薄层色谱生物自显影技术

简述薄层色谱工作原理薄层色谱操作规程所谓薄层色谱法，是指通过利用各成分对同一吸附剂的吸附本领不同，在流动相流过固定相的过程中，连续发生吸附、解吸、再吸附、再解吸，实现各成分相互分别的吸附薄层色谱法分别法。

薄层色谱法依据固定相的支持体，分为薄层吸附色谱法（吸附剂）、薄层调配色谱法（纤维素）、薄层离子交换色谱法（离子交换剂）、薄层凝胶色谱法（分子笕凝胶）等。

在一般的试验中，大多使用以吸附剂为固定相的薄层吸附色谱法。

吸附是表面的紧要性质。

两个相都能形成表面，吸附是其中一个相的物质或溶解在其中的溶质在该表面密集的现象。

在固体与气体之间、固体与液体之间、吸附液体与气体之间的表面有可能发生吸附现象。

由于各物质性质不同，因此物质分子停留在固体表面是由于固体表面的物质和固体内分子受到的吸引力不同。

在固体内部，分子间相互作用的力是对称的，其力场相互抵消。

固体表面的分子受到的力是不对称的，内侧面是固体内分子的力大，表面层受到的力小，所以气体和溶质分子在运动中碰到固体表面时受到这样的影响而被吸引并停留。

吸附过程是可逆的，被吸附物可以在确定条件下解吸。

在单位时间内被吸附剂的表面积吸附的分子和在同一单位时间内离开该表面的分子之间可取得动态平衡，被称为吸附平衡。

吸附色谱过程是指不断产生平衡和不平衡、吸附和解吸的动态平衡的过程。

由于资料有限，因而上述对薄层色谱概述并不全面，欢迎补充。

解析薄层色谱仪的原理薄层扫描仪是可以对斑点进行扫描的专用分光光度计，用可见光或紫外光作光源，线性扫描或锯齿扫描薄层板打开后的斑点，该斑点就吸取该组分特征波长的单色光，剩余的单色光经透射或反射或发射荧光，由检测器积分起来，获得这块斑点面积的待测物质含量。

薄层扫描仪原理：薄层色谱又叫薄板层析，是色谱法中的一种，是快速分别和定性分析少量物质的一种很紧要的试验技术，属固—液吸附色谱。

它兼备了柱色谱和纸色谱的优点，一方面适用于少量样品（几到几微克，甚至0.01微克）的分别；另一方面在制作薄层板时，把吸附层加厚加大，因此，又可用来精制样品，此法特别适用于挥发性较小或较高温度易发生变化而不能用气相色谱分析的质。

薄层色谱自显影法分离检测海洋放线菌T-2-3中抑菌成分目的采用薄层色谱生物自显影方法对北极海洋放线菌T-2-3提取物的抑菌成分进行研究。

方法采用大孔树脂对该放线菌活性成分进行富集，并针对活性成分进行薄层生物自显影检测。

结果经检测，Rf 0.40的点为活性化合物。

结论薄层色谱生物自显影法是一种快速分离检测抑菌成分的实验手段。

Abstract：ObjectiveTo investigate the antimicrobial components in extracts of Arctic Marine actinomycetes T-2-3 by TLC bioautography. MethodsThe active fraction was extracted by macroporous resin, and detected by TLC bioautography. ResultsThe compoud of Rf 0.40 behave antimicrobial activity. ConclusionTLC bioautography is a fast method to isolate and detect antimicrobial activity components.Key words：TLC bioautography; Marine actinomycetes; Antimicrobial activity 海洋微生物由于其特殊的生存環境，表现出特异的代谢方式，同时可以产生结构新颖且具有特殊生物活性的化合物，是海洋生物活性物质的重要来源[1]。

目前为止，已知有22000多种微生物次级代谢产物中70%由放线菌产生，而10000多种抗生素由链霉菌属产生[2]。

链霉菌属在放线菌中占有重要的地位，是生物活性物质的重要来源。

薄层色谱生物自显影法（TLC-Bioautography）是近年来应用的一种集分离、生物活性和鉴定于一体的”化合物+生物活性”的测定方法[3-4]。

薄层色谱生物自显影法筛选新疆莫合烟天然乙酰胆碱酯酶抑制剂的活性成分王健;朱萍萍;倪国柱;温琳豫;支玲;胡曙晨【期刊名称】《中国药业》【年(卷),期】2014(000)020【摘要】Objective To explain nicotine in tobacco can reduce the incidence of degenerative diseases,perform the activity screening of acetyl cholinesterase inhibitors of Xinjiang's unique Mohe-tobacco for illuminating the action mechanism. Methods The thin layer chromatography(TLC)bioautographic method combining TLC with biological activity assay was used to conduct the activity screening of extract solution of Xinjiang Mohe-tobacco. Results Nicotine in the extract solution of Xinjiang Mohe-tobacco appeared the white spots on the purple background by the TLC bioautography,indicating that which possesses the activity,but the white spots were weak, indicating that the nicotine content in the extract solution was unable to reach the significant inhibiting concentration,its activity was lower than that of the reference substance huperzine A;the DPPH development method revealed that the extraction solution of Xinjiang Mohe-tobacco simultaneously possesses the better antioxidant activity. Conclusion Nicotine in Xinjiang Mohe-tobacco can be com-bined with acetyl cholinesterase and inhibits its activity. The TLC bioautographic method is easy to operate with high sensitivity andspecificity in the activity screening for natural acetyl cholinesterase inhibitor.%目的：为阐明烟草中的烟碱降低退行性疾病发病率的作用机理，对新疆特有的莫合烟进行天然乙酰胆碱酯酶抑制剂的活性筛选。

薄层色谱的原理薄层色谱（TLC）是一种常用的色谱分离技术，它通过在薄层固定相上进行分离，使样品中的化合物在流动相的作用下，根据其在固定相上的亲和力大小而分离出来。

薄层色谱广泛应用于化学、生物、药学等领域，是一种简单、快速、低成本的分析方法。

薄层色谱的原理主要包括样品的制备、色谱板的制备、色谱条件的选择和色谱分离的原理。

首先，样品的制备是薄层色谱的第一步，样品需要在适当的溶剂中溶解，并通过过滤等方法去除杂质。

其次，色谱板的制备是关键步骤，色谱板通常是由玻璃、铝箔或塑料基板上涂覆一层固定相而成。

然后，选择适当的色谱条件也是十分重要的，包括固定相的选择、流动相的选择和色谱板的预处理。

最后，色谱分离的原理是根据化合物在固定相和流动相之间的相互作用力来进行分离，通常是通过极性差异来实现。

在薄层色谱中，固定相起着至关重要的作用。

固定相的选择决定了色谱分离的效果，通常使用的固定相包括硅胶、氧化铝、纤维素等。

不同的固定相对于化合物的亲和力也不同，因此在进行色谱分离时需要根据样品的性质选择合适的固定相。

另外，流动相的选择也是影响色谱分离效果的重要因素。

流动相的极性和流速会直接影响化合物在色谱板上的迁移速度，从而影响分离效果。

通常使用的流动相包括醇类、醚类、酮类等有机溶剂，其选择需要根据样品的性质和固定相的特性来确定。

薄层色谱的分离原理是基于化合物在固定相和流动相之间的相互作用力来实现的。

当样品在色谱板上进行分离时，化合物会根据其与固定相的亲和力大小而在色谱板上形成不同的斑点。

通过观察斑点的位置和色泽，可以对样品中的化合物进行定性和定量分析。

总之，薄层色谱是一种简单、快速、低成本的色谱分离技术，其原理包括样品的制备、色谱板的制备、色谱条件的选择和色谱分离的原理。

固定相和流动相的选择是影响色谱分离效果的重要因素，而分离原理是基于化合物在固定相和流动相之间的相互作用力来实现的。

薄层色谱在化学、生物、药学等领域有着广泛的应用前景，对于化合物的分离和分析具有重要的意义。

薄层色谱详细资料大全薄层色谱是在被洗涤干净的玻板（10×3cm左右）上均匀的涂一层吸附剂或支持剂，待干燥、活化后将样品溶液用管口平整的毛细管滴加于离薄层板一端约1cm处的起点线上，晾干或吹干后置薄层板于盛有展开剂的展开槽内，浸入深度为0.5cm。

待展开剂前沿离顶端约1cm附近时，将色谱板取出，干燥后喷以显色剂，或在紫外灯下显色。

基本介绍•中文名：薄层色谱•外文名：(Thin Layer Chromatography)•别名：薄板层析•类别属性：快速分离少量物质的实验技术原理,实验流程,注意事项,趋势,胶板,原理基本原理色谱法的基本原理是利用混合物中各组分在某一物质中的吸附或溶解性能的不同，或和其它亲和作用性能的差异，使混合物的溶液流经该种物质，进行反复的吸附或分配等作用，从而将各组份分开。

薄层色谱是一种微量、快速和简便的色谱 ... 。

由于各种化合物的极性不同，吸附能力不相同，在展开剂上移动，进行不同程度的解析，根据原点至主斑点中心及展开剂前沿的距离，计算比移值（Rf）：化合物的吸附能力与它们的极性成正比，具有较大极性的化合物吸附较强，因此Rf值较小。

在给定的条件下（吸附剂、展开剂、板层厚度等），化合物移动的距离和展开剂移动的距离之比是一定的，即Rf值是化合物的物理常数，其大小只与化合物本身的结构有关，因此可以根据Rf值鉴别化合物。

薄层色谱可适用小量样品（几到几十微克甚至0.01μg）的分离：也可用于多达500mg样品的分离，是近代有机化学中用于定性，定量的一种重要手段。

特别适用于那些挥发性小的化合物，以及在高温下易发生化学变化而不能用气相色谱分析的物质。

实验流程铺板点样展开显色计算Rf值铺板取7.5x2.5cm左右的载玻片5片，洗净晾干。

在50mL烧杯中，放置3g矽胶G，逐渐加入0.5﹪羧甲基纤维素钠水溶液(CMC)8mL，调成均匀的糊状，涂于上述洁净的载玻片上，用手将带浆的玻片在水平的桌面上做上下轻微的颠动，制成薄厚均匀、表面光洁平整的薄层板，涂好的矽胶G的薄层板置于水平的玻璃板上，在室温放置0.5h后，放入烘箱中，缓慢升温至110℃，恒温0.5h后取出，稍冷后置于干燥器中备用。

简述薄层色谱的原理和应用1. 原理薄层色谱（Thin Layer Chromatography, TLC）是一种基于分子间相互作用的分离技术。

它通过将样品分子在固定相表面上的吸附、扩散和分配过程来实现分离和检测。

薄层色谱相比于其他色谱技术具有操作简单、快速、经济实惠等优点。

薄层色谱主要基于以下原理进行分离：1.1 吸附色谱薄层色谱的固定相是一层稀薄的吸附剂（一般为硅胶或氧化铝），它能够吸附样品分子。

吸附色谱的分离基于不同样品分子与吸附剂之间的相互作用。

根据样品分子与吸附剂之间的亲疏性，它们在固定相表面上停留时间不同，从而实现分离。

1.2 扩散色谱薄层色谱中的移动相沿着固定相表面扩散，将样品分子带至吸附剂的表面。

扩散色谱的分离基于样品分子在移动相中的扩散速率不同。

较容易扩散的分子将在固定相表面上停留更长的时间，而不容易扩散的分子则会相对较快地通过固定相进入移动相中。

1.3 分配色谱分配色谱是薄层色谱中的一个重要原理。

分配色谱是基于样品分子在固定相和移动相之间分配的不平衡性来实现分离。

样品分子在固定相和移动相之间反复分配，直到达到平衡。

此时，分子在两相之间的分配系数将决定分离程度。

根据样品分子在两相分配的差异，可以实现有效的分离。

2. 应用薄层色谱具有广泛的应用领域，以下是一些主要的应用：2.1 药物分析薄层色谱在药物分析中起着重要的作用。

它可以用于快速筛选药物的纯度、鉴别药物、检测药物残留等。

通过选择适当的固定相，可以将不同的化合物分离开来，并且可以在薄层上直接观察和识别分离的色斑。

2.2 生物化学薄层色谱在生物化学分析中也是一种常用的技术。

它可以用于生物样品中化合物的富集和分离。

例如，可以用薄层色谱对氨基酸、脂肪酸、核苷酸和糖等生物分子进行分离和定量分析。

2.3 食品安全薄层色谱可用于检测食品中的非法添加物、农药残留、重金属等有害物质。

通过将食品样品经过适当的前处理后，可以使用薄层色谱来分离和确定这些有害物质的存在与否。

仪器分析实验薄层色谱仪器分析实验薄层色谱是一种常用的分离和鉴定物质的方法。

薄层色谱是一种在平面上进行的色谱技术，它主要依靠样品组分的吸附、分配和迁移现象来实现物质的分离和分析。

以下是对仪器分析实验薄层色谱进行详细介绍的文章。

薄层色谱是一种简单、快速、灵敏且易于操作的物质分离和鉴定方法。

其原理是利用固定在薄层支持剂上的吸附剂对物质进行分离，通过比较样品与标准物质的色谱行为来进行鉴定。

薄层色谱实验的基本步骤如下：1.准备薄层板：薄层板通常由玻璃或铝质材料制成，其表面涂覆有吸附剂（常见的有硅胶、藤黄果酸等）。

准备薄层板时，首先需使用刮刀将吸附剂涂抹在板面上，待其干燥后即可使用。

2.准备样品：样品可以是单一化合物或混合物，根据待测物质的性质选择适当的分离方式。

对于固态样品，通常需先进行溶解、萃取等预处理。

3.样品上样：将准备好的样品点滴于薄层板上，一般可使用微量移液管逐点滴于吸附剂上。

注意，每次滴液的量应尽量相同，以保证结果的可比性。

4.色谱开展：将装有样品的薄层板放置于色谱槽中，加入溶剂并封闭。

溶剂的选择应根据待测物质的极性特征进行，一般常用的有甲醇、二氯甲烷等。

溶剂的极性需根据样品的极性进行调整。

5.迁移与可视化：将色谱槽置于恒温槽内，通过升温、降温或恒温的方式进行迁移。

当样品迁移至一定距离后，取出薄层板并进行可视化。

常用的可视化方法有紫外灯照射、碘蒸气显色法等。

6.数据分析：根据样品与标准物质的色谱行为进行对比，进一步进行鉴定和分析。

可以通过Rf值计算、色谱图形态分析等方式进行。

仪器分析实验薄层色谱的优点在于其操作简便、快速、准确。

由于其样品用量少、试剂费用低等特点，常被广泛应用于药物分析、食品检测、环境监测等领域。

但其缺点在于分离度相对较低，不适用于样品数量过大或分离度要求较高的情况。

综上所述，仪器分析实验薄层色谱是一种常用的分离和鉴定方法，具有操作简便、快速、准确等优点。

在实际应用中，需要根据待测物质的特性选择合适的溶剂体系和色谱条件进行分析。

TLC（薄层层析色谱）技术原理与应用一、薄层层析（TLC）简介薄层层析是将吸附剂或者支持剂（有时加入固化剂）均匀地铺在一块玻璃上，形成薄层。

把欲分离的样品点在薄层上，然后用适宜的溶剂展开，使混合物得以分离的方法。

由于层析在薄层上进行故而得名。

薄层层析是一种微量、快速的层析方法。

它不仅可以用于纯物质的鉴定，也可用于混合物的分离、提纯及含量的测定。

还可以通过薄层层析来摸索和确定柱层析时的洗脱条件。

根据分离的原理不同，薄层层析可以分为两类：用吸附剂铺成的薄层所进行的层析为吸附薄层层析，吸附薄层中常用的吸附剂为氧化铝和硅胶；用纤维素粉、硅胶、硅藻土为支持剂铺成的薄层，属于分配薄层层析。

吸附TLC→固定相为吸附剂→氧化铝、硅胶。

（较多用）TLC→分配TLC→固定相为液态（通常为水）→固定相吸附在支持剂上。

（一）吸附薄层的基本原理：吸附薄层主要是利用吸附剂对样品中各成分吸附能力不同，及展开剂对它们的解吸附能力的不同，使各成分达到分离。

吸附作用主要由于物体表面作用力、氢键、络合、静电引力、范德华力等产生。

吸附强度决定于吸附剂的吸附能力，还受被吸附成分的性质影响，更与展开剂的性质有关。

1.吸附薄层层析：在硅胶薄层板上，样品中的两成分是两种结构近似的染料，在展开剂四氯化碳的作用下。

在展开剂和薄层板之间不断地产生吸附、解吸，再吸附，再解吸，……。

由于对氨基偶氮苯的极性比偶氮苯的极性稍强一些，层析的结果，对氨基偶氮苯受到的吸附作用稍强于偶氮苯，从而将两者分离。

展开结束以后，会在薄层板上形成两个斑点，混合物中的成分得以分离。

中药中的有效成分复杂多样，结构近似者不少。

特别是对未知结构的成分分析，设计并摸索出合理的层析条件是首要任务。

只有先设计出可用的层析条件，再经摸索改进，才可能对未知或者已知成分进行成功地分离。

然后才能谈得上进一步的分析研究。

要设计出合理有效的层析条件，必须熟悉薄层层析条件的选择的基本要领。

下面对薄层层析条件的选择做一初步介绍。