三种猪瘟抗体检测方法比较试验研究

猪免疫抗体不同检测方法的对比试验摘要应用某国产胶体金诊断试剂盒和进口酶联免疫吸附试验（ELISA）诊断试剂盒，分别检测猪血清中口蹄疫、猪瘟和蓝耳病抗体合格率，比较两种血清学诊断方法的准确性。

结果表明，胶体金诊断试剂盒结果和ELISA结果差异显著，两者的符合率较低。

因此，应加强国内部分胶体金诊断试剂的监控。

关键词：抗体检测；胶体金；ELISA随着养殖业的持续发展及动物防疫工作的进一步深化，对动物进行免疫接种已成为预防和控制动物疫病的重要手段。

口蹄疫、猪瘟和蓝耳病是国家要求强制免疫的重大动物疫病，其抗体监测关系免疫效果的考核、合理免疫程序的建立，也是评估疫苗质量、对重大动物疫情预警能力的的可靠依据。

县级以上兽医实验室目前开展抗体监测主要使用ELISA试剂盒，其昂贵、费时和要求专业仪器和专业人员的特点，使之不适合基层推广使用。

近年来，随着一系列胶体金检测产品在动物疫病检测领域的推广运用，以其操作简单、价格低廉、现场即时检测等特点，迅速获得了基层兽医站和养殖户的认可。

为了解这项新技术的检测准确性和可靠性，我们用胶体金和ELISA两种试剂盒检测猪血清中的抗体水平，其结果对比如下。

1 材料与方法1.1 被检血清从全市5个规模养猪场采集并分离猪血清共27份,-20℃保存备用。

1.2 诊断试剂口蹄疫合成肽ELISA试剂盒为上海优耐特生物医药有限公司生产，批号：201012004；猪瘟抗体ELISA试剂盒为北京爱德士元亨生物科技有限公司生产，批号：43220-X681；猪蓝耳病抗体ELISA试剂为北京爱德士元亨生物科技有限公司生产，批号： 40959-X061。

胶体金快速诊断试剂盒为苏州艾瑞德生物医药有限公司生产，猪口蹄疫抗体快速检测试剂盒批号：CFC005A；猪瘟抗体快速检测试剂盒批号：CFC002A；猪繁殖与呼吸综合症抗体快速检测试剂盒批号：CFC001A。

1.3 检测方法1.3.1 酶联免疫吸附试验（ELISA）严格按照说明书进行操作，以测得样品OD值大于临界值为阳性，否则为阴性。

非洲猪瘟的检测技术非洲猪瘟是一种高度致死性、急性传染病，主要通过直接接触、飞沫传播和病毒污染引起猪类的感染。

这种病毒传染能力极强，而且在猪类社群中极易传播，给养殖业、经济和社会带来严重的困扰。

因此，研究非洲猪瘟的检测技术对于疾病控制和防范具有重要的意义。

非洲猪瘟的传播与发病过程比较复杂，因此应采用多种技术进行综合检测。

常用的检测技术包括病毒分离法、酶联免疫吸附试验（ELISA）、PCR技术等。

病毒分离法是一种直接检测非洲猪瘟病毒的方法，通过对检测样品进行病毒分离和纯化，进而用于检测病毒感染的存在和数量。

病毒分离法的优点在于可以检测出非洲猪瘟病毒，并具有较高的特异性和敏感性。

但该方法操作繁琐，需要具有较高的实验技能和专业知识才能得到准确的结果。

ELISA是一种间接检测非洲猪瘟病毒抗体的方法，通过检测猪体内的非洲猪瘟病毒特异性抗体，判断猪是否被感染。

ELISA方法具有快速、准确和经济的优点，适合用于检测大量猪的群体免疫情况。

但该方法有可能产生假阳性或假阴性结果，操作时需要千丝万缕遵循操作规范。

PCR技术是研究非洲猪瘟检测技术的大热门，该技术基于特定的引物，选择性扩增非洲猪瘟病毒的核酸片段，通过检测PCR扩增产物的存在和数量，判断猪是否被感染。

PCR技术适用于各种非洲猪瘟病毒的分型、溯源和变异分析，以及对复杂样品的检测和快速获得结果。

但需要特定的设备和配套试剂，并且对样本的操作和提取过程要求非常苛刻，容易出现污染和假阳性等问题。

总的来说，非洲猪瘟的检测技术发展日新月异，涉及的技术和人力资源也越来越丰富。

检测技术的选择应根据检测目的、检测样品类型和可用资源等方面来确定。

虽然每种方法都具有其特定的优缺点，但应根据实际需要选择最适合的技术方法来进行研究。

试验研究2019年第#期（总第209期）doi:10.3969/j.issn.1006-4907.2019.01.011规模猪场主要三种病毒的抗体检测与分析蒋光明1,彭兰丽2(1.湖南省永州市道县畜牧水产局，湖南道县425300;2.湖南生物机电职业技术学院，湖南长沙410128)摘要：为了给湖南省道县兴达规模养猪场提供疫病诊断防控依据，试验对该规模化猪场5头发病猪进行了临床诊断、病理 解剖和实验室检测。

采集24份血清采用ELISA方法检测抗体。

结果表明：猪群整体食欲下降，病猪的体温为39.86 ~41.58,部分病猪四肢末端呈蓝紫色，剖检可见猪内脏表面密布点状出血;PR R SV抗体平均阳性率为95.8%，PCV2抗体平均阳性率为100%，CSFV抗体平均阳性率仅有25>。

说明该猪场CSFV免疫抗体整齐度差，保护率低，应加强 饲养管理，及时进行免疫，控制并发感染，保证猪群 疫状态，并对该猪场对于猪病的预防提供了 。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒;猪瘟病毒;猪圆环病毒2型;病理解剖;ELISA;饲养管理中图分类号:S858.28 文献标识码:C文章编号：1006-4907(2019)01-0023-02近年来养猪行业快速发展，但猪瘟、蓝耳病和 圆环病三种常见病毒性疾病的防控难度不断增大，制约产业的发展。

猪瘟(CSF)是由猪瘟病毒（CSFV)引起的猪急性、热性、败血性、全身性传染病，无季 节性，传染性极强，发病率和死亡率极高。

猪繁殖与 呼吸综合征（PRRS)又称猪蓝耳病，是由猪繁殖与 呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的猪的一种高度接触 性传染病，以母猪流产，产死胎、弱胎、木乃伊胎及 仔猪呼吸困难、败血症、高死亡率等为主要特征，严 重 全养猪业*1]。

猪圆环病毒病是由猪圆环病毒(PCV)引的一种新的传染病，猪圆环病毒分为猪 圆环病毒1型(PCV-1)和猪圆环病毒2 (PCV-2)种血 ，猪 大的是PCV-2，引起猪的一症现湖南省道县兴规养猪 的5只病猪行，猪的24血 湖南省 业行 ，为猪一些参1材料与方法1.1病例病猪5头，由湖南道县兴达规模养猪场提供，为 1、2、3、4、5 。

猪瘟抗体检测两ELISA方法比较一、原理是什么？间接法：①该方法是检测猪瘟抗体的经典ELISA方法，其原理是在酶标板中包被猪瘟病毒或猪瘟病毒的表面抗原蛋白，加入待检血清同包被的抗原孵育后，加入酶标二抗和底物显色，通过OD值来判定猪瘟抗体的效价。

②如待检血清中有特异性抗体，则形成包被抗原-待检抗体-酶标二抗三种物质的结合物，OD值越高、显色越深、待检抗体含量越高，反之，则待检抗体含量越少。

显色深浅与待检抗体量呈正比。

阻断法：①该方法是基于基因工程和单克隆抗体发展起来的ELISA方法，其原理是在酶标板中包被通过基因工程得到的猪瘟病毒保护性抗原蛋白，然后加入待检血清与包被的抗原孵育，洗板后加入针对包被蛋白的酶标单抗再次孵育，后加入底物显色，通过OD值来判定猪瘟抗体的效价。

②如待检血清中有特异性抗体，则会阻断酶标单抗的反应，导致酶标单抗不会或少量地同抗原蛋白结合；若待检血清中没有特异性抗体，酶标单抗会更好地同抗原蛋白结合。

OD值越高，显色越深、待检抗体含量越少，反之，则待检抗体含量越多。

显色深浅与待检抗体量呈反比。

二、哪种方法更好？在农业部颁布的国家动物疫病监测方案中，规定可以采用阻断ELISA或间接ELISA等方法进行猪瘟抗体水平检测。

目前，世界动物卫生组织推荐的猪瘟抗体检测方法是ELISA法和荧光抗体中和试验（FVNT）, 其中FVNT可作为猪瘟抗体检测的“金标准”。

而中和试验对试验条件和操作人员的要求很高，且耗时长，仅适合专业实验室进行少量样本检测，不宜推广应用。

因此，ELISA方法是目前国际上承认的惟一适合大规模应用的血清检测方法。

在进行ELISA检测方法评价时，最重要的两个指标就是敏感性和特异性。

阻断ELISA采用了单克隆抗体，因此检测的特异性更高；而间接ELISA则更侧重于敏感性。

有研究表明，用OIE推荐的FVNT与上述两种ELISA方法进行符合验证实验，结果表明间接法与FVNT的符合率高于阻断法，间接法能更真实地反映疫苗免疫后的中和抗体水平，而阻断法对阳性样本有漏检情况。

4种猪瘟病毒抗体检测方法的比较马超英【摘要】为比较4种猪瘟病毒抗体检测方法的优缺点,应用正向间接血凝试验(IHA),间接ELISA、Dot-ELISA、胶体金免疫层析试纸条(GICA)4种方法分别对142份猪血清样品进行检测.结果表明,间接ELISA方法检出阳性样品119份,IHA检出阳性样品117份,Dot-ELISA检出阳性样品115份,GICA检出阳性样品109份.结果提示,在对猪瘟病毒抗体进行检测时,间接ELISA由于其灵敏性高,可作为首选检测方法,但操作时需要避免假阳性的出现；正向间接血凝试验虽然灵敏度稍低,对血清质量要求高,但结果准确,是猪瘟抗体检测必不可少的检测方法,适合个体检测；胶体金试纸条和dot-ELISA检测时间较短、操作简单、无需特殊仪器设配,由于受其敏感性较低所限,适合对畜群进行检测.【期刊名称】《动物医学进展》【年(卷),期】2012(033)010【总页数】4页(P128-131)【关键词】猪瘟抗体;检测方法;优缺点【作者】马超英【作者单位】青海省海西州乌兰县铜普兽医站,青海乌兰817000【正文语种】中文【中图分类】S852.651猪瘟（Classical swine fever，CSF）是由猪瘟病毒（Classical swine fever virus，CSFV）引起猪的一种高度接触性、致死性的传染病，临床上主要以稽留高热、皮肤和黏膜出现大量出血点为主要特征［1］。

猪瘟具有高度传染性，主要通过呼吸道和消化道传染，传播速度快，发病率和病死率高，给全球养猪业造成了巨大的经济损失，世界动物卫生组织（OIE）将其列为必须报告的动物传染病，我国也将其列为一类动物疫病，是严重危害我国养猪业的最重要的疫病之一［2－6］。

近年来，我国猪瘟的流行和发病特点发生了很大变化，转变为隐性感染和亚病毒感染，在临床表现上也更加复杂，既有区域性流行，又有零星散发，既有高病死率的急性症状，又有持续感染的温和性症状趋于复杂化，出现了所谓“非典型猪瘟”、“温和型猪瘟”和“带毒母猪综合征”，在病理剖检上也常常不同于典型猪瘟的病理变化，给兽医临床诊断带来了很大困难［7］。

猪瘟抗体检测方法猪瘟，即猪繁殖与呼吸综合征，是由猪瘟病毒引起的一种严重的传染病，对猪群健康和养殖业产生了重大影响。

为了及时控制疫情和保护养殖业的发展，猪瘟抗体检测方法非常重要。

猪瘟抗体检测方法主要包括传统血清学法和分子生物学法。

传统血清学法主要是利用抗原-抗体反应原理进行检测，分子生物学法则是通过检测猪瘟病毒核酸进行诊断。

下面我将详细介绍这两种方法。

传统血清学法中最常用的方法是血清病毒中和试验。

该方法通过将待检血清与猪瘟病毒进行反应，观察病毒和抗体的相互作用。

这种方法的优点是简单、经济、可靠，适用于大规模的抗体检测。

但是存在一些局限性，如需要对待测血清和病毒进行配对，病毒株的选择和制备需要一定的经验和技术，且过程较为繁琐。

另一种传统血清学方法是酶联免疫吸附试验（ELISA）。

该方法利用特异性的酶标记抗体来检测待测血清中的猪瘟病毒抗体。

ELISA具有操作简单、灵敏度高、多重样品同时检测等优势。

此外，还可以通过改变试剂盒中抗原的性质，进一步检测不同类型的抗体，如IgM和IgG。

但是，该方法需要进行酶标仪等专门设备的检测，成本较高。

分子生物学法主要是通过检测猪瘟病毒核酸来进行诊断。

常用的方法包括聚合酶链反应（PCR）和实时荧光定量PCR（RT-qPCR）。

PCR是一种高度敏感且特异的检测方法，通过扩增待检样品中的病毒核酸，可以快速检测出病毒的存在。

RT-qPCR则能实时监测PCR反应的过程，具有更高的精确性和灵敏度。

此外，PCR还可以进行基因测序，用于病毒株的分型和溯源研究。

然而，分子生物学法虽然灵敏度高，但仍存在一些局限性。

首先，该方法对设备和技术要求较高，需要专业的实验室和操作人员。

其次，由于病毒基因组的变异性较大，需要选择合适的引物和探针，以确保检测的准确性。

此外，病毒核酸在环境中的稳定性较差，易受到污染和降解的影响，可能导致假阴性结果。

综上所述，猪瘟抗体检测方法在疫情监测、疫苗评估和动物检疫等方面具有重要作用。