第二章 菌种扩大培养

菌种扩大培养的一般流程菌种扩大培养是微生物学实验中常见的一项操作，其目的是在较小的培养基中培养并扩大菌种数量，以满足后续实验的需要。

下面将介绍一般的菌种扩大培养流程，以帮助读者了解和掌握这一技术。

第一步：选择适当的培养基菌种扩大培养的第一步是选择适当的培养基。

不同的菌种对培养基的要求不同，因此选择合适的培养基是非常重要的。

一般来说，培养基应包含适当的营养物质，如碳源、氮源、矿物质和水等，以满足菌种生长的需要。

第二步：制备培养基制备培养基是菌种扩大培养的关键步骤之一。

一般情况下，制备培养基需要将适量的培养基粉末溶解在适量的蒸馏水中，并进行加热煮沸，以杀灭其中的细菌和其他微生物。

然后，将煮沸的培养基倒入无菌培养皿或试管中，并在冷却后加入适量的菌种。

第三步：接种菌种接种菌种是菌种扩大培养的关键步骤之一。

接种菌种时，首先需要将菌种从原始培养基中转移到新的培养基中。

这可以通过采用无菌的接种环、接种针等工具，将菌种从原始培养基中接种到新的培养基中完成。

为了确保接种的无菌性，可以在接种后进行密封和贴标。

第四步：培养菌种在接种菌种后，需要将培养基置于适当的环境条件下进行培养。

一般来说，菌种的生长需要适宜的温度、湿度和氧气条件。

因此，在培养过程中需要注意保持适宜的培养环境，并定期观察菌落的生长情况。

第五步：检测菌种的生长情况在培养一定时间后，需要检测菌种的生长情况。

这可以通过肉眼观察菌落的形态、颜色和大小等特征来判断。

同时，也可以采用显微镜观察菌落的细胞形态和结构，以进一步确定菌种的生长情况。

第六步：收获菌种在菌种生长到一定程度后，可以进行菌种的收获。

一般来说，菌种可以通过离心、过滤和冻干等方法进行收获。

收获后的菌种可以用于后续的实验操作或保存在冷冻库中。

菌种扩大培养的一般流程包括选择适当的培养基、制备培养基、接种菌种、培养菌种、检测菌种的生长情况和收获菌种等步骤。

通过掌握和熟练操作这一流程，可以有效地扩大菌种数量，并满足后续实验的需要。

菌种的扩大培养、污染的检测与判别种子扩大培养是指将保存在砂土管、冷冻干燥管中处休眠状态的生产菌种接入试管斜面活化后，再经过扁瓶或摇瓶及种子罐逐级扩大培养,最终获得一定数量和质量的纯种过程。

这些纯种培养物称为种子。

微生物工业自从采用纯种发酵以来，产率有了很大的提高，然而防止杂菌污染的要求也更高了。

人们在与杂菌污染的斗争中，积累总结出很多宝贵的经验。

规范了管理措施，设计了一系列设备(例如密闭式发酵罐，培养基灭菌设备，无菌空气制备设备等)和管道，应用了无菌室甚至无菌车间，建立了无菌操作技术，因而大大降低了发酵染菌率。

但是某些发酵工业还遭受着染菌的威胁，染菌后轻者影响产率、产物提取收得率和产品质量，重者造成“倒罐” ，不但浪费大量原材料，造成严重的经济损失，还会对周围环境造成破坏。

凡是在发酵液或发酵容器中侵入了非接种的微生物统称为杂菌污染，及早发现杂菌并采取相应措施，对减少由杂菌污染造成的损失至关重要。

因此检查的方法要求准确、快速。

发酵污染可发生在各个时期。

种子培养期染菌的危害最大，因严格防止。

一旦发现种子染菌，均应灭菌后弃去，并对种子罐及其管道进行彻底灭菌。

发酵前期养分丰富，容易染菌，此时养分消耗不多，应将发酵液补足必要养分后迅速灭菌，并重新接种发酵。

发酵中期染菌不但严重干扰生产菌株的代谢，而且会影响产物的生成，甚至使已形成的产物分解。

由于发酵中期养分已被大量消耗，代谢产物的生成又不是很多，挽救处理比较困难，可考虑加入适量的抗生素或杀菌剂。

如果是发酵后期染菌，此时产物积累已较多，糖等养分已接近耗尽，若染菌不严重，可继续进行发酵;若污染严重，可提钱放罐。

染菌程度越重，危害越大;染菌少，对发酵的影响就小。

所以，实际生产中，应当根据污染程度和发酵时期区别对待。

器材与试剂1.器材高压蒸汽灭菌锅、超净工作台、带摇床的培养箱、显微镜、天平、三角瓶、试管、移液管、培养皿、接种针、平板涂布器、酒精灯、载玻片2.试剂营养琼脂、葡萄糖、磷酸二氢氨、七水合硫酸镁、氯化钠、磷酸氢二钾、牛肉膏、蛋白胨、0.4%酚红溶液、蒸馏水、番红染液、香柏油、擦镜液3.培养基(1)营养琼脂培养基：直接称量营养琼脂粉4.5g，溶于100mL蒸馏水配制，pH 7.2，分装到试管中，灭菌后摆成斜面。

菌种扩大培养的一般流程菌种扩大培养是微生物学研究中的一项重要技术，在生物制药、食品工业等领域也有广泛应用。

本文将介绍一般的菌种扩大培养流程，以帮助读者更好地理解和应用该技术。

一、菌种的选择菌种的选择是菌种扩大培养的第一步。

在选择菌种时，需要考虑其特性、用途和所需培养条件等因素。

一般来说，菌种应具有较好的生长特性、产生目标产物的能力以及较高的稳定性。

二、菌种的预培养菌种的预培养是为了获得足够数量的起始菌株。

首先，将菌种从冷冻保存物中取出，接种到适当的培养基中，进行预培养。

预培养的目的是让菌种活化并适应培养基的环境，以提高后续扩大培养的成功率。

三、扩大培养的前期准备在进行扩大培养之前，需要准备好培养基、培养设备和相关试剂等。

培养基的选择应根据菌种的需求和培养目的来确定，一般包括碳源、氮源、无机盐和其他必需因子等。

培养设备的清洁和消毒也是保证扩大培养成功的重要步骤。

四、扩大培养的操作步骤1. 将预培养的菌种转接到扩大培养所需的培养基中，并进行初级培养。

初级培养的目的是让菌种适应新的培养基和环境，逐渐增加菌体数量。

2. 根据菌种的生长特性和需求，调节培养条件，如温度、pH值、氧气供应等。

保持适宜的培养条件可以促进菌种的生长和产生目标产物。

3. 定期监测培养物的生长情况，包括菌体数量的增长、生长曲线的变化以及培养基中目标产物的积累情况等。

监测结果有助于调整培养条件，以获得最佳的扩大培养效果。

4. 在菌种生长达到一定阶段时，可以进行菌体的分离和提取。

常用的方法包括离心、超滤和柱层析等。

分离和提取的目的是纯化目标产物并减少其他杂质的干扰。

五、扩大培养的后期处理完成扩大培养后，需要对培养物进行后期处理。

常见的处理方法包括杀菌、浓缩、冻干等。

后期处理的目的是保持菌种的活性和稳定性，以便于后续的存储和应用。

六、菌种的存储菌种的存储是为了长期保存和保持菌种的活性。

常用的存储方法包括冷冻保存、冻干保存和液氮保存等。

存储条件的选择应根据菌种的特性和需求来确定，以确保菌种的长期稳定性和可用性。