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酶活力的测定-课件

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连续监测法测定酶活性浓度 医学课件

连续监测法测定酶活性浓度 医学课件
（二）IFCC推荐的测定方法
以色素原GCNA为底物，甘氨酰甘氨酸为受体，GGT催化γ谷氨酰基团从GCNA转移至甘氨酰甘氨酸上，并游离出2-硝基 -5-氨基苯甲酸。后者的生成量与样品中的GGT活性成正比关 系，故测定405nm处的吸光度增量可计算出GGT的活性。
GCNA 双甘氨酸 pGHG7T.72 硝基 5 氨基苯甲酸 L 谷氨酰 甘氨酰甘氨酸
第14页
第二十四章 连续监测法测定酶活性浓度
（三）方法学评价
②2-硝基-5-氨基苯甲酸在410nm的摩尔消光系数为 7.96×103（pH为7.70），受pH和温度影响较大。若选择 401nm或405nm时需注意校正。
③由于产物摩尔消光系数较小，样品用量大，样品体积 分数0.0909，为了样品和反应液在37℃平衡，故需要孵育时 间180s和底物启动模式。
（一）测定方法概述
γ-L-谷氨酰对硝 基苯胺为底物
L-γ-谷氨酰-α（β） -萘胺为底物
方法灵敏度低， 底物溶解度差， 受溶血干扰较 大
可以连续监 测，有较好 的灵敏度和 准确性，但 底物溶解度 差
L-γ-谷氨酰-3-羧 基-4-硝基苯胺为
底物
IFCC推荐方 法
第12页
第二十四章 连续监测法测定酶活性浓度
CNPF AFU CNP(黄色) L - 岩藻糖
第22页
第二十四章 连续监测法测定酶活性浓度
（三）方法学评价
CNPF法所采用CNP的解离常数(pKa)5.5与AFU的最适pH相 近，缩短了反应时间，无需样本空白，实现了AFU的连续监测 法测定。提高pH可提高CNP的离子化率，但过高的pH会影响 酶活性；该方法操作简便，测定时间短，灵敏度及抗干扰性都 有所提高。溶血仍有干扰。

吲哚乙酸氧化酶活性的测定ppt课件

吲哚乙酸氧化酶活性的测定ppt课件

5
+6-BA0.5
用分光光度计在530nm波长处测A值；
查标准曲线；
计算 对照—处理(μg/ml)
IAA氧化酶活力 = 时间(h)
(μg·IAA/h·ml)
× 10
结果总结
不同培养基对怀地黄愈伤组织生长情况的影响
培养基
接种数 (瓶*片）
MS+2,4-D1.0 13*3
最早出愈 时间 （d）
18
出愈率 （%）
97.43
P144
实验目的
熟悉运用比色法测定吲哚乙酸 氧化酶活力的方法，并掌握测定酶 活力的基本要求。
实验原理
吲哚乙酸在吲哚乙酸氧化酶的作用下，被氧 化破坏失去活力。植物体内吲哚乙酸氧化酶活力 的大小，对调节体内吲哚乙酸的水平起着重要的 作用，从而影响植物的生长。
酶活力的大小可以其破坏吲哚乙酸的速度表 示。吲哚乙酸的含量可用比色法测定。
MS+2,4-D1.0 12*3
17
100
+6-BA0.4
MS+2,4-D1.0 12*3
16
100
+6-BA1.0
污染率 （%）
愈伤生长 情况
7.69 0 0
切口处较多出 愈，黄色颗粒 状，偶见灰白 色愈伤
切口及与培养 基接触处生长 愈伤，黄色透 明，较湿润
切口及与培养 基接触处生长 愈伤，黄白色， 湿润
结果总结
I型愈伤组织
Ⅱ型愈伤组织
Ⅲ型愈伤组织
不同培养基对怀地黄试管苗生长情况的影响
培养基 （mg/L)
MS+NAA 0.02
接种数 （瓶*株）
13*3
出芽时间 (d)
20

α-淀粉酶菌株摇瓶发酵初筛及酶活力测定

α-淀粉酶菌株摇瓶发酵初筛及酶活力测定

2%淀粉液20mL+5mLpH6.0缓冲液
1m0.5mL
预热5min（60℃）
混匀
混匀、计时（保温60℃），反应开始
标准比色管（红棕色） 对照比色
在白瓷板上定时取样（1滴）比色
确定反应终点
比色终点，计下反应时间（与标准比色管颜色相同）
完整ppt课件
8
2%可溶淀粉溶液及标准糊精溶液配制
2%可溶淀粉溶液：称取20g可溶淀粉， 放入小烧杯中，加少量蒸馏水做成悬浮液。 然后在搅拌下注入沸腾的700mL蒸馏水中， 继续煮沸一分钟（透明），冷却后用pH6 磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液定容至1000ml。
标准糊精溶液：取0.06克化学纯糊精悬于 少量水中调匀，然后倾入90毫升正在煮沸 腾的蒸馏水中，冷却后定容至100毫升， 滴加数滴甲苯（现配现用就不用加），冰 箱保存。
方法及步骤
发酵培养基灭菌冷却后，利用接种环接种 一环上周培养好的斜面菌种。
37 ℃摇瓶培养（往复式110转/分钟）2 天。
2天后小漏斗脱脂棉花过滤发酵液。
测定发酵液中α-淀粉酶酶活力单位（碘比 色法）。
根据结果选出1~2株进行下周的复筛试验。
完整ppt课件
11
所选菌株产α-淀粉酶摇瓶发酵复筛 试验的安排
上课前一天下午17：00~17：30将斜面 菌种接种一环于5mL种子培养基中（装于 18×180mL），37 ℃摇瓶培养（旋转 式150转/分钟）14~16hr。
上课当天上午8：00~8：30将上述摇瓶 培养好的菌种，用1mL无菌吸管吸取1mL 接种于50mL种子培养基中（装于 250mL三角瓶）， 37 ℃摇瓶培养（旋 转式150转/分钟）8~10hr。
121.3℃灭菌20分钟 灭完菌后取出，要马上轻摇混匀（？）。

生物化学实验课件-影响酶活力的因素-激活剂和抑制剂

生物化学实验课件-影响酶活力的因素-激活剂和抑制剂

实验原理
实验原理
酶活力常受某些物质的影响，有些物质能使酶活力增加，称为酶的激活剂； 另一些物质则能使酶活力降低，称为酶的抑制剂。例如，Cl-为唾液淀粉酶的 激活剂，Cu2+为其抑制剂。
实验试剂
实验试剂
（1）0.1%淀粉溶液：称取可溶性淀粉0.1g，先用少量的水加热调成糊状， 再加热水稀释至100ml； （2）1%氯化钠溶液：1g氯化钠溶于蒸馏水，稀释至100ml； （3）1%硫酸铜溶液：1g硫酸铜溶于蒸馏水，稀释至100ml； （4）1%硫酸钠溶液：1g硫酸钠溶于蒸馏水，稀释至100ml； （5）碘化钾-碘溶液：于2%碘化钾溶液加入碘至淡黄色。
实验步骤
实验步骤
激活剂和抑制剂对酶活力的影响
取干净试管4只，按下表加入试剂并操作。
试剂/管号
1
2
3
4
1%淀粉溶液/ml
1
1
1
1
1%硫酸铜溶液/ml
1
-
-
-
1%氯化钠溶液/ml
-
-
1
-
蒸馏水/ml
-
-
-
1
混匀，37℃水浴中保温2min
稀释的唾液（1∶30）/ml
0.5
0.5
生物化学实验
影响酶活力的因素-激活剂、抑制剂
目录 / CONTENTS
CHAPTER 01 CHAPTER 02 CHAPTER 03 CHAPTER 04 CHAPTER 05
实验目的 实验原理 实验试剂 实验步骤 注意事项
实验目的
实验目的
1.掌握激活剂及抑制剂对酶活力的影响。 2.理解激活剂及抑制剂影响酶活力的机制。 3.了解测定酶活力的方法。
0.5

DNS法测定α-淀粉酶活力的方法课件(1)

DNS法测定α-淀粉酶活力的方法课件(1)

密封121.3 ℃ 灭菌处理20min）。用时注意酶
污染。
14
标准曲线制作相关试剂加入表
试剂
管号 123456
标准麦芽糖溶液
（mL）
0 0.4 0.8 1.2 1.6 2.0
蒸馏水 （mL）
2.0 1.6 1.2 0.8 0.4 0
麦芽糖含量 （mg）
0 0.4 0.8 1.2 1.6 2.0
DNS试剂 （mL）
淀粉酶活力的大小与产生的还原糖的量成正比。
用标准浓度的麦芽糖溶液制作标准曲线，用比色
法测定淀粉酶作用于淀粉后生成的还原糖的量，
以单位样品（重量或体积）在一定时间内生成的
麦芽糖的量表示酶活力。
7
酶活力测定（DNS比色法）
酶活力定义：在一定反应条件下（本实验为40 ℃ ，pH5.6或6.0），1分钟反应生成1mg麦 芽糖的酶量定义为1个酶活力单位。
利用Excel中相关统计分析工具，完成回 归方程的计算及分析，并绘制标准曲线图。
12
相关试剂（第一种）
标准麦芽糖溶液（1mg/mL）：精确称取 1g麦芽糖，用蒸馏水溶解并定容至 1000mL。
0.1mol/L pH5.6的柠檬酸缓冲液：称取 柠檬酸（C6H8O7·H2O ）5.78g，柠檬酸 钠（Na3C6H5O7·2H2O）21.32g ，用 蒸馏水溶解并定容至1000mL。
称取磷酸氢二钠（Na2HPO4.12H2O）45.3g， 柠檬酸（C6H8O7·H2O ）7.74g，先在烧杯中 用蒸馏水使之溶解，然后转入容量瓶中定容至
1000mL。
1%马铃薯淀粉溶液：称取1g马铃薯淀粉
（105℃烘干2hr）溶于100mL 0.2mol/L
pH6.0 磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液中（一般需要

碱性磷酸酶的活力测定 ppt课件

碱性磷酸酶的活力测定 ppt课件
（2）各种骨骼疾病。ALP主要由成骨细胞产生，故骨骼 病特别是有新生骨质生成时，血液内ALP活性增加，以 促进磷酸盐的沉积。如佝偻病、纤维性骨病、成骨不 全症、骨转移癌和骨折修复愈合期等均引起血清ALP活 力升高。
• 降低：主要见于呆小症，磷酸酶过少症等。
PPT课件
12
•问题2：
• 如何测定酶活性？
PPT课件
8
诊断常用血清酶
血清酶
符号
鸟氨酸氨基甲酰转移酶
OCT
卵磷脂胆固醇酰基转移酶 LCAT
谷氨酸脱氢酶
GLDH
山梨醇脱氢酶
SDH
丙氨酸氨基转移酶
ALT
异柠檬酸脱氢酶
ICD
-谷氨酰转肽酶
-GT
5ˊ-核苷酸酶
5ˊ-NT
单胺氧化酶
MAO
天门冬氨酸氨基转移酶 AST
肌酸激酶
CK
乳酸脱氢酶
LDH
碱性磷酸酶
ALP
酸性磷酸酶
ACP
淀粉酶
AMS
脂肪酶
LPS PPT课件
来源
肝 肝 肝 肝 肝、肾、心 肝、胎盘、心 肝、胆、肾、小肠 肝、胆道 肝、肾、脑 心、肝、骨骼肌 骨骼肌、心、脑 心、肾、骨骼肌、肝、肺 骨骼、牙齿、肝、肾 前列腺、红细胞、血小板 胰、唾液腺 胰
9
碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,ALP or AKP )
血清碱性磷酸酶活性测定 （磷酸苯二钠法）
PPT课件
1
• 问题1：
• 为何要测定血清中酶的活性？有什 么意义？
PPT课件
2
引言（1）
• 酶活性测定是目前临床酶学分析最为常用的方 法。酶测定约占目前临床生化总工作量的1/4到 1/2。

酶活性的测定PPT课件

酶活性的测定PPT课件

第28页/共30页
.SOD活性测定：
将样液加入到Tris缓冲溶液中，其余步骤同自 氧化速率测定方法。 活力单位定义：将一定条 件下使每毫升反应液自氧化速率抑制50%的酶量 定义为一个单位（u）。
第29页/共30页
感谢您的观看！
第30页/共30页
失活。只要AsA能够再生，APX就能充分进行
催化反应，从而保护叶绿体维持正常的光合能
力。
第15页/共3碎，加入适量的石英砂、PVPP和7.5mL酶提取液 ，在冰浴中充分研磨，离心（10000g、4℃、20min）取上层清夜1mL，分装 于小离心管中置于4℃备用或-20℃保存。
10mmol/LHCl 配制成 6mmol/L溶液存放于冰
箱备用。
2.仪器: 紫外分光光度计，酸度计，恒温
水浴锅
第27页/共30页
实验步骤：
（1）.邻苯三酚自氧化速率测定：
在试管中加入4.5ml 50mmol/LTris缓冲溶液 ，于25℃保温20min,加入10～20ul 30mmol/L 邻苯三酚，立即计时并摇匀，倾于比色杯内， 于325nm下，每隔1min测吸光值一次，空白以 10mmol/L HCl代替邻苯三酚，要求自氧化速 率控制在0.070 OD/min左右。
• 式中 • • • •
A—对照KMnO4滴定毫升数； B—酶反应后KMnO4滴定毫升数； VT—酶液总量（ml）； V1—反应所用酶液量（ml）; W—样品鲜重（g）；
• 1.7mg
1.7—1ml H2O2。
0.1mol/L的KMnO4相当于
第10页/共30页
• 紫外分光光度法:
• H氧根2O化据2在氢 测2，量40使吸nm反光波应率长溶的下液变有吸化强光速烈度度吸即(收A可24，0测)过随出氧反过化应氧氢时化酶间氢能而酶分降的解低活过。性 。

高中生物同步课件：3.1 酶的制备及活力测定(中图版选修1)

高中生物同步课件：3.1 酶的制备及活力测定(中图版选修1)

(4)萨姆纳第一次证明了脲酶是蛋白质。(√)
栏目 导引
第三章
酶的制备及应用
二、酶的活力及测定方法 底物的消耗量 1.酶的活力：以单位时间内_______________ 产物的生成量 或者在单位时间内_______________来表示。 2.酶活力的测定 分光光度法 (1)方法：利用______________进行比色。
栏目 导引
第三章
酶的制备及应用
(2)实例 ①植物淀粉酶的制备及活力测定
使酶失活
栏目 导引
第三章
酶的制备及应用
钝化酶的活性使反应终止
3,5-二硝基水杨 酸试剂 黄褐色 520m 煮沸
栏目 导引
第三章
酶的制备及应用
想一想 进行酶活力测定时，出现了“恒温处理”、
“沸水加热”、“钝化处理”，是否矛盾？
活性达到最高；随后，随着温度的继续上升,
酶的活性迅速下降。A点和C点相比，虽然酶 的活性都很低，A点是低温条件，对酶的分子
结构无影响，随着温度的上升，其活性也会
不断上升，而C点是高温条件，当温度过高时, 会破坏酶的分子结构，使酶的活性发生不可 逆的变性。
栏目 导引
学反应，少数在________发挥作用。 细胞外 温度、酸碱性 3.影响因素：_______________等多种环境条
空间结构 件都可能影响酶的__________,导致酶变性， 直至丧失活力。
栏目 导引
第三章
酶的制备及应用
判一判 (1)人体内、参与物质分解的酶都可以在分泌
物中提取。(×)
(2)高温、低温、过酸和过碱等环境条件都能 改变酶的空间结构，导致酶变性失活。(×) (3)新采摘的甜玉米放在沸水中浸泡后，可使 甜味保持的时间长些。(√)

《酶活力的测定》课件

《酶活力的测定》课件

数据记录与整理
实验数据记录
在实验过程中，应准确、及时地记录实验数据，包括实验条件、实验步骤、实 验结果等。
数据整理
将实验数据整理成表格或图表，便于分析和比较。数据整理时应确保数据的准 确性和完整性。
数据分析与处理
数据分析
对实验数据进行统计分析，包括平均值、标准差、误差等指 标的计算。
数据处理
对异常值或离群数据进行处理，如剔除、替换或修正，以确 保数据分析的准确性。
未来，酶活力测定技术的发展将更加注重高灵 敏度、高特异性和自动化方向，为生物工程领 域的研究提供更加精准和高效的工具。
感谢您的观看
THANKS
问题
实验操作复杂，耗时较长。
改进建议
优化实验流程，简化操作步骤，提高实验 效率。
酶活力测定在生物工程领域的应用前景
酶活力测定是生物工程领域中重要的研究手段 ，可用于研究酶促反应动力学、酶的抑制剂和 激活剂等方面的研究。
随着生物工程技术的不断发展，酶活力测定的 应用范围将不断扩大，如应用于生物制药、生 物能源和生物环保等领域。
通过实验，我们掌握了酶活力测定的基本原理和方法，学会了如何设置实验条件和 操作实验。
实验过程中，我们观察到了酶促反应的动力学特征，如米氏方程的适用性和酶促反 应的速率常数。
实验中存在的问题与改进建议
问题
改进建议
实验过程中存在误差，如温度控制不精确 、底物浓度不均匀等。
采用更精确的仪器和设备，如恒温控制器 和磁力搅拌器，以提高实验的准确性和可 重复性。
米氏方程是描述酶促反应速率与底物浓度关系的方程，其形式为V=Vmax[S]/（Km+[S]），其中V代表反应速率，Vmax代表 最大反应速率，[S]代表底物浓度，Km代表米氏常数。

生化实验课件-尿液淀粉酶活力测定

生化实验课件-尿液淀粉酶活力测定
澱粉酶活性單位的規定是：在37℃，30分鐘，將0.1%澱 粉溶液1mL水解後與碘液作用呈無色的酶量定為一個活 力單位。
三.操作步驟
1. 尿液等梯度稀釋
取8支試管，按次序記上號碼，各加0.9% NaCl 1 mL。 用1mL移液管加尿液1mL於第一管，使其與0.9%NaC1混合
1mL 尿液 1mL 1mL 1mL 1mL 1mL 1mL 1mL
4.顯色
各管中加稀碘液2滴
搖勻。觀察各管的顏色
四.實驗結果與分析
1.酶活力單位的計算：
選擇無色管中尿液稀釋倍數最大的一管來計算。假設第5管為無色 （從第6管起仍有紅色或藍色）。已知第5管內含尿液為1/32mL。 即1/32mL尿液能在37℃，30分鐘水解0.1%澱粉1 mL。所以，1 mL尿液在同樣條件下可水解0.1%澱粉32 mL。即每1 mL尿液中 所含澱粉酶的活性為32個活力單位。
棄之
1mLNaCl 稀釋度 1/2 1/4 1/8 1/32 1/64 1/128 1/256 對照
從第1管吸出1mL到第2管中，再從第2管吸出1mL到第3管……依次類推。 第7管吸出1mL棄之。可得分別含有尿液1/2、1/4，1/8…1/256 mL的 不同濃度的尿稀釋液，第8管不加尿液作為對照管。
2.對實驗結果進行分析
五.實驗注意事項
1.尿液取樣要準確 2.稀釋時取樣要準確 3.移液管反復沖洗 4.Fra bibliotek液不能加的太多
附：試劑與器材
1.0.9%NaC1； 2.0.1%澱粉； 3.碘化鉀一碘溶液（20gKI和10g碘溶於100mL水中，使用前稀釋10倍） 4.移液管； 5.試管； 6.恒溫水浴鍋。
2.加底物
各管加入0.1%澱粉液1mL

酶活性的测定PPT课件

酶活性的测定PPT课件
（1）样品对照：只加样品不加底物 （2）底物对照：不加样品只加底物 （3）时间对照：含有酶和底物但反应时间为零的对
照管；也可以先用蛋白沉淀剂或其他试剂停止反 应后，再加底物予以抵销。
11
酶的区域化分布
表7-3 诊断常用血清酶的来源
血清酶
符号
鸟氨酸氨基甲酰转移酶
OCT
卵磷脂胆固醇酰基转移酶 LCAT
谷氨酸脱氢酶
GLDHΒιβλιοθήκη 山梨醇脱氢酶SDH
丙氨酸氨基转移酶
ALT
异柠檬酸脱氢酶
ICD
-谷氨酰转肽酶
-GT
5ˊ-核苷酸酶
5ˊ-NT
单胺氧化酶
MAO
天门冬氨酸氨基转移酶
AST
肌酸激酶
CK
乳酸脱氢酶
LDH
碱性磷酸酶
ALP
酸性磷酸酶
ACP
淀粉酶
AMS
脂肪酶
LPS
来源
肝 肝 肝 肝 肝、肾、心 肝、胎盘、心 肝、胆、肾、小肠 肝、胆道 肝、肾、脑 心、肝、骨骼肌 骨骼肌、心、脑 心、肾、骨骼肌、肝、肺 小肠、胎盘、肝、肾 前列腺、红细胞、血小板 胰、唾液腺
5
6
米-曼氏方程：

Vmax〔S〕 v = —————
〔S〕+ Km
上式中v代表反应速度，Vmax代表最大反应速度， 〔S〕代表底物浓度，Km称为米氏常数。
7
由米-曼氏方程可以导出：
（Vmax-v）〔S〕 Km = ———————
v
当v = 1/2Vmax时，Km =〔S〕。因此Km值为反应速度相当于 最大反应速度一半时的底物浓度。Km值是酶的特征常数，具有重 要的应用价值。
应加入不抑制该酶活性的防腐剂并冰箱保存，以 防止底物被分解或变质 • 4、在测定过程中所用器材应绝对清洁，不应含有 酶的抑制物 • 5、使酶活性测定在线性期内进行

《酶活力测定方法》PPT课件_OK

《酶活力测定方法》PPT课件_OK
18
19
20
3批ｒｈＩＬ 11制品的ＲＰ ＨＰＬＣ图谱完 全一致,说明该厂ｒｈＩＬ 11的生产工艺是稳定 的;与ＧＩ公司生产的ｒｈＩＬ 11对照品比较有 20个峰与对照品一致,但第6 峰的峰高和峰面积均 明显较小,且在第9和第10 峰之间多一个峰,说明 该厂ｒｈＩＬ 11蛋白质结构与ＧＩ公司生产的 ｒｈＩＬ 11比较存在细小差别。
加热：使酶失效
不同的时间取样
终止反应
测定
8
连续测定法：在反应过程中对反应系统进 行直接连续检测。
检测方法： 紫外-可见分光光度法 旋光法 荧光分光光度法 电化学测定法 酶偶联测定法 离子选择性电极测定法等。
9
示例：胰蛋白酶效价测定 胰蛋白酶 肽键、酰氨键、酯键（碱性氨基酸） 水解速率：酯键﹥酰氨键﹥肽键 供试品溶液：50～60单位/ml 底物溶液：N-苯甲酰-L-精氨酸乙酯
供试液的a每分钟改变15相当于的单位数为每mg供试品中含胰蛋白酶单位数为000316重组人白细胞介素11的胰蛋白酶切肽图分析肽图分析是评价重组产品蛋白质结构及其生产工艺稳定性的重要方法目前常用的方法有cnbr裂解sdspage微量肽图法和胰蛋白酶切rphplc肽图171
2．酶活力测定法
1）基本原理： 酶活力是指酶催化一定化学反应的能力。酶
A1 - A2
0.003 : 1 =
:X
T
A1 - A2 0.003T
每mg供试品中含胰蛋白酶单位数为
A1 - A2
0.003TW
A1—A 2 P=
0.003 T W
15
重组人白细胞介素 11的胰蛋白酶切肽 图分析
肽图分析是评价重组产品蛋白质结构及其 生产工艺稳定性的重要方法,目前常用的方 法有ＣＮＢｒ裂解ＳＤＳ-ＰＡＧＥ微量肽 图法和胰蛋白酶切ＲＰ ＨＰＬＣ肽图法。

生物化学实验指导课件—枯草杆菌蛋白酶活力测定

生物化学实验指导课件—枯草杆菌蛋白酶活力测定
枯草杆菌蛋白酶活的力测定
实验目的 实验原理 实验仪器与试剂 实验操作步骤
一、实验目的
掌握定量测定蛋白酶活力的方法，了解本实验的酶、底物和生成物的相关 性质，以及本反应的环境条件。
进一步理解酶活力和比活力的概念 巩固比色法测定物质含量的基础，掌握721型分光光度计的原理和使用方 法，学习绘制标准曲线的方法。
二、实验原理
酶活力概念：指专一性催化某种底物反应的能力，酶活力通常用一定条件下酶催化某种 反应的反应速度来表示。 枯草杆菌蛋白酶是一种水解酶，它将酪蛋白水解成酪氨酸等物质。酪氨酸能与酚试剂反 应生成蓝色物质。 酚试剂又名Folin试剂，是磷钨酸和磷钼酸的混合物，它在碱性条件下极不稳定，可被酚 类化合物还原产生蓝色（钼蓝和钨蓝的混合物，680 nm）用分光光度计可以定量的比较颜 色的深浅，从而推导出酪氨酸的量，根据生成物的含量可以计算枯草杆菌蛋白酶的活力。 枯草杆菌蛋白酶活力单位定义：在40 ℃，pH 7.5的条件下，水解酪蛋白每分钟产生1μg酪 氨酸为1U。
10
20
30
40
50
数为横
60
坐标，
A680nm
Na2CO3溶液（mL）
5
5
5
5
5
5
为纵坐
标，作
酚试剂（mL）
1
1
1
1
1
1
出标准
迅速混合，于30℃显色15min
曲线。
A680nm
2、蛋白酶活力的测定
管号
酶液 （mL）
1（样品）1
2（对照）1
酪蛋白 （mL） 2
----
三氯乙
酸（mL） 30℃水
----
三、器材仪器和主要试剂

硝酸还原酶活性的测定ppt课件

硝酸还原酶活性的测定ppt课件
8
结果与计算
9
把在标准曲线上查得的NaNO2含量代入下式，计算硝酸还原酶活 性：
将上述结果带入公式测得硝酸还原酶活性为2.60856。
10
三、查阅文献与结果分析
11
实验数据存在较大误差，其原因总结如下： 1.可能培养方式为水培，氮吸收与土培可能不同，一般来说，
氮吸收量越多，说明酶活力越强。 2.材料不新鲜，导致酶活力降低。 3.实验操作不当所致。 4.抽真空时间不够，反应不充分。 5.抽真空后没马上进行暗反应。 6.OD值读数误差。
13
五、操作中存在的不足
1.待测样品研磨不充分导致的实验误差。 2.操作人员不同导致加入药品量的细微不同导致的实验误差。 3.不同人员对于颜色的辨别度不同导致的实验误差。 4.药品配制后放置时间过长部分变质导致的实验误差。 5.水浴加热时间不准确导致的实验误差。
14
六、提高准确度的方法
12
四、试验操作技能
1.在加液研磨实验材料时分次的添加冲洗研钵和研磨棒。 2.经离心后的样品上清须转移至试管中再进行吸取。 3.在测定样品OD值时所采用的对照试剂不同，标准曲线与Y轴的
交点也不同。 4.称量纸折叠至四边上翘，以防药品腐蚀天平。 5.试管夹夹在试管中上部，从试管 底部套入、取出，拇指不要按在试管 夹的短柄上。 6.在滴定时加液要慢， 边加边震荡使之充分反应。
前方图文并茂请注意！
硝酸还原酶活性的测定
1
一、实验原理与过程
实验原理
1
2
3
2
实验流程
标准曲线制作
试剂
1ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
2
3
4
5
亚硝酸钠标准
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自我检测区
第6课时
4．如图是果胶酶在不同温度条件下的酶活性变化曲线，请回 答下列问题。
本 课 栏 目 开
关 (1)在 35 ℃时，果胶酶的活性________。 (2)在________和________时，果胶酶的活性都降为 0，但恢 复至 35 ℃时，________图的催化活性可能恢复，请在图中 画出恢复曲线，由此表明________图中所示酶的结构未受 到破坏。
越高；反之，酶的活力越低。
学习探究区
第6课时
2．下列关于果胶酶活力的测定的说法中，错误的是 ( A )
本
A．果胶酶活力测定过程中与温度、pH 无关
课
栏
B．果胶酶可将果胶水解生成 β­半乳糖醛酸
目
开
C．β­半乳糖醛酸可用次碘酸钠法进行定量测定
关
D．根据测定得到的 β­半乳糖醛酸的量可以计算出果胶酶的
自我检测区
第6课时
3．关于探究果胶酶浓度的实验，叙述错误的是
( C)
A．配制不同浓度的果胶酶溶液，并在各组中加入等量的该
本 课
溶液
栏 目
B．调节 pH，使各组中的 pH 相同而且处于适宜状态
开 关
C．用玻璃棒搅拌加酶的果泥，搅拌时间可以不同
D．在相同且适宜的温度条件下进行实验
解析 根据单一变量的原则，除了果胶酶的浓度外，其他 因素都要保持相同且适宜。
② 加
反应液加入两个碘量瓶中，碱性条件下(碳酸钠
加热煮沸，冷却后分别加入 提供碱性条件)，碘可
碘 氧
1 mL1mol/L 的_碳____酸___钠_____溶 以和果胶酶的水解 液和 5 mL0.1 mol/L 的 碘 产物 β半乳糖醛酸
化
液，混匀
作用，生成糖酸盐
学习探究区
第6课时
分别加入 2 mL1 mol/L 的硫 滴定时加入硫酸的目
自我检测区
答案 (1)最高 (2)0 ℃ 100 ℃ 甲 如下图 甲
第6课时
本 课 栏 目 开
关 解析 从图中可以看出，果胶酶在 35 ℃时催化效率最高， 当温度降至 0 ℃或升高至 100 ℃时，催化效率均降至 0。果 胶酶的化学本质是蛋白质，当温度升高至 100 ℃时，果胶酶 的分子结构发生改变，从而使酶变性失活，当温度再恢复到 35 ℃时，酶也不会恢复活性。而温度降至 0 ℃时，酶的结构 并没有发生变化，再恢复到 35 ℃时，活性还会恢复。
×1÷2 ×20÷5
表示反应液 总体积 ；5 表示检测时所 取 反应液 的毫升数
学习探究区
第6课时
归纳提炼
1．为了得到一种高纯度、高活力的酶制剂，往往要经过一系列
本 课
复杂的分离纯化过程，而各个过程中采取的手段可能很温
栏 目
和，也可能很激烈，这些手段都或多或少地影响到酶的活性。
开 关Leabharlann 为了掌握了解每一个过程中的酶活力的损失程度以及所采
胶、 果胶酶 ；2 号试管内加 保温的目的是使酶
目 开
①保 入等量的果胶和 蒸馏水 ， 对底物很好地发挥
关
温 均用冰乙酸将 pH 调至3.5 ，作用，温度和 pH
放在恒温水浴锅中 50 ℃保 都应是 最适宜 的
温2h
学习探究区
第6课时
从 1、2 号瓶中分别取 5 mL 这一步的目的是在
本 课 栏 目 开 关
度，酶催化的反应速度越大，说明酶活力 越高 ；反之，酶
活力 越低 。
2．果胶酶活力的测定
本 课
(1)实验原理
栏 果胶酶可将果胶水解生成 β半乳糖醛酸 ，产物可用次
目
开 碘_ 酸钠_法进行定量测定，从而计算出果胶酶的活力。
关
(2)方法步骤
学习探究区
第6课时
步骤 操作
提示
本
两个锥形瓶，1 号内加入果
课 栏
活力
解析 果胶酶活力受温度、pH 等的影响。
学习探究区
第6课时
探究点二 探究果胶酶作用的最佳条件
本 课
酶的活性受多种因素的影响，实际应用中为了最大限度
栏 地利用酶，就要先确定酶的最佳作用条件，结合下列实
目
开 验体会探究酶最佳作用条件的方法。
关
1．探究温度对果胶酶活性的影响
学习探究区
本 课 栏 目 开 关
学习探究区
第6课时
4．下图一表示温度对酶促反应速率的影响示意图，图二的实线
表示在温度为 a 的情况下生成物量与时间的关系图。则当温
度增加一倍时生成物量与时间的关系是
本 课 栏 目 开 关
(B )
A．曲线 1 B．曲线 2 C．曲线 3 D．曲线 4
解析 从图一可以看出，当温度由 a 变为 2a 时，酶促反应 速率提高，所以能在更短的时间内达到图二中的饱和值。
本
B．酶的活性是指酶催化一定化学反应的能力
课 栏
C．酶的活性受温度、pH 等因素的影响
目 开
D．酶活性高低与反应物浓度无关
关
解析 酶的活性是指酶催化一定化学反应的能力，其高低可
以用在一定条件下，酶所催化的某一化学反应的反应速度来
表示。酶的催化作用受外界条件影响，温度、pH 等对酶的
催化作用都有较大影响，反应物浓度与酶的活性高低无关。
第6课时
学习探究区
第6课时
(1)果胶酶的最适温度为 45～50 ℃。设置温度梯度时，要以这个
范围为 中心 设置，上图实验中的温度梯度为 5 ℃。
(2)为什么在混合苹果泥和果胶酶之前，要将果泥和果胶酶分装
在不同的试管中恒温处理？
本 课
答案
将果泥和果胶酶分装在不同的试管中恒温处理，可以保
栏 目
证底物和酶在混合时的温度是相同的，避免了果泥和果胶酶混
学习探究区
第6课时
本 课 栏 目 开 关
酶活力
B 表示 空白 滴定消耗的硫代硫酸钠毫升 数；A 表示 样品 滴定消耗的硫代硫酸钠
④
(单位) ＝(B－
毫升数； M 表示 硫代硫酸钠 的摩尔浓
计 算
A)×M
度；1 表示 1 mol 硫代硫酸钠相当于 1 mol
β_半__乳__糖__醛___酸___；2 表示作用时间 ；20
的条件下)
本
课
栏
目 开
3．极端条件对酶活性的影响区别
关
酶的结
影响因素 酶的活性
构
低温
降低 未破坏
高温 降低或失活 破坏
过酸
失活
破坏
过碱
失活
破坏
活性恢复情况
可恢复 不可恢复 不可恢复 不可恢复
学习探究区
第6课时
活学活用
3．探究温度对果胶酶活性的影响、pH 对酶活性的影响、果胶
酶的用量三个实验中，实验变量依次为
本 课
酸，用 0.05 mol/L 硫代硫酸钠 的是使酶促反应 终 ③ 滴定至溶液呈淡黄色，再加入 止，然后用硫代硫酸
栏
目
滴 质量分数为 0.5%的 淀粉 指 钠滴定剩余的 碘 ，
开 关
定 示剂，继续滴定至 蓝 色消失 根据化学反应中的定
为止，记录所用硫代硫酸钠的 量关系即可求出半乳
体积，分别用 A 和 B 表示 糖醛酸的量
目 编组”之后，有下面两种操作：
开
关 方法一：将试管中的果胶酶溶液和烧杯中的苹果泥相混合，再
把混合液的 pH 分别调至 4、5、6、7、8。
方法二：将试管中果胶酶溶液和烧杯中苹果泥的 pH 分别调到
4、5、6、7、8，再把 pH 相等的果胶酶溶液和苹果泥相混合。
请 问 哪 一 种 方 法 更 为 科 学 ： ________ ， 并 说 明 理 由 ：
本
B．酶活力大小可以用在一定条件下所催化的某一化学反应
课 栏
的反应速度来表示
目 开
C．酶催化的反应速度越大，酶的活力越高
关
D．酶催化的反应速度越大，酶的活力越低
解析 酶活力又叫酶活性，是指酶催化某一化学反应的能
力，酶活力大小可以用在一定条件下所催化的某一化学反
应的反应速度来表示，酶催化的反应速度越大，酶的活力
第6课时
酶活力的测定
本 课
[学习目标定位]
栏 目
1.识别酶活力和酶反应速度的关系。2.解释果胶酶活力测定
开 关
原理及方法。3.探究果胶酶作用的最佳条件。
知识储备区
第6课时
1．果胶酶是能够分解果胶的 多种 酶的总称，除了含有_果__胶__
本 课
_分解_酶外，还含有少量的_纤__维__素__酶__、__半__纤__维__素__酶__、__淀__粉___酶_
D．果胶酶就是果胶分解酶的简称 解析 果胶是由半乳糖醛酸聚合而成的一种高分子化合物；果
胶被果胶酶分解后的产物是半乳糖醛酸；果胶酶是一类酶的总
称，包括多聚半乳糖醛酸酶、果胶分解酶和果胶酯酶等。
自我检测区
第6课时
2．下列与酶的活性有关的说法，不正确的是
( A)
A．酶的活性是由蛋白质结构决定的，不受外界条件的影响
取的手段是否合适，以决定是否进行下一步操作，就必须在
完成了每一步操作后都要对酶活力进行测定。
学习探究区
第6课时
2．果胶酶可以将果胶水解成 β­半乳糖醛酸，而半乳糖醛酸具有
还原性糖醛基，可用次碘酸钠法定量测量，其原理如下：碘
本 在碱性溶液中可以生成具有强氧化性的次碘酸盐，次碘酸盐
课
栏 能与醛糖反应，从而使醛糖氧化成糖酸盐。
关
(1)酶活力单位是指在一定条件下，1min 内能转化1μmol 底
物的酶量。测定过程中温度保持在 25 ℃，其他条件如pH 和
底物浓度等均应采用最适条件。
(2)测定方法