动物肝星状细胞标记蛋白DESMIN表达免疫组化检测试剂盒产

一种改良的肝星状细胞分离方法陈超;陈宁;覃霞;朱樑【摘要】目的改良肝星状细胞(HSC)的分离方法,为深入研究肝纤维化的发生机制奠定基础.方法采用Ⅳ型胶原酶和链酶蛋白酶原位消化肝脏,在1.040~1.060 g/mL 范围内多重多次密度梯度离心分离HSC,台盼蓝染色测定细胞存活率,328 nm紫外光激发HSC自发蓝绿色荧光法和Desmin细胞免疫荧光法鉴定HSC及检测HSC 纯度.Desmin和α-SMA细胞免疫荧光方法鉴定HSC静息和活化状态.结果每只大鼠肝脏HSC得率为(3~5)×107个,HSC存活率在95%以上,纯度在90%以上,体外培养14 d后活化的HSC纯度几乎达100%.结论在1.040~1.060 g/mL密度范围内采用多重多次密度梯度离心方法,避免了HSC分离过程中因密度配比误差及HSC自身密度相对不均一性所导致的细胞流失,建立了一种改良的肝星状细胞分离方法,HSC得率和纯度更加稳定,达到国外文献报道水平.%Objective To improve the method of isolating rat hepatic stellate cells (HSCs). Methods Rat hepatic stellate cells were isolated for several times with multiple density centrifugation within 1. 040 ～ 1. 060 g/mL after enzyme perfusion of liver. The cell viability was determined by Trypan blue exclution staining. The purity of HSCs was identified by retinoid antofluorescence and immunostaining by Desmin. The phenotype of HSCs was evaluated by characteristic immunofluorescence using antibodies specific for Desmin and α-SMA. Results About (3 ～5 ) × 107 HSCs were harve sted from each rat through multiple density centrifugation within 1. 040 ～ 1.060 g/mL. The cell viability was more than 95％ determined by the trypan blue exclusion method. The purity of freshly isolated HSCs and the activatedHSCs were more than 90％ and almost 100％ respectively assessed by retinoid antofluorescence and immunostaining cells using Desmin antibody. Conclusion The method of multiple density centrifugation greatly increased the production of HSCs by reducing loss of cells due to error of density preparation and their relative heterogeneity of density during isolating HSCs. This method is more convenient, efficient and reliable.【期刊名称】《胃肠病学和肝病学杂志》【年(卷),期】2011(020)006【总页数】4页(P564-567)【关键词】肝星状细胞;细胞分离;肝纤维化【作者】陈超;陈宁;覃霞;朱樑【作者单位】第二军医大学长征医院消化内科,上海,200003;第二军医大学长征医院消化内科,上海,200003;第二军医大学长征医院消化内科,上海,200003;第二军医大学长征医院消化内科,上海,200003【正文语种】中文【中图分类】R575肝星状细胞(HSC)是肝纤维化发生发展的中心环节［1］。

免疫组化分型诊断抗体选用表（2016年3.15版）注：红字提示目前未购买到，或者抗体预试验未完成，或观点尚未证实。

一、间叶肿瘤：Vimentin+ Cytokeratin- LCA-1、肌源性肉瘤：Actin (广谱肌动蛋白HHF35)，Actin（平滑肌肌动蛋白SMA）+，Desmin（结蛋白）+，横纹肌肉瘤P63/MyoD1/Myogenin+，平滑肌瘤或肉瘤高分子量钙结合蛋白（H-caldesmon）浆+，平滑肌瘤或乳腺肌上皮Calponin肌动蛋白结合蛋白+。

2、组织细胞肿瘤（注：恶纤组CD68阴性、CD10阳性）：CD68（PG-M1单核细胞）+，CD68（KP-1组织细胞/巨噬细胞）+，CD163+。

脂肪肉瘤：S-100和Ki-67脂母细胞核浆+。

骨巨细胞瘤（软组织巨细胞瘤）：单核细胞P63+CD68-，多核细胞P63-Ki67-CD68+3、滑膜肉瘤：Cytokeratin+，Vim+，CK19+，CK7+，CK17+，EMA+，SYT基因+。

胃肠间质瘤：CD34+、CD117+、DOG-1+。

4、神经源性：PNET：CD99/CgA/Syn/S-100/Nue-N+, PNET/髓母: INI-1+(恶性横纹肌样瘤-)。

恶性神经鞘瘤：S-100/CD57/PGP9.5/Leu-7+。

室管膜瘤EMA+（中枢神经用EMA点状胞浆阳性）、CK+，GFAP+，S-100+。

脉络膜瘤GFAP-，S-100+。

星型胶质瘤：GFAP+，少突细胞瘤：Olig2，黄色瘤样星型细胞瘤CD34阳CR阴（节细胞胶质瘤CD34阴CR阳）神经元细胞、：NeuN+，Nestin+，NF+，Syn+。

嗅母NeuN-，Syn+，CgA+，NSE+，S-100癌巢周围支持细胞+、脑膜瘤Vim+, EMA+, PR+，CK+, S-100+。

副神经节瘤：Syn+, CgA+, S-100支持细胞+。

血管母细胞瘤：间质细胞аinhibin/VEGF/NSE/Vim/S-100/D2-40+，GFAP/CK/CD10/EMA-；CD34及CD31血管内皮阳性。

肝星状细胞肝脏星状细胞占肝脏固有细胞总数的15%，占非实质细胞的30%左右。

HSC存在于Disse腔中，呈梭形或多边形，胞浆内有多个富含维生素A的脂滴，其细长的突起向外延伸环绕在血窦内皮细胞外面，是体内储存视黄醛衍生物的首要部位。

在正常肝脏中，星状细胞处于静止状态，不表达α平滑肌肌动蛋白（α-SMA），增殖活性低，合成胶原能力低，其主要功能是贮存视黄醛类。

中文名肝星状细胞外文名hepatic stellate cell，HSC 科室肝胆外科简介肝星状细胞是ECM的主要来源，HSC激活并转化为肌成纤维细胞样细胞(MFC)，各种致纤维化因素均把HSC 作为最终靶细胞。

肝星状细胞激活并转化为肌成纤维细胞样细胞(MFC)，各种致纤维化因素均把HSC作为最终靶细胞，正常情况下肝星状细胞处于静止状态。

当肝脏受到炎症或机械刺激等损伤时，肝星状细胞被激活，其表型由静止型转变为激活型。

激活的肝星状细胞一方面通过增生和分泌细胞外基质参与肝纤维化的形成和肝内结构的重建，另一方面通过细胞收缩使肝窦内压升高。

背景早在1876年，德国CarlvonKupffer在使用氯化金染色法研究肝脏的神经系统时无意中发现肝血窦周围有呈星状形态的细胞，将其命名为星状细胞（sternzellen）。

1898年，Kupffer用印度墨水对兔肝进行染色时，观察到能吞噬墨水颗粒的肝巨噬细胞，也就是后来人们为纪念Kupffer而命名的Kupffer细胞。

因为同样为星状形态，Kupffer 误把肝巨噬细胞和星状细胞混为一谈，认为星状细胞就是肝巨噬细胞。

这种观点在当时得到了广泛的认同。

直到1951年，日本学者ToshioIto通过光学显微镜发现人的肝窦周围有一种富含脂质小滴、并且有网状纤维包绕的细胞，并将之命名为伊东细胞（ItoCel1s）或贮脂细胞（fat-storingcells）。

1958年，Suzuki用银染色法在Disse腔内观察到这种星芒状的细胞，发现其突起与肝脏内的自主神经末梢相连系，他认为这种细胞能将来自肝内自主神经的冲动传递给肝实质细胞，并将其称为“间质细胞”；1966年，Bronfenmajor证实了伊东细胞的发现，又给该细胞起新名叫脂细胞（1ipocytes）；1971年，KenjiroWake采用电镜，结合氯化金染色法和苏丹红染色法发现Ito所描述的伊东细胞和Kupffer所发现的星状细胞原来是同一类型的细胞，并指出上述细胞既不同于肝窦内皮细胞，也不是肝内的巨噬细胞。

教你如何看懂花了好几千的免疫组化报告单免疫组化是用标记的特异性抗原（抗体）对组织内抗体（抗原）的分布进行检测。

免疫组化虽然价钱昂贵，却有不能替代的作用：①恶性肿瘤的诊断和鉴别②确定转移性恶性肿瘤的原发部位③对某类肿瘤进行病理分型④明确软组织肿瘤的正确组织学分类，明确软组织的诊断⑤发现微小转移灶⑥为临床治疗方案提供支持虽然免疫组化有那么多作用，但是很多患友拿到手了根本就看不懂，都是些英文缩写，代表着什么意思呀，别着急，下面小编就按照字母顺序列张表，告诉大家各个代表什么意思：项目临床意义Actin 肌动蛋白，间叶组织来源标记，平滑肌、血管内皮、肌上皮组织表达。

AE1/AE3 细胞角蛋白AE1/AE3 ，标记上皮及上皮来源的肿瘤，鉴别和判断转移性肿瘤是否为上皮源性，如胆管细胞阳性，肝细胞阴性，鉴别肝癌和胆管癌。

AFP 甲胎蛋白，肝癌细胞表达，胃和肝脏同时肿瘤时，胃肝样腺癌HepPar-1、AFP、CK19 和CDX-2 等4 种不同程度阳性表达，而肝细胞癌CK19 和CDX-2 不表达。

ALK 间变型淋巴瘤激酶，用于淋巴造血来源标记，间变性大细胞淋巴瘤、弥漫性大B 细胞淋巴瘤和炎症性肌纤维母细胞瘤的诊断。

AMACR 甲基酰基辅酶A消旋酶，癌特异性指标，只存在于癌症组织。

结肠直肠癌、卵巢癌、乳腺癌、膀胱癌、肺癌、淋巴瘤和黑素瘤等过度表达，以结直肠癌和前列腺癌表达最高。

Bax 促进凋亡蛋白，同Fas/FasL。

Bcl-2 抑制细胞凋亡相关基因-2，肿瘤预后指标，高表达者对多数抗癌药物、放射治疗耐受，高表达者预后差。

Bcl-6B 淋巴细胞凋亡相关基因-6，抑制细胞凋亡作用，淋巴造血细胞来源标记，用于B 淋巴瘤诊断。

Bel-XL 抑制细胞凋亡相关基因-XL ，Bcl-2 抑制细胞凋亡基因家族成员之一，作用同Bcl-2 。

Cam5.2 人角蛋白抗原决定簇，正常分泌上皮表达，复层鳞状上皮不表达，用于鉴别腺癌和鳞癌。

病理科开展免疫组化抗体目录
病理科开展免疫组化抗体作用/使用范围
黑色素瘤细胞、皮内痣细胞及非黑色素细胞不反应。

常用于黑色素瘤及伴有黑色素细
胞分化倾向的肿瘤的诊断。

noma
15.Insulin 胰岛素胰岛素是胰岛ß细胞分泌的一种激素，可以减低血糖浓度。

此抗体和人胰岛
素反应，并与大多数哺乳类动物的一套苏有交叉反应，主要用于胰岛细胞瘤
的功能性分类研究。

16.Inhibin 抑制素ɑ抑制素是由ß亚单位所组成的异二聚体糖蛋白类激素，属于转化生长因子
ß（TGF-ß）超家族成员，可以抑制垂体促性腺激素的合成和分泌.此抗体主要
用于性索间质肿瘤的诊断与鉴别诊断。

Inhibi n-ɑ
17.Hepa—1 肝细胞此抗体识别的抗原存在于正常人肝细胞和大多数的肝细胞癌中，与其他肿瘤
包括消化道肿瘤细胞没有交叉反应。

绝大多数的肝细胞癌为阳性表达，主要
用于肝肿瘤的研究。

Hepa tocyt e
18.TdT 末端脱
氧核苷TdT是一种DNA聚合酶,表达于大多数的皮质胸腺细胞,未成熟的淋巴细胞来源的肿瘤其TdT活性增高，同样情况可见见于淋巴母细胞型白血病、急性T/B。

《软组织肿瘤病理诊断免疫组化指标选择专家共识》要点软组织肿瘤是外科病理学中一类病种最多，也最为复杂的肿瘤。

WHO(2013）软组织肿瘤病理新分类包括12大类。

各类肿瘤又包含很多种疾病类型，并根据生物学行为的不同，分为良性、中间性和恶性。

与其他类型的肿瘤相似，软组织肿瘤的病理诊断也需与临床、病理相结合。

除部分肿瘤可根据临床特点和镜下形态直接做出诊断外，大多数软组织肿瘤需加做免疫组化标记。

1 免疫组化在软组织肿瘤病理诊断中的应用及注意事项免疫组化不仅在软组织肿瘤的诊断和鉴别诊断中起非常重要的作用，而且在指导靶向治疗或预测肿瘤的生物学行为等方面也有广阔的应用前景。

但要强调的是，免疫组化只是一种辅助性手段，有其自身的局限性，并不能代替传统的组织学检查，后者才是病理学诊断的基础。

免疫组化检测必须以病理组织学形态为基础，选择免疫组化检测指标时应注意以下几个问题：⑴熟悉常用抗体的反应谱和适用条件，首选敏感和特异性较高的抗体类型，特别是公认的抗体型号，并合理配伍，力争采用尽可能少的抗体取得最好的检测结果。

⑵免疫组化检测过程需注重质量控制，尽可能做到标准化，使染色切片背景清晰，标记定位准确。

⑶推荐设置阳性对照，尤其是一些与靶向治疗密切相关的标志物，如CD117等，以确保免疫组化标记结果的可信性。

⑷对标记结果要注意辩证分析，因有相当一部分抗体在一些不同类型的肿瘤之间存在交叉反应或有异常表达，如S-100蛋白在滑膜肉瘤中的阳性率也可高达38％，因此不能仅根据S-100蛋白标记阳性简单地将梭形细胞肉瘤诊断为恶性周围神经鞘膜瘤。

CD31不仅表达于血管肉瘤，也可表达于组织细胞肿瘤。

另外，HMB45是恶性黑色素瘤、软组织透明细胞肉瘤和血管周上皮样细胞分化的肿瘤（PE-Coma）的标志物，但最近有文献报道部分子宫平滑肌肉瘤和子宫内膜间质肉瘤也可表达HMB-45。

⑸软组织肿瘤中存在一些异常表达的情况，如标记上皮细胞的角蛋白，也可在假肉瘤样肌纤维母细胞性增生、胚胎性或腺泡状横纹肌肉瘤和骨外尤因肉瘤等一些不具有上皮样分化的软组织肿瘤中表达。

大鼠肝星状细胞原代培养实验具体步骤及方法将小鼠的肝细胞从机体中取出，经胰酶、螯合剂（常用EDTA）处理，分散成单细胞，置合适的培养基中培养，使细胞得以生存、生长和繁殖。

步骤一、实验材料准备1. 动物：雄性SD大鼠(体重250-450 g)。

2. 试剂：戊巴比妥钠，小牛血清(或胎牛血清，则更好)，DMEM，酶消化液I、Ⅱ(以HBSS配)，18% Nycodenz(以GBSS配)，D-Hanks' 液(KCl 0.4 g/L，KH2PO4 0.06g/L，NaCl 8.0 g/L，NaHCO3 0.35 g/L，Na2HPO4·7H2O 0.06 g/L或Na2HPO4 0.053 g/L，可加酚红0.02 g/L)，HBSS，台盼兰等。

3. 器械：手术器械，200目尼龙网，相差显微镜，荧光显微镜。

二、原代培养方法1. 大鼠腹腔麻醉后在超净台上剖腹，进行门静脉插管，以D-Hanks'液灌注，同时剪开下腔静脉，冲掉血液后，改灌以100 ml酶消化液I(0.05% IV型胶原酶)。

2. 待肝脏变软后，离体肝脏并剪碎，继续以酶消化液II(含20 U/ml DNase I的0.05% IV型胶原酶)消化15 min，尼龙网过滤后以450 g 离心5 min(4℃，下同)。

3. 以HBSS重悬沉淀至10 ml，再混以20 ml Nycodenz液，分置于离心管中，并分别覆以2-3 ml HBSS，1450 g离心16 min后取界面细胞。

4. 以HBSS重悬后再次离心收集细胞，以DMEM重悬后进行细胞计数，并判断存活率和产量，最后按照常规方法接种(105细胞/cm2)，次日换液，以后每2-3天换液一次。

三、传代方法弃去培液后以D-Hanks'液洗两次，加0.125%胰酶(原代最好加0.05% EDTA)消化，镜下观察细胞突起回缩(2-5 min左右)，以完全培液(DMEM+10% NBS)终止反应(若不用EDTA，可以不需离心)，充分吹打后以1:2-1:3接种，然后继续培养(5%CO2，37℃)。

免疫组化常用标记物免疫组化常用标记物一、常用标志物1. CD15(LeuM1)---（阳性部位：细胞膜）。

是一种由半乳糖、岩藻糖和N-乙酰葡萄糖组成的碳水化合物抗原，又称半抗原χ，是粒/单核细胞相关抗原。

免疫组织化学表达：成熟粒细胞、激活的淋巴细胞（主要是T淋巴细胞）、R-S细胞、大多数腺癌等。

2. 癌胚抗原（carcinoembryonic antigen，CEA）(CD66e)---（阳性部位：细胞膜/浆）。

癌胚抗原是表达于胎儿上皮细胞的一种糖蛋白，分子量为180kDa。

存于某些恶性肿瘤组织尤其是内胚层来源发肿瘤中，大多数胃肠道（包括胰腺）和肺腺癌均有表达，少量成人上皮细胞和良性肿瘤亦可表达。

CEA主要用于标记上皮性肿瘤，尤其是腺上皮来源的腺癌。

3.嗜铬素A（chromogranin A，CgA）---（阳性部位：细胞浆）。

嗜铬素是位于神经分泌颗粒内的酸性糖蛋白家族，是一组可溶性酸性蛋白，分子量为76～1 20 kDa，分布广泛。

含量最丰富的是嗜铬素A，另两个是嗜铬素B和嗜铬素C。

几乎所有的神经内分泌肿瘤中均可检测到嗜铬素。

嗜铬素A不仅存在于神经内分泌细胞的分泌颗粒中，也广泛分布于所有含有颗粒的内分泌细胞和神经内分泌细胞来源的肿瘤细胞。

此抗体可以识别嗜铬素A抗原羧基末端的片段，而不与氨基末端的片段反应，主要用于标记神经内分泌细胞及其来源的肿瘤。

对小细胞癌进行抗原修复可提高检测的敏感性。

4.细胞角蛋白（cytokeratin pan，广谱CK）--- AE1/ AE3（阳性部位：细胞浆）。

此抗体可以识别绝大部分酸性细胞角蛋白（Ⅰ型/低分子量）和碱性细胞角蛋白（Ⅱ型/高分子量）。

用于标记上皮及上皮来源的肿瘤，特别是对鉴别和判断转移性肿瘤是否为上皮源性具有一定的意义。

5.细胞角蛋白5/6（cytokeratin 5/6，CK5/6）---（阳性部位：细胞浆）。

在正常组织中，鳞状上皮和导管上皮的基底细胞以及部分的鳞状上皮生发层细胞、肌上皮细胞和间皮细胞阳性，腺上皮细胞阴性。

免疫组化名称及各指标染色的意义ACTH 促肾上腺皮质激素。

可用于垂体腺瘤的功能性分类，有助于区分原发性和转移性垂体肿瘤。

某些神经内分泌肿瘤也可出现阳性反应。

Actin 肌动蛋白。

用于标记骨骼肌、心肌、平滑肌及其来源的肿瘤。

AFP 甲胎蛋白。

用于标记肝癌、卵黄囊瘤和某些生殖细胞肿瘤。

Bcl—2 主要用于滤泡性淋巴瘤、毛细胞性白血病的辅助诊断及细胞凋亡方面的研究。

CerbB-2 主要作为判断乳腺癌、卵巢癌、子宫内膜癌及消化道肿瘤预后的参考指标，并用于赫赛汀治疗乳腺癌的药物治疗的筛选。

CD3 目前是T细胞标记物的首选.95％以上的T细胞或NK细胞淋巴瘤阳性表达。

CD4 辅助T细胞.与CD8联合使用，对于某些疾病的诊断、疗效观察及预后有一定意义. CD8 细胞毒T细胞。

一般与CD4联合使用。

CD10 为滤泡中心细胞的标记。

Burkitt淋巴瘤/生发中心母细胞/生发中心滤泡性淋巴瘤可阳性CD15 是成熟粒细胞、R—S细胞的标志之一。

主要用于标记霍奇金淋巴瘤。

CD20 B细胞的标记.主要用于B细胞淋巴瘤的诊断。

CD21 主要用于B细胞、滤泡树突状细胞及其来源的肿瘤。

CD30 主要用于R-S细胞和大多数间变性大细胞淋巴瘤的标记。

CD31 内皮细胞标记.主要用于良、恶性血管源性肿瘤和鉴别诊断以及肿瘤中血管分布的研究.CD34 内皮细胞标记.主要用于良、恶性血管源性肿瘤和鉴别诊断以及肿瘤中血管分布的研究。

与CD117联合用于诊断间质瘤。

CD56 是NK细胞淋巴瘤比较好的标记物。

还可用于神经源性肿瘤的辅助诊断。

CD57 自然杀伤细胞。

主要用于NK细胞介导的细胞毒、NK细胞及T细胞亚群的功能方面的研究。

CD68 巨噬细胞。

可作为组织细胞标记物及骨髓白血病的的鉴别.CD99 有助于尤文肉瘤、原始神经外胚叶肿瘤、小圆细胞肿瘤进行鉴别。

也可用于鉴别胸腺上皮性肿瘤。

CD117 是胃肠道间质瘤的特异性标记物，可用于指导格列卫药物治疗。

《免疫组织化学》试题库标准答案三性颗粒呈粗颗粒状。

正常肝细胞阳性，肝胆管上皮阴性。

约80％肝细胞癌为HPC阳性，不足5％非肝细胞癌表达HPC。

81.Vimentin 波形蛋白（Vimentin）主要分布于间叶细胞及其起源的肿瘤组织，而上皮细胞及其肿瘤一般不含此蛋白。

常用于间叶来源的恶性肿瘤如间皮瘤、滑膜肉瘤、脑膜瘤等诊断，该抗体对癌与肉瘤、恶性黑色素瘤与癌、胸腺瘤与淋巴瘤、未分化癌与小细胞间叶肿瘤的鉴别诊断具有重要参考意义。

82.Desmin结蛋白（Desmin）是一种中间丝蛋白，广泛分布于平滑肌细胞、心肌细胞、骨骼肌细胞和肌上皮细胞。

主要用于平滑肌肿瘤、横纹肌肉瘤和肌上皮肿瘤、部分肌纤维母细胞肿瘤的诊断和鉴别诊断。

83. MSA 肌特异性肌动蛋白（Muscle Special Actin;MSA）是一种具有收缩能力的微丝蛋白，广泛分布于几乎所有的肌型细胞中。

主要表达于骨骼肌、平滑肌、心肌和肌上皮细胞、肌纤维母细胞，肌源性肿瘤包括平滑肌瘤，平滑肌肉瘤和横纹肌肉瘤以及肌上皮肿瘤、肌纤维母细胞肿瘤等均可呈阳性反应。

84. MyoD1横纹肌核蛋白（MyoD1）是MyoD1基因所编码的45KD的磷酸化蛋白，只在胚胎横纹肌细胞中表达，正常成人横纹肌细胞不表达，是横纹肌肿瘤的一种非常特异的标志。

免疫表型为胞核型。

主要用于横纹肌肉瘤的诊断。

85.肌生成素因子Myf-3 是横纹肌肉瘤有用的标志物，有助于横纹肌肿瘤与神经母细胞瘤、Wilm's瘤、肝母细胞瘤、淋巴瘤和平滑肌肉瘤的鉴别。

86.肌红蛋白（Myoglobin）肌红蛋白存在于骨骼肌和心肌中，是横纹肌的特异性标记物。

主要用于横纹肌肿瘤的诊断与鉴别诊断，少数恶性中胚叶混合瘤，睾丸畸胎瘤、肾母细胞瘤中肌母细胞亦可见阳性表达。

87. TPO 甲状腺过氧化物酶(TPO)是一种分子量为107 KD转膜蛋白，是甲状腺素合成的主要酶。

TPO是甲状腺良恶性肿瘤鉴别诊断的早期标记物，恶性甲状腺肿瘤细胞中TPO表达水平下降，若TPO低表达则强烈提示异型增生。

免疫组化常用抗体标记物（一）上皮源性标记物1、一般性标记物（1）CK（角蛋白）CK亚型：CK5/6、CK7、CK8、CK10/13、CK18、CK19、CK20（2）EMA（上皮膜抗原）2、特异性和（或）相对特异性上皮标记物（1）CEA（癌胚抗原，标记胃肠道癌、肺腺癌等）（2）CA242（肿瘤相关粘液抗原、标记胰腺癌、结、直肠癌等）（3）TG（甲状腺球蛋白，标记甲状腺癌）（4）PSA（前列腺特异性抗原，主要用于前列腺癌和转移性前列腺癌的诊断）（5）PSAP（前列腺特异性酸性磷酸酶，主要用于前列腺癌和转移性前列腺癌的诊断）（6）340E12（高分子量细胞角蛋白，标记前列腺基底细胞）（7）AFP（甲胎蛋白，标记肝癌、内胚窦癌等）（8）Hepatocyte（标记肝细胞癌）（9）p-HCG（P绒毛膜促性腺激素，标记胎盘滋养叶细胞肿瘤、生殖细胞肿瘤）（10）CA125（卵巢癌抗原）（二）间叶源性标记物肌源性标记物1、Desmin（Des，结蛋白）2、Actin（肌动蛋白）3、SMA（平滑肌肌动蛋白）4、MSA（肌特异性肌动蛋白）5、Myosin（肌球蛋白）6、Myoglobin（MG，肌红蛋白）7、Myogen（肌浆蛋白）8、MyoD1（肌调节蛋白）2、CD313、CD34（三）血管源性标记物1、FV W RAg（第8因子相关抗原）4、UEA-15、BNH9(四)组织细胞源性标记物1、CD68/KP-12、Lysozyme(溶菌酶)3、a-AT(a l-抗胰蛋白酶)4、a1-ACT(a1-抗胰糜蛋白酶)5、Mac387(五)淋巴造血组织源性标记物1、全淋巴细胞(1)CD45/LCA(白细胞共同抗原)(2)TdT(末端脱氧核苷酸转移酶)(3)CD30/ki-12、全B细胞(1)Ig K(2)Ig入(3)CD20/L26(4)CD79a(5)BLA36(B淋巴细胞抗原)(6)Pax-5(B细胞系特异性激活蛋白) 3、B细胞亚型(1)CD10(2)CD21(标记滤泡性树突状细胞)(3)CD23(4)CD35(标记滤泡性树突状细胞) (2)CD5(5)CD384、全T细胞(1)CD3(4)CD45RO/UCHL-15、T细胞亚型(1)CD1a(2)CD4(3)CD86、NK细胞(1)CD56(2)CD57/Leu-7(3)CD16/Leu-117、粒细胞和单核细胞(1)CD11c/LeuM5(2)CD15/LeuM5(3)Lysozyme(溶菌酶)(4)a-AT(a l-抗胰蛋白酶)(5)a1-ACT(a1-抗胰糜蛋白酶)(6)CD68(7)S-100蛋白(8)Mac3878、其他(1)EMA(上皮细胞膜抗原)(2)CD99(尤因肉瘤标记物)(3)ALK-1(间变性淋巴瘤激酶)(4)HLA-DR(5)Bcl-2(6)Bcl-6(2)CD5(3)CD43(7)Bcl-10(8)Ki-67(9)CyclinD1(周期素D1)(10)CD25（11）CD34（六）神经源性标记物1、S-1002、NSE（神经原特异性烯醇化酶）3、Leu-74、Neurofilament（NF,神经微细蛋白）5、GFAP（胶质纤维酸性蛋白）（七）神经内分泌源性标记物1、激素标记物（1）CA（儿茶酚胺）（2）5-HT（5-羟色胺）（3）垂体激素GH（促生长素）PRL（催乳素）ACTH（促肾上腺皮质激素）TSH（促甲状腺素）FSH（促滤泡素）LH（促黄体素）（4）甲状腺TG（甲状腺球蛋白）CT（降钙素）（5）甲状旁腺PTH（甲状旁腺素）（6）胰岛Insulin（胰岛素）Glucagon（胰高糖素）VIP（舒血管肠肽）PP（胰多肽）Someitostatin（生长抑素）Gastrin（胃泌素）（1）NSE（神经原特异性烯醇化酶）（2）CgA（嗜铬素A）（3）SY（突触素）3、激素受体（1）ER（雌激素受体）（2）AR（雄激素受体）（3）PR（孕激素受体）（八）细胞增殖标记物1、PCNA（细胞增殖核抗原）2、Ki-67（九）黑色素标记物1、S-100蛋白2、HMB453、Melanoma（十）癌基因和（或）抑癌基因1、Bcl-22、C-erbB-23、P534、P16（多肿瘤抑制基因）5、nm23（十一）病原体标记物1、MyocobacteriumBovis（分枝杆菌，抗卡介苗）2、HBsAg（乙型肝炎病毒表面抗原）3、HBcAg（乙型肝炎病毒核心抗原）4、HPV（人乳头状瘤病毒）5、HTLV-1（人类T细胞白血病病毒）免疫组化套餐泌尿与男性生殖系统肿瘤1 .前歹|J腺癌：CK、P63、34B E12、PSA、P504S(9AMAC)、AR2 .前列腺增生/腺瘤：CK、P63、34BE12、P504S3 .肾癌：CK、EMA、Inhibin、Melan-A、CK7、Vimentin、PAX2、CD104 .肾母细胞瘤：WT-1、CK、P53、Ki-675 .膀胱尿路上皮癌：CK7、CK20、P53、Ki-67、P636 .精原细胞瘤：CK、PLAP、CD117、LCA、OCT3/4淋巴造血系统肿瘤7 .胸腺肿瘤：CK、CD3、CD5、CD20、TdT、EBV*8 .霍奇金淋巴瘤：CD30、CD15、ALK-1、EMA、CD3、CD20、EBV*、PAX-59 .非霍奇金淋巴瘤：CD3、CD20、CD45RO、CD79a、TdT、CD4310 .间变大细胞淋巴瘤：CD30、CD15、ALK-1、EMA、CD3、CD20、EBV*11 .弥漫性大B细胞淋巴瘤：CD3、CD20、CD45RO、CD79a、CD43、CD30、Ki-6712 .小B细胞淋巴瘤：CD3、CD5、CD10、CD20、CD23、CD79a、CyclinD1、TdT13 .T细胞淋巴瘤：CD3、CD20、CD43、CD45RO、CD79a、TdT、TiA-1、Perforin14 .套细胞淋巴瘤：CD3、CD5、CD20、CD79a、CyclinD1、TdT、Bcl-2、Ki-6715 .T/NK细胞淋巴瘤：CD3、CD20、CD45RO、CD79a、CD56、TiA-1、Perforin、粒酶B16 .淋巴上皮病变/癌：CK、EMA、S-100、Ki-67、P53、EBV*、P63、CD30、CD2017 .Burkitt淋巴瘤：CD3、CD20、CD79a、CD10、Bcl-2、Bcl-6、Ki-67、EBV*、TdT18滤泡性淋巴瘤：CD3、CD20、CD45RO、CD79a、CD10、Bcl-2、Bcl-6、Ki6719 .脂膜炎样T细胞淋巴瘤:CD2、CD3、CD7、CD20、CD43、Perforin、TiA-1、EBV*20 .浆细胞瘤：CD3、CD20、CD38、CD138、CD79a、EMA、K*、卜21 .坏死性淋巴结炎：CD3、CD20、CD45RO、CD79a、CD43、CD68、Mac387、CD16322 .粘膜相关淋巴瘤：CK、CD3、CD5、CD10、CD20、CD23、CD43、CD79a、CyclinD123 .血管免疫母细胞性淋巴瘤：CD3、CD20、CD45RO、CD43、CD79a24 .组织细胞肉瘤：S100、CD10、CD21、CD35、CD68、Lysozyme、MPO、CD33、CD34、CD11c、CD14、CD45RO25 .朗格罕氏细胞增生症/肉瘤：S100、CD1a、CD68、CD35、HMB45、CK、EMA、Ki67、CD4526 .指状突树突细胞肉瘤/肿瘤：S100、CD1a、CD68、CD21、CD35、CD3、CD20、CD30、CK、EMA、Ki67、CD4527 .滤泡树突细胞肉瘤/肿瘤：CD21、CD35、S100、CD1a、CD68、CD3、CD23、EMA、VIM、MPO、CD34、CD79a、CK、HMB4528 .肥大细胞肿瘤：CD117、CD45、CD33、CD68、CD15、CD3、CD20消化系统肿瘤29 .胃癌：CK7、CK20、Villin、CEA、P53、Ki-67、CDX-2、GST-n、AB/PAS**30 .肠癌：CK7、CK20、Villin、CEA、P53、Ki-67、CDX-2、GST-n、AB/PAS**31 .肝细胞癌：AFP、CD34、CEA、CK8/18、CK19、Ki-67、P53、HbsAg、Hepatocyte32 .肝胆管细胞癌：CK7、CK20、Villin、AFP、CD34、CEA、CK8/18、CK19、Ki-67、Hepatocyte、HbsAg33 .食道癌：P53、Ki-67、CDX-2、GST-n、P6334 .胰腺癌：CEA、P53、Ki-67、CDX-2、GST-n、Villin、CK7、CK20、35 .胰岛细胞瘤：CD56、Syn、CgA、Ki-67、Insulin、CK8/18、CK1939 .肝炎病毒：HbsAg、HbcAg、HCV涎腺肿瘤40 .涎腺粘液性囊腺癌：CK、P63、SMA、Vimentin、Myosin-heavychain41 .上皮肌上皮癌：CK、P63、SMA、Vimentin、S-100、Myosin-heavychain42 .导管腺癌：CK、P63、SMA、AR、HER2、Myosin-heavychain43 .多形性腺瘤：CK、P63、SMA、S-100、GFAP、Myosin-heavychain神经内分泌肿瘤44 .神经内分泌癌：CD56、CD57、Syn、CgA、CK、CK8/1845 .肺神经内分泌癌：CD56、CD57、Syn、CgA、CK、CK8/18、CD99、TTF-1、P63、Sp-B46 .甲状腺乳头状癌：Tg、TTF-1、CK19、HMBE-1、Gelactin-3、Ki-67、TPO47 .甲状腺髓样癌：Tg、CT、CD56、CD57、Syn、CgA、CEA48 .肾上腺皮质癌：CK、CEA、Inhibin、Melan-A、CD10、CgA、Syn、S10049 .肾上腺嗜铬细胞瘤：Syn、CgA、S-100、CK、EMA、Inhibin、Melan-A、50 .肾上腺外副神经节瘤：Syn、CgA、S-100、CK、EMA、Inhibin、Melan-A、GFAP51 .Merkel细胞癌：CK7、CK20、Syn、CgA、CK、CD99软组织肿瘤52 .促纤维增生性小圆细胞肿瘤：CK、EMA、CD99、S-100、Des、Syn、CgA、53 .尤文/PNET/视/嗅/髓母细胞瘤：CD99、S-100、Syn、CgA、CD56、CD57、GFAP、Vimentin54 .上皮样血管平滑肌脂肪瘤：HMB45、S-100、Melan-A、CD34、CK、SMA、Vimentin55 .上皮样血管瘤：CK、CD34、CD31、CD68、EMA56 .孤立性纤维性肿瘤：CD34、Bcl-2、CD99、S-100、CK、Vimentin、SMA57 .间皮瘤：CK5/6、HMBE-1、Calretinin、TTF-1、D2-40、CK、WT158 .横纹肌（肉）瘤：MyoD1、Myogenin、Desmin、SMA、CK、S100、CD9959 .滑膜肉瘤：EMA、CK、CD34、CD99、CD68、S-100、Bcl-2、Vimentin60 .皮隆突/恶纤组：CD34、CD68、S-100、SMA、Vimentin61 .血管球瘤：EMA、CK、CD34、SMA、S-10062 .血管周肌细胞瘤：EMA、CK、CD34、SMA、S-100、Desmin63 .梭形/多形性脂肪：CD34、SMA、S-100、HMB45、CK、CD31、CD6864 .脊索/副脊索瘤：SMA、S-100、EMA、CK、GFAP、CD6865 .腱鞘巨细胞瘤：SMA、MSA、Desmin、CK、Vimentin66 .平滑肌（肉）瘤：SMA、MSA、Desmin、CK、S-100、CD34、Vimentin67 .软骨母细胞瘤：CD99、S-100、CK、Vimentin68 .结节性筋膜炎：CK、SMA、MSA、DES、CD68、S100、Vimentin69 .缺血性筋膜炎：VIM、SMA、CD68、DES、S100、CD34、Vimentin70 .肌纤维瘤/肌纤维瘤病：VIM、SMA、Actin、S100、EMA、CK、Vimentin71 .硬化性纤维母细胞瘤：VIM、SMA、CK、DES、EMA、S100、CD3472 .乳腺型肌纤维母细胞瘤：DES、CD34、EMA73 .钙化性腱膜纤维瘤：VIM、SMA、MSA、CD99、S10074 .血管肌纤维母细胞瘤：DES、SMA、Actin、ER、PR、CD34、S100、CK、fastmyosin75 .富于细胞性血管纤维瘤：VIM、CD34、DES、Actin、SMA、MSA76 .项型纤维瘤：VIM、CD34、CD99、DES、Actin77 .Gardner纤维瘤：VIM、CD34、SMA、MSA、DES、ER、PR78 .钙化性纤维性肿瘤：Vim、VIII因子、Xllla因子、Des、Actin、S100、CD31、CD34、CK79 .巨细胞血管纤维瘤：CD34、CD99、Bcl-280 .韧带样型纤维瘤：Vim、SMA、Des、S10081 .脂肪纤维瘤病：CD34、Bcl-2、S100、Actin、EMA、CK、Des、CD9982 .炎症性肌纤维母细胞性肿瘤：Vim、SMA、Des、CK、S100、ALK、CD11783 .低度恶性肌纤维母细胞瘤：Actin、Des、CD34、CD99、S100、CK84 .黏液炎症性肌纤维母细胞瘤：Vim、CD34、CD68、SMA、CK、LCA、CD30、TandB转移性肿瘤鉴别85 .转移性肺/肝癌：CK7、CK20、Villin、CEA、TTF-1、CK、AFP、CD34、Hepatocyte86 .转移性肺/胃肠癌：CK7、CK20、Villin、CEA、TTF-1、Sp-B、CDX-287 .转移性肺/前列腺癌：CK7、CK20、Villin、TTF-1、CK、Sp-B、PSA、PSAP88 .转移性肺/甲状腺癌：CK7、CK20、Villin、TTF-1、CK、Sp-B、TG89 .转移性腺/鳞癌：CKAE1、CKAE3、CK8/18、CK5/6、EMA、CD15、P6390 .转移性肺/鼻咽癌：CK7、CK20、Villin、TTF-1、CK、Sp-B、EMA、EBV*91 .食道低分化癌/神经内分泌癌：Syn、P63、CgA、CD56、CD99、CKAE3、CK5/692 .转移性卵巢粘液/浆液性癌：CK7、CK20、Villin、CEA、TTF-1、CA125、CDX-2神经系统肿瘤93 .垂体瘤：TSH、FSH、GH、LH、ACTH、PrL、P5394 .胶质瘤：GFAP、MBP、Vim、EMA、S-10095 .少突胶质细胞瘤：Pax-5、GFAP、MBP、Vim、EMA、S-100、CD5796 .胶质肉瘤：GFAP、CD68、Vim、S-100、Ki-6797 .节细胞胶质瘤：Syn、CgA、GFAP、S-100、CD68、Vim、Ki-6798 .神经束膜瘤：S-100、EMA、GFAP、CK、Vim99 .恶性外周神经鞘瘤：S-100、CK、HMB45、Desmin、SMA、MyoD1、CD57、MB100 脑膜瘤：GFAP、EMA、Vim、S-100101 神经纤维/神经鞘瘤：GFAP、EMA、Vim、S-100、CK102 中枢神经细胞瘤：GFAP、S-100、Syn、CD57、MBP、EMA、CgA、Calretinin 103 .室管膜瘤：EMA、CK、S-100、GFAP、Syn、CD57、MBP、104 .脉络丛乳头状瘤：GFAP、CK、S-100、Syn、EMA、Ki-67、CgA105 .颅咽管瘤：CKAE1、EMA、GFAP、CKAE3、Ki-67106 .颅内血管母细胞瘤：CD34、CD31、EGFR、CK、EMA、VEGF乳腺及女性生殖器官107 .浸润性乳腺癌：P53、Bcl-2、ER、PR、HER2、E-Cadherin、Ki-67、CK7、GCDFP-15108 .浸润性筛状癌/腺样囊性癌：ER、PR、HER2、P63、Laminin109 .实性神经内分泌癌：ER、PR、HER2、GCDFP-15、CK7、CK20、CgA、Syn 110 .子宫内膜样肿瘤/宫颈腺癌：Vim、CK、ER、PR、Inhibin、P16、CEA111 .子宫内膜间质肿瘤：Vim、CD10、SMA、Inhibin112 .移行细胞癌:CA125、CK7、CK20、P63113 .颗粒细胞瘤：CD99、Inhibin、Vim、S100、SMA、CK、CK7、EMA114 .卵泡膜瘤-纤维瘤：Vim、Inhibin115 .硬化性的间质瘤：Vim、Des、SMA、Inhibin116 .Sertoli-间质细胞瘤：Vim、Inhibin、EMA、Ker、ER、PR114 .无性细胞瘤：Vim、CD117、PLAP、CK、Des、CEA、S100115 .卵黄囊瘤：AFP、CK、CD30、ER、PR116 .胚胎性癌：AFP、CD30、CK117 .非妊娠绒毛膜癌：CK、hPL、B-Hcg恶性肿瘤预后与耐药监测指标P53、Bcl-2、PCNA、Ki67、P-gp、TOPOII a、GST n宫颈CIN病变分级检测指标P16、P53、Ki-67、CD68、Pro-EXC1.前歹|J腺癌：CK、P63、34B E12、PSA、P504S(AMACR)、AR25.朗格罕氏细胞增生症/肉瘤：S100、CD1a、CD68、CD35、HMB45、CK、EMA、Ki67、CD45、CD20750.尤文/PNET/视/嗅/髓母细胞瘤：CD99、S-100、Syn、CgA、CD56、CD57、GFAP、Vimentin、Fli-1104 .浸润性乳腺癌：P53、Bcl-2、ER、PR、HER2、E-Cadherin、Ki-67、CK7、GCDFP-15、P120-catenin108 .子宫内膜间质肿瘤：Vim、CD10、SMA、Inhibin-a109 .移行细胞癌:CA125、CK7、CK20、P63、uroplakinIII110 .颗粒细胞瘤：CD99、Inhibin-a、Vim、S100、SMA、CK、CK7、EMA111 .卵泡膜瘤-纤维瘤：Vim、Inhibin-a112 .硬化性的间质瘤：Vim、Des、SMA、Inhibin-a113 .Sertoli-间质细胞瘤：Vim、Inhibin-a、EMA、Ker、ER、PR114 .无性细胞瘤：Vim、CD117、PLAP、CK、Des、CEA、S100、OCT3/4115 .卵黄囊瘤：AFP、CK、CD30、ER、PR116 .胚胎性癌：AFP、CD30、CK、OCT3/4。

肿瘤免疫组化指标含义大汇总在当前精准医疗得时代,免疫组化(IHC)在肿瘤得诊断中具有极其重要得意义。

在常规肿瘤病理诊断中,5%-10％得病例单靠H。

E、染色难以作出明确得形态学诊断。

利用好肿瘤IHC,将使肿瘤得诊断与治疗轻松许多。

近年来,随着免疫组织化学技术得发展与各种特异性抗体得出现,许多疑难肿瘤得到了明确诊断。

尤其就是免疫组化在肿瘤诊断与鉴别诊断中得实用价值受到了普遍得认可,其在低分化或未分化肿瘤得鉴别诊断中得准确率可达5０％-75%。

免疫组化(IHC)就是免疫学与组织化学两种技术得结合,基本原理就是应用抗原与抗体得特异性结合,再用显色剂显色以达到标记细胞得某种抗原物质得定性／定位检测技术。

(１)上皮性肿瘤标记表皮角蛋白(ＥK):鳞状上皮或高分化鳞癌细胞角蛋白(ＣK):ＣK7／ＣK18 标记腺上皮,通常在腺癌中表达、CK１９分布于单层上皮与间皮,常用于腺癌诊断,胆管(+)。

上皮膜抗原(EMA):低／未分化上皮高表达;常存在于间变大细胞／恶性横纹肌样瘤。

P504:前列腺癌得敏感性为９7%,特异性为1０0%。

HＭB45:存在于恶性黑色素瘤。

(２)间叶源性肿瘤标记波纹蛋白(Ｖimentin, Vｉm): 细胞中间死蛋白抗体,多数软组织肿瘤均可表达,但肌纤维较明显,在一些上皮性肿瘤也有阳性反应,作为间叶与上皮源性鉴别一线抗体。

结蛋白(Desｍｉn,Des):存在于平滑肌／横纹肌肌动蛋白(Ａctin):平滑肌/血管内皮/肌上皮肌球蛋白(Myｏｔｌoｂin)/肌红蛋白(myosｉｎ):横纹肌ＣD３4:血管内皮,通常用于血管源性肿瘤得诊断。

(3)神经细胞／神经内分泌肿瘤标记:S－1０0:周围神经雪旺氏细胞特异性标记胶质纤维酸性蛋白(GFＡP):脑胶质细胞特异性标记抗体神经原特异性烯醇化酶(NSE): 主要用于神经内分泌肿瘤诊断Chr 嗜铬素:鉴别肾上腺髓质与皮质,用于神经内分泌肿瘤诊断。

神经内分泌肿瘤标记:Ｓyn 突触素/NSE/嗜铬蛋白颗粒A(CgＡ)CＫ２0:用于胃肠道腺癌、卵巢黏液性肿瘤、皮肤Ｍｅrkel细胞癌诊断。

大鼠胰腺星状细胞分离培养与鉴定崔立华;张淑坤;崔乃强;夏亚飞;许大辉【摘要】目的：分离培养大鼠胰腺星状细胞,为体外研究胰腺纤维化提供细胞模型。

方法：采用酶消化结合Nycodenz密度梯度离心法分离胰腺星状细胞,通过倒置显微镜观察细胞形态，油红O染色和免疫细胞化学染色desmin，α-SMA进行细胞鉴定，并绘制传代后细胞生长曲线。

结果：原代培养的大鼠胰腺星状细胞呈星形或梭形生长；原代胰腺星状细胞油红O染色胞浆均可见红色密集脂滴，直至传代后消失；原代胰腺星状细胞培养48 h后，desmin表达开始减弱，α-SMA表达开始增强；传代后desmin基本不表达，α-SMA阳性表达100%；传代后第3 d~5 d 的胰腺星状细胞处于快速增殖阶段。

结论：酶消化结合Nycodenz密度梯度离心法分离培养大鼠胰腺星状细胞纯度高，重复性好，可以满足体外研究的需要。

%Objective To establish a method for isolation and culture of rat pancreatic stellate cell (PSC). Methods PSCs were isolated by enzyme digestive method combined Nycodenz discontinuous density gradi-ent centrifugation. The cell morphology was observed by inversion microscope. Oil red O staining and immunos-taining of desmin and α-SMA were performed to identify PSC. The growth curve was drawn to understand the characteristics of PSC. Results The primary PSCs were star or spindle shape during culture . There were nu-merous lipid drops in cytoplasm of primary PSC and the lipid drops disappeared after passage. After 48 hours, the primary PSCs were devoid of desmin and positive for α-SMA. There was no expression of desmin and 100%expression of α-SMA after passage. The fast proliferation period of passage PSC was from the third day to the fifthday. Conclusion PSCs were successfully isolated by enzyme digestive method combined Nycodenz dis-continuous density gradient centrifugation and this method could meet the demand for research of PSC in vitro.【期刊名称】《中国中西医结合外科杂志》【年(卷),期】2014(000)005【总页数】4页(P504-507)【关键词】胰腺星状细胞;细胞培养;胰腺纤维化【作者】崔立华;张淑坤;崔乃强;夏亚飞;许大辉【作者单位】天津市中西医结合急腹症研究所天津 300100;天津市中西医结合急腹症研究所天津 300100;天津市南开医院肝胆胰外科天津 300100;天津市南开医院药学科天津 300100;天津市南开医院肝胆胰外科天津 300100【正文语种】中文【中图分类】Q95-33;Q952.5纤维化是慢性胰腺炎的典型病理特征，活化的胰腺星状细胞（pancreatic stellate cell，PSC）是胰腺纤维化的主要效应细胞。

看懂常见免疫组化指标在当前精准医疗的时代，免疫组化（IHC）在肿瘤的诊断中具有极其重要的意义。

在常规肿瘤病理诊断中，5%-10%的病例单靠H.E.染色难以作出明确的形态学诊断。

利用好肿瘤IHC，将使肿瘤的诊断与治疗轻松许多。

近年来，随着免疫组织化学技术的发展和各种特异性抗体的出现，许多疑难肿瘤得到了明确诊断。

尤其是免疫组化在肿瘤诊断和鉴别诊断中的实用价值受到了普遍的认可，其在低分化或未分化肿瘤的鉴别诊断中的准确率可达50%-75%。

免疫组化（IHC）是免疫学与组织化学两种技术的结合，基本原理是应用抗原与抗体的特异性结合，再用显色剂显色以达到标记细胞的某种抗原物质的定性/定位检测技术。

一、上皮源性肿瘤标记细胞角蛋白（CK）：CK7/CK18：标记腺上皮，通常在腺癌中表达。

CK14：标记肌上皮，用于鉴别肿瘤基底细胞上皮和肌上皮。

CK5/6：鳞状上皮和导管上皮的基底细胞以及部分鳞状上皮生发层细胞、肌上皮细胞和间皮细胞阳性，腺上皮细胞阴性。

CK19：分布于单层上皮和间皮，常用于腺癌诊断，肝细胞不表达，胆管上皮阳性。

CK20：标记胃肠上皮移行上皮Merkel细胞，用于胃肠道腺癌。

上皮膜抗原（EMA）：低/未分化上皮高表达；常存在于间变大细胞/恶性横纹肌样瘤。

P504：前列腺癌的敏感性为97％，特异性为100％。

HMB45：存在于恶性黑色素瘤。

二、间叶源性肿瘤标记波纹蛋白（Vimentin, Vim）：细胞中间死蛋白抗体，多数软组织肿瘤均可表达，但肌纤维较明显，在一些上皮性肿瘤也有阳性反应，作为间叶与上皮源性鉴别一线抗体。

结蛋白（Desmin, Des）：存在于平滑肌/横纹肌。

肌动蛋白（Actin）：平滑肌/血管内皮/肌上皮。

肌球蛋白（Myotlobin）/肌红蛋白（myosin）：横纹肌。

CD34：血管内皮，通常用于血管源性肿瘤的诊断。

CD117：诊断胃肠间质瘤。

三、神经细胞/神经内分泌肿瘤标记神经内分泌肿瘤标记：Syn 突触素/NSE/嗜铬蛋白颗粒A（CgA）。

肝星状细胞（hepatic stellate cells,HSCs）分离培养及鉴定的试验方案【试验原理】在用循环灌注法去除肝胶原组织后,根据HSC内含富含脂滴,密度较轻,它与肝脏内其它细胞在不同密度的离心液中有不同的浮密度的原理,采用密度梯度离心方法(连续性和非连续性两种)使HSC存在于一高度提纯的区带中而得以分离。

【试验动物】雄性清洁级Sprague-Dawsey大鼠（购自浙江省实验动物中心,合格证号：）,体重400～500g,常规饲料喂养,正常饮水,在分离HSCs前2周每天Vitamin A以200IU/100g灌胃。

【试剂与仪器】主要试剂Ⅳ型胶原酶、链霉蛋白酶(Pronase E)、Nycodenz均为美国Sigma公司产品,DNA酶I(Dnase I)、DMEM培养干粉(高糖型)为Gibco公司产品,鼠抗人Desmin 抗体SP试剂盒为福州迈新生物工程公司产品,其它试剂均为国产分析纯试剂。

主要仪器设备蠕动恒流泵、超净工作台(2台)、电子分析天平、超速低温离心机、二氧化碳培养箱、多功能动物手术台等。

【试验方法】1、肝星状细胞的分离制备1）肝星状细胞的分离采用改良的Friedman方法,大鼠术前禁食12～16h,自由饮水。

2）用1％戊巴比妥钠40mg/kg 腹腔内注射麻醉大鼠。

3）胸腹部皮肤消毒,移入超净工作台中。

沿腹部正中线剪开腹腔,分离下腔静脉及门静脉,在门静脉距肝外10mm处用眼科剪斜形剪一小口,迅速插入自制血管插管,结扎固定。

4）接通恒流蠕动泵,灌注预热37℃的D-Hank’s肝脏灌流液,剪开下腔静脉,此时可见灌流液自下腔静脉流出,肝脏逐渐饱满,由紫红色逐渐变成淡黄白色。

5）游离肝脏,保留下门静脉血管插管及下腔静脉的标志缝线。

将游离之肝脏置于平皿中,灌注预热37℃的含酶Hank’s液I(含0.05％的胶原酶、0.1％链霉蛋白酶溶液并调PH 7.35),并将灌注系统进液端放入平皿中,使流出的酶液可进行循环灌流,可见肝脏变软无弹性,肝包膜下出现小液泡。

异甘草酸镁对大鼠肝星状细胞增殖和活力的影响【摘要】目的观察异甘草酸镁对大鼠肝星状细胞(HSC)增殖和活力的影响。

方法用含不同浓度异甘草酸镁的培养基(0、0.01、0.1、1.0、10.0 mg/ml)培养HSC,通过MTT法和LDH法检测异甘草酸镁对HSC增殖和活力的影响,并同时观察其形态变化。

结果MTT法测得与空白对照组(0 mg/ml)比较,培养基所含的异甘草酸镁浓度为1.0 mg/ml时,对HSC具有明显的抑制增殖作用;10.0 mg/ml 时,其抑制增殖作用达到最高峰。

LDH法测得各浓度组的异甘草酸镁给药组细胞上清液中LDH活力无明显差异。

结论异甘草酸镁在一定剂量范围内对HSC具有明显的抑制增殖作用,但对细胞上清液LDH活力无明显的影响。

【Abstract】Objective To investigate the effects of magnesium isoglycyrrhizinate on the proliferation and activityof rat hepatic stellate cell.Methods HSC were incubated with various concentrations of magnesium isoglycyrrhizinate solution(0 mg/ml,0.01 mg/ml,0.1 mg/ml,1 mg/ml,and 10 mg/ml).With the MTT colorimetric assay and LDH,the effects of maganesium isoglycyrrhizinate on the proliferation and activityof rat hepatic stellate cell cultured were studied,and morphological changes of the HSC also observed.Results Compared with the control group(0 mg/ml group),the proliferation of HSC significantly decreased when the concentration of magnesium isoglycyrrhizinate in mediumreached 1.0 mg/ml.The restrain proliferation of HSC presented its peak when the magnesium isoglycyrrhizinate concentration was 10.0 mg/ml.Different concentrations of Magnesium isoglycyrrhizinate do not affect the vitality on HSC by LDH measurement.Conclusion Magnesium isoglycyrrhizinate could significantly restrain the proliferation of HSC within certain concentration range.But do not affect the vitality on HSC by LDH measurement.【Key words】Magnesium isoglycyrrhizinate; Hepatic stellate cells T6; Proliferation; Activity肝纤维化是多种慢性肝病的共同病理基础。

常用免疫组化试剂（类别）介绍一、用于鉴别诊断（一）上皮源性：1、细胞角蛋白／cytokeratin.CK：目前，商品化的细胞角蛋白有20多种，不同的分子量代表不同类型的上皮标志。

通常将CK分为两大类型：Ⅰ型（低分子量）；Ⅱ型（高分子量）。

理论上讲，大多数单层上皮表达低分子量的CK；复层上皮多表达高分子量的CK；移形上皮（膀胱）和假复层上皮（呼吸道的被覆上皮）既表达低分子量的CK，也表达高分子量的CK。

在癌组织中，低分子量的CK多在腺癌中表达，高分子量的CK多在鳞癌中表达。

目前为止，未发现任何一种上皮只含有一种CK，某些上皮可含2－10种不同分子量的CK。

因此，目前试图应用单一的CK免疫表型来确定某种特定的上皮性肿瘤是不可能的。

同样，应用CK来区别腺癌、类癌和间皮瘤也是困难的。

因此，CK的免疫组化结果判断是一个较为复杂的问题，在应用这类标记物作为腺癌和鳞癌的鉴别应特别注意。

有必要时，应联合用多种CK加以综合判断。

CK的阳性表达还包括有间变癌、双向分化的滑膜肉瘤、脊索瘤、胚胎癌、间皮瘤、上皮样肉瘤、胸腺瘤等。

CK 的阴性表达有：副节瘤单向分化的滑膜肉瘤、软骨（肉）瘤、精原细胞瘤、淋巴瘤、脑膜瘤、恶黑、恶纤组、软组织肉瘤（除特殊类型外）。

在判断CK免疫组化结果时应注意几点：（1）CK的单克隆抗体优于多克隆抗体；（2）CK常出现斑点状的假阳性反应，应注意识别；（3）虽然大多数CK多在胞浆表达，但CK17多在胞核表达；（4）绝大多数CK抗体需用胰酶消化，可增加阳性表达率和染色强度；（5）部分非上皮性肿瘤（平滑肌肉瘤）可见有CK表达，在诊断时应注意；（6）淋巴结、扁桃体和脾组织中的滤泡外的网织细胞含有CK8和18以及desmin，在判断淋巴结转移癌和肌源性肉瘤转移时应根据组织学综合判断。

2、上皮膜抗原（epithelialmembraneantigen／EMA）：EMA是上皮细胞分泌的一种乳脂小球膜糖蛋白，广泛存在于人体各种上皮细胞中（也存在于间皮细胞、浆细胞、组织细胞和T细胞淋巴瘤中），其分布与角蛋白相似，但对脏腺上皮优于细胞角蛋白，尤其是分化差的癌EMA有时可呈强阳性表达。