API20E 肠道菌试剂鉴定条详解

实验八 AMES 试验和细菌的微量快速鉴定内容：1、AMES 试验检测样品的致突变性；2、API20E 鉴定肠杆菌科和其他部分革兰氏阴性菌；3、20套洁净平皿，放车上；4、确定各组的自选实验题目。

1、AMES 实验——TA98菌株检测移码突变（点试法）－先模拟，注意配合♦ 在3ml肉汤液的试管中接种TA98菌株，37℃，220rpm培养10－12h，菌液浓度要求达到（1－2）×109/ml；♦ 融化底层葡萄糖基本培养基，倒底层平板，每皿约15ml 培养基，冷凝彻底；♦ 融化试管中的上层素琼脂培养基，冷却到70℃后放在48℃水浴锅中保温，注意放稳； ♦ 取一支上层素琼脂试管，迅速加入TA98菌悬液0.1ml，马上用两只手搓匀；♦ 马上将搓匀的上层培养基倒入底层平板上，轻轻摇动，使上层培养基均匀铺满底层，然后平放台面，冷凝；（注意：配合要熟练，操作要快，从水浴锅中拿出上层培养基试管后，要在30s 内完成加入菌悬液、混匀、倒上层平板和放在台面上等步骤，否则上层培养基可能凝固不均匀，影响结果观察。

）♦ 重复上述步骤，制备所需的全部检测平板。

凝固后做好标记（检测何种液体）；♦ 用无菌镊子把无菌滤纸圆片浸入待测的液体样品中，饱和后取出，然后将蘸有待测液的滤纸圆片放在相应的检测平板中心。

注意清洗或者更换镊子；（注意：蘸取液体不能过量，不要让待测液体滴在平板上，否则会影响结果观察。

） ♦ 将上述平板置于37℃温箱中培养2天，观察结果；2、API20E 细菌鉴定系统鉴定肠杆菌科和部分革兰氏阴性杆菌 待鉴定的肠杆菌科菌种肉汤斜面上培养（37℃，20－24h ）用无菌水制备菌悬液（1.5×108个/ml)培养盒中加约5ml 无菌水API20E 菌种鉴定卡接种菌液等（注意防止气泡）将鉴定卡置于培养盒中，盖上盖子，并做好标记37℃培养18－24h 观察结果（TDA、IND 和VP三个反应要加试剂），编码查阅编码本，确定菌种名称API20E 检测某菌，培养24小时：加入试剂后：。

API20E生化鉴定条在致病菌检验中的应用摘要】目的提高API20E鉴定系统在肠道致病菌鉴定中的应用。

方法应用API20E和国产生化鉴定管对13株阳性菌株（4株致病性大肠埃希氏菌、7株志贺氏菌、2株甲型副伤寒菌）进行鉴定比较，并经血清学凝集验证。

结果表明API20E鉴定系统方法程序简化，检测结果准确可靠，对致病菌鉴定有现实的指导意义，可作为常规致病菌检测方法。

【关键词】API20E生化鉴定条、生化鉴定管、沙门氏菌、志贺氏菌【中图分类号】R446 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2014）30-0305-02近年来新的生化鉴定系统不断推出，以传统的试验方法来鉴定致病菌已不能适应准确、快速诊断的需求。

API20E生化鉴定系统是由法国生物梅里埃公司生产细菌数值分类鉴定系统，它的鉴定能力强，数据库不断更新和补充完善，已被许多国家和组织列入标准方法。

现在就API20E生化鉴定系统与国产生化鉴定官的鉴定效果进行比较对比，报告如下：1、样品、材料和检测依据1.1样品来源：本地区历年检测出的阳性菌株13株（4株致病性大肠埃希氏菌、7株志贺氏菌、2株甲型副伤寒菌）1.2、材料：API20E生化反应试剂条（法国生物梅里埃公司生产），批号：1002230950；API-Plus鉴定软件；国产细菌生化鉴定管（北京路桥公司生产），批号：20140218；志贺氏菌属诊断血清22种（宁波天润生物药业公司生产），批号：20140201；肠道致病性大肠埃希氏菌诊断学清15种（宁波天润生物药业公司生产）批号：20140201；沙门氏菌属诊断血清30种（宁波天润生物药业公司生产），批号：20140201。

1.3、检验依据：沙门氏菌检验方法：GB/T4789.4-2010、志贺氏菌检验方法：GB/T4789.5-2012、致泻性大肠埃希氏菌检验方法：GB/T4789.6-2003。

API20E生化反应试剂条和国产细菌生化鉴定管按厂家操作说明书进行操作。

我了解到你需要我撰写一篇关于“API 20 NE非发酵菌鉴定条”的文章，既要求深度又要求广度。

这是一个关于微生物学的主题，我会从浅入深地探讨，并且在文章中多次提及“API 20 NE非发酵菌鉴定条”。

第一部分：介绍API 20 NE非发酵菌鉴定条API 20 NE非发酵菌鉴定条是一种用于鉴定非发酵菌的检测工具，它采用了生物化学方法和微生物学方法来确定微生物的种类和特性。

这种鉴定条广泛应用于临床医学、食品工业和环境监测等领域，可以帮助科研人员和临床医生对非发酵菌进行快速而准确的鉴定和分类。

第二部分：深入探讨API 20 NE非发酵菌鉴定条的原理和方法API 20 NE非发酵菌鉴定条的原理基于微生物菌落的代谢反应，通过监测微生物对不同营养物质的利用情况来推断其种属和分类。

该鉴定条包含20个小管，每个小管内都含有不同的营养物质，当微生物菌落接种到这些小管中后，根据颜色变化和气体产生等特征，就可以判断微生物的代谢特性和种属分类。

第三部分：API 20 NE非发酵菌鉴定条在临床医学和食品工业中的应用在临床医学中，API 20 NE非发酵菌鉴定条被广泛应用于临床微生物学检测，可以帮助医生快速鉴定非发酵菌，从而选择合适的治疗方案。

在食品工业中，该鉴定条也被用于食品卫生和质量监测，可以帮助食品生产企业及时发现并控制微生物的污染。

第四部分：API 20 NE非发酵菌鉴定条的发展趋势和展望随着微生物学和生物技术的发展，API 20 NE非发酵菌鉴定条也在不断更新和改进。

未来，随着新的技术和方法的引入，该鉴定条将更加高效、准确地鉴定非发酵菌，为临床医学和食品工业提供更好的支持和帮助。

个人观点和理解：作为一种重要的微生物学检测工具，API 20 NE非发酵菌鉴定条在医学和工业领域发挥着重要作用。

它不仅可以帮助医生进行微生物感染的诊断和治疗，还可以帮助食品企业保障食品质量和安全。

我对这种鉴定条的发展前景充满信心，相信它会在未来发挥更加重要的作用。

细菌鉴定国际金标准- API无需专用仪器，标准化手工方法完成细菌的生化鉴定，为低成本替代传统手工细菌生化鉴定的最佳产品。

产品特点：1、完整的鉴定谱：15种试条，可鉴定的细菌多于550种。

2、简单方便：标准化方法。

3、快速结果：4-24小时。

4、成本低廉。

5、判读结果简单。

以下为API系列中应用比较广的几个产品：API 20E 肠道菌鉴定试剂条－24小时内鉴定革兰氏阴性杆菌1、覆盖临床常见的几乎所有细菌2、可作为其他鉴定系统的参考标准（文献超过600篇）3、快速，操作简便：只需一个菌落配成菌悬液，加入试剂条指定位置的小杯中，孵育后观察颜色的变化，软件辅助解释鉴定结果。

4、有效期较长阴性结果阳性结果API 20 NE 非肠道菌鉴定－24-28小时内鉴定非肠道革兰氏阴性杆菌1、本系列适合日益增加的引起院内感染的细菌的鉴定（由于这些细菌对抗生素越来越耐药，必须准确鉴定）2、标准的生化试验与同化实验相结合，完全适合这类细菌的非发酵代谢特点：这两种实验是这些细菌的检测标准。

3、配置标准浓度的菌悬液及标准化的操作方法（0.5个麦氏单位）保证了结果的可靠性，避免了混合培养和传代。

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API 20E、API 20NE使用说明：概要说明：API 20 E 是肠杆菌科和其它非苛养G-杆菌的标准鉴定系统，包括21 个标准化微型生化测试和鉴定资料库可鉴定的菌谱名录请参考说明书后的鉴定表。

原理：API 20 E 试验条是由20 个含干燥底物的小管所组成，这些测定管用细菌悬浮液接种培养一定时间後通过代谢作用产生颜色的变化或是加入试剂後变色而观察其结果，根据说明表判读反应参照分析图索引或使用鉴定软件得到鉴定结果。

试条的准备：准备一个培养盒盘和盖子，倒入5mL蒸馏水或软化水，于盘的蜂窝小凹中，造成一个湿室。

在盘的边缘写上编号。

从报装中取出实验条放到盘中。

API 20E操作步骤：1．取API 0.85% NaCl（5mL）培养基或使用5mL0.85%无杂质生理盐水2．用吸管或接种针从分离物的平板上挑取单个分纯菌落至悬浮基物中建议适用新鲜培养3．仔细研匀以达到均一的细菌悬液4．用同一根吸管，将菌悬液充满[CIT]、[VP]和[GEL]管的管部和杯部（加满）5．其他管仅充满管部（不是杯部）6．ADH、LDC、ODC、H2S和URE管用矿物油覆盖以形成厌氧环境7．盖上培养盒8．孵育18~24小时结果判读：添加附加试剂：TDA试验加1滴TDA试剂深褐色为阳性反应IND试验加1滴JAMES试剂反应立即发生粉红色出现为阳性反应VP试验加1滴VP1和1滴VP2试剂至少等待10分钟浅粉或红色表示为阳性结果如浅粉红色在10至12分钟内出现判断结果为阴性NO2测定：各加一滴Nit 1和Nit 2试剂於葡萄糖管内，待2~3分钟後，红色表示阳性，阴性反应（黄色）可能由於还原至N2（有时还有气泡）：加2-3mg锌粉到葡萄糖管，5分钟後，如果管保持黄色表示N2阳性记录於报告对照结果判读（加入附加试剂前阳性结果包括GLU试验的数量少于3个重新培养21小时且不要加任何试剂）板条的准备准备一个培养盒，在盒子中加入5ml 纯水，以建立一个湿润的环境。

API试剂条细菌鉴定国际金标准- API无需专用仪器，标准化手工方法完成细菌的生化鉴定，为低成本替代传统手工细菌生化鉴定的最佳产品。

产品特点：1、完整的鉴定谱：15种试条，可鉴定的细菌多于550种。

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5、判读结果简单。

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4、有效期较长阴性结果阳性结果API 20 NE 非肠道菌鉴定－24-28小时内鉴定非肠道革兰氏阴性杆菌1、本系列适合日益增加的引起院内感染的细菌的鉴定（由于这些细菌对抗生素越来越耐药，必须准确鉴定）2、标准的生化试验与同化实验相结合，完全适合这类细菌的非发酵代谢特点：这两种实验是这些细菌的检测标准。

3、配置标准浓度的菌悬液及标准化的操作方法（0.5个麦氏单位）保证了结果的可靠性，避免了混合培养和传代。

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法国梅里埃公司API20E 肠道菌试剂鉴定条上面就是API20E的鉴定试剂条，也就是用来鉴定肠道细菌之用途的。

一共是20种生化反应再加手工操作的氧化酶试验（ARA后面的OX）。

非常赞叹梅里埃公司的厉害，能把非常复杂的生化反应做成那么小的试剂条，而且还做了细菌生化反应数据库，好庞大的工作量和好精细的工作…………下面我来分别介绍一下这20种生化反应原理以及用途：复杂但是很有趣味……1）ONPG试验翻译成中文是：邻硝基苯-半乳糖苷酶试验。

用来检测细菌是否发酵乳糖。

原理是因为乳糖发酵过程中需要乳糖通透酶和β－半乳糖苷酶才能快速分解，但是有些细菌没有乳糖通透酶，只有半乳糖苷酶，所以会导致迟缓发酵。

由此可得，如果某种细菌能够发酵乳糖，那么一定会产生β－半乳糖苷酶。

ONPG试验是将ONPG作为底物，如果细菌产生β－半乳糖苷酶，那么会水解ONPG为半乳糖和黄色的邻-硝基苯酚（ONP），培养液会变成黄色。

因此试验结果为阳性。

2）ADH 精氨酸双水解酶试验:某些细菌能产生精氨酸水解酶，先水解精氨酸生成瓜氨酸和氨，再水解瓜氨酸生成鸟氨酸、氨和二氧化碳。

因此使培养基呈碱性。

用于阴沟肠杆菌（阳性）和产气肠杆菌（阴性）的鉴别。

（氨基酸分解过程是在厌氧环境中进行的，所以要加盖石蜡油造成厌氧环境）。

3）LDC 赖氨酸脱羧酶试验：某些细菌能产生赖氨酸脱羧酶，可以将赖氨酸脱羧生成胺和二氧化碳，但是碱性更强，使培养基呈紫色（溴甲酚紫指示剂）。

用来鉴别用于产气肠杆菌（阳性）与阴沟肠杆菌（阴性）。

4）ODC 鸟氨酸脱羧酶试验：某些细菌产生鸟氨酸脱羧酶，将鸟氨酸脱羧生成胺和二氧化碳，是培养基呈碱性。

用来鉴别鸟氨酸用于阴沟肠杆菌（阳性）和克雷伯菌（阴性）。

5）CIT 柠檬酸盐（又称枸橼酸盐）利用实验：当柠檬酸盐作为唯一的碳源，某些细菌能利用此碳源而分解柠檬酸盐产生碳酸盐，而使培养基呈碱性由浅绿色变成深蓝色。

肠杆菌科中：沙门菌属、克雷伯菌属、粘质和液化沙雷菌及某些变形杆菌以及枸橼酸杆菌阳性；而埃希菌属、志贺菌属、爱德华菌属和耶尔森菌属均为阴性。

API20E详解什么是API20E？API20E是一种用于微生物学的试剂盒，用于对细菌进行鉴定。

它通过观察微生物在不同营养条件下的生长和代谢方式来确定其物种。

API20E实验是一种基本而重要的微生物鉴定方法,被广泛应用于临床医院、食品、饮料、化工、环保和水域生态等领域。

API20E的组成和原理API20E试剂盒包含了20种用于细菌识别的生化试剂，其中每种试剂用于不同的代谢通路的检测和观察。

这些试剂被装在一系列小管中，可以方便地进行识别反应。

这些试剂的使用基于不同的生化反应原理：如糖酵解、蛋白质水解、氧化还原作用等。

细菌在不同的代谢通路中的反应不同，因此可以根据这些反应来区分不同的细菌种类。

API20E的操作步骤API20E试剂盒的使用方法较为简单，只需要按照以下步骤进行操作即可：步骤一：准备好培养好的细菌首先要准备好培养好的细菌，一般使用革兰氏染色技术对细菌进行初步的分离和分类。

步骤二：将细菌接种于API20E培养基中接着将准备好的细菌接种到API20E试剂盒中的培养基中。

步骤三：根据API20E说明书进行生化测试根据API20E试剂盒中的说明书，添加一定量的试剂并观察反应的结果。

步骤四：根据结果确定细菌的物种根据API20E试剂盒提供的指南以及反应结果判断细菌的物种。

API20E的优缺点优点：•使用方便，无需复杂的仪器设备操作•测试时间短，可在24-48小时内得到结果•结果准确，可以鉴别多种氧化还原、酸碱度和碳水化合物降解等情况缺点：•不能对细菌进行准确的分类•必须使用API20E试剂盒中提供的试剂和培养基进行实验，如果试剂和培养基质量不佳，则结果可能出现误判或不准确API20E试剂盒是一种简便、快速、准确的微生物鉴别方法，被广泛应用于微生物学研究及各个领域的生物学研究。

对于需要进行细菌鉴别的实验室来说，API20E是一种非常实用和有效的方法。