生化实验课

实验一基本技术操作及吸光光度法*********************************************实验须知一、实验目的1、通过实验验证生化的基本理论，巩固所学知识。

2、掌握生物化学及分子生物学基本实验方法。

3、培养严谨、认真、实事求是的态度和正确的思维方法。

二、实验要求1、课前预习，课中认真做笔记。

2、按照实验室要求规范操作，如实记录实验结果。

3、认真，按时（当堂）完成实验报告。

三、试剂使用1、核对标签，切勿拿错试剂。

2、刻度吸管或移液器头（Tip头）与试剂必需一一对应，以免引起试剂的交叉污染。

3、用后盖好瓶盖，归还原处。

切勿张冠李戴。

四、仪器使用1、爱护仪器设备，严格遵守操作规则，注意安全。

2、精密仪器，未经允许，不得动用。

3、仪器出现故障，应立即关闭电源，报告老师。

五、实验室规则1、穿工作服进入实验室，遵守课堂纪律。

2、节约水、电、试剂，实验完毕后，清洗所用器材。

3、注意安全，若发生酸碱灼伤，应立即用大量清水冲洗。

4、值日生负责实验室卫生，倒尽垃圾，关好水电、门窗，收齐实验报告。

基本技术操作一：玻璃仪器的洗涤及干燥：（一）意义：去除干扰物，提高实验结果的准确性。

（二）常用洗涤剂：1．洗衣粉，肥皂，洗洁精，去污粉----用于一般去污。

2．强酸，强碱，尿素------去除蛋白质，核酸。

3．铬酸洗液------见附2。

4．水（自来水，蒸馏水）------用来冲洗容器。

（三）洗涤方法：* 洗涤程序：泡→洗（→泡）→冲→漱1．新仪器的洗涤：2%的盐酸浸泡数小时→自来水冲净→洗涤剂溶液中浸泡过夜→试管刷蘸肥皂、洗衣粉或去污粉擦洗容器内外壁→自来水冲10遍→蒸馏水漱洗内壁3遍→包装、消毒→干燥备用。

2．非定量敞口仪器的洗涤（试管、烧杯等）用后立即放入洗涤剂溶液或清水中浸泡过夜→试管刷蘸肥皂、洗衣粉或去污粉擦洗容器内外壁→自来水冲10遍→检查是否洗净→蒸馏水漱洗内壁3遍→包装、消毒→干燥备用。

双缩脲法测定蛋白质含量（考核实验）一、教学目的与要求：①加强对蛋白质的有关性质的认识；②掌握双缩脲法测定蛋白质含量的原理和方法；③对学生所学进行综合的测试。

二、教学实验原理：蛋白质含有两个以上的肽键，因此有双缩脲反应。

在碱性溶液中蛋白质与Cu2+形成紫红色络合物，其颜色的深浅与蛋白质的浓度成正比，而与蛋白质的分子量氨基酸成分无关，因此利用此进行比色测定蛋白质含量。

在一定条件下，未知样品的溶液与标准蛋白质溶液同时反应，并于540—560nm下比色，可以通过标准蛋白质的标准曲线求出未知的蛋白质浓度，标准蛋白溶液可以用结晶的牛（或人）血清白蛋白、卵清蛋白或酪蛋白粉末配制。

除-CONH-有此反应外，-CONH2-，-CH2-，NH2-，-CS-CS-NH2，等基团亦有此反应。

三、考核主要内容1、标准曲线的制作取6支干净的试管，按0→5编号，然后按下表依次加入试剂，充分混匀，在室温下放置半小时，以管为空白，在550nm波长处测定消光值（OD），以各管蛋白质含量（毫克）横坐标，OD值为坐标，画出标线。

2、样品测定：取样品液1.0 ml，同法进行，测其OD值，对照标准曲线求得未知液蛋白质浓度。

3、分光光度计的使用：规定每组在10min以内全部完成操作（共测6支管）；同时注意操作是否规范。

4、成绩的计算：此次的实验占30%（包括平时的表现及实验报告的完成情况和完成质量），平时的五次实验共占70%，每次实验按总分为5分为满分进行打分，总评折合成百分制。

四、实验注意事项：①标准样品的浓度为：10μg/ml；②实验过程中不得过问他人，同组人可以配合进行；③实验报告在课堂上独立完成，同组人数据相同，不得抄袭他人数据，一旦发现以零分处理；④实验过程若出现失误应向老师汇报后再进行重做；⑤对实验结果进行简单的分析.一、实验目的：1.掌握分光光度计的使用方法。

2.掌握标准管法测物质含量的方法。

3.掌握双缩脲法测定蛋白质含量的方法。

生化检测讲课教案教案标题：生化检测讲课教案教学目标：1. 了解生化检测的基本概念和意义；2. 掌握生化检测的常见方法和技术；3. 能够解释生化检测结果的含义和应用。

教学重点：1. 生化检测的基本原理和方法；2. 常见的生化指标及其检测方法；3. 生化检测结果的分析与应用。

教学准备：1. 教师：准备好相关的教学资料、实验室设备和示范实验；2. 学生：准备好课前阅读材料，以及笔记和实验记录本。

教学过程：一、导入（5分钟）1. 引入生化检测的概念，让学生了解生化检测在医学、生物科学等领域的重要性；2. 提问学生是否了解生化检测的常见方法和技术。

二、知识讲解（20分钟）1. 介绍生化检测的基本原理和方法，包括生物样本的采集、样本处理和检测方法选择等；2. 讲解常见的生化指标及其检测方法，如血液中的血糖、血脂、肝功能指标等；3. 通过示范实验或实验视频展示生化检测的具体操作步骤。

三、案例分析（15分钟）1. 提供一些生化检测的实际案例，让学生分析和解释检测结果的含义；2. 引导学生思考生化检测结果在临床诊断、疾病预防和药物疗效评估中的应用。

四、小组讨论（15分钟）1. 将学生分成小组，让他们共同讨论并总结生化检测的优势和局限性；2. 鼓励学生提出自己的观点和问题，并与小组成员进行交流。

五、总结与拓展（10分钟）1. 总结本节课的重点内容，强调生化检测在医学和生物科学中的应用价值；2. 引导学生进一步了解生化检测的发展趋势和新技术。

教学延伸：1. 鼓励学生自主进行生化检测实验，加深对生化检测原理和方法的理解；2. 布置相关的课后作业，如阅读相关文献、撰写实验报告等。

教学评估：1. 课堂参与度：观察学生在课堂讨论和实验中的积极参与程度；2. 课后作业：评估学生对生化检测知识的掌握和应用能力；3. 小组讨论表现：评估学生在小组讨论中的合作和表达能力。

教学资源：1. 生化检测实验视频或示范实验材料；2. 生化检测相关的教材、参考书和期刊文章；3. 生化检测仪器设备和实验室用品。

课题：DNA提取与鉴定一、实验目的1. 学习DNA提取的基本原理和方法。

2. 掌握从动植物细胞中提取DNA的操作步骤。

3. 学习DNA的鉴定方法，包括观察DNA的紫外光吸收特性。

二、实验原理DNA是生物体内的遗传物质，存在于细胞核、线粒体等细胞器中。

DNA提取是将细胞内的DNA与其他成分分离的过程。

本实验采用酚-氯仿法提取DNA，该方法利用酚和氯仿的相容性将蛋白质等杂质去除，从而获得纯净的DNA。

三、实验材料1. 材料：新鲜鸡血、小麦种子、苹果等。

2. 试剂：酚-氯仿混合液、NaCl溶液、75%乙醇、蒸馏水、10×TE缓冲液、二苯胺试剂。

3. 仪器：研钵、离心机、移液枪、微量离心管、紫外可见分光光度计、显微镜。

四、实验步骤1. 材料准备：取新鲜鸡血、小麦种子、苹果等，分别研磨成匀浆。

2. 细胞裂解：将匀浆加入1.5倍体积的酚-氯仿混合液，剧烈振荡，静置10分钟。

3. 去除杂质：将混合液转移至新的离心管中，12000 rpm离心10分钟，弃去上层酚-氯仿层，保留下层水相。

4. DNA纯化：将水相中加入等体积的75%乙醇，混匀后静置10分钟，12000 rpm离心5分钟，弃去上清液，将沉淀用70%乙醇洗涤一次，12000 rpm离心5分钟，弃去上清液。

5. DNA溶解：将沉淀溶于适量的10×TE缓冲液中。

6. DNA鉴定：a. 取少量DNA溶液，加入二苯胺试剂，观察颜色变化。

b. 使用紫外可见分光光度计测定DNA溶液在260 nm处的吸光度值。

五、实验结果1. DNA鉴定：通过二苯胺试剂，DNA溶液呈现蓝色，证明DNA提取成功。

2. 紫外可见分光光度计测定：DNA溶液在260 nm处的吸光度值为0.45，表明DNA 纯度较高。

六、实验讨论1. DNA提取过程中，酚-氯仿法的操作较为复杂，需要严格控制实验条件，以保证DNA的纯度。

2. 在DNA纯化过程中，乙醇沉淀法是一种常用的方法，可以有效地去除蛋白质等杂质。

生化实验课的反思报告生化实验课的反思报告生化实验课是我在大学期间所修的一门重要的实践课程。

在这门课上，我有幸参与了许多具有挑战性的实验项目，积累了丰富的实验技巧和实践经验。

通过这门课程的学习和实践，在实施实验过程中，我遇到了一些问题，但同时也取得了一些收获。

首先，我发现在实验前准备工作中，理论知识的学习是非常重要的。

在实验课中，老师会提前给我们讲解实验的原理和目的，并要求我们预习相关的理论知识。

然而，有时候由于课业繁忙或者其他原因，我没有充分地预习相关的知识，导致在实验中理论知识不够扎实的情况。

这给我的实验过程带来了很大的困扰。

通过这次的实验课，我意识到理论知识对于实验的重要性，我将会更加重视实验前的学习，尽量确保自己对实验原理的理解。

第二，实验中的团队合作是至关重要的。

在生化实验中，尤其是一些较为复杂的实验项目中，往往需要多人合作才能完成。

而在实验中，我发现与团队成员充分合作，相互协调配合，会使实验过程更加顺利。

以前，我经常习惯独立完成实验，但这常常会给我带来不必要的困难和挫败感。

通过这门实验课，我学会了与团队成员充分沟通合作，共同解决实验过程中遇到的问题，更加高效地完成实验任务。

第三，实验中的仪器操作技巧是需要不断提高的。

在实验中，我发现仪器的正确操作和调试是实验成功的关键。

而在实验中，我也面临过一些操作不熟练的情况，导致实验无法进行或者结果不准确。

通过这次实验，我发现需要不断加强仪器操作的技巧，熟练掌握仪器的使用方法，提高自己的实验能力。

我会更加注意观察仪器操作步骤，多与老师和同学请教相互交流，提高自己的仪器操作技巧。

最后，实验安全意识是非常重要的。

在生化实验中，我们经常接触到一些有毒有害的试剂和溶液，如果在操作过程中不注意安全，就会对自己和他人的健康造成严重的危害。

我在实验中经常听到一些同学的“啊”声，就是因为他们在操作过程中受伤了。

通过这次实验，我深刻意识到实验安全的重要性，并会更加加强自己的安全意识。