黄芪_莪术配伍对胃癌MKN_45细胞COX_省略__NF_B_VEGF_MMP_
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谈参芪抑瘤方抑制胃癌细胞MKN-45 增殖和侵袭转移作用机制
谈参芪抑瘤方抑制胃癌细胞MKN-45 增殖和侵袭转移作用机制本文从网络收集而来，上传到平台为了帮到更多的人，如果您需要使用本文档，请点击下载按钮下载本文档（有偿下载），另外祝您生活愉快，工作顺利，万事如意！消化道肿瘤以胃癌最多见，其病死率逐步升高。
中医药在胃癌防控方面有其优势，但尚缺少理想的中成药，其探索尚需深化。
近年来当归贝母苦参丸( 苦参丸) 加味治疗宫颈和前列腺的癌症取得了明显效果。
研究表明苦参丸可以对顺铂化疗H22 荷瘤小鼠肿瘤起到增效减毒的作用。
抑瘤方由苦参丸加黄芪等组成，契合了肿瘤正气不足，痰( 湿) 浊、癌毒、瘀血内阻的病机。
其组成中药所含有效成分黄芪多糖、当归多糖、阿魏酸、贝母碱、土贝母苷甲、苦参碱，全蝎蛋白组分等对多种癌细胞均有抑制作用。
前期研究表明抑瘤方可抑制H22 移植瘤的增殖，苦参丸可抑制SGC-7901的增殖。
但其机制并未完全阐明，本课题在前期研究的基础上采用抑瘤方药物血清干预MKN-45细胞的方法，选择侵袭转移相关的肿瘤标记物环氧合酶-2( COX-2) 和人第10 号染色体缺失的磷酸酶( PTEN) ，从分子水平探讨该方抑制胃癌侵袭转移的作用机制。
1 材料1. 1 动物和细胞SPF 级Wistar 大鼠60 只，体重( 200 ± 20) g，由甘肃中医药大学科研中心提供，合格证号SCXK( 甘) 2011-0001。
MKN-45 细胞株由北京协和肿瘤研究所提供。
1. 2 试剂和药物DMEM 培养基，胰蛋白酶( Hyclone 公司，批号分别为NZH1205，J130025) ，胎牛血清( 杭州四季青公司，批号130215 ) ，噻唑蓝( MTT) ，二甲基亚砜( Sigma 公司，批号分别为3BH0357，WXBB5403V) ，RNAisoTM Plus ( Takara Bio公司，批号D9810A) ，the PrimeSeript RT reagent，SYBR Premix Ex TaqTM ( Takara Bio 公司，批号分别为DRRO37A，DRR081A) ; 结晶紫( Solarbio 公司，批号C8470) ; COX-2，PTEN 抗体( 中杉金桥生物技术有限公司，批号均为ZA0251) ; 二抗( 中杉金桥公司，批号K135627C) ; 抑瘤方( 苦参15 g，黄芪30 g，当归15 g，浙贝母10 g 等) 由甘肃中医药大学附属医院中药房提供，经甘肃中医药大学附属医院杨仓锡主任药师鉴定为正品。
黄芪、莪术配伍对人卵巢癌HO-8910原位移植瘤组织中MMP2和VEGF表达的影响
术组 ， 黄 芪、 莪 术 配伍 组 和 顺 铂 组移 植 瘤 组 织 中 ＭＭＰ ２和 ＶＥ ＧＦ蛋 白表 达 水 平 平 均 减 弱 （ Ｐ＜ Ｏ ． Ｏ ５ ） 。结 论
黄 芪、 莪 术 配 伍
使 用在 实验 周期 内对人 卵 巢 癌 ＨＯ － ８ ９ １ ０抑 瘤 效 果 明显 （ Ｐ＜ ０ ． ０ ５ ） ， 其 作 用 机 制 可 能 与 下 调 ＭＭＰ ２和 ＶＥ ＧＦ蛋 白 的表 达 有 关 。
关键词 ｉ 黄芪 ； 莪 术； 卵巢癌 ； ＭＭＰ ２ ； ＶＥ ＧＦ 中 图号 ： Ｒ ２ ８ ５ ． ５ 文献标志码 ： Ａ 文章编 号 ： １ ６ ７ ２— ０ ４ ８ ２ （ ２ ０ １ ４ ） Ｏ １ — ０ ０ ５ ３ 一Ｏ ４
Ｅｆ ￣ｃ ｔ ｏ ｆ Ｃｏ ｍ ｐａ ｔ ｉ ｂ ｉ ｌ ｉ ｔ ｙ ｏ ｆ Ａｓ ｔ ｒ ａ ｇ ａ ｌ ｕ ｓ Ｐｌ ｕｓ Ｚｅ ｄｏ ａ ｒ ｙ ｏ ｎ ｔ ｈｅ Ｅｘ ｐｒ ｅ ｓ ｓ ｉ ｏ ｎ ｏｆ Ｍ Ｍ Ｐ２ ａ ｎｄ ＶＥＧＦ ｉ ｎ Ｏｒ ｔ ｈｏ ｔ ｏ ｐｉ ｃ Ｔｒ ａ ｎｓ ｐｌ ａ ｎｔ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ Ｔｕ ｍｏ ｒ Ｔｉ ｓ ｓ ｕ ｅ ｏ ｆ Ｈ（ ） － ８９ １ Ｏ ０ｖ ａ ｒ ｉ ａ ｎ Ｃａ ｒ ｃ ｉ ｎｏ ｍａ ｉ ｎ Ｓ ｉ ｔ ｕ
Ｙ Ｉ Ｎ Ｇａ ｎ ｇ ， Ｔ ＡＮＧ Ｄｅ — ｃ ａ ｉ “ ， ＤＡＩ Ｊ ｉ ａ ｎ— ｇ ｕ ｏ ， Ｚ ＡＮＧ Ｗｅ ｎ— ｈ ｕ ａ ，删
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（ １ ． Ｃ ｏ ｌ ｌ ｅ ｇ ｅ ｏ ｆ Ｂ ａ ｓ ｉ ｃ Ｍｅ ｄ ｉ ｃ ｉ ｎ ｅ ，Ｎａ ｎ ｊ ｉ ｎ ｇ Ｕ ｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ｙ ｏ ｆ Ｃ ｈ ｉ ｎ ｅ ｓ ｅ Ｍｅ ｄ ｉ ｃ ｉ ｎ ｅ ， Ｎａ ｎ ｊ ｉ ｎ ｇ ，２ １ ０ ０ ２ ３ ， Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ ２ ． Ｔ ｈ ｅ Ａ ｆ ｉｌ ｆ ｉ ａ ｔ ｅ ｄ Ｈｏ ｓ —
黄芪莪术配伍对胃癌细胞cox-2表达的调节作用
COX-2、PPARγ、NF-κB的影响. 方法: 以黄芪 、 莪术配伍作用于 M K N-45 细 胞, 并设塞莱希布组、罗格列酮组、黄芪 组 、 莪术组和空白组相对照 . 用 MTT 法观察 各组药物对胃癌细胞的抑制率, 用RT-PCR以 及 Western blot 方法检测给药后人胃癌细胞 COX-2、PPAR γ、NF-κ B基因及COX-2蛋白 表达的变化. 结果: 各组对COX-2和NF-κ B的mRNA表达均 有抑制作用, 除莪术外对PPAR γ mRNA均有 促表达作用 , 其中以塞莱希布组和配伍组对 COX-2 mRNA表达的抑制作用最为明显, 且配 伍组作用明显强于黄芪组和莪术组, 以罗格列 酮组和配伍组对NF-κ B mRNA的表达抑制作 用和对PPARγ表达的促表达作用都是最明显. 结论: 黄芪、莪术配伍能起到增效作用, 对细 胞的抑制效应明显, 对COX-2的抑制作用大于 黄芪、莪术的单独效应, 与塞莱希布相近, 其 对COX-2的抑制作用可能是通过PPAR γ/NFκB信号途径发挥作用的.
关键词: 黄芪; 莪术; 配伍; 胃癌; 信号通路; 环氧化 物合成酶2; 过氧化物酶增殖因子激活受体γ; 核因 子κB
沈天华, 沈洪, 骆殊, 朱学军伍对胃癌细胞COX-2表达的调节作用. 世界华人消化杂志 2008; 16(32): 3599-3604
®
wcjd@
世界华人消化杂志 2008年11月18日; 16(32): 3599-3604 ISSN 1009-3079 CN 14-1260/R
基础研究 BASIC RESEARCH
黄芪、莪术配伍对胃癌细胞COX-2表达的调节作用
沈天华, 沈 洪, 骆 殊, 朱学军, 刘 丽, 李春婷, 刘亚军
Shen TH, Shen H, Luo S, Zhu XJ, Liu L, Li CT, Liu YJ. Regulatory effect of compatibility of Astragalus membranaceus and Rhizoma curcumae on COX-2 expression in gastric cancer MKN-45 cells. Shijie Huaren Xiaohua Zazhi 2008; 16(32): 3599-3604
黄芪、莪术配伍对胃癌MKN-45细胞COX-1、COX-2、NF—κB、VEGF、MMP-2表达的影响
［ 作者 简 介 】 骆 殊（ ９ ８ ） 男 ， 士 ， 究方 向为 中药抗 肿瘤 的分 子 机 制 。 １ ７一 ， 博 研 ［置 作 者 】 沈 洪（ ９ ９ ） 男 ， 授 ， 士生 导 师 ， 要从 事 消 化 系 统 疾病 的研 究 工 作 。Ｅ—ｍａ ：ｈｎ ｏ ｇ ９ ＠１ ３ Ｃｒ ｊ信 １ ５一 ， 教 博 主 ｉ ｓｅｈ ｎ９ ９ ６ Ｏ ｌ ｎ ［ 金 项 目】 江 苏省 中 医药 管 理 局资 助 益 气 活 血 疗 法 的 研 究 越 发 深 入 ， 在 临 床 上 取 并 得 了显 著 效 果 。 为 进 一 步 探 讨 益 气 活 血 治 法 的 抗 癌 作 用 机 制 ， 研 究 观 察 了益 气 活 血 治 法 中最 常 用 的 黄 芪 、 术 对 胃 癌 本 莪 ＭＫ 一 ４ 细 胞 环 氧 合 酶 （ Ｏ Ｎ ５ Ｃ Ｘ）一 １ Ｃ Ｘ ２ Ｎ 出 、 、Ｏ 、 Ｆ Ｖ Ｇ 、 Ｅ Ｆ ＭＭＰ一２表 达 的 影 响 ， 分 子 、 白水 平 探 讨 中 药 的 从 蛋
５ ０ ， 冰 箱 过 夜 。一 抗 孵 育 成 功 后 用 Ｔ Ｓ 洗 ３次 ， 次 ０ ） ４℃ ＢＴ 每
１ ｍｉ。加 入 二 抗 后 （ ： ０ ） 室 温 下 孵 育 １ｈ ０ ｎ １ ２０ ０ ， 。最 后 再 用 ＴＢ Ｔ 洗 ３次 ， 次 １ ｎ 每 张 膜 加 １ １的 发 光 液 １ｍＬ， Ｓ 每 ０ｍｉ。 ： 曝 光 ５ ｎ 等 条 带 清 晰 后 将 胶 片 取 出 ， 描 后 用 Ｔ ｎ ｎＧｓ ～７ｍｉ， 扫 ａ ｏ ｉ ３０ ５ ０软 件 半 定 量 分 析 。
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３２ ・ ５
现 代 中西 医 结 合 杂 志 Ｍｏ ｅｎ ｏ ｒａ ｏ Ｉ ｔ ｒｔｄ ａ ｉｏ ａ Ｃ ｉｅｅ ｎ ｅ ｅｎＭｅ ｉ ｎ ０ ９Ｆ ｂ １ （ ） ｄ ｒ ｕ ｎ ｌ ｆ ｎｅ ａｅ ｄｔ ｎ ｌ ｈ ｓ ｄＷ ｓ ｒ ｄ ｉｅ ０ ｅ ， ８ ４ Ｊ ｇ Ｔｒ ｉ ｎ ａ ｔ ｃ ２
黄芪莪术配伍对人肝癌裸鼠原位移植瘤新生血管生成的影响
黄 芪 莪 术 配 伍 对 人 肝 癌 裸 鼠原 位 移 植 瘤 新 生 血 管 生 成 的影 响
臧文华 ， 唐德 才 ， 尹 刚 ， 李冰冰
（ 南 京 中医药 大学 基 础 医学 院 ， 江苏 南 京 ２ １ ０ ０ ４ ６ ）
捅要： 目的 探 讨补 气活血药黄 芪、 莪 术配伍 对人 肝癌裸鼠原位移植瘤新 生血 管生成 的影响。方 法 构建人肝癌裸 鼠原位 移植瘤模型 。成瘤后 ， 将其随机分为 ５组 ： 模 型对 照组 、 顺铂 组（ Ｄ Ｄ Ｐ ） （ ２ ｍ ｋ ｇ Ｄ Ｄ Ｐ腹 腔 注射） 、 黄 芪莪术 配伍 高剂量组
时珍 国医国药 ２ ０ １ ４年第 ２ ５卷第 ３期
Ｌ Ｉ Ｓ Ｈ Ｉ Ｚ Ｈ Ｅ Ｎ Ｍ Ｅ Ｄ Ｉ Ｃ Ｉ Ｎ Ｅ Ａ Ｎ Ｄ Ｍ Ａ Ｔ Ｅ Ｒ Ｉ Ａ Ｍ Ｅ Ｄ Ｉ Ｃ Ａ Ｒ Ｅ Ｓ Ｅ Ａ Ｒ Ｃ Ｈ ２ ０ １ ４ Ｖ Ｏ Ｌ ． ２ ５ Ｎ Ｏ ． ３
温郁 金。黄芪 、 莪术分别 购 自产地内蒙古 、 浙江 ， 经南京 中医药大 ２ 方 法
． １ Ｈ ｅ ｐ Ｇ ２ 细胞培养 将人肝癌 Ｈ ｅ ｐ Ｇ ２ 细胞置于含 １ ０ ％小 牛血 学药学院吴德康 教授鉴 定 ， 分别 为豆科 植 物蒙古 黄芪 Ａ ｓ ｔ ｒ ａ ｇ ａ ｌ ｕ ｓ ２
发、 预后差 的临床病理特点 ， 严重威胁患者 的健康甚至生命 ， 其易 １ ８～ ２ ０ ｇ ， 裸 鼠置 于恒 温（ ２ ４～２ ７ ℃） 、 恒湿（ ４ ５ ％ ～５ ０ ％） 、 新 鲜空 转移、 复发率高是 制 约预 后改 善 的瓶颈 … 。中药配 伍 及其 提取 气高度除尘除菌 、 无特殊 病原 菌 （ Ｓ Ｐ Ｆ ） 环 境下 ， 用 高压 灭菌饮 用
文献标 识码 ： Ａ 源自文 章编 号 ： １ ０ ０ ８ ０８ － ０ ５ （ ２ ０ １ ４ ） ０ ３ ０５ － １ ６ ０３ －
黄芪多糖抑制人胃癌MKN45、MGC-803细胞生长的作用机制
黄芪多糖抑制人胃癌MKN45、MGC-803细胞生长的作用机制桂壮;邵治国;金笛【期刊名称】《中医学报》【年(卷),期】2018(33)4【摘要】目的:探讨黄芪多糖抑制人胃癌细胞MKN45、MGC-803生长的作用机制。
方法:将人胃癌细胞MKN45、MGC-803置于RPMI1640培养基中做传代培养,分为对照组、5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)组和黄芪多糖(astragalus polysaccharides,APS)组。
对照组采用1640培养基培养,5-FU组给予不同质量浓度的5-FU培养,黄芪多糖组给予不同质量浓度的黄芪多糖培养,采用四甲基偶氮噻唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)实验检测细胞生长抑制情况,使用流式细胞仪检测细胞周期,使用荧光显微镜观察细胞凋亡情况。
结果:(1)培养24 h,APS质量浓度≥10.0 g·L^(-1)、5-FU质量浓度≥0.05 g·L^(-1)时,MKN45、MGC-803细胞受抑制作用均比较明显;培养48 h,APS质量浓度≥5.0 g·L^(-1)、5-FU质量浓度≥0.025 g·L^(-1)时,MKN45、MGC-803细胞受抑制作用均比较明显;(2)细胞培养48 h后,5-FU组和APS组MKN45、MGC-803细胞周期均改变,停留在G0/G1期的细胞比例显著高于对照组,处于S期和G2/M期细胞明显少于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);(3)培养48 h后,5-FU组和APS组MKN45、MGC-803细胞凋亡率均高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。
结论:黄芪多糖可以抑制胃癌细胞MKN45、MGC-803的生长,其作用机制可能是使细胞停留在GO/G1期并诱导细胞发生凋亡。
【总页数】4页(P525-528)【关键词】人胃癌细胞MKN45;人胃癌细胞MGC-803;肿瘤;黄芪多糖;5-氟尿嘧啶;细胞周期;细胞凋亡【作者】桂壮;邵治国;金笛【作者单位】荆州市中医医院【正文语种】中文【中图分类】R273.52【相关文献】1.芦笋对人胃癌细胞MKN45裸鼠模型抑制肿瘤生长的初探 [J], 李良;汪军;范其坤;丁琦;褚芳2.黄芪多糖对人胃癌细胞MKN45诱导凋亡和细胞周期的影响 [J], 黄惠风;钱建业;谢少茹3.奥曲肽抑制人胃癌细胞株MKN45的生长 [J], 王消冰;王绪;张南征4.西咪替丁对人胃癌细胞MKN45的生长抑制和促凋亡的研究 [J], 范嵘;吴云林;乔敏敏;章永平5.南蛇藤提取物抑制人胃癌MGC-803细胞生长的作用机制 [J], 彭微; 袁桂; 刘洁; 刘求梅; 黄旭因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
黄芪-莪术-重楼配伍降低血管内皮通透性抑制结肠癌转移作用的研究
黄芪-莪术-重楼配伍降低血管内皮通透性抑制结肠癌转移作用的研究刘甜甜1，卞勇1,2，关汉卿1，梁研1，郭文晖1，余倩慧1，唐德才1(1.南京中医药大学中医学院·中西医结合学院，江苏南京 210023；2.南京中医药大学实验动物中心，江苏南京 210023)基金项目：国家自然科学基金面上项目（81873021）；江苏省中医药科技发展专项（2020ZX01）；江苏省研究生科研与实践创新计划项目（KYCX21_1764）通信作者：唐德才，男，教授，主要从事中药药性、配伍机制及应用研究，E-mail：****************.cn摘要目的：观察黄芪-莪术-重楼配伍对人脐静脉内皮细胞株(HUVEC)通透性与细胞紧密连接的影响及其抑制人结肠癌细胞系(HCT116)血行转移的作用机制。
方法：制备空白对照血清和黄芪-莪术-重楼配伍含药血清。
构建HUVEC-HCT116共培养体系，实验分为共培养模型组，黄芪-莪术-重楼配伍低、中、高剂量(2.1、4.2、8.4 g·kg-1)组。
另设HUVEC单培养对照组。
CCK-8法检测细胞增殖;FITC-dextran法、Transwell法检测HUVEC通透性与HCT116跨内皮迁移数量;免疫荧光法检测ZO-1蛋白的分布;Western blot法检测RhoA、ROCK及ZO-1蛋白表达量。
结果：黄芪-莪术-重楼配伍不同剂量含药血清处理48 h后，HUVEC增殖均显著减少(P<0.01)。
与单培养对照组相比，共培养模型组FITC-dextran渗透量、跨越内皮迁移的HCT116细胞数量明显增加(P<0.01)，ZO-1蛋白表达下调(P<0.01)，RhoA、ROCK蛋白表达上调(P<0.01);与共培养模型组相比，黄芪-莪术-重楼配伍各剂量组FITC-Dextran渗透量、跨越内皮迁移的HCT116细胞数量均减少(P<0.05)，ZO-1蛋白表达上调(P<0.05)，RhoA、ROCK蛋白表达下调(P<0.05)，且呈现剂量依赖性。
黄芪-莪术抑制肺癌生长和转移的网络药理学与转录组学机制研究
黄芪-莪术抑制肺癌生长和转移的网络药理学与转录组学
机制研究
肺癌是全球范围内最常见的恶性肿瘤之一，其发病率和死亡率居高不下。
近年来，中药作为一种重要的辅助治疗手段，受到了广泛关注。
黄芪和莪术作为中药中常用的药材，具有抗肿瘤的活性。
本研究旨在探究黄芪-莪术对肺癌生长和转移的网络药理学与转录组学机制。
首先，我们利用网络药理学方法，筛选并分析了黄芪和莪术中的活性成分。
结果显示，黄芪和莪术中含有多种具有抗肿瘤活性的成分，如黄芪苷、黄芪酸、莪术醇等。
这些成分通过调节多个关键信号通路，包括PI3K/Akt、MAPK、NF-κB等，发挥抗肿瘤作用。
接着，我们利用转录组学方法，研究了黄芪-莪术对肺癌细胞基因表达的影响。
结果显示，黄芪-莪术能够显著改变肺癌细胞的基因表达谱，调节多个关键基因的表达。
这些基因涉及到肿瘤细胞的增殖、凋亡、侵袭和转移等过程。
例如，黄芪-莪术能够抑制肿瘤细胞的增殖和侵袭能力，促进细胞凋亡和细胞周期的阻滞。
进一步的研究表明，黄芪-莪术通过调节多个信号通路和关键基因，对肺癌生长和转移起到了协同作用。
这些信号通路和基因的调节可能涉及到多个分子机制，如miRNA调控、转录因子激
活等。
此外，黄芪-莪术还可以调节肺癌细胞的免疫应答，增强机体的免疫功能。
总结起来，黄芪-莪术具有抑制肺癌生长和转移的作用，其机制涉及到多个信号通路和关键基因的调节。
这些研究结果为黄芪-莪术在肺癌治疗中的应用提供了理论依据，并为进一步深入研究其作用机制和开发相关药物提供了新思路。
然而，还需进一步的实验和临床研究来验证这些发现，以提高黄芪-莪术在肺癌治疗中的应用前景。
黄芪多糖对人胃癌细胞MKN45诱导凋亡和细胞周期的影响
黄芪多糖对人胃癌细胞MKN45诱导凋亡和细胞周期的影响黄惠风;钱建业;谢少茹【摘要】目的观察不同浓度﹑不同时间的黄芪多糖对人胃癌细胞MKN45的影响.方法应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)实验﹑流式细胞仪﹑细胞免疫组化等方法对人胃癌细胞MKN45进行检测.结果 MTT实验显示黄芪多糖可抑制MKN45细胞增殖;细胞周期分析提示黄芪多糖可将细胞MKN45阻滞于G0/G1期,均与浓度和时间呈正相关;免疫组化法显示凋亡相关基因Bcl-2蛋白表达下调, Bax蛋白表达上调.结论黄芪多糖对人胃癌细胞MKN45有直接杀伤作用,同时诱导肿瘤细胞凋亡,可将细胞周期阻滞于G0/G1期,其作用机制可能通过上调促凋亡蛋白和下调抑制凋亡蛋白实现.【期刊名称】《实用临床医药杂志》【年(卷),期】2010(014)019【总页数】4页(P17-20)【关键词】黄芪多糖;胃癌细胞;细胞凋亡【作者】黄惠风;钱建业;谢少茹【作者单位】南京中医药大学附属姜堰医院,消化科,江苏,姜堰,225500;南京中医药大学附属姜堰医院,消化科,江苏,姜堰,225500;南京中医药大学附属姜堰医院,消化科,江苏,姜堰,225500【正文语种】中文【中图分类】R735.2中医药在肿瘤的治疗中应用广泛,可以明显提高肿瘤治疗的疗效、减轻放化疗毒副反应和延长患者生存时间。
选择合理有效的中药,并从分子生物学角度寻找中药作用靶点,是目前研究热点。
近年来许多学者从不同角度对常用的益气药黄芪进行了研究,认为黄芪多糖具有抗肿瘤作用[1],其抗肿瘤作用可能与黄芪多糖的免疫增强作用有关[2],亦有报道黄芪多糖对肿瘤细胞具有直接杀伤作用[3],并具有一定诱发肿瘤细胞凋亡的作用[4],但其抗肿瘤机制尚未完全阐明。
紫杉醇是从紫杉树皮中提取的一种新型抗微管广谱抗癌药,现广泛应用于各种晚期肿瘤的治疗,疗效可靠。
作者以黄芪的主要药效成分黄芪多糖作为本研究的主要对象,以紫杉醇为对照,采用MTT法观察其对人胃癌细胞MKN45的体外生长抑制作用,流式细胞仪观察其对细胞周期的影响,免疫组化检测其对凋亡相关基因Bcl-2、Bax蛋白的表达的影响,进一步了解黄芪多糖对人胃癌细胞MKN45的生长抑制作用及可能作用机制。
民间抗癌偏方，黄芪搭配“一物”每天泡水喝，癌细胞越来越少
民间抗癌偏方，黄芪搭配“一物”每天泡水喝，癌细胞越来越少大家好，很开心又和大家见面了。
今天我们来聊一聊肿瘤这个话题，肿瘤是机体细胞在各种始动与促进因素作用下产生的增生与异常分化所形成的新生物。
肿瘤的生长不受正常机体生理调节，而是破坏正常组织与器官。
根据肿瘤的生物学行为可分为良性肿瘤、恶性肿瘤及介于良、恶性肿瘤之间的交界性肿瘤。
现代人可谓是“谈瘤色变”，那么应该怎么来治疗肿瘤或者防止肿瘤的产生呢？对于肿瘤的药物治疗，主要是运用内分泌治疗的方式，这种治疗方式需要使用激素，使肿瘤生长所依赖的激素水平发生变化，从而抑制肿瘤的生长，有极强的副作用。
但其实还有一个很好的方法用于癌症，那就是很多医生都赞成的用中医的方子来保守治疗，以人为本。
这里呢分析给大家，希望大家都能利用这个好方法抗癌成功。
这个方法源于我有次去中医药大学做演讲汇报时，一个中药学教授告诉我的。
他说，这个方子来源于中国古代的名医钱乙，钱乙曾治愈皇亲国威的小儿疾病，声誉卓著，被授予翰林医学士。
教授说，这个方子的组成虽然只有简单的三味药，但是它疗效确实出奇的好。
方子由以下三种药材组成，首先是碄山人参3克，再是黄芪2克，最后再加入枸杞子7-10粒即可。
《神农本草经》记载，碄山人参性温，微苦，能够入五脏，补益五脏虚劳，大补元气，除了对肿瘤有一定的治疗作用之外，它还能调节中枢神经系统，改善大脑的兴奋与抑制过程，使之趋于平衡。
在提高脑力与体力劳动方面，它还能提高工作效率，并有抗疲劳的作用。
久服无毒，轻身延年。
在本方中起到一个关键的作用，配合着黄芪跟枸杞子能够达到抗癌的效果。
其实，中医方子就是这样，有的时候看着很普通的药材搭配在一起却能达到非常理想的效果。
好了，今天我们就给大家分享这么多，大家有任何问题欢迎评论区给我留言。
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论 著 黄芪、莪术配伍对胃癌M KN-45细胞COX-1、COX-2、NF-κB、VEGF、MMP-2表达的影响骆 殊1,沈 洪2,朱学军2,刘 丽2,李春婷1,刘亚军2(1.南京中医药大学,江苏南京210029;2.江苏省中医院,江苏南京210029) [摘要] 目的 观察黄芪、莪术配伍对胃癌M KN-45细胞V EGF、COX-1、COX-2、NF-κB、MMP-2表达的影响。
方法 以黄芪、莪术配伍作用于M KN-45细胞,并设塞莱希布组、黄芪组、莪术组和空白组相对照。
通过EL ISA法检测V EGF的水平变化,用RT-PCR以及Western blot方法检测加药后人胃癌细胞COX-1、COX-2、NF-κB、MMP-2的mRNA及COX-2蛋白表达情况。
结果 各药物组对V EGF表达的抑制效应起始于48h,配伍组作用大于黄芪组和莪术组。
各药物对COX-2mRNA、NF-κB mRNA和MMP-2mR2NA均有抑制作用。
对COX-2的抑制以塞莱希布组和配伍组最明显,且呈时间依赖性。
对NF-κB mRNA的抑制作用起始于48h,配伍组在作用72h后对其抑制作用最显著。
对MMP-2的抑制作用以塞莱希布组和配伍组较明显,72h时的作用最强。
Western blot曝光结果可见,各组细胞在72 kD处可见特异性的COX-2蛋白表达条带。
进行灰度分析发现:各药物组对COX-2的抑制作用呈时间依赖性,以中药配伍和塞莱希布的抑制作用最强。
结论 黄芪、莪术配伍可能是通过对COX-2和NF-κB的调控影响MMP-2、V EGF的表达,从而抑制肿瘤细胞的浸润、转移。
[关键词] 益气活血;胃癌;COX-1;NF-κB;V EGF;MMP-2[中图分类号] R735.2 [文献标识码] A [文章编号] 1008-8849(2009)04-0351-04I nfluence of compatibility of Astragalus mongholicus and blue turmeric rhizome on expression ofCOX-1,COX-2,NF-κB,VEG F and MMP-2in gastric cancer cell MKN-45Luo Shu1,Shen Hong2,Zhu Xuejun2,Liu Li2,Li Chunting1,Liu Y ajun2(1.Nanjing University of TCM,Nanjing210029,Jiangsu,China;2.Jiangsu Hospital of Traditional Chinese Medicine,Nanjing210029,Jiangsu,China)Abstract:Objective It is to observe the influence of compatibility of Astragalus mongholicus and blue turmeric rhizome on the expression of COX-1,COX-2,NF-κB,V EGF and MMP-2in gastric cancer cell M KN-45.Methods The compatibility of Astragalus mongholicus and blue turmeric rhizome was used on M KN-45cell,comparing with another five contrasting medicine including celecoxib,Astragalus mongholicus,blue turmeric rhizome and blank drug.Experssion of V EGF was detecded by EL ISA.mRNA of COX-1,COX-2,NF-κB,MMP-2and COX-2proteinum were deter2 mined through RT-PCT and Western blot methods.R esults Suppression of all medicines on the expression of V EGF began after48h.The effect of compatibility was better than that of Astragalus mongholicus and blue turmeric rhizome.The influ2 ence of every medicine on COX-2mRNA,NF-κB mRNA and MMP-2mRNA was obvious.The suppression of celecox2 ib and compatibility on COX-2were both well,and became more apparent following time.All medicines had suppressed ex2 pression of NF-κB mRNA after48h,and the suppression of compatibility were most apparent after72h.The suppression of celecoxib and compatibility was visible and became most apparent after72h.Western blot results showed that a s pecific protein strip of COX-2expression was observed at the72kD.Gray scale analysis showed that all medicine had obvious sup2 pression on COX-2,and become more obviously following time.The suppression of celecoxib and compatibility was the strongest.Conclusion The compatibility of Astragalus mongholicus and blue turmeric rhizome has effect on the expression of MMP-2and V EGF by regulating COX-2and NF-κB,so to inhibit infiltration and metastasis of tumor cell.K ey w ords:Y iqi Huoxue therapy;gastric cancer;COX-1;NF-κB;V EGF;MMP-2[作者简介] 骆殊(1978—),男,博士,研究方向为中药抗肿瘤的分子机制。
[通信作者] 沈洪(1959—),男,教授,博士生导师,主要从事消化系统疾病的研究工作。
E-mail:shenhong999@[基金项目] 江苏省中医药管理局资助项目(H05044) 近年来对益气活血疗法的研究越发深入,并在临床上取得了显著效果。
为进一步探讨益气活血治法的抗癌作用机制,本研究观察了益气活血治法中最常用的黄芪、莪术对胃癌M KN-45细胞环氧合酶(COX)-1、COX-2、NF-κB、V EGF、MMP-2表达的影响,从分子、蛋白水平探讨中药的作用机制。
1 临床资料111 材料 黄芪、莪术饮片,江苏省中医院制剂部提供;塞莱希布胶囊(西尔大药厂波多黎各分厂生产,辉瑞制药有限公司分口包装,批号:B K070127)购自江苏省中医院中心药房。
人胃癌细胞株MK N-45购自上海仁济医院。
COX-2一抗及二抗均由ABCAM公司生产。
引物、第一链cDNA合成试剂盒、PCR扩增试剂盒购自上海生工生物有限公司。
其他试剂由江苏省中医院细胞分子实验室提供。
112 方法11211 EL ISA法检测V EGF 取对数生长期的细胞,按1×108L-1的密度,每孔500μL培养基分别加入到2个24孔板中,24h细胞贴壁后分别加药。
空白对照组、塞莱希布组(100μmol/L)、黄芪组(10mg/L)、莪术组(5mg/L)、配伍组(10mg/ L),每个药物分别设3个复孔,于24h、48h、72h后收集上层培养基,离心后上清转入tube管中备用。
将备好的培养基加入已平衡至室温板条的相应孔中(100μL/孔),37℃孵箱孵育90min,取出板充分洗涤4次,向滤纸上印干后每孔加入一抗工作液100μL,用封板胶纸封住反应孔,充分混匀,37℃孵箱孵育60min,洗板4次,干后每孔加入酶结合物工作液100μL,用封板胶纸封住反应孔,37℃孵箱孵育30min,洗板4次,加入显色剂100μL/孔,37℃孵箱暗处反应20min,每孔加入终止液100μL,混匀后即刻测量A450nm值,减去空白孔A值,得各标本的A值。
根据标准品的测定值绘制标准曲线图,在标准曲线上查出每个标本V EGF浓度。
11212 RT-PCR法检测COX-1、COX-2、NF-κB、MMP-2基因 取对数生长期的细胞,按2×106个/孔的细胞量加入到6孔板中,24h细胞贴壁后给药,于24h、48h、72h后收集各组细胞。
用Total RNA Trizol试剂盒提取RNA,并用紫外分光光度计测定A260nm及A280nm值,分析其纯度,同时进行定量。
于冰上混合2μg RNA样品及10μL随机六聚体引物,70℃退火5min,立即置于冰浴中,加入5μL逆转录酶缓冲液,40万IU/L rRNase抑制剂1μL,10mm ol/L dNTP1.25μL,200IU/mL的M-MLV逆转录酶1μL,并补加水至25μL充分混合。
然后37℃1h,80℃5min终止反应,-20℃保存。
PCR反应体系:10×reaction Buffer2.5μL,25mmol/L MgCl218.0μL,10mmol/L dN TP0.5μL,10mmol/L上下游引物各1μL,cDNA2μL,Taq酶1μL,补加水至50μL。
PCR 条件:94℃热启动,95℃变性50s,58℃复性50s,72℃延伸50 s,35cycle,其中NF-κB复性的温度和时间为52℃50s。
最后于72℃延伸8min。
反应完毕后,取扩增产物10μL,于115g/L 的琼脂糖凝胶上进行电泳分析。