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奶粉中蛋白质含量测定1.前言：在蛋白质研究领域中，用一种快速准确的方法来检测蛋白浓度是必不可少的。
与双缩脲法、紫外吸收法相比，新建立的考马斯亮蓝法在许多情况下已成为定量检测蛋白浓度的首选方法。
同时，与传统的Lowry法相比，该法具备更易操作，更快，更灵敏以及受其它试剂和非蛋白成分干扰较小等优势。
其检测原理是基于染料考马斯蓝G250和蛋白质之间可以形成特异性结合。
详细的研究表明[1]，该染料可以自由存在于四种不同的离子形式中。
相比之下，染料更多的阴离子形式与蛋白质结合且结合后显蓝色，在590 nm左右具有最大吸收。
因此通过测定染料中蓝色离子的量就可以折算出蛋白质的量，这通常可以在595 nm处测定吸光度获得。
2.实验方案及原理：（1）①实验流程：前期原料配备标准曲线绘制样品测定②实验前期准备：Ⅰ、称取奶粉样品，配制成5mg/ml的溶液。
再取0.3ml该溶液于试管，再加入0.7ml去离子水，9ml考马斯亮蓝G-250，配制成奶粉含量为150μg/ml的样品溶液；Ⅱ、配制浓度为0.4mg/ml的标准牛血清蛋白（BSA）溶液,选用五个点绘制标准曲线，这五点BSA溶液体积分别为0.1，0.2，0.4，0.6，0.8ml，同时相应地加入9ml考马斯亮蓝G-250和水，每份配制成体积为10ml的溶液，即每份含BSA的量为40，80，160，240，320μg。
浓度分别为4，8，16，24，32μg/ml。
配制相同两组，分别记为A组和B组。
如下表：溶液序号0 1 2 3 4 50 0.1 0.2 0.4 0.6 0.8标准牛血清蛋白（BSA）/ml去离子水/ml 1 0.9 0.8 0.6 0.4 0.2考马斯亮蓝9 9 9 9 9 9G-250/ml③做紫外分光光度测试，得每份试剂蛋白质-色素结合物在595nm波长下的最大光吸收A。
因其光吸收值与蛋白质含量成正比，所以可用于蛋白质的定量测定；④根据所测数据，通过作图得直线A=aC+d(A为蛋白质-色素结合物在595nm波长下的最大光吸收,C为溶液浓度)。
测量不确定度评定报告编制：审核：批准：年月日1目的评定 食品中蛋白质的测定GB 5009.5 第一法 项目测量不确定度，本次实验测定奶粉中蛋白质含量。
2检测过程描述称取充分混匀的固体试样0.2g-2g ，精确至0.001g ，至消化管中，再加入0.4g 硫酸铜、6g 硫酸钾及20mL 硫酸于消化炉进行消化。
当消化炉温度达到420℃之后，继续消化1h ，此时消化管中的液体呈绿色透明状，取出冷却后加入50mL 水，于自动凯氏定氮仪上自动加液、蒸馏、滴定和记录滴定数据。
同时测定空白。
3所用仪器设备和标准物质：4数学模型根据检测标准中规定的检测原理，建立被测量的数学模型（一般直接采用被测量的计算公式作为数学模型）。
100100/V m 0140.0c V V X 321⨯⨯⨯⨯⨯-=F ）（式中：X —试样中蛋白质的含量，单位为g/kg ；V 1—试样消耗硫酸或盐酸标准滴定液的体积，单位为mL ； V 2—试剂空白消耗盐酸标准滴定液的体积，单位mL ； c —盐酸标准滴定溶液浓度，单位mol/L;0.0140—1.0mL 盐酸标准滴定溶液相当的氮的质量，单位为g ；m —试样的质量，单位g ；V 3—吸取消化液的体积，单位为mL ；F —氮换算为蛋白质的系数，各种食品中氮转换系数见标准附录A ； 100—换算系数。
5.不确定度的来源样品中蛋白质含量X 的不确定度来源有3个方面：5.1 重复性测量 5.2 标准溶液标准物质引入的相对不确定度。
5.3 样品称量万分级电子天平经北京计量院检定合格，0-50g 最大允许误差为±0.5e 。
5.4 检测设备凯氏定氮仪经中检计量有限公司校准，最大允许误差2%;6 不确定度分量的评定6.1 随机因素对测量结果带来的不确定度分量u r （f r ），评定时进行6次独立测量，算术平均值为 20.1g/100g ，测量重复性导致的标准不确定度评价如下表：奶粉中蛋白质含量测定结果一览表单位g/100g根据贝塞尔公式计算单次测量实验引入的标准差为：2101i ix 1n Y Y )C (--=∑=）（S=0.173测量结果由两次平行测定的算术平均值给出，故其重复性引入的标准不确定度为：2C S u x f r ）（）（==0.122mg/L测量重复性引入的相对标准不确定度为%61.01.20122.0C f u f u x r r r ===）（）（6.2 标准溶液引入相对不确定度u r （C s ）标准溶液浓度引入的相对不确定度u r （C 0）。
凯氏定氮法检测奶粉中蛋白质质量控制及注意事项凯氏定氮法是一种常用的检测奶粉中蛋白质含量的方法。
本文将介绍使用凯氏定氮法进行奶粉中蛋白质质量控制的步骤，并提供一些注意事项。
凯氏定氮法是通过测定样品中的氮元素含量，间接地计算出样品中蛋白质的含量。
蛋白质中约含有16%的氮元素，因此通过测定样品中的氮含量，可以估算出蛋白质的含量。
1. 样品制备：取适量奶粉样品，加入适量去离子水进行均匀搅拌，以获得均匀的样品溶液。
2. 氮元素测定：将样品溶液取一定量置于凯氏蒸发皿中，放入预热至恒定质量的烘箱中，在高温下使样品脱水和燃烧，使其中的有机物燃烧成无水的氮气。
燃烧完毕后，用盖子盖上，冷却至室温。
3. 氮气收集：在凯氏蒸发皿上设置一个滴水漏斗，在漏斗尾端连接吸气瓶。
用一定的抽气速度抽出皿内的气体，并通过吸气瓶中的酸吸取燃烧发出的SO2，保持皿内负压状态，确保样品中的所有氮元素都收集到吸气瓶中。
4. 酸碱滴定：将吸气瓶中的氮气接入一定量的硫酸铜试剂中，反应生成亚硫酸铜，并称量标准氧化钾溶液滴定，让其与亚硫酸铜反应。
通过滴定过程中反应液由蓝色转变为无色，从而确定氮气的净生成量。
5. 计算蛋白质含量：根据滴定所用的标准氧化钾溶液的浓度，以及样品中收集到的氮气净生成量，可计算出样品中的蛋白质含量。
1. 样品选择：选择代表性好的样品进行检测，如果样品不均匀或有不良成分，则会对结果产生偏差。
2. 操作规范：操作时需严格按照方法要求进行，并遵守实验室标准操作规程，以保证结果准确可靠。
3. 实验仪器：保持实验仪器的良好状态，定期校验和维护，以确保检测结果的准确性。
4. 数据分析：对实验结果进行合理分析和判断，并与其他方法进行对比，以获取更准确的蛋白质含量数据。
5. 质量控制：定期进行质量控制，包括使用标准样品进行校准和重复性检测，以确保数据的准确性和可靠性。
凯氏定氮法是一种可靠的方法用于检测奶粉中蛋白质含量，通过正确操作和质量控制可以得到准确可靠的结果。
凯氏定氮法检测奶粉中蛋白质质量控制及注意事项
凯氏定氮法是一种常用的检测蛋白质含量的方法，也被广泛应用于奶制品行业。
在奶粉生产中，蛋白质的含量是影响奶粉品质的重要因素之一。
因此，采用凯氏定氮法对奶粉中蛋白质含量进行检测和质量控制非常必要。
本文将介绍凯氏定氮法在奶粉中检测蛋白质的应用以及注意事项。
一、凯氏定氮法原理
凯氏定氮法是以蛋白质中的亮氨酸和脯氨酸为基础，通过催化剂作用使蛋白质中的氮原子被氧化成氨，进而转化为氨基氮，再以铜离子为催化剂，将氨基氮还原成亚铜离子。
通过比色法或电位滴定法测定亚铜离子的含量，计算出蛋白质含量。
该方法具有准确、简单、灵敏等特点，被广泛应用于生物化学、食品科学等领域。
二、凯氏定氮法在奶粉中的应用
1. 样品处理要彻底。
奶粉在生产过程中易受到各种污染，应保持样品卫生和细心处理样品。
2. 操作要规范。
操作过程中要注意按操作规程处理，仪器设备要经过严格的校准。
3. 标准品的准备要充分。
标准品的准备要求较高，必须通过标准品验证后再进行蛋白质含量分析。
4. 良好的实验室管理。
合理的实验室布局、管理及仪器设备养护、维护是保持精度可靠性的前提。
5. 实验操作人员要熟练掌握相关技术，具备一定的实验经验和操作技能。
总之，凯氏定氮法是目前奶粉制造工业中广泛采用的一种检测蛋白质含量的方法。
在奶粉制造和质量控制中，准确、快速、准确的测定奶粉中蛋白质含量是保证产品质量的一个重要环节。
同时，操作规范、维护仪器设备、常规检验、标准品准备以及实验室管理都是确保实验结果准确可靠的必要前提。
实验三 凯氏定氮法测量奶粉中蛋白质含量一、实验目的1、学习凯氏定氮法测定蛋白质的原理2、学会全自动凯氏定氮仪的操作，包括样品的消化处理，蒸馏，滴定以及蛋白质含量的计算等二、实验原理蛋白质是含氮的化合物，食品与浓硫酸和催化剂共同加热消化，使蛋白质分解，产生的氨与硫酸结合生成硫酸铵，留在消化液中，然后加碱蒸馏使氨游离，用硼酸吸收后，再用盐酸标准溶液滴定，根据酸的消耗量乘以蛋白质换算系数，得到蛋白质含量。
由于食品中除了蛋白质意外还有其它含氮的物质，所以此蛋白质称为粗蛋白。
三、实验仪器与试剂1、仪器消解仪，全自动凯氏定氮仪2、试剂浓硫酸，消解片硼酸（40g/L ），氢氧化钠（350g/L ），蒸馏水0.01mol/L 盐酸标准溶液，0.1%甲基红乙醇溶液， 0.1%溴甲酚绿乙醇溶液奶粉四、实验步骤1、样品消化称取两份奶粉（0.5g ）,加入15mL 浓硫酸和一片消化片根据设定的程序进行消解2、样品的吸收和蒸馏消化后的样品冷却后，用全自动凯氏定氮仪进行吸收和蒸馏，馏出液为蓝色或蓝绿色3、样品滴定以0.01mol/L 盐酸标准溶液滴定至浅灰色或者淡红色五、结果计算 100101000140.0⨯⨯⨯⨯⨯=F m c V x X 为样品中蛋白质的含量，g/100g; V 为样品滴定消耗盐酸标准溶液体积， mL; c 为盐酸标准溶液浓度，mol/L; 0.014为1.0 mL 盐酸标准滴定溶液滴定溶液相当的氮的质量，g; m 为样品的质量，F为换算为蛋白质的系数，乳制品为6.38。
六、思考题1、预习凯氏定氮法测定蛋白质的原理2、蒸馏时为什么要加入氢氧化钠溶液，加入量对测定结果有何影响？3、实验过程中，影响准确性的因素有哪些？。
奶粉中蛋白质含量的测定第一篇嗨，亲爱的朋友们！今天咱们来聊聊奶粉中蛋白质含量的测定这个有趣的话题。
你知道吗？奶粉可是宝宝们成长的重要营养来源，而蛋白质在其中的含量那可是至关重要。
那怎么来测定这个含量呢？这就像是一场小小的科学探秘之旅。
呢，得有专业的实验室和仪器。
那些瓶瓶罐罐和精密的设备，看起来就特别厉害。
然后呢，工作人员会取一些奶粉样品，小心翼翼地处理。
这可不能马虎，一点点的偏差都可能影响结果。
测定的方法也有好几种。
有一种叫凯氏定氮法，听起来是不是有点高大上？其实就是通过一系列的化学反应，把奶粉中的氮转化成可以测量的形式，从而推算出蛋白质的含量。
在测定的过程中，每一个步骤都要精准，就像在完成一件精美的艺术品。
要是出了差错，那可就不好啦。
而且哦，测定蛋白质含量不仅仅是为了知道数字，更是为了保证宝宝们能喝到营养均衡、质量可靠的奶粉。
这可是关系到宝宝们健康成长的大事呢！所以呀，奶粉中蛋白质含量的测定可不是闹着玩的，是一项非常重要又严谨的工作。
第二篇哈喽呀，小伙伴们！咱们今天来扯扯奶粉中蛋白质含量的测定这事儿。
说起奶粉，那可是宝宝们的“口粮”，蛋白质在里面的含量可不能瞎猜。
那到底咋测定呢？想象一下，一群穿着白大褂的科学家，在实验室里忙忙碌碌。
他们先把奶粉拿来，就像对待宝贝一样。
然后开始各种操作，那认真劲儿，就跟在完成一个超级重要的任务。
有一种方法是用化学试剂来反应，看看能产生啥变化。
还有的会用高科技的仪器，一扫描一分析，结果就出来啦。
这测定可不是随便搞搞，得严格按照标准来。
要是不准，宝宝们喝的奶粉营养不够或者太多，那可就麻烦了。
而且呀，这测定还得经常做，不能偷懒。
就像我们要经常体检一样，奶粉也得经常“体检”，保证蛋白质含量一直是合适的。
每次想到那些工作人员为了宝宝们能健康成长，这么认真地测定奶粉中的蛋白质含量，我就觉得特别暖心。
这就是对宝宝们满满的爱呀！怎么样，是不是觉得奶粉中蛋白质含量的测定也挺有意思的？。
凯氏定氮法检测奶粉中蛋白质质量控制及注意事项凯氏定氮法是一种常用的检测奶粉中蛋白质含量的方法，该方法通过测定样品中氨基酸的总氮含量来计算蛋白质含量。
蛋白质是奶粉中的重要营养成分，也是影响奶粉品质的关键因素之一。
对奶粉中蛋白质的质量进行控制是非常重要的。
下面将重点介绍凯氏定氮法检测奶粉中蛋白质质量控制及注意事项。
1. 样品准备：在进行定氮法检测之前，首先需要对样品进行准备。
样品准备的关键是确保样品的代表性和均匀性，通常采用机械粉碎和分装的方法来进行处理，确保样品具有代表性。
还需要注意避免样品受到外界污染。
2. 仪器选择：在进行凯氏定氮法检测时，需要选择合适的仪器设备。
通常使用的仪器包括凯氏消解仪、凯氏蒸馏仪、凯氏滴定仪等，这些仪器能够准确测定样品中蛋白质的含量。
3. 检测方法：在进行凯氏定氮法检测时，需要严格按照标准操作程序进行操作，确保检测结果的准确性和可靠性。
具体操作包括样品的消解、蒸馏和滴定等步骤，对每一步操作都需要严格控制条件和操作要求。
4. 质量控制：为了确保检测结果的准确性，需要进行质量控制。
质量控制主要包括标准品的使用、对照样品的测定、仪器的校准和验证等。
通过进行质量控制，可以及时发现和排除可能影响检测结果的因素，确保检测结果的准确性和可靠性。
5. 结果解读：需要对检测结果进行解读。
通过比对标准要求，判断检测结果是否符合规定标准，并据此评估样品的蛋白质质量，为后续加工和品质控制提供重要参考依据。
1. 操作规范：在进行凯氏定氮法检测时，需要严格按照标准操作程序进行操作，避免操作不当导致检测结果的偏差。
操作人员需要熟悉仪器设备的使用方法，确保操作过程的平稳进行。
2. 样品防护：在样品准备和检测过程中，需要做好样品的防护工作，避免样品受到外界污染或挥发。
对于可能对人体造成危害的样品，操作人员还需要做好个人防护措施，确保人身安全。
3. 仪器维护：定氮法检测仪器的维护非常重要，定期对仪器设备进行清洁、校准和维护，以确保仪器设备的正常运行和检测结果的准确性。
【摘要】目的尝试建立一种快速准确地测定奶粉中蛋白质含量的方法。
方法使用三氯乙酸沉淀蛋白质后，运用BCA（二喹啉甲酸）法，在570 nm波长处，分别测定标准蛋白质应用液与样品稀释液的吸光度值，基于测定液中蛋白质含量与其吸光度值呈正比关系，计算出样品中蛋白质的含量。
结果待测溶液中蛋白质浓度在0～250 μg/ml 范围内标准曲线呈线性关系，其回归方程为：Y=301.12X-73.42，相关系数r=0.998，平均回收率为100.2%。
结论结合三氯乙酸沉淀的BCA法适用于奶粉中蛋白质的快速检验和掺伪检验。
【关键词】奶粉；蛋白质；BCA法；三氯乙酸；三聚氰胺A rapid and simple method of protein determination in powdered milkZhang Zhiqiao, Shen Guodong, Wang GangFirst Middle School of Hefei, Anhui Provincial Hospital Affiliated to Anhui Medical University, Hefei 230001［Abstract］Objective To explore a rapid and simple method of protein determination in powdered milk without other nitrogen-containing compound disturbance in Kjeldahl determination.Methods Conjugated with protein precipitation with trichloroacetic acid, BCA (bicinchoninic acid) method was used. According to the positive relationship of protein content with the 570 nm absorbance, protein content was calculated in powdered milk.Results Protein content in milk solution showed a good linear relationship at the detection ranges of 0-250μg/ml, with regression equation: Y=301.12X-73.42 and related coefficient: 0.998, and the average recovery rate was 100.2%.Conclusion BCA method conjugated with trichloroacetic acid is adaptable to the rapid and sensitive determination of protein in powdered milk.［Key words］Powdered milk; Protein; BCA method; Trichloroacetic acid; Melamine蛋白质是人类最重要的营养物质之一。
测定奶粉中蛋白质含量的方法一、背景介绍奶粉是一种非常重要的婴幼儿食品，蛋白质是奶粉中最重要的营养成分之一，对于婴幼儿的生长发育起着至关重要的作用。
因此，准确测定奶粉中蛋白质的含量对于保证婴幼儿的健康发育具有重要意义。
二、常用的蛋白质测定方法1. Kjeldahl法Kjeldahl法是目前最常用的测定蛋白质含量的方法之一、该方法是通过将奶粉样品与浓硫酸混合加热，使样品中的蛋白质转变成无机氮化合物，并通过酸碱滴定法测定产生的无机氮含量来计算蛋白质含量。
实验步骤：1)将奶粉样品称取一定量(通常为1g)，加入耐酸的蒸馏瓶中。
2)加入适量的浓硫酸，并加热加压至110-120℃，将样品中的有机氮转变为无机氮。
3)冷却样品，加入适量的蒸馏水进行稀释，使样品可以进行后续的滴定。
4)使用酸碱滴定法，在碱性条件下滴定产生的无机氮，根据滴定消耗的酸碱溶液的体积计算样品中蛋白质的含量。
2.比色法比色法是利用试剂与蛋白质反应产生颜色的强弱来测定蛋白质含量的方法。
目前常用的试剂有布雷特田试剂和卡焦氏蓝试剂等。
实验步骤：1)将奶粉样品溶解并稀释，制备合适浓度的样品溶液。
2)加入试剂，并充分混合，使试剂与蛋白质反应。
3)使用分光光度计测定反应体系的吸光度值，并与标准曲线进行比较，计算样品中蛋白质的含量。
3.贝里氏酶消化法贝里氏酶消化法是通过使用分解蛋白质的酶来测定奶粉中蛋白质含量的方法。
在酶的作用下，蛋白质会被分解成肽链和氨基酸，进而进行测定。
实验步骤：1)将奶粉样品溶解，并加入适量的贝里氏酶。
2)在适当的时间和温度下进行消化反应，使蛋白质分解为肽链和氨基酸。
3)使用比色法或其他方法，测定消化后样品的蛋白质含量。
三、常见问题和注意事项1. 消化方法选择：根据样品的性质和需要的精度选择合适的消化方法，比如Kjeldahl法适用于大样品量和较高精度要求的测定，而贝里氏酶消化法适用于较小样品量和相对较低精度要求的测定。
2.校准曲线的制备：使用标准物质制备不同浓度的标准溶液，建立标准曲线并进行校准，以保证蛋白质测定结果的准确性。
凯氏定氮法测奶粉中真实蛋白质的含量
摘要
实验用凯氏定氮法测定奶粉中的蛋白质含量，将硫酸及催化剂与奶粉一同加热消化，使蛋白质分解，其中C、H形成CO2、H2O逸出，而氮以氨的形式与硫酸作用，形成硫酸铵留在酸液中。
然后将消化液碱化，蒸馏，使氨游离，用水蒸气蒸出，被硼酸吸收。
用标准盐酸溶液滴定所生成的硼酸铵，消耗的盐酸标准液计算出总氮量，再折算为粗蛋白含量。
关键词: 凯氏定氮法蛋白质消化蒸馏
1前言：劣质奶粉的出现严重地损害了人民群众的健康,劣质奶粉的主要特点是蛋白质含量远低于正常值。
正是利用氮与蛋白质含量间的关系，实验室测定蛋白质的非直接性，一些不法人士钻了蛋白质中氮的含量。
他们利用三聚氰胺含有很高的氮，将三聚氰胺残掺杂近奶粉中以提高奶粉的蛋白质含量。
而长期饮用这些蛋白质含量极低的奶粉，首先会导致婴儿严重营养不良，随后会引起各种并发症，在外来细菌的侵袭之下，婴儿几乎完全丧失了自身的免疫能力，病情发展十分迅速，最后婴儿头部严重水肿，几乎看不清五官，全身皮肤也出现了大面积的高度溃烂，伤口长时间无法愈合，最后导致呼吸衰竭而死亡。
因此，测定奶粉中蛋白质含量，对掌握其营养价值和品质的变化，保障人体的健康，合理配料，为乳制品深加工提供数据十分重要，此外，蛋白质分解产物对乳制品的色、香、味都有一定的作用，所以测定具有深远意义。
2实验目的
（1）学习凯氏定氮法的测定蛋白质的原理；
（2）掌握凯氏定氮法的操作技术，包括样品的消化处理、蒸馏、滴定及蛋白质含量的计算等。
3实验原理
各种天然有机物的含氮量通常用微量凯氏定氮法（micro-Kjeldahl method）来测定。
当有机含氮化合物与浓硫酸共热消化，氮转化为氨，氨与硫酸结合成硫酸铵。
消化产生
的硫酸铵在蒸馏过程中与强碱（40%氢氧化钠）反应，放出氨。
氨被带指示剂的硼酸吸收后，用标准盐酸溶液滴定。
根据标准盐酸的消耗量可以计算样品的总氮量。
反应式如下：
消化：含氮有机物+H2SO4→CO2+H2O+NH3↑
2NH3+H2SO4→（NH4）2SO4
蒸馏：（NH4）2SO4+2NaOH→H2O+2NH3+ Na2SO4
2NH3+4HBO3（带指示剂）→（NH4）2B4O7+5 H2O
酒红色鲜绿色
滴定：（NH4）2B4O7+2HCL+5 H2O→2 NH4CL+4H3BO4
鲜绿色淡紫色
消化过程时间较长，为加速反应，在消化时常加入硫酸钾与硫酸铜混合粉末来促进。
期中硫酸钾与硫酸作用生成硫酸氢钾，可以提高溶液的沸点（一般纯硫酸的沸点在340℃左右，而添加硫酸钾后可是温度提高到400℃以上），提高反应温度，从而加快有机物的分解。
硫酸铜起催化作用。
在凯式定氮中可用的催化剂的种类很多，出硫酸铜外，还有氧化汞、硒粉、二氧化钛等，但综合价格、效果及环境污染等因素，硫酸铜的应用最为广泛。
微量凯氏定氮法蒸馏样品时每次适合0.2~1.0 mg的氮含量。
4.实验设备
凯氏烧瓶、移液管、酸式滴定管、电炉、容量瓶、凯氏定氮蒸馏装置
5实验材料和试剂
材料奶粉一包
试剂浓硫酸（AR）；硫酸钾-硫酸铜混合物（K2SO4：CuSO4·5H2O=3:1 、6:1或10:1）；40%氢氧化钠溶液；2%硼酸溶液；0.01 mol/L 标准盐酸（要标定）；甲基红-溴甲酚绿混合指示剂：5份0.2%溴甲酚绿溶液（含95%乙醇）与一份0.2%甲基红乙醇溶液混合；2%硼酸指示剂混合液（2%硼酸溶液100mL，加混合指示剂1mL）。
6操作步骤
6.1消化
称取0.1~0.5g样品于50mL干燥的凯氏烧瓶内，加入硫酸钾-硫酸铜混合粉末0.3~0.5g，再加入浓硫酸5mL。
用消化炉加热，在通风橱中消化，瓶口加一小漏斗。
先以
文火加热，避免泡沫飞溅，不能让泡沫上升到瓶颈，待泡沫停止发生后，加强火力保持瓶内液体沸腾。
时常转动烧瓶使样品全部消化完全，直至消化液清澈透明。
另取凯氏烧瓶一个，不加样品，其它操作相同，作为空白试验，用以测定试剂中可能含有的微量含氮物质，以对样品进行校正。
将凯氏烧瓶中的待测样品及空白消化液冷却后，分别转入100mL的容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，备用。
6.2蒸馏
按下图所示安装微量凯氏定氮装置。
将微量凯氏定氮蒸馏仪洗涤，先用自来水清洗，再用蒸汽蒸洗至流出液不能使带指示剂的硼酸明显变色。
关闭电源，放空蒸馏瓶中的热水，待蒸馏瓶冷至室温后加样品蒸馏。
取一只三角瓶，加入硼酸-知识剂混合液10mL,置于冷凝管端口下，为防止蒸出的氨气逃逸至空气中，冷凝管口应浸没在硼酸液面之下，以保证氨的吸收。
吸取稀释消化液2~10mL（控制每个蒸馏样品的含氮量在0.2~1.0mg内），置于蒸馏装置的反应室中，加入40%氢氧化钠溶液10mL，将进样夹夹紧，再在漏斗中加一些蒸馏水，作为水封，检查各夹子是否有漏水漏气现象，确保不漏时，开冷却水，开始进行样品的蒸馏。
加热蒸气发生器，沸腾后，三角瓶中的硼酸-指示剂混合液接收蒸馏出的氨，当出馏液使硼酸由酒红色变为鲜绿色时开始计时，继续蒸馏5~10min后，让硼酸液面离开冷凝管端口，再蒸馏1~2分钟后，再用少许蒸馏水冲洗冷凝管口。
移开硼酸吸收瓶，关闭电源，清洗蒸馏器，准备下一个样品的蒸馏。
空白样品的蒸馏按同样操作进行。
6.3滴定
样品和空白均蒸馏完毕后，用0.01moL/L标准盐酸滴定，至硼酸-指示剂混合液由绿色变回淡紫色，即为滴定终点，记录消耗标准盐酸溶液的体积数（mL）。
1.安全管
2.导管
3.汽水分离管
4.样品入口
5.塞子
6.冷凝管
7.吸收瓶
8.隔热液套
9.反应管10.蒸汽发生瓶
7结果和计算
7.1数据记录
项目第一次第二次第三次
样品消化液（mL）
滴定消耗盐酸标准溶液
（mL）
消耗盐酸标准溶液平均值
（mL）
7.2结果计算
样品中的含氮量（%）=（V2-V1）×c×14×N×100/(1000×m)
样品中的粗蛋白含量（%）=（V2-V1）×c×14×6.25×N×100/(1000×m)
其中，V2：滴定样品消耗的标准盐酸溶液的体积（mL）；
V1：滴定样品消耗的标准盐酸溶液的体积（mL）；
c：标准盐酸溶液的浓度（mol/L）；m：样品的质量（g）；
14：氮原子的相对摩尔质量；6.25：蛋白质与氮的换算系数；
N：消化样品的稀释倍数[N=消化液定容的体积（mL）/蒸馏时所取消化液（mL）的体积]。
8注意事项
（1）样品应是均匀的。
固体样品应预先研细混匀，液体样品应振摇或搅拌均匀。
（2）样品放入定氮瓶内时，不要沾附颈上。
万一沾附可用少量水冲下，以免被检样消化不完全，结果偏低。
（3）硝化时如不容易呈透明溶液，可将定氮瓶放冷后，慢慢加入30%过氧化氢
2-3ml，促使氧化。
（4）在整个消化过程中，不要用强火。
保持和缓的沸腾，使火力集中在凯氏瓶底部，强火加热易产生大量泡沫与烟雾，导致蛋白质附在烧瓶壁或冷凝管壁上，在接触不到硫酸的情况下，消化不完全会使测定结果偏小。
（5）氨是否完全蒸馏出来，可用PH试纸试馏出液是否为碱性。
参考文献
［1］北京大学化学系分析化学教研室编.基础分析化学实验.北京大学出版社. 1993.5 ［2］厦门大学化学系(无机与分析).基础化学实验一.科学出版社.2001.8
［3］曾富华等.生物化学实验技术教程.高等教育出版社.2011.7。
