炭疽检验技术

炭疽芽胞杆菌的鉴定分析摘要】探讨炭疽芽胞杆菌的微生物学检验的方法与鉴定。

炭疽芽胞杆菌是炭疽病的病原菌，炭疽病的病原菌，为人、畜共患性疾病，快速有效的检验和鉴定炭疽牙孢杆菌是最为重要的。

采取直接涂片染色镜检，分离培养与鉴定及药物敏感试验方法进行检查。

快速的病原学诊断在控制疾病流行中有重要意义。

【关键词】炭疽牙胞杆菌；微生物学；检查方法【中图分类号】R37 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2016）21-0397-02炭疽芽胞杆菌(B.anthracis)俗称炭疽杆菌，是炭疽病的病原菌，为人、畜共患性疾病，常在牧区暴发流行。

由于炭疽杆菌宿主广泛，传播方式多样，芽胞的抵抗力极强，故恐怖分子可利用该菌制造“生物恐怖”危害人类。

炭疽芽胞杆菌是需氧芽胞杆菌属中致病力最强的革兰阳性大杆菌。

引起人与动物炭疽病。

1.炭疽芽胞杆菌的生物学特性1.1 形态与染色本菌为致病性细菌中最大的革兰阳性杆菌。

大小为5～10μm×1～3μm，两端平切，无鞭毛。

新鲜标本直接涂片常单个存在或呈短链。

经培养后则形成长链，呈竹节状排列。

细菌在有氧条件下可形成芽胞，芽胞小于菌体、椭圆形、位于菌体中央。

有毒菌株可有明显的荚膜。

1.2 培养特性本菌为需氧或兼性厌氧，营养要求不高，最适生长温度为30～35℃。

无毒菌株在普通琼脂培养基上形成灰色、扁平、干燥、粗糙型(R)菌落，低倍镜下观察菌落边缘呈卷发状。

在血液琼脂平板上培养12～15h菌落周围不溶血，24h后有轻度溶血[1]。

在肉汤培养基中由于形成长链而呈絮状沉淀生长。

在明胶培养基中37℃培养18～24h，由于细菌沿穿刺线向四周扩散生长，使明胶表面液化成漏斗状。

有毒菌株在NaHCO3血琼脂平板上置5％的CO2环境中37℃培养24～48h可产生荚膜，变为黏液型(M)菌落。

用接种针挑取时呈黏丝状。

1.3 生化反应能分解葡萄糖、麦芽糖、蔗糖、蕈糖，有些菌株迟缓发酵甘油和水杨酸，产酸不产气；不发酵鼠李糖、半乳糖等其他糖类；能还原硝酸盐为亚硝酸盐；不产生吲哚和硫化氢，不利用枸橼酸盐，不分解尿素；卵磷脂酶弱阳性、触酶阳性。

炭疽杆菌的快速鉴定王艺钧10 生物技术3 班0326摘要杆菌( Bacillus anthraci )属于需氧杆菌属，能引起羊、牛、马等动物及人类的炭疽病。

炭疽杆菌曾被帝国主义作为致死战剂之一。

平时，牧民、农民、皮毛和屠宰工作者易受感染。

皮肤炭疽在我国各地还有散在发生，不应放松警惕。

我们利用炭疽杆菌的特性，通过微生物学检查，观察炭疽杆菌在含血平板上幼稚菌落待征、溶血和粘性, 再进行高价效噬菌体快速裂解试验、青霉素纸片串珠试验和活性炭NaHC03平板CO2培养物的荚膜肿胀试验, 可在短时间内完成对炭疽杆菌的定性鉴定，而不需要对其深入分子水平的检测。

1．立项依据与研究内容1.1 项目的立项依据炭疽热是一种古老的人兽共患传染病。

炭疽是由炭疽杆菌引起的人兽共患急性、热性、败血性传染病。

其病理变化的特点是脾脏显著肿大，皮下及浆膜下结缔组织出血浸润，血液凝固不良，呈煤焦油样。

人感染后多表现为皮肤炭疽、肺炭疽及肠炭疽，偶有伴发败血症。

人类炭疽病是由于接触病畜的皮毛、吸入带病菌(芽孢型)尘埃，或进食未煮熟的病畜肉类而感染。

该病潜伏期约7 天，但彻底发病多达60 天，早期症状包括咳嗽，但很快会发展为严重的呼吸障碍和痉挛。

由于炭疽病起初的症状类似流感，非常容易被人忽略。

一旦发病，病人在几天内就会死亡。

因此，快速检测出炭疽杆菌和有炭疽杆菌引起的症状的辨别对临床和治疗有着重大的意义。

如今，炭疽杆菌的鉴别技术已近很成熟，如：免疫学检验技术、核酸检验技术、适配子、肽核酸、生物传感器、生物芯片、化学分析技术、核酸测序与指纹图分析技术等等[2] 。

1.2 项目的研究内容炭疽杆菌的特点革兰氏阳性细菌；长而直的大杆菌，菌体两端平直；大小为～ 1. 5um× 3～5um，致病菌中最大的；无鞭毛，不能运动。

在病人、病畜体内多散在或呈2～3个短链排列，有荚膜(红色)。

炭疽杆菌为兼性需氧菌，在12～44℃都能生长，最适生长温度为37℃。

猪炭疽病检疫的技术要点研究炭疽是由炭疽杆菌引起的一种散发性或地方性人畜共患传染病,其致病性及经过因畜种不同而异。

家畜以牛羊马最易感染。

症状重剧、多呈急性经过,猪有一定的抵抗力,常限局部感染,慢性经过。

因具有种属上的天然免疫性,常无明显的临床症状,但在宰后检疫易检出该病。

1宰前检疫在临床实践中曾见到一例咽型炭疽病猪,生前呈咽喉炎症状,咽喉部明显肿胀,呼吸采食障碍,体温升高,经急宰后,采病料镜检,检出炭疽杆菌确诊。

猪炭疽病,除典型病例外,极少有急性型临床表现。

一般宰前仅能见到高热、精神沉郁、食欲废绝、卧地不起等症状,在宰前检疫中不易发现。

宰前检疫无任何病状的康复猪,于宰后检验中,发现颌下淋巴结、肠系膜淋巴结仍有典型的病理变化,经实验室涂征镜检发现炭疽菌而确诊。

实践证明,宰后检验是检出慢性或恢复期猪炭疽病的重要环节。

2宰后检验在正常猪宰后检验中,根据国家有关规定,专设两处猪炭疽病检验点和实验室检验,即剖检猪颌下淋巴结、肠系膜淋巴结、病料的涂征镜检三个把关环节。

2．1咽炭疽检验生猪屠宰放血后,立即剖检两侧颌下淋巴结,观察其大小、周围有无异常变化,观察刀切面变化,如有可疑时,送实验室镜检。

2．2肠炭疽检验生猪烫毛后开膛,出膛后,在滑道上或检验点,部检肠系膜淋巴结,注意重点剖检异常的淋巴结,重点观察空肠前段肠系膜淋巴结有无病变,同时从腔内将脾脏拉出,视检有无异常。

3病理变化生猪炭疽病主要有以下病理变化。

3．1咽型炭疽典型病变是颌下淋巴结肿大几倍,一侧、二侧不等。

刀切时感觉硬而脆,切面为均匀的深砖红色,质地粗糙、无光泽,并有暗红或紫黑色的凹陷坏死灶。

淋巴结周围伴有程度不同的胶样浸润,从坏死灶处涂片镜检出炭疽杆菌。

3．2肠型炭疽肠炭疽病变多见于十二脂肠和空肠前段的少数淋巴结中,偶而也见于其它部位肠系膜淋巴结。

患肠炭疽的病猪,病理变化和颌下淋巴结的咽炭疽基本一样,表现为肿大,刀切有弹性感,切面呈砖红色,出血或坏死,有灰色或白色的凹陷的坏死灶,在肠淋巴结周围及肠系膜间有黄色的胶样润,也见于因肠壁有炭疽痈形成,使局部肠管变粗大,痈底部突出肠壁,呈紫红色,在痈周围散步一些针尖状出血点,将痈切开后,可见内含豆渣样的黄色干硬的坏死物,以肠痈内容物涂片镜检,检出大量炭疽杆菌。

炭疽检验报告模板范文1. 检验目的本次检验旨在对样品进行炭疽病的检测，以确定样品是否带有炭疽病病原菌，并评估其感染程度。

2. 样品信息- 样品编号：XJ-20210501- 样品来源：农田玉米叶片- 取样时间：2021年5月1日- 取样地点：某农田，XX省，XX市3. 检验方法本次检验采用了PCR（聚合酶链式反应）技术结合病原菌标记基因的特异引物进行检测。

具体检验流程如下：1. 样品准备：将样品中的病原菌提取出来，得到DNA待用。

2. PCR扩增：在PCR反应体系中加入样品DNA和特异引物，进行PCR扩增，以扩增出炭疽病病原菌的目标基因片段。

3. 凝胶电泳：将扩增产物进行凝胶电泳，根据目标基因片段的大小，判断是否存在病原菌。

4. 检验结果经过PCR扩增和凝胶电泳分析，得到的结果如下：- 样品编号：XJ-20210501- 检测结果：阳性- 病原菌类型：炭疽病病原菌（Colletotrichum）- 病原菌感染程度：中度感染5. 结论根据检验结果，样品编号为XJ-20210501的农田玉米叶片中存在炭疽病病原菌（Colletotrichum），感染程度为中度。

6. 建议根据检验结果，采取以下措施来控制炭疽病的传播和减轻其对作物的损害：1. 及时清除感染的叶片和植株。

2. 使用适当的农药进行喷洒，以控制病原菌的繁殖。

3. 加强田间管理，保持良好的通风和排水条件，降低病原菌的传播速度。

7. 参考文献1. 张三, 李四, 王五. 炭疽病检测方法的优化与比较[J]. 农业科技通讯, 2020, 10(3): 12-18.2. Colletotrichum identification and detection. International Mycological Institute. [Online] Available at: [该报告仅为本次检验结果的描述和分析，仅供参考。

如需了解更多信息或针对具体情况提供解决方案，请与相关专业机构或专业人士联系。

牛炭疽病的诊断及防治技术炭疽病是由炭疽杆菌引起的动物急性、烈性传染病，各种动物均可感染，其中以草食动物最易感。

炭疽病对牛养殖业危害巨大，常常造成严重的经济损失；同时，炭疽病属于人畜共患病，严重威胁到养殖工作人员的健康安全，因此需要定期进行检疫，确保牛群处于一个无毒、卫生且舒适的环境中。

笔者采用临床观察和实验室诊断相结合的方法，对牛场疑似患有炭疽病的病牛进行诊断，并制定相应的治疗方案，现将诊治情况介绍如下。

一、发病情况安徽省合肥市庐阳区某奶牛场共饲养奶牛38头，2022年9月15日，其中4头12月龄、体重160千克左右的奶牛出现不食不动、鼻孔出血症状，并于1周内先后死亡。

该奶牛场其他奶牛通过观察、测温，未见异常。

经调查了解，该奶牛场以前未发现过奶牛感染炭疽病。

笔者检查发现，该奶牛场给奶牛饲喂了从疫区收割的干草，因奶牛炭疽病主要通过消化道感染，所以怀疑病死奶牛可能食用了被炭疽芽孢污染的干草而致病。

二、实验室检验1.镜检。

当病牛临床中出现体温升高和败血症等症状，可通过采集病牛组织或血液进行分析，通过取末梢血液或其他材质制成涂片，用瑞士染色，会发现大量的菌体连接排成短链，还发现竹节状有夹膜的粗大杆菌，即可确定是炭疽杆菌引起的。

2.分离培养。

通过采集动物新鲜病料，直接用于普通琼脂进行培养，同时将受污染的病料制成悬液，通过70℃加热30分钟后杀死非芽孢菌后再进行接种培养。

对分离的可疑菌株做噬菌体裂解试验，即可判断是否为炭疽杆菌。

此种实验方法简单、快速且准确性较高。

3.炭疽沉淀反应。

取病死牛体组织进行切片，将5～10倍生理盐水煮沸15分钟，自然冷却后过滤出的滤液为沉淀原，使用移液枪取适量沉淀原加入装有沉淀血清试管中，5分钟内便会出现白色沉淀物，即可确定为炭疽杆菌。

此种方法简单方便、快捷且检出率高。

三、剖检变化牛表现为急性败血症，天然孔出血，脾肿大几倍，血不凝固，脾髓及血如煤焦油样，切片小有大量炭疽杆菌；内脏浆膜有出血斑点；皮下胶样浸润；肺充血、水肿；心肌松软，心内外膜出血；全身淋巴结肿胀、出血、水肿等。

《炭疽诊断标准及处理原则》（GB17015-1997）1．范围本标准规定了人炭疽的诊断标准及人炭疽发生后的处理原则。

本标准适用于各级、各类医疗保健、卫生防疫机构对人炭疽的诊断及处理。

2．定义本标准采用下列定义。

2．1 炭疽由炭疽芽孢杆菌引起的一切人类感染，其中包括症状不典型的轻型病例。

动物炭疽在本标准中均专门指明，如称为炭疽病畜等。

2．2 就地隔离在诊断地点或家中隔离炭疽病人。

2．3 感染来源炭疽病人获得感染的来源。

其中包括传染源，指炭疽病人、病畜或其尸体，以及被炭疽芽孢污染的环境及各种物体。

3．炭疽病人的诊断3．1 诊断依据3．1．1 流行病学病人生活在已证实存在炭疽的地区内，或在发病前14日内到达过该类地区；从事与毛皮等畜产品密切接触的职业；接触过可疑的病、死动物或其残骸，食用过可疑的病、死动物肉类或其制品；在可能被炭疽芽孢杆菌污染的地区从事耕耘或挖掘等操作，均应作为流行病学线索。

3．1．2 临床表现3．1．2．1 体表感染型（皮肤）炭疽：在面、颈、手或前臂等暴露部位的皮肤出现红斑、丘疹、水疱，周围组织肿胀及浸润，继而中央坏死形成溃疡性黑色焦痂，焦痂周围皮肤发红，肿胀，疼痛不显著。

引流该部位的淋巴结肿大且常化脓，伴有发热、头痛、关节痛等。

少数严重病例，局部呈大片水肿和坏死。

3．1．2．2 经口感染型（肠）炭疽：急性起病，发热，腹胀，剧烈疼痛，腹泻，通常为血样便或血水样便。

可有恶心、呕吐，呕吐物中含血丝及胆汁。

可累及消化道以外系统。

3．1．2．3 吸入感染型（肺）炭疽：高热，呼吸困难，可有胸痛及咳嗽，咯粘液血痰。

肺部体征常只有散在的细湿罗音。

X射线的主要表现为纵膈影增宽。

常见胸腔积液。

3．1．2．4 脑膜炎型炭疽：可继发于3．1．2．1～3．1．2．3各型，也可能直接发生。

剧烈头痛，呕吐，项强，继而出现谵妄、昏迷、呼吸衰竭，脑脊液多为血性。

3．1．2．5 炭疽败血症：可继发于3．1．2．1～3．1．2．3各型，也可能直接发生。

炭疽诊断标准及处理原则GB 17015—1997^~`前言炭疽（Anthrax）是由炭疽芽孢杆菌（Bacillus anthracis）引起的一种人与动物共患传染病，主要存在于食草动物和牲畜群落之中，并能造成环境的广泛污染。

由于炭疽芽孢具有对外界环境极强的抵抗力，造成这种污染常持续存在。

人类主要通过接触患病的牲畜、进食感染本病的牲畜肉类、吸入含有该菌的气溶胶或尘埃，以及接触污染的毛皮等畜产品而罹患本病。

本标准规定了炭疽病人的诊断标准及诊断后所必须进行的处理原则。

本标准的附录A、附录B为标准的附录；附录C及附录D为提示的附录。

本标准由中华人民共和国卫生部提出。

本标准由中国预防医学科学院流行病学微生物学研究所负责起草。

本标准主要起草人：李爱芳、董树林、刘秉阳、俞东征。

本标准由卫生部委托技术归口单位中国预防医学科学院负责解释。

1 范围本标准规定了人炭疽的诊断标准及人炭疽发生后的处理原则。

本标准适用于各级、各类医疗保健、卫生防疫机构对人炭疽的诊断及处理。

2 定义本标准采用下列定义。

2．1 炭疽由炭疽芽孢杆菌引起的一切人类感染，其中包括症状不典型的轻型病例。

动物炭疽在本标准中均专门指明，如称为炭疽病畜等。

2．2 就地隔离在诊断地点或家中隔离炭疽病人。

2．3 感染来源炭疽病人获得感染的来源。

其中包括传染源，指炭疽病人、病畜或其尸体，以及被炭疽芽孢污染的环境及各种物体。

3 炭疽病人的诊断3．1 诊断依据3．1．1 流行病学病人生活在已证实存在炭疽的地区内，或在发病前14日内到达过该类地区；从事与毛皮等畜产品密切接触的职业；接触过可疑的病、死动物或其残骸，食用过可疑的病、死动物肉类或其制品；在可能被炭疽芽孢杆菌污染的地区从事耕耘或挖掘等操作，均应作为流行病学线索。

3．1．2 临床表现3．1．2．1 体表感染型（皮肤）炭疽：在面、颈、手或前臂等暴露部位的皮肤出现红斑、丘疹、水疱，周围组织肿胀及浸润，继而中央坏死形成溃疡性黑色焦痂，焦痂周围皮肤发红，肿胀，疼痛不显著。

炭疽诊断标准及处理原则前言【GB 17015—1997】炭疽（Anthrax）是由炭疽芽孢杆菌（Bacillus anthracis）引起的一种人与动物共患传染病，主要存在于食草动物和牲畜群落之中，并能造成环境的广泛污染。

由于炭疽芽孢具有对外界环境极强的抵抗力，造成这种污染常持续存在。

人类主要通过接触患病的牲畜、进食感染本病的牲畜肉类、吸入含有该菌的气溶胶或尘埃，以及接触污染的毛皮等畜产品而罹患本病。

本标准规定了炭疽病人的诊断标准及诊断后所必须进行的处理原则。

本标准的附录A、附录B为标准的附录；附录C及附录D为提示的附录。

本标准由中华人民共和国卫生部提出。

本标准由中国预防医学科学院流行病学微生物学研究所负责起草。

本标准主要起草人：李爱芳、董树林、刘秉阳、俞东征。

本标准由卫生部委托技术归口单位中国预防医学科学院负责解释。

1范围本标准规定了人炭疽的诊断标准及人炭疽发生后的处理原则。

本标准适用于各级、各类医疗保健、卫生防疫机构对人炭疽的诊断及处理。

2定义本标准采用下列定义。

2．1炭疽由炭疽芽孢杆菌引起的一切人类感染，其中包括症状不典型的轻型病例。

动物炭疽在本标准中均专门指明，如称为炭疽病畜等。

2．2就地隔离在诊断地点或家中隔离炭疽病人。

2．3感染来源炭疽病人获得感染的来源。

其中包括传染源，指炭疽病人、病畜或其尸体，以及被炭疽芽孢污染的环境及各种物体。

3炭疽病人的诊断3．1诊断依据3．1．1流行病学病人生活在已证实存在炭疽的地区内，或在发病前14日内到达过该类地区；从事与毛皮等畜产品密切接触的职业；接触过可疑的病、死动物或其残骸，食用过可疑的病、死动物肉类或其制品；在可能被炭疽芽孢杆菌污染的地区从事耕耘或挖掘等操作，均应作为流行病学线索。

3．1．2临床表现3．1．2．1体表感染型（皮肤）炭疽：在面、颈、手或前臂等暴露部位的皮肤出现红斑、丘疹、水疱，周围组织肿胀及浸润，继而中央坏死形成溃疡性黑色焦痂，焦痂周围皮肤发红，肿胀，疼痛不显著。

新疆畜牧业2019年第34卷第6期炭疽病是由炭疽芽孢杆菌(Bacillus an ⁃thracis ,BA )感染引起的人畜共患疾病。

BA 在极端环境中形成芽孢,并且可以在自然界中长期稳定存在。

由于BA 的稳定性及其致病性,很容易引起突发公共卫生事件。

世界动物卫生组织(OIE )将其列为必须报告的动物疾病,中国将其列为二类动物疫病[1]。

新疆地域辽阔,地形复杂,气候多样,是全国炭疽发病最高的地区之一,因此,做好炭疽杆菌的实验室检验工作对于有效地预防和控制该病的流行,确保本地区畜牧业健康发展具有重要意义。

本研究采用皮张炭疽沉淀试验对牛羊皮张进行验检,采用荧光PCR 方法对土壤、肉、奶中的核酸进行验检,以期为同行提供有益参考。

1材料与方法1.1主要试剂0.5%苯酚生理盐水;国家标准炭疽沉淀素血清;炭疽皮张抗原;健康皮张抗原;炭疽杆菌(BA )核酸检测试剂盒(荧光-PCR 法);细菌基因组DNA 提取试剂盒。

1.2主要仪器荧光PCR 仪(ABI 7500型);II 级生物安全柜;超净工作台;恒温培养箱;高压灭菌器。

1.3炭疽杆菌的实验室检验1.3.1样品采集1.3.1.1炭疽疫点土壤在被炭疽芽孢杆菌污染的区域(或者怀疑炭疽病发生的区域),收集20份50m 周围区域内的表面土壤(10cm 内),以每份20~50g 的量收集。

1.3.1.2牛、羊皮张在每个牛羊皮的腿根内切一块约2.0g 的皮标本并标记。

在重新检查时,仍然在第1次取样附近取样。

将样本置于带盖塑料试管中并标记。

牛、羊皮张取样各50份。

1.3.1.3其余样品肉105份,每份5~10g ;胴体拭子105份;环境拭子75份;生鲜奶120份,每份10ml 。

1.3.2检验步骤1.3.2.1皮张炭疽沉淀试验1.3.2.1.1灭菌。

将皮张标本装入试管或者用牛皮纸包裹,放入高压蒸汽灭菌锅内,121℃高压灭菌30min 。

1.3.2.1.2被检皮张抗原的制备。

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