二 醛溶 液 中反应 ２ ４ ｈ后 ， 滤 ， ｐ 抽 用 Ｈ
０ １ｇ交联 后 壳 聚糖 置 于不 同 ｐ 盐 浓 度 的 ． Ｈ、 缓 冲 体 系 中 ， 入 一 定 量 的 酶 液． 其 轻 轻 混 匀 加 将 后， 在一定 温度 下反应 一定 时间． 固定 化后 的酶 经
２ １２ 加酶量 对 固定化 的影 响 固定化酶 的活力 ．． 先随着加酶量的增多而升高 ， 酶量为 １０Ｕ时达最 ６ 大 ； 酶 量 继续 加 大反 而 固定 化 效 果 不 理 想 （ 加 图
７５的缓 冲液 淋洗 ３次 ． ．
作 者 简 介 ： 仕 伟 （ ９６ ） 男 ， 东 潍 坊 人 ， 士 ， 师 ， 究 方 向 ： 工 程 程 １７ 一 ， 山 博 讲 研 酶
１４ ６
烟 台大 学学报 （ 自然科 学与工 程版 ） 造成酶 与载体结 合 的能力 降低 ．
第２ ４卷
程仕伟 ， 贾彦 荣 ， 缪 静 ， 慧鸽 屈
（ 东大学生命科学学院 ， 鲁 山东 烟 台 ２４ ２ ） ６ ０ ５
摘 要 ：以戊二醛 为 交联 剂 ， 壳聚糖 为载 体 固定化粪 产碱杆 菌来 源的青 霉 素 Ｇ酰化 酶． 通过
单 因素和 正 交试验 优化 确 定 固定化 最佳 条 件 ：． ０ １ｇ载 体 ，． ％ 戊 二醛 ， ２５ 酶量 １０ Ｕ， ． ６ ０６
有较 好 的批 次反 应稳 定性．
关键 词 ：壳聚糖 ； 戊二 醛 ； 固定化 ； 青霉素 Ｇ酰化 酶
中图分类 号 ： ８ ４ ２ Ｑ １ ． 文献 标 志码 ： Ａ
壳 聚糖是 甲壳 素 的脱 乙 酰基 团产 物 ， 多 糖 除 结 构 以外还 含有 氨 基 功 能基 团 ， 是性 能 优 良 的 固 定 化酶 载体 ¨ ． 比无 机 载 体 结合 酶量 较 低 及 合 』相
１ ２ 青 霉素 Ｇ酰化 酶 的 固定 化 ．
青霉 素酰 化 酶是 一 重 要 的工业 生 产 用 酶 ， 可 催化 合成 多种 的 半合 成 抗 生 素 Ｊ此 外 该 酶 在 ，
手 性 药 物 中 问 体 拆 分 与 合 成 方 面 也 有 广 泛 应 用 一 ， 因此 开发 操 作 性 能 稳 定 的 固定 化 青霉 素
ｍ ｌＬ Ｎ Ｃ ，． ｏ Ｌ磷 酸缓 冲液 ９ ５ｍＬ ３ ｏ ａ １０ ２ｍ ｌ ／ ／ ． ，７℃ ，Ｈ ８ ０ 固定 化 ３ ． ｐ ． ， ８ｈ 固定 化 酶 最 高 比
活为 ４ ． ／ ８ ７ Ｕ ｇ湿载体 ． 固定化 酶性 质研 究表 明其 最适反 应 温度 为 ５ Ｃ， ５ｑ 最适 ｐ ． 具 Ｈ ９ ５；
第２ ４卷 第 ２期
２１ ０ １年 ４月
烟 台大学 学报 （ 自然 科学 与工 程版 ）
Ｊｕｎｌ ｆ ａｔｉ ｎｖｒ ｔ Ｎ ｔｒｌ ｃ ｎｅａ ｄＥ ｇ ｅｒ ｇＥ ｉｏ ） ｏｒａ ｏ ｎａ Ｕ ｉ ｓｙ（ ａｕａ Ｓ ｉ ｃ ｎ ｎｉ ｅｉ ｄｔ ｎ Ｙ ｅｉ ｅ ｎ ｎ ｉ
力 弱 ， 易从 吸 附载体 上脱 落 ， 酶 因此 常用 吸附 和交 联结 合方 法提 高其 操作 稳定 性．
药； 低粘 度工 业级 壳 聚糖 （ 乙酰度 Ｉ８ ％ ）济 南 脱 ＞０ 海得 贝海 洋生 物 工 程 公 司 ； 产 碱杆 菌 青 霉 素 Ｇ 粪
酰化 酶 （ ｌ ｌ ｅｅｆ ｅａｉ ｐｎｃｌｎＧ ａｙａｅ 酶 Ａｃ ｉ ｎｓ ａｃｌ ｅｉｉｉ ｃｌ ， ａｇ ｓ ｌ ｓ
１ 材 料 与 方 法
１ １ 试 剂材 料与 仪器 ．
对二 甲氨基苯 甲醛 （ Ｄ Ｂ） Ａ 上 海精 纯 试 Ｐ Ａ ， Ｒ， 剂有 限 公 司 ； 霉 素 Ｇ钾 盐 和 ６一Ａ Ａ， 北 制 青 Ｐ 华
成 高分 子载体 亲 水 性 差 的缺 点 ， 聚糖 除 溶 于低 壳 浓 度酸 外 ， 乎具 备 了优 良 固定化 载 体 的全 部 性 几 质 ． 聚糖 分子 中 的羟基 和氨基 可 以形 成 活 泼 壳 界 面 ， 蛋 白质 的亲合力 显 著． 对 由于酶 与载 体结合
Ｖｏ ． ４ Ｎｏ． １２ ２
Ａｐｒ ２ ． ０１１
文章 编 号 ：０４ ８ ２ （０ ）２ ０ ６ －４ １０ — ８０ ２ １ ０ － １３ ０ １
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６研究 简报 ２
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戊 二 醛 交联 壳聚 糖 固定 化 青 霉 素 Ｇ 酰 化 酶 及 其 性 质 研 究
抽 滤 、 涤后 ， ４℃ 的冰箱 中贮存备 用． 洗 放
１ ３ 酶活 力测定 （ Ｄ ． Ｐ ＡＢ法 ）
１）这可能是 由于酶液含有一定量 的杂蛋 白， ｂ． 酶体 积增 大时 ， 系 中杂蛋 白增 多 ， 体 与青 霉素 Ｇ酰化 酶
与酶 分子 和壳 聚糖 的氨 基发 生加 成反应 生成 西佛 碱 ， 而 达 到 固定 化 酶 的 作 用 ． 研 究 以戊 二 从 本
醛交 联 的壳 聚 糖 为载 体 ， 过 共 价 结 合 方 法 固定 通
化粪 产碱 杆菌来 源 的青 霉素 Ｇ酰化 酶 ．
收 稿 日期 ： ０ ００ －８ ２ １－ ４ ０ 基 金 项 目 ： 东 大学 科 研 基 金 （ Ｙ ０ ８３ ５ ． 鲁 Ｌ ２ ０ ３０ ）
