实验六肠杆菌科细菌的微生物学鉴定课程名称：兽医微生物学实验学时：6学时一、目的要求1．熟悉大肠杆菌和沙门氏菌形态与染色特性以及主要培养特性；2．熟悉大肠杆菌和沙门氏菌常规微生物学诊断法；3．掌握大肠杆菌和沙门氏菌生化试验的方法和原理；4．熟悉大肠杆菌和沙门氏菌在选择性和鉴别培养基上的生长表现；5．熟悉沙门氏菌血清分群、定型的方法和步骤。
二、知识背景肠杆菌科的细菌为革兰氏阴性、中等大小的杆菌，运动者周身鞭毛；在普通培养基上生长好；发酵葡萄糖和碳水化合物者产酸或产酸产气；在麦康凯琼脂上生长；细胞色素氧化酶阴性；还原硝酸盐为亚硝酸盐等。
碳水化合物的利用和其它生化试验是肠杆菌科细菌鉴定的重要试验。
大肠埃希氏菌（E.coli）简称大肠杆菌，作为原发和继发病原可引起多种动物疾病：犊牛的肠道感染和水泻；幼猪的水泻和腹泻，二月龄以上猪的出血性肠炎和水肿病；狗的尿道感染；鸡的气囊炎和大肠杆菌肉芽肿（Coligranuloma）。
沙门氏菌（Salmonella），虽然沙门氏菌血清型超过2200个，但承认的种为数不多，在O抗原的基础上，沙门氏菌血清组（群）用字母A、B、C…表示，然后根据它的H抗原（鞭毛抗原）再分，用阿拉伯数字1、2、3…等表示，沙门氏菌可引起多种动物和人的疾病，是肠杆菌科重要的致病菌，如鼠伤寒沙门氏菌（S.typhimurium）可引起动物流产，胃肠炎和败血症。
其它肠杆菌科成员：肺炎克雷伯氏菌（Klebsiella pneumoniae）可引起牛乳房炎、肺炎、母马的宫颈炎和子宫炎，这个菌常形成厚的荚膜。
变形杆菌（proteus）引起动物的尿道和胃肠道疾病。
耶尔森氏菌（yersinia）引起鼠疫、胃肠炎等。
生化试验和血清群的鉴定和定型在肠杆菌科细菌的鉴定中占很重要的位置。
三、实验材料每6人一组，每组所需材料：1．普通琼脂斜面培养物2管：分别为大肠杆菌和鼠伤寒沙门氏菌（提供实验用菌种）；2．普通肉汤2管：分别用来接种大肠杆菌和鼠伤寒沙门氏菌；3．普通琼脂平板2个分别用来划线接种大肠杆菌和鼠伤寒沙门氏菌；4．生化试验用培养基2套，包括葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖发酵试验管、靛基质，M．R、V．P试验、柠檬酸盐利用，硝酸盐还原试验等；5．三糖铁琼脂斜面培养基2管；6．选择性培养基2个，如：麦康凯琼脂平板或远滕氏琼脂平板或伊红美蓝琼脂平板；7．各种生化试验试剂：靛基质试剂，M．R试剂，V．P试剂，硝酸盐还原试剂；8．沙门氏菌因子血清。
大肠杆菌和沙门氏菌的分离鉴定方案实验原理：1、大肠杆菌的性质：大肠杆菌是G--无芽孢直杆菌，在大多数培养基上表现出不同的特性。
在麦康凯琼脂平板上是凸起光滑湿润的粉红菌落，革兰氏染色镜检为红色短杆菌。
三糖铁琼脂上的反应为斜面和底部都变黄，产气，不产生硫化氢。
生化特性为发酵葡萄糖、乳糖、甘露醇、麦芽糖，不发酵蔗糖。
MR试验，吲哚试验为阳性，VP试验为阴性，不产生H2S，不能利用枸椽酸盐。
半固体中沿穿刺线向四周生长。
2、沙门氏杆菌的性质：沙门氏杆菌是G-直杆菌。
在麦康凯平板上为细小半透明、圆形、无色小菌落，三糖铁斜面下层变黄色，上层仍为红色，穿刺处为变黑产生H2S。
能发酵葡萄糖产酸产气，能利用枸椽酸盐，不发酵乳糖不利用蔗糖肌醇，MR阳性，VP阴性，不产吲哚，不分解尿素。
实验材料：含有大肠杆菌和沙门氏菌的猪肝脏、培养基（琼脂平板培养基、三糖铁琼脂斜面培养基、麦康凯琼脂、生化培养基、SC）、器械（剪刀、记号笔、接种环、酒精灯、显微镜、试管、玻片、培养皿）、药品（消毒酒精、结晶紫、碘液、酸酒精、品红、松柏油）实验内容及操作程序：一、培养基制备：制备普通琼脂培养基、麦康凯平板、SC增菌培养基、生化培养基，制备方法见附1.二、标本制备：（1）取新鲜猪肝脏一小块，火焰表面消毒。
（2）用浸过消毒液的剪刀剪开一个小口于消过毒的猪肝脏。
（3）用接种环在剪开的肝脏小口沾取肝脏液，分别画线于麦康凯培养基和接种于SC中，37°C恒温培养24小时。
三、细菌分离培养：（1）取出培养了24小时的麦康凯平板。
挑选麦康凯平板上的凸起光滑湿润的粉红菌落染色镜检，看是否为红色短杆菌，若是，即疑似为大肠杆菌，则取其接种于另一麦康凯平板，37°C 恒温培养24小时。
（2）取出培养了24小时的SC增菌培养基，染色镜检，看是否有疑似沙门氏菌，有则取其中细菌画线接种于麦康凯平板上，37°C恒温培养24小时。
四、细菌的鉴定纯化：（1）检查疑似大肠杆菌的培养基是否长满了粉红色菌落，染色镜检。
实验原理：1、大肠杆菌的性质:大肠杆菌是G无芽抱直杆菌，在大多数培养基上表现出不同的特性。
在麦康凯琼脂平板上是凸起光滑湿润的粉红菌落，革兰氏染色镜检为红色短杆菌。
三糖铁琼脂上的反应为斜面和底部都变黄，产气，不产生硫化氢。
生化特性为发酵葡萄糖、乳糖、甘露醇、麦芽糖，不发酵蔗糖。
MR试验，口引噪试验为阳性，VP试验为阴性，不产生H2S,不能利用xx酸盐。
半固体中沿穿刺线向四周生长。
2、沙门氏杆菌的性质：-沙门氏杆菌是G直杆菌。
在麦康凯平板上为细小半透明、圆形、无色小菌落，三糖铁斜面下层变黄色，上层仍为红色，穿刺处为变黑产生H2S。
能发酵葡萄糖产酸产气，能利用枸椽酸盐，不发酵乳糖不利用蔗糖肌醇，MR阳性，VP阴性，不产呵噪，不分解尿素。
实验材料：含有大肠杆菌和沙门氏菌的猪肝脏、培养基（琼脂平板培养基、三糖铁琼脂斜面培养基、麦康凯琼脂、生化培养基、SQ、器械（剪刀、记号笔、接种环、酒精灯、显微镜、试管、玻片、培养皿）、药品（消毒酒精、结晶紫、碘液、酸酒精、品红、松柏油）实验内容及操作程序：一、培养基制备：制备普通琼脂培养基、麦康凯平板、SC增菌培养基、生化培养基，制备方法见附1.二、标本制备：(1) 取新鲜猪肝脏一小块，火焰表面消毒。
(2) 用浸过消毒液的剪刀剪开一个小口于消过毒的猪肝脏。
(3) 用接种环在剪开的肝脏小口沾取肝脏液，分别画线于麦康凯培养基和接种于SC中，37 C恒温培养24小时。
三、细菌分离培养：(1) 取出培养了24小时的麦康凯平板。
挑选麦康凯平板上的凸起光滑湿润的粉红菌落染色镜检，看是否为红色短杆菌，若是，即疑似为大肠杆菌，则取其接种于另一麦康凯平板，37 C恒温培养24小时。
(2) 取出培养了24小时的SC增菌培养基，染色镜检，看是否有疑似沙门氏菌，有则取其中细菌画线接种于麦康凯平板上，37 C恒温培养24小时。
四、细菌的鉴定纯化：(1) 检查疑似大肠杆菌的培养基是否长满了粉红色菌落，染色镜检。
沙门氏菌的实验报告沙门氏菌的实验报告引言：沙门氏菌是一种常见的细菌，广泛存在于自然环境中，尤其是在动物体内。
它是引起人类食物中毒的主要病原菌之一。
为了更好地了解沙门氏菌的特性和对人类健康的影响，我们进行了一系列的实验。
实验一：沙门氏菌的分离与培养我们从市场购买了一份新鲜鸡蛋，并在实验室中进行了分离与培养的操作。
首先，我们将鸡蛋表面进行消毒处理，然后用无菌的工具将鸡蛋壳上的细菌刮取到培养基上。
接着，我们将培养基置于恒温箱中，控制温度和湿度，以促进沙门氏菌的生长。
经过一段时间的培养，我们成功地分离出了纯净的沙门氏菌菌落。
实验二：沙门氏菌的形态观察为了观察沙门氏菌的形态特征，我们使用了光学显微镜对其进行了观察。
在显微镜下，我们发现沙门氏菌呈杆状或球状，大小约为0.5至1.5微米。
沙门氏菌具有鞭毛，使其能够在液体中快速移动。
此外，我们还观察到沙门氏菌菌落呈灰白色或淡黄色，有时会形成粘液。
实验三：沙门氏菌的生长条件为了确定沙门氏菌的适宜生长条件，我们进行了一系列的实验。
首先，我们将沙门氏菌接种于不同温度的培养基上，发现其最适宜生长的温度为37摄氏度。
此外，我们还研究了沙门氏菌在不同pH值下的生长情况，结果显示其最适宜生长的pH值为6.5至7.5。
这些实验结果为控制沙门氏菌的生长提供了重要的参考。
实验四：沙门氏菌的致病机制为了研究沙门氏菌对人类健康的影响，我们进行了一系列的实验来探索其致病机制。
首先，我们将沙门氏菌接种于小鼠体内，并观察其对小鼠的影响。
结果显示，被感染的小鼠出现了食欲不振、腹泻和发热等症状。
进一步的实验表明，沙门氏菌通过侵入人体细胞并释放毒素来引起病症。
这些实验结果为预防和治疗沙门氏菌感染提供了重要的依据。
实验五：沙门氏菌的控制方法为了控制沙门氏菌的传播和感染，我们进行了一些实验来研究其控制方法。
首先，我们发现煮沸可以有效地杀死沙门氏菌，因此在食物加工过程中要确保充分的加热。
此外，我们还研究了一些抗生素对沙门氏菌的抑制作用，结果显示某些抗生素可以有效地抑制其生长。
