新型植物基因组DNA快速提取试剂盒使用说明书
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磁珠法多糖多酚植物组织基因组DNA提取试剂盒MagBeads Polysaccharide & Polyphenol Plant Genomic DNA Extraction Kit【目录号】PTDE-6005、PTDE-6030;【运输条件】2~25℃;【保存条件】磁珠分散液、β-巯基乙醇2~8℃;蛋白酶K -20℃;其它组分室温保存;【试剂盒组成】【注意事项】1. 使用前请检查裂解液(组分①)和结合液(组分②)是否出现结晶,如有结晶请置于65℃温浴至重新溶解完全;2. 初次使用全新试剂盒前,请按照结合液(组分②)标签标注量加入异丙醇,稀释备用;3. 磁珠悬浮液(组分③)不可反复冻融或离心,使用前需充分摇匀;4. 蛋白酶K(组分⑤)于-20℃长期保存,避免反复冻融;融化后4℃保存,并尽快使用;5. 请仔细阅读本说明书,并按照操作指南建议操作。
磁珠法·自动化:为生命科学提供自动化磁纳米捕获方案【产品简介】本试剂盒采用针对富含多糖多酚植物组织进行杂质去除的特殊磁珠,配合高性能缓冲液体系,可从各种富含多糖多酚植物组织样本中高质量的分离纯化基因组DNA。
特殊技术包埋的磁珠在特定条件下对核酸具有极强的亲和力,而当条件改变时,磁珠会释放所吸附的核酸,从而达到快速分离纯化核酸的目的。
提取所得的基因组DNA产物片段大、纯度高、质量稳定可靠,尤其适合高通量仪器自动化提取,特别是本公司生产的各类型号自动化核酸提取仪或工作站。
使用本试剂盒纯化所得核酸产物可适用于各种常规分子生物学下游实验,如:酶切、PCR、荧光定量PCR、文库构建、Southern杂交、芯片检测和高通量测序等。
【试剂盒说明】【自备仪器及耗材】研钵&研磨棒(或者研磨机、匀浆机)、水浴锅、涡旋混合仪、高速离心机、EP管(1.5mL 或2.0mL)、EP管配套用磁力架、核酸提取仪(仪器自动版操作步骤需准备)。
【自备试剂】液氮、乙醇(80%, v/v)、异丙醇、RNase A溶液(100mg/mL,分散液10mM Tris-HCl, 1mM EDTA, pH值8.0)。
基因组DNA 提取试剂盒使用说明书此说明书仅适用于此说明书仅适用于基因组基因组DNA 提取试剂盒提取试剂盒,,使用前请务必仔细阅读说明书有关内容使用前请务必仔细阅读说明书有关内容,,若有任何疑问若有任何疑问,,欢迎致电厦门欢迎致电厦门致致善生物科技有限公司生物科技有限公司((4006618810*************)进行咨询进行咨询,,您也可以登录我们公司的网站您也可以登录我们公司的网站(( )了解相关信息或者通过E-mail ( ****************) 与我们进行沟通与我们进行沟通。
一 产品简介基因组DNA 提取试剂盒采用本公司自行研制的磁珠,用于从抗凝全血、新鲜或冻存组织、培养细胞、石蜡包埋组织、唾液、培养细菌等一系列不同样品中分离、纯化高质量的基因组DNA。
我们根据磁珠的独特分离作用,提供了一个极其简便的操作程序:样品裂解、磁珠吸附、洗涤以及洗脱。
在最适的试剂及操作条件下,可获得高质量DNA。
该方法具有简便、快捷、高效等特点,整个提取过程无须使用苯酚、氯仿等有机溶剂。
品名规格 货号 基因组DNA 提取试剂盒100T 4hk001裂解液DL 120ml ×2 磁粒 40ml 洗涤液 50ml ×5 洗脱液 45ml 缓冲液HTL 20ml ×1 二硫苏糖醇(DTT ) 10管,0.18g/管 说明书 1份储存条件储存条件::本试剂盒所有试剂(除DTT 外)均可以室温保存,应避免阳光直射。
当室温低于15℃时,裂解液中可能有结晶析出,38℃水浴加热几分钟,恢复澄清后即可使用,提取效率不受影响。
DTT 需要于冰箱4℃保存。
本试剂盒有效期为12个月, 请于有效期内使用。
安全信息:试剂中含刺激性化合物,操作时应小心,避免沾染皮肤,眼睛和衣服,若沾染皮肤、眼睛时,要立即用大量清水或生理盐水冲洗,必要时寻求医疗咨询。
三 使用者自配试剂DTT 溶液使用浓度为1mol/L 。
新型大量植物DNA快速提取试剂盒目录号:DN38适用范围:适用于快速提取植物组织、细胞、真菌基因组DNA 试剂盒组成、储存、稳定性:试剂盒组成保存10次(DN3801)RNase A(10mg/ml) -20℃500 μl缓冲液AP1 室温50 ml缓冲液AP2 室温20 ml缓冲液AP3/E 室温40 ml第一次使用前按说明加指定量乙醇漂洗液WB 室温25ml x2第一次使用前按说明加指定量乙醇洗脱缓冲液EB 室温20 ml吸附柱AC 室温10个收集管(50ml)室温10个本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。
储存事项:1.裂解液AP1、AP3/E低温时可能出现析出和沉淀,可以在65℃水浴几分钟帮助重新溶解(AP3/E加入乙醇前可加热,加入乙醇后不可加热),恢复澄清透明后冷却到室温即可使用。
2.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化,各溶液使用后应及时盖紧盖子。
产品介绍:该试剂盒采用DNA吸附柱和新型独特的溶液系统,适合于从含酚类、多糖类和酶抑制物的植物样品中快速简单地提取基因组DNA。
可在1小时左右完成一个或多个1g新鲜或200mg干燥的植物样品DNA的纯化工作。
提取过程不需要用到有毒的酚氯仿等有机物抽提,也不需要用到耗时的异丙醇或乙醇沉淀,并能快速高效地去除多糖类、酚类和酶抑制物等杂质,纯化的DNA可直接用于PCR、酶切和杂交等实验。
新鲜或干燥的植物组织(细胞)磨碎后经裂解液裂解;蛋白质、多糖、细胞残片被沉淀去除;然后基因组DNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜,再通过一系列快速的漂洗-离心的步骤, 进一步将多糖,多酚和细胞代谢物,蛋白等杂质去除,最后低盐的洗脱缓冲液将纯净基因组DNA从硅基质膜上洗脱。
产品特点:1.离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口特制吸附膜,柱与柱之间吸附量差异极小,可重复性好。
克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。
2.不需要使用有毒的苯酚等试剂,也不需要乙醇沉淀等步骤。
15. 于12,000 x g 离心1分钟,并弃去Spin column。
1.5ml离心管中液体含有DNA。
16. 提取的DNA可直接用于各种下游应用实验,如不立即使用,请于-20℃保存。
常见问题及对策问:本试剂盒能从那些植物组织中提取DNA?答:可从植物叶、花、茎(如树皮等含细胞部分)、根(如根冠部分)、果实、种子(如黄豆、玉米等)中提取DNA。
问:什么时候需要在过滤之前进行离心?答:有些样本在加入DA Buffer冰浴之后,整个混合物会非常粘稠,如先进行离心,就能很方便得将上清液转移到hredder Spin Column中。
问:DNA得率低,怎么办?答:DNA得率与裂解效率有很大关系,可以通过延长裂解温浴的时间(对于某些样本,甚至可以温浴过夜)来提高裂解的效率,进而提高DNA得率。
问:如何去除提取的DNA中有RNA污染?答:可按说明书中的方法加入RNase A来消化去除RNA。
问:提取的基因组DNA片断长度是多少?答:提取的基因组DNA片段长度一般为30~50KB。
核酸的检测分析及图例见英文说明书 Biospin Plant Genomic DNA ExtractionKitBiospin植物基因组DNA提取试剂盒Cat# BSC13S1sterile 1.5ml microcentrifuge tube.14. Add 100μl to 200μl Elution Buffer, Incubate at room temperature for 1 minute.15. Centrifuge at 12,000 x g for 1 minute. The buffer in the microcentrifuge tube containsthe DNA.16. The purified DNA can be used directly for kinds of downstream molecular biologicalexperiments. Store at -20℃ if not used immediately.FAQQ1: We can extract DNA from which plant tissue using the kit?A: We can extract DNA from leaves, flowers, caudexes (as the parts of bark which contain cells), roots (as the pileorhiza), fruits, seeds (as soybean, corn and so on).Q2: When should be centrifugated before filtration?A: Some samples will be very dense after put into DA Buffer ice bath. We can transfer the above clear liquid into shredder Spin Column if centrifugate before that.Q3: What can we do when DNA extraction yield is low?A: DNA yield relates with lysis efficiency very much. We can improve lysis efficiency by extend incubate time (we can adopt full night lysis incubate to some samples), and then improve DNA yield.Q4: How to wipe off the RNA included in the extracted DNA?A: We can add RNase A to digest the RNA following with the method listed in Specification. Q5: How long about the extracted genomic DNA fragments?A: Length of the extracted genomic DNA fragments is about 30~50KB in general. Analysis DNA⊕Absorbance anlysisGet some DNA,diluted in a advisable factor with elution buffer.Survey the OD260,OD280 and OD320.expressions:concentration(μg/ml)=50×OD260×dilution facttarget: 2.0≥OD260-320/ OD280-320≥1.7Notice: 1.0≥OD260≥0.1, the result of ratio is much reliable.⊕Agarose Gel Analysis0.8~1% Agarose gel Example 1:rice leaves Example 2:rice leaves试剂盒组成 (50T)成分数量LP Buffer 22.5 mlDA Buffer 7.5 mlP Binding Buffer 14mlG Binding Buffer 25mlWash Buffer 25.2mlElution Buffer 10mlSpin column 50Shredder Spin Column 50说明书 1 份储存条件保存于室温 (15-25℃)。
杭州昊鑫生物科技股份有限公司 htpp://EASYspin Plant RNA KitEASYspin植物RNA快速提取试剂盒目录号:RN09试剂盒组成、储存、稳定性:试剂盒组成保存50次(RN0902)裂解液RLT 室温50 ml去蛋白液RW1 室温40 ml漂洗液RW 室温10 ml第一次使用前按说明加指定量乙醇RNase-free H2O 室温10 mlPLANTaid 室温 5 mlRNase-free吸附柱RA和收集管室温50套本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。
储存事项:1.不合适的储存于低温(4℃或者-20℃)会造成溶液沉淀,影响使用效果,因此运输和储存均在室温下(15℃-25℃)进行。
2.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、PH值变化,各溶液使用后应及时盖紧盖子。
注意事项1.所有的离心步骤均在室温完成,使用转速可以达到13,000 rpm的传统台式离心机。
2.需要自备乙醇,研钵(可选)。
3.裂解液RLT和去蛋白液RW1中含有刺激性化合物,操作时戴乳胶手套,避免沾染皮肤,眼睛和衣服。
若沾染皮肤、眼睛时,要用大量清水或者生理盐水冲洗。
4.关于DNA 的微量残留:一般说来任何总RNA提取试剂在提取过程中无法完全避免DNA的微量残留,本公司的EASYspin系列RNA提取产品,由于采取了本公司独特的缓冲体系和选择了特殊吸附能力的吸附膜已经清除了绝大部分的DNA残留,在大多数RT-PCR 扩增过程中极其微量的DNA残留影响不是很大,如果要进行严格的mRNA表达量分析如荧光定量PCR,我们建议在进行模板和引物的选择时:1)选用跨内含子的引物,以穿过mRNA中的连接区,这样DNA就不能作为模板参与扩增反应。
2)选择基因组DNA和cDNA上扩增的产物大小不一样的引物对。
3)将RNA提取物用RNase-free的DNase I 处理。
本试剂盒还可以用于DNase I处理后的RNA清洁(cleanup),请联系我们索取具体操作说明书。
使用说明书Version 20.1目 录 Contents *所有商标均属于各自商标所有者的财产,某些商标并未在全部行政区注册01/产品概述 02/产品组分03/保存条件04/适用范围05/自备材料06/注意事项07/实验原理与流程概要08/实验流程 08-1/样本处理 08-2/RNA 提取09/常见问题及解决方案................................................................................................... 02................................................................................................... 02................................................................................................... 03................................................................................................... 03................................................................................................... 03 (03) (04) (04) (04) (05) (06)01/ 0201/产品概述本试剂盒适用于植物组织,特别是富含多糖多酚或淀粉的植物组织(如棉花叶片、成熟水稻叶片、松针、杨树、枇杷叶片、马铃薯块茎、棉叶根、香蕉、葡萄、苹果、梨、月季、荞麦种子、拟南芥种子、烟草等)中快速提取总RNA ,可同时处理大量不同样品。
Qiagen基因组提取试剂盒中⽂操作说明QIAamp DNA Blood Mini Kit简介:QIAGEN公司出品的QIAamp DNA Blood Mini Kit适⽤于使⽤微型离⼼机或真空处理从全⾎、⾎浆、⾎清、⾎沉、淋巴细胞以及体液样品中提取总(基因、线粒体和病毒)DNA。
该试剂盒可处理带有EDTA、柠檬酸盐和肝素等常规抗凝剂的新鲜或冷冻的全⾎样本,样品量可达200µl。
整套基因组的操作时间约为20–40分钟,⼀般可从200µl健康全⾎中获得4–12 µg DNA,洗脱体积可在50–200µl范围。
抽提原理:样品中的DNA可以特异性结合到QIAamp的硅胶膜上,通过两次洗涤可以将PCR抑制剂,如:⼆价阳离⼦和蛋⽩完全去除,最后结合在离⼼柱上的纯核酸可⽤⽔或试剂盒中的缓冲液进⾏洗脱收集。
开始前的注意事项:1. 所以的离⼼步骤需要在室温(15-25℃)进⾏2. 如果样品中含有的基因组当量少于10000,请添加载体DNA(carrier DNA)3. 200µl全⾎样品可以得到约3-12µgDNA开始前的准备⼯作:1. 将样品平衡到室温(15-25℃)2. 将⽔浴或是⾦属浴加热到56℃,以备第4步使⽤3. 将Buffer AE或蒸馏⽔平衡到室温,⽤于第11步的洗脱4. 确保Buffer AW1、AW2以及QIAGEN蛋⽩酶已经按照说明配置完毕5. 如果在Buffer AL中出现沉淀物,请在56℃孵育使其溶解操作步骤:以下为整个基因组提取操作的流程图,由于真空装置并⾮所有的实验室都配置,所以这⾥介绍的是离⼼法(流程图左侧)。
以下译介⾃QIAGEN官⽅出品的说明部分,⿊粗体为实验操作的主体部分。
1. 吸取20µl QIAGEN蛋⽩酶(或者蛋⽩酶K)⾄1.5ml离⼼管的底部。
2. 加⼊200µl待提取基因组的样品⾄离⼼管中。
细菌基因组DNA快速提取试剂盒DN1101 50次DN1102 100次DN1103 200次DN1111 50次(带蛋白酶K) DN1112 100次(带蛋白酶K) DN1113 200次(带蛋白酶K)❖适用范围:适用于快速提取各种细菌基因组DNA❖试剂盒组成、储存、稳定性:试剂盒组成保存50次100次200次平衡液室温 5 ml 10 ml 20 ml 缓冲液RB 室温30 ml 60ml 120 ml 结合液CB 室温11 ml 20 ml 40ml 抑制物去除液IR 室温25 ml 50 ml 100 ml漂洗液WB 室温15 ml 25 ml 2x25 ml 第一次使用前按说明加指定量乙醇洗脱缓冲液EB 室温15 ml 20 ml 40 ml 蛋白酶K粉(可选)20mg/ml-20℃20mg 2×20mg 4×20mg 吸附柱AC 室温50个100个200个收集管(2ml)室温50个100个200个本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。
储存事项:1.结合液CB或者抑制物去除液IR低温时可能出现析出和沉淀,可以在37℃水浴几分钟帮助重新溶解,恢复澄清透明后冷却到室温即可使用。
2.为避免降低活性,方便运输,提供蛋白酶K为冻干粉状,收到后,可短暂离心后,加入1毫升灭菌水溶解,因为反复冻融可能会降低酶活性,因此溶解后立即按照每次使用量(20微升)分装冻存,-20℃保存。
3.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化,各溶液使用后应及时盖紧盖子。
❖产品介绍:独特的结合液/蛋白酶K迅速裂解细胞和灭活细胞内核酸酶,然后基因组DNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜,再通过一系列快速的漂洗-离心的步骤,抑制物去除液和漂洗液将细胞代谢物,蛋白等杂质去除,最后低盐的洗脱缓冲液将纯净基因组DNA从硅基质膜上洗脱。
❖产品特点:1.离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口世界著名公司特制吸附膜,柱与柱之间吸附量差异极小,可重复性好。
◆新型植物基因组DNA快速提取试剂盒◆目录号DN15◆使用手册◆实验室使用,仅用于体外新型植物基因组DNA快速提取试剂盒目录号:DN15目录编号包装单位DN1501 50次DN1502 100次DN1503 200次❖适用范围:适用于快速提取植物组织、细胞、真菌基因组DNA❖试剂盒组成、储存、稳定性:试剂盒组成保存50次100次200次RNaseA(10mg/ml)-20℃250 μl500 μl 1 ml 缓冲液AP1 室温25 ml 50 ml 100 ml 缓冲液AP2 室温10 ml 20 ml 40 ml缓冲液AP3/E 室温15 ml 25 ml 50 ml 第一次使用前按说明加指定量乙醇漂洗液WB 室温15 ml 25ml 50ml 第一次使用前按说明加指定量乙醇洗脱缓冲液EB 室温15 ml 20 ml 40 ml吸附柱AC 室温50个100个200个收集管(2ml)室温50个100个200个本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。
储存事项:1.裂解液AP1、AP3/E低温时可能出现析出和沉淀,可以在65℃水浴几分钟帮助重新溶解(AP3加入乙醇前可加热,加入乙醇后不可加热),恢复澄清透明后冷却到室温即可使用。
2.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化,各溶液使用后应及时盖紧盖子。
❖产品介绍:该试剂盒采用DNA吸附柱和新型独特的溶液系统,适合于从含酚类、多糖类和酶抑制物的植物样品中快速简单地提取基因组DNA。
可在30分钟内完成一个或多个100mg新鲜或20mg干燥的植物样品DNA的纯化工作。
提取过程不需要用到有毒的酚氯仿等有机物抽提,也不需要用到耗时的异丙醇或乙醇沉淀,并能快速高效地去除多糖类、酚类和酶抑制物等杂质,纯化的DNA可直接用于PCR、酶切和杂交等实验。
新鲜或干燥的植物组织(细胞)磨碎后经裂解液裂解;蛋白质、多糖、细胞残片被沉淀去除;然后基因组DNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜,再通过一系列快速的漂洗-离心的步骤, 进一步将多糖,多酚和细胞代谢物,蛋白等杂质去除,最后低盐的洗脱缓冲液将纯净基因组DNA从硅基质膜上洗脱。
*质粒小量提取试剂盒产品说明:■本产品采用经典的硅胶膜及碱裂法技术,硅胶膜柱可以在高盐、低pH值情况下高效可逆的结合DNA, 而蛋白及其它杂质不被结合而被除去,被结合的核酸在低盐、高pH值情况下可被洗脱出来.该试剂盒具有高效、快速、方便之特点,全套操作只需半个小时便可完成。
使用本试剂盒可从1~5 ml的过夜培养的菌液中纯化得到1~40μg的高纯度质粒DNA(OD260/OD280 = 1.8~2.0),此质粒DNA可直接用于DNA序列分析以及各种酶促反应等。
试剂盒组成:产品编号GS001-1 GS001-2 GS001-3试剂盒组成纯化次数50次100次200次RNaseA(10mg/ml)150μl 300μl 600μl溶液Ⅰ15ml 30ml 60ml溶液Ⅱ15ml 30ml 60ml溶液Ⅲ20ml 40ml 80ml溶液PB 30ml 50ml 100ml溶液W 30ml 2×30ml3×40ml溶液Eluent 5ml 10ml 20mlDNA纯化柱50个100个200个溶液W初次使用前用无水乙醇按1:1.5稀释,即含60%乙醇。
用途:提取用于酶切、转化、测序、PCR等试验用质粒。
保存:初次使用本试剂盒时,请将RNase A全部加入到溶液Ⅰ中,均匀混合后4℃保存。
溶液Ⅱ:室温保存,若出现沉淀,请于37℃保温溶解,待恢复至室温后使用。
其他试剂:室温保存。
操作步骤:1.用1.5 ml离心管收集1.5-5ml菌液,12000rpm离心60秒,弃上清。
(应根据所培养的菌液的浓度确定收集的菌液量)2. 加入250µl溶液Ⅰ/RNase A混合液,漩涡振荡使菌液完全重新悬浮。
(菌液重新悬浮对于获得高产量是非常重要的,为使RNA被RNase A充分降解,让悬浮菌液静置1-2分钟3. 250µl溶液Ⅱ,温和反复颠倒混匀4-10次,室温放置1-2分钟,以获得澄清的裂解液。
细菌基因组DNA快速提取试剂盒(溶液型)GK1061 50 次GK1062 100次一、试剂盒组成Components GK1061 GK1062Digestion Solution(a)Proteinase K(b)NaCl Solution CTAB/NaCl Solution(c) Boiled RNase A (10mg/ml)TE (pH8.0)Lysozyme(d)SP Buffer 18ml3mg6ml6ml240µl18ml30mg0.5ml36ml6mg12ml12ml480µl36ml60mg1.0ml二、实验前的准备(a) Digestion Solution低温时可能出现沉淀,请于55℃适当加温溶解后使用,不会影响实验结果。
首次使用时,将Boiled RNase A全部加入到Digestion Solution中,充分混匀备用,加完Boiled RNase A的Digestion Solution,请于4℃保存。
(b) Proteinase K使用前加入300µl (GK1061) 、600µl (GK1062)灭菌双蒸水,分装-20℃冻存。
不得将ProteinaseK直接加入到Digestion Solution中,以免酶失活。
(c) CTAB/NaCl Solution使用前需要65℃预热,便于溶解和取液。
(d) Lysozyme使用前加入500µl (GK1061) 或1ml (GK1062) SP Buffer,使Lysozyme全部溶解。
分装后-20℃冻存。
三、试剂盒说明本试剂盒用于快速的从各种细菌中提取基因组DNA。
细菌样品加入细胞核裂解液(或者通过溶菌酶或者其它一些酶帮助裂解细胞壁后),首先在强去污剂作用下裂解细胞释放出基因组DNA,接着加入RNase A去除RNA,然后蛋白沉淀液选择性沉淀去除蛋白,最后纯净的基因组DNA通过异丙醇沉淀并重新溶解于DNA溶解液中。
新型植物基因组DNA快速提取试剂盒目录号:DN15目录编号包装单位DN1501 50次DN1502 100次DN1503 200次适用范围:适用于快速提取植物组织、细胞、真菌基因组DNA试剂盒组成、储存、稳定性:试剂盒组成保存50次100次200次RNase A(10mg/ml) -20℃250 μl500 μl 1 ml 缓冲液AP1 室温25 ml 50 ml 100 ml 缓冲液AP2 室温10 ml 20 ml 40 ml缓冲液AP3/E 室温15 ml 25 ml 50 ml 第一次使用前按说明加指定量乙醇漂洗液WB 室温15 ml 25ml 50ml 第一次使用前按说明加指定量乙醇洗脱缓冲液EB 室温15 ml 20 ml 40 ml 吸附柱AC 室温50个100个200个收集管(2ml)室温50个100个200个本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。
储存事项:1.裂解液AP1、AP3/E低温时可能出现析出和沉淀,可以在65℃水浴几分钟帮助重新溶解(AP3加入乙醇前可加热,加入乙醇后不可加热),恢复澄清透明后冷却到室温即可使用。
2.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化,各溶液使用后应及时盖紧盖子。
产品介绍:该试剂盒采用DNA吸附柱和新型独特的溶液系统,适合于从含酚类、多糖类和酶抑制物的植物样品中快速简单地提取基因组DNA。
可在30分钟内完成一个或多个100mg新鲜或20mg干燥的植物样品DNA的纯化工作。
提取过程不需要用到有毒的酚氯仿等有机物抽提,也不需要用到耗时的异丙醇或乙醇沉淀,并能快速高效地去除多糖类、酚类和酶抑制物等杂质,纯化的DNA可直接用于PCR、酶切和杂交等实验。
新鲜或干燥的植物组织(细胞)磨碎后经裂解液裂解;蛋白质、多糖、细胞残片被沉淀去除;然后基因组DNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜,再通过一系列快速的漂洗-离心的步骤, 进一步将多糖,多酚和细胞代谢物,蛋白等杂质去除,最后低盐的洗脱缓冲液将纯净基因组DNA从硅基质膜上洗脱。
Version 10112010 PlantGen DNA Kit植物基因组提取试剂盒Cat. No. CW0553保存:室温组分说明Cat.No. CW0553 CW0553A CW0553BKit Size 50 200 6Buffer GP1 40 ml 160 ml 5 mlBuffer GP2 40 ml 160 ml 5 mlBuffer GW1(concentrate)19 ml 76 ml 3.8 mlBuffer GW2(concentrate)13 ml 52 ml 2.6 mlBuffer GE 15 ml 60 ml 2 mlSpin Column DM 50 200 6Collection Tube(2ml) 50 200 6产品简介本试剂盒利用先进的硅胶膜技术和简单的离心程序可以简单快速地从植物或真菌中分离得到高纯度DNA。
本品可以在1小时内完成总DNA的全部提取过程,包括基因组DNA、线粒体DNA和叶绿体DNA。
纯化过程无需乙醇沉淀,提取后可以立即使用。
DNA特异性结合到硅胶膜上,PCR和其他酶促反应的抑制剂可通过两步有效的洗涤步骤去除,最后用低盐缓冲液或水洗脱下来的纯化DNA可以直接用于PCR、AFLP、RFLP、RAPD、Southern Blot、Microsatellite Analysis和Real-Time PCR 等下游操作。
注意事项1.样品应避免反复冻融,否则会导致提取的DNA片段较小且提取量下降。
2.所有离心步骤均应使用台式离心机,在室温下进行离心。
3.第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明在Buffer GW1和Buffer GW2中加入无水乙醇。
4.使用前请先检查Buffer GP1和Buffer GP2是否出现浑浊,如有混浊现象,可在65℃水浴中加热几分钟,即可恢复澄清。
5.Buffer GP1在使用前请加入β-巯基乙醇,1 ml Buffer GP1加1 μl β-巯基乙醇。
◆新型植物基因组DNA快速提取试剂盒◆目录号DN15
◆使用手册
◆实验室使用,仅用于体外
新型植物基因组DNA快速提取试剂盒
目录号:DN15
目录编号包装单位
DN1501 50次
DN1502 100次
DN1503 200次
适用范围:
适用于快速提取植物组织、细胞、真菌基因组DNA
试剂盒组成、储存、稳定性:
试剂盒组成保存50次100次200次RNase
A(10mg/ml)
-20℃250 μl500 μl 1 ml 缓冲液AP1 室温25 ml 50 ml 100 ml 缓冲液AP2 室温10 ml 20 ml 40 ml
缓冲液AP3/E 室温15 ml 25 ml 50 ml 第一次使用前按说明加指定量乙醇
漂洗液WB 室温15 ml 25ml 50ml 第一次使用前按说明加指定量乙醇
洗脱缓冲液EB 室温15 ml 20 ml 40 ml
吸附柱AC 室温50个100个200个
收集管(2ml)室温50个100个200个
本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。
储存事项:
1.裂解液AP1、AP3/E低温时可能出现析出和沉淀,可以在65℃水浴几分钟帮助重
新溶解(AP3加入乙醇前可加热,加入乙醇后不可加热),恢复澄清透明后冷却到室温即可使用。
2.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化,各溶液使用后应及时
盖紧盖子。
产品介绍:
该试剂盒采用DNA吸附柱和新型独特的溶液系统,适合于从含酚类、多糖类和酶抑制物的植物样品中快速简单地提取基因组DNA。
可在30分钟内完成一个或多个100mg新鲜或20mg干燥的植物样品DNA的纯化工作。
提取过程不需要用到有毒的酚氯仿等有机物抽提,也不需要用到耗时的异丙醇或乙醇沉淀,并能快速高效地去除多糖类、酚类和酶抑制物等杂质,纯化的DNA可直接用于PCR、酶切和杂交等实验。
新鲜或干燥的植物组织(细胞)磨碎后经裂解液裂解;蛋白质、多糖、细胞残片被沉淀去除;然后基因组DNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜,再通过一系列快速的漂洗-离心的步骤, 进一步将多糖,多酚和细胞代谢物,蛋白等杂质去除,最后低盐的洗脱缓冲液将纯净基因组DNA从硅基质膜上洗脱。
产品特点:
1.离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口特制吸附膜,柱与柱之间吸附量差异极小,
可重复性好。
克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。
2.不需要使用有毒的苯酚等试剂,也不需要乙醇沉淀等步骤。
3.快速,简捷,单个样品操作一般可在1小时内完成。
4.数种去多糖、多酚成份和多次柱漂洗确保高纯度,OD260/OD280典型的比值达
1.7~1.9,可直接用于PCR,Southern-blot和各种酶切反应。
注意事项
1.所有的离心步骤均在室温完成,使用转速可以达到13,000 rpm的传统台式离心机,
如Eppendorf 5415C 或者类似离心机。
2.开始实验前将需要的水浴先预热到65℃备用。
3.缓冲液AP3/E中含有刺激性化合物,操作时要戴乳胶手套,避免沾染皮肤,眼睛
和衣服。
若沾染皮肤、眼睛时,要用大量清水或者生理盐水冲洗。
4.不同来源的植物组织材料中提取DNA 的量会有差异,一般100mg新鲜组织典型产
量可达3-25μg。
5.洗脱液EB不含有螯合剂EDTA,不影响下游酶切、连接等反应。
也可以使用水
洗脱,但应该确保pH大于7.5,pH过低影响洗脱效率。
用水洗脱DNA应该保存在-20℃。
DNA如果需要长期保存,可以用TE缓冲液洗脱(10mM Tris-HCl,1mM EDTA,pH 8.0),但是EDTA可能影响下游酶切反应,使用时可以适当稀释。
操作步骤:(实验前请先阅读注意事项)
提示:
⇨第一次使用前请先在漂洗液WB中加入指定量无水乙醇,充分混匀,加入后请及时在方框打钩标记已加入乙醇,以免多次加入!
⇨第一次使用前请先在缓冲液AP3/E中加入指定量无水乙醇!
1.取适量植物组织(新鲜组织100 mg 或干重组织20 mg,可适当多取一些样品弥
补粘在研钵上的损失)在研钵中加入液氮充分碾磨成细粉。
研磨前,可准备一个1.5ml 离心管,加入400μl缓冲液AP1 和4μl RNase A(10 mg/ml)室温备用。
2.转移细粉(新鲜组织100 mg 或干重组织20 mg)到前面准备的1.5ml离心管(已
加入400μl缓冲液AP1 和4μl RNase A(10 mg/ml)旋涡振荡,充分混匀帮助裂解。
如果组织裂解困难,可根据需要加一个轻柔匀浆10秒的步骤帮助裂解。
大多数情况下不需要离心去除未完全裂解的组织,因为后面有一个离心去除的步骤。
3.65℃水浴10分钟,在水浴过程中颠倒离心管2-3次,混合样品。
4.加入130 μl 缓冲液AP2,充分混匀,冰上放置5分钟,14,000 rpm 离心5-10 分
钟,小心吸取上清到一个新的1.5ml离心管,注意不要吸到界面物质。
5.计算上清量,加入1.5倍体积的AP3/E(请先检查是否已加入无水乙醇!),立即
吹打混匀。
加入AP3/E可能会出现絮状沉淀,但不影响DNA提取。
注意将AP3/E直接加入
到上清并立即吹打混匀。
6.将上一步所得混合物(包括可能出现的沉淀)加入一个吸附柱AC中,(吸附柱放
入收集管中)13,000 rpm离心30-60秒,倒掉收集管中的废液(先加650μl离心,弃废液,再加入剩余的溶液,再次离心)。
7.加入600μl漂洗液WB(请先检查是否已加入无水乙醇!),12,000 rpm 离心30秒,
弃掉废液。
8.加入600μl漂洗液WB,12,000 rpm 离心30秒,弃掉废液。
9.将吸附柱AC放回空收集管中,13,000 rpm离心2分钟,尽量除去漂洗液,以免
漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。
10.取出吸附柱AC,放入一个干净的离心管中,在吸附膜的中间部位加100μl洗脱缓
冲液EB(洗脱缓冲液可事先在65-70℃水浴中预热),室温放置3-5分钟,12,000 rpm 离心1分钟。
将得到的溶液重新加入吸附柱中,室温放置2分钟,12,000 rpm 离心1分钟。
洗脱体积越大,洗脱效率越高,如果预计和需要产量高,可增大洗脱体积,如果需要DNA浓度较高,可以适当减少洗脱体积,但是最小体积不应少于50μl,体积过小降低DNA洗脱效率,减少DNA产量。
11.DNA可以存放在2-8℃,如果要长时间存放,可以放置在-20℃。
问题与解决方法
问题评论与建议
DNA产量低*处理材料过量或者裂解不完全-建议:使用适量的起始材料,充分研磨或者匀浆
*结合条件不恰当-建议:步骤5精确估计上清量,加入1.5倍体积AP3/E量要准确
RNA残留*植物RNA含量太丰富-建议:提高RNase A处理浓度
未提取到DNA *漂洗液WB中忘记加无水乙醇-建议:第一次实验时,在漂洗液WB中加入指定量无水乙醇。
离心柱堵塞*研磨裂解不充分,团块多;裂解物太粘稠;离心力太小-建议:参见步骤2,加一个离心步骤去除;减低起始材料量,不要处理过量,加大离心力
洗脱下来的DNA溶液带颜色或者膜上有明显的色素残留*漂洗次数不够-建议:步骤8完成后,加500μl乙醇再漂洗一遍
*起始材料太多过量-建议:减少起始处理材料,不要过量
洗脱下来的DNA产量低*离心柱残留有较多乙醇或者底部不慎沾有乙醇-建议:确保做了步骤9,否则残留乙醇会影响洗脱效率。
*使用了水或者其它非最佳液体代替洗脱缓冲液-建议:仔细阅读步骤10和注意事项5和只使用洗脱缓冲液EB洗脱。
*洗脱缓冲液量偏低-建议:使用200μl洗脱缓冲液洗脱
A260吸光值*一些硅基质膜成分一起洗脱下来,干扰了吸光值-建议:将
异常偏高洗脱的基因组DNA溶液13,000rpm再离心一分钟,小心
取上清使用。
DNA下游酶切不能切开或者酶切不完全*一些硅基质膜成分一起洗脱下来,抑制了酶切反应-建议:将洗脱的基因组DNA溶液13,000rpm再离心一分钟,小心取上清使用。
*离心柱残留有较多乙醇或者底部不慎沾有乙醇抑制了酶切反应-建议:确保做了步骤9,然后空气中晾几分钟,让残留乙醇挥发。