下载文档原格式
血小板保存血小板保存2011年10月06日血小板是血液重要的组成成分，参与机体凝血过程，发挥正常的止血功能，防止损伤后血液丢失,因此血小板输注在临床血液输注中也占有很大比例。
血小板采集主要有2种方法：从全血中分离制备血小板，机器采集献血者血小板（机采血小板）。
2006年8月，卫生部出台《关于限期停止有偿机采血小板的通知》，要求各地献血办不得下达指令性无偿捐献机采血小板的指标，或以发放补贴为由变相有偿机采血小板；为补充无偿机采血小板的不足，各采供血机构要充分利用已经采集的“无偿献血”血液资源，开展手工分离制备血小板工作。
目前，手工分离制备血小板的方法有富含血小板血浆法(PRP 法)和去白膜法(BC法)2种。
由于PRP法分离制备浓缩血小板时，移走富含血小板血浆后的红细胞悬液层含有大量白细胞，这些白细胞会引起诸如发热、过敏等非溶血性输血反应，此外，红细胞悬液层中由血小板和白细胞形成的微聚物也会进一步对受血者造成危害；因此BC法分离血小板的使用越来越广泛。
BC法的原理是：全血首先经重离心后分离白膜层，再将白膜层经轻离心后移走红细胞和白细胞，即得到浓缩血小板。
与PRP法制备的血小板相比，BP法制备的血小板具有白细胞残留量较低、血小板膜表面CD62p的表达率显著降低，以及提高ATP水平和低渗性休克反应能力等优点。
对血小板功能来说，BP 法制备的血小板糖分解率可降低一半，提高氧代谢率，维持二氧化碳水平，使pH保持恒定，尤其适合长期储运。
这可能是由于血小板离心时是隔着红细胞和白细胞的“生理垫”，这样的分离制备过程对血小板的损伤较低，表现为反映血小板激活指标——血小板膜表面糖蛋白分子CD62p的表达率降低。
因此，手工分离血小板，尤其是BC法制备的血小板首先可以使手工采集全血中的血小板得到充分利用，避免资源的浪费；其次，价格低廉，患者容易接受；第三，从全血中分离白膜再获得血小板，可以降低全血保存后微聚物的形成，降低受血者发生肺部、脑部栓塞的危险性，减少非溶血性输血反应的发生。
2021血小板冻干再水化的条件及其凝血功能变化范文 血小板(platelet)是由骨髓巨核细胞产生并释放于血液循环中的最小细胞,在止血和凝血过程中发挥着重要的作用。
由于血小板保质期较短，临床输注需求量大，加之临床输注需求时间的不确定性，造成了血小板过期浪费和临床供不应求的两难尴尬局面。
目前国内血小板主要保存方式是22℃振荡保存，有效期为 5d。
此外血小板还可深低温冰冻保存，但这种方法的保存效果和临床疗效不确切。
冷冻干燥技术已广泛应用于各种生物材料的保存，冻干制品具有常温下保存、性能稳定、便于运输的特点。
本研究以过期血小板为原料，探索血小板冻干再水化的条件，检测其冻干再水化后凝血功能的变化，为过期血小板再利用及新鲜血小板冰冻或低温保存研究提供了依据。
1、材料与方法 1.1实验材料 1.1.1血小板来源实验组选择体检合格，一周内未服用阿司匹林等抗血小板药物的自愿献血者，用血细胞分离机单采富含血小板血浆，22℃振荡保存 5d 过期；对照组选择新鲜机采血小板。
1.1.2主要试剂和溶液海藻糖 (CH22O11·2H2O，北京经科宏达生物技术有限公司)；牛血清白蛋白(BSA，上海生工生物工程有限公司)；磷酸盐缓冲液(PBS)；血小板聚集诱导剂二磷酸腺苷(ADP，Sigma公司)；凝血酶(Sigma 公司)；胶原(Sigma 公司)；瑞斯托霉素(Sigma 公司)；CD62P-PE(Bioscience 公司)；PAC-1-FITC(BDIS 公司 )；海藻糖加载缓冲液 ( 含50mmol/L 海藻糖，100mmol/L NaCl，10mmol/L KCl，10mmol/L EGTA，pH 为 6.8)；冻干保护剂(含 20%海藻糖，1% 牛血清白蛋白，9.5mmol/L HEPES，142.5mmol/L NaCl，4.8mmol/L KCl，1mmol/L Mg-Cl2)；复水溶液为 PBS 缓冲液和蒸馏水以 3:1 比例混合制成。
海藻糖＋ＨＥＳ＋ＢＳＡ冷冻干燥血小板的初步实验研究
徐梦洁１张绍志１王波２许先国３周正１陈光明１
１浙江大学制冷与低温研究所；２解放军第一一七医院；３浙江省血液中心
摘要：冷冻干燥保存技术为血小板的长期保存提供了一种有效的解决办法。
在冷冻干燥 中，提高一次干燥温度可有效缩短冻干操作时间，减少能量消耗，提高生产效率。
为此，本 文尝试选用部分玻璃化转变温度较高的聚合物羟乙基淀粉（ＨＥＳ）作为冻干保护剂成分，结合 海藻糖、牛血清白蛋白（ＢＳＡ）对人血小板进行了冷冻干燥的实验研究。
ＤＳＣ检测表明，羟乙 基淀粉的加入可以提高保护剂溶液的玻璃化转变温度。
在试验的六组配方中，以１０％（ｗｔ／ｗｔ） 海藻糖＋３％（ｗｔ／ｗｔ）ＨＥＳ＋１％（ｗｔ／ｗｔ）ＢＳＡ相对较好，其溶液的玻璃化转变温度为－３０．６±０．１℃， 采用它冻干血小板复水后的数值恢复率达到８５％以上，非活化率达到８０％以上，但各试验 组都存在复水后血小板细胞平均体积偏大、聚集效果不佳的问题。
关键词：血小板；冷冻干燥；羟乙基淀粉；玻璃化转变温度；冻干保护剂。
各种血液制品的最佳保存条件
各种血液制品的最佳保存条件如下：
1.全血：需要保存在2-6℃的专用冰箱中，在有效期内使用。
离开血库冰箱到输注结束，在常规温度中不超过4小时。
2.红细胞悬浮液：同全血。
3.浓缩红细胞和少量的红细胞：同全血。
4.洗涤红细胞：需要在2-6℃的专用冰箱内保存不超过24小时。
5.血浆：需要放入速冻机中，在零下50℃的环境中速冻半小时后，再放入零下22℃的冰柜中保存。
6.血小板：需要被放置在一个特制的保存箱内，保持温度在22±2℃左右，并且要不停地振荡摇晃，防止血小板聚集，保质期只有5天。
7.血小板的保存条件更苛刻：要在22℃的条件中震荡保存，而且保质期只有5天。
8.特殊血液制品如RH型血（熊猫血）：加入高浓度的甘油后则可在-80°的冷冻室里储存十年。
以上信息仅供参考，如有疑问或需要了解更多信息，建议咨询专业医护人员。
人红细胞冰冻干燥保存研究的进展【摘要】目前红细胞临床保存方法主要有低温（4℃）和深低温（-80℃或-196℃）保存。
4℃保存时间短，而且容易受到细菌污染；深低温保存大大延长了红细胞保存时间，但需要笨重的低温设备，而且由于保护液中含有甘油等渗透性保护剂，解冻后需要反复洗涤。
这些缺陷限制了常规红细胞保存方法在一些特殊情况，例如在战争和自然灾害条件下的应用。
相对于常规保存方法而言，冰冻干燥具有以下优势：重量大大减轻，便于运输，适合室温保存，易于再水化。
本文就冰冻干燥保存红细胞研究的进展和所面临的挑战，尤其是最近海藻糖在冰冻干燥保存过程中的应用以及其作用机制进行了综合讨论，从而为发展一种安全、简单和有效的红细胞冰冻干燥保存方法提出理论指导。
【关键词】红细胞Progress in the Study of Lyophilization of Human Red Blood Cells ―― ReviewAbstract Now the clinical preservation methods of human red blood cells mainly include hypothermic storage (4℃) and cryopreservation (-80℃ or -196℃). The preservation time of hypothermic storage of red blood cells is relatively short and it is easy to be contaminated by microbes. Cryopreservation greatly prolongs the storage time，but it needs heavy storage equipments. Because the protective solutions in cryopreservation contain glycerol，red blood cells need complicated washing in order to remove glycerol. These shortage methods limit their application to some special conditions，such as war or natural disasters. Compared with conventional preservation methods of red blood cells，lyophilization has many advantages such as less weight，convenient transportation，room temperature preservation，prone to be rehydrated. In this review，the progress and challenge in the development of lyophilization of red blood cells，especially application of trehalose and its mechanism in the lyophilization of red blood cells were systematically discussed. This review can provide some theoretic guidance for developing a safe，simple and efficient preservation approach of red blood cells by lyophilization.Key words red blood cell；lyophilization；trehalose；biomembrane红细胞是血液中含量最多的细胞，它通过其中的血红蛋白从肺部携带氧气运送到周边器官，在维持人体正常机能起着重要的作用。
直盐匡堂２１塑生！！旦笺！Ｑ鲞笙！！趟ｐｌａｔｅｌｅｔｓｔｏｒａｇｅ：Ｔｈｅｎｅｘｔｓｔｅｐｆｏｒｗａｒｄ［Ｊ］．Ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ，２００５，４５（１２）：１８３２．［１０］ＭｃＤｏｎａｌｄＣＰ，ＣｏｌｖｉｎＪ，ＳｍｉｔｈＲ，ｅｔａ１．Ａｎｏｖｅｌｍｅｔｈｏｄｆｏｒｔｈｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆｂａｃｔｅｒｉａｉｎｐｌａｔｅｌｅｔｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅｓｕｔｉｌｉｚｉｎｇｏｘｙｇｅｎｃｏｎｓｕｍｐｔｉｏｎａｓａｍａｒｋｅｒｆｏｒｂａｃｔｅｒｉａｌｇｒｏｗｔｈ［Ｊ］．ＴｒａｎｓｆｕｓＭｅｄ，２００４，１４（６）：３９１．［１１］马敏，王迅．血小板制品细菌污染检测方法的研究进展［Ｊ］．中同输血杂志，２００７，２０（４）：３４８．［１２］ｔｅＢｏｅｋｈｏｒｓｔＰＡ，ＢｅｃｋｅｒｓＥＡ，ＹｅｓＭＣ，ｅｔａ１．Ｃｌｉｎｉｃａｌｓｉｇ－ｎｉｆｉｃａｎｅｅｏｆｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｉｃｓｃｒｅｅｎｉｎｇｉｎｐｌａｔｅｌｅｔｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅｓ［Ｊ］．Ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ，２００５，４５（４）：５１４：［１３］ＢｒｅｃｈｅｒＭＥ，ＭｅａｎｓＮ，ＪｅｒｅＣＳ．ｅｔａ１．Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎｏｆｆｉｌｌａｕ．ｔｏｍａｔｅｄｃｕｌｔｕｒｅｓｙｓｔｅｍｆｏｒｄｅｔｅｃｔｉｎｇｂａｃｔｅｒｉａｌｃｏｎｔａｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｐｌａｔｅｌｅｔｓ：ａｎａｎａｌｙｓｉｓｗｉｔｈ１５ｃｏｎｔａｍｉｎａｔｉｎｇｏｒｇａｎｉｓｍｓ［Ｊ］．Ｔｒａｎｓ—ｆｕｓｉｏｎ，２００１，４１（４）：４７７．［１４］ＭｃＤｏｎａｌｄＣＰ，ＣｏｌｖｉｎＪ，ＲｏｂｂｉｎｓＳ，ｅｔａ１．Ｕｓｅｏｆａｓｏｌｉｄ．ｐｈａｓｅｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔｃｙｔｏｍｅｔｒｉｃｔｅｃｈｎｉｑｕｅｆｏｒｔｈｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆｂａｃｔｅｒｉａｉｎｐｌａｔｅｌｅｔｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅｓ［Ｊ］．ＴｒａｎｓｆｕｓＭｅｄ，２００５，１５（３）：１７５．［１５］ＹａｚｅｒＭＨ，ＴｒｉｕｌｚｉＤＪ．ＵｓｅｏｆａｐＨｍｅｔｅｒｆｏｒｂａｃｔｅｒｉａｌｓｃｒｅｅｎｉｎｇｏｆｗｈｏｌｅｂｌｏｏｄｐｌａｔｅｌｅｔｓ［Ｊ］．Ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ，２００５，４５（７）：１１３３．冻干血小板保存技术研究进展刘静，杜丽莉（天津市血液中心，天津３００１１０）［关键词】冻干；血小板；保存技术血小板是血液中的一种重要组成成分，输注血小板已成为治疗血小板减少症患者的重要手段。
冻干保存人红细胞的技术要点
为了减少细胞损伤，在冻干液和再水化洗涤液中需要加入稳定剂(冻干缓冲液、洗涤液中的大分子聚合物和碳水化合物)，红细胞冻干稳定剂文献报道各异，主要包括：
1、大分子聚合物，如PVP、葡聚糖、骨胶等；
2、聚阴离子化合物，如焦磷酸、磷酸化肌醇；
3、碳水化合物，如葡萄糖、蔗糖、木糖、甘露糖等；
4、磷酸盐缓冲液或钾、钠等金属离子。
其中大分子聚合物和聚阴离子化合物的选择及其分子量和在溶液中的浓度等因素，对细胞的回收率均有影响。
进一步的研究证明，PVP的玻璃化转变温度受分子量和浓度的制约，即玻璃化转变温度随分子的增大而提高，随着水分的丢失(或在冻干体系中浓度的增加)而提高，冻干和保存生物样品应在保护剂的玻璃化转变温度下进行，以减少生物活性的丢失。
再水化过程中使细胞膜不受损伤为了细胞的存活，冻干过程中细胞必须处于高渗状态，所用保养液的渗透压相当于3～5倍生理渗透压，在给人体输注前需要经过逐步洗涤。
将细胞悬液的渗透压调整到生理水平的过程中，容易出现细胞膜破裂，血红蛋白流出的现象。
冻干过程中的温度控制
红细胞的冻干首先使细胞冰冻，由液态变成固态，然后使箱体内的细胞在抽气减压、升温的同时，水分升华，逐步达到干燥的目的。
因此，冰冻、升温与真空度三者关系如何协调、控制，对冻干效果至关重要。
深低温冷冻保存血小板的最佳温度及时限杨振宇;李正发;付凌梅;朱祥明【摘要】背景:临床对血小板的需求量急剧增加,新鲜液态血小板无法保障临床需求,特别是特殊血型、急诊患者和偏远地区的需求.目的:探讨用5％二甲基亚砜深低温冰冻保存血小板的最佳保存温度、时限及复融后的最佳使用时间.方法:选择16个机采血小板标本,对冰冻前及在-18℃、-40℃、-80℃冰冻保存1,3,6,12个月、冻融后即刻、冻融后1,2,4h进行相关指标检测,包括血小板计数、平均血小板体积、血小板分布宽度、CD42b和CD62p表达.结果与结论:①-80℃冰冻保存6个月血小板的CD62p表达、冰冻保存12个月血小板的CD42b、CD62p表达分别与冰冻前比较差异有显著性意义(P＜0.05);②-18℃、-40℃冰冻保存6个月血小板的CD42b、CD62p表达与-80℃相比差异均有显著性意义(P＜0.05);③-80℃冰冻保存6个月复融后4 h CD42b、CD62p表达与复融后即刻相比差异有显著性意义(P ＜0.05);④结果表明5％二甲基亚砜冰冻保存血小板在越低的温度下保存越好;推荐保存条件为-80℃、6个月内;解冻后的最佳使用时间为2h内.【期刊名称】《中国组织工程研究》【年(卷),期】2018(022)033【总页数】5页(P5368-5372)【关键词】血小板;低温冰冻保存;保存温度;保存时限;二甲基亚砜;复融;CD42b;CD62p;干细胞【作者】杨振宇;李正发;付凌梅;朱祥明【作者单位】云南昆明血液中心,云南省昆明市650106;云南省第一人民医院,云南省昆明市650000;云南昆明血液中心,云南省昆明市650106;云南昆明血液中心,云南省昆明市650106【正文语种】中文【中图分类】R394.2文章快速阅读：文题释义：保存时限：机采血小板常规保存时间最多为5 d，从献血员的招募、采集、检验等到供应临床需要两三天，也就是说，它的真正使用时间只有约2 d，如不能及时用于临床将造成过期浪费，因此临床上机采血小板供应比较紧张。
人多能干细胞的冷冻与保存刘鸿燕1，2，黄元华2，马燕琳21郑州大学第一附属医院，河南省郑州市450052；2海南医学院附属医院，海南省海口市570102 Cryopreservation of human pluripotent stem cellsLiu Hong-yan1, 2, Huang Yuan-hua2, Ma Yan-lin21First Affiliated Hospital of Zhengzhou University, Zhengzhou 450052, Henan Province, China; 2Affiliated Hospital of Hainan Medical University, Haikou 570102, Hainan Province, China摘要背景：人多能干细胞的出现与发展是近年来生物医学研究领域的重大突破。
但其在基础/临床研究中的广泛应用还有诸多限制，建立安全有效标准化的冷冻保存方案是人多能干细胞广泛应用面临的重大挑战。
目的：回顾人多能干细胞冷冻领域的研究进展，探索造成冷冻损伤的原因和机制及改进方式，致力于促进新的更有效的冷冻方案形成。
方法：以“人多能干细胞、人胚胎干细胞、人诱导多能干细胞、玻璃化、程序化冷冻、慢冻法、冷冻保存”为中文检索词，以“human pluripotent stem cells，human embryonic stem cell，human introduced pluripotent stem cell，vitrification，programmedcryopreservation,slow-freezing,cryopreservation”为英文检索词，应用计算机检索中国知网全文数据库、万方全文数据库、维普(VIP)期刊全文数据库、PubMed数据库有关人多能干细胞冷冻保存技术的文献，排除与研究目的无关及重复文献，保留58篇文献进一步总结分析。
·论著·大容量人血小板冻干保存的初步研究王波1，张存海1，徐梦洁2，许先国3，陈光明2，张绍志2［摘要］目的为使血小板冷冻干燥保存技术用于军队临床战创伤救治，在小容量冻干保存的基础上研究大容量人血小板的冷冻干燥技术。
方法采用特制血盒作为冻干容器，以20%（w/v）海藻糖和1%（w/v）牛血清白蛋白作为冻干保护剂。
冻干样品复水后测量血小板的数值恢复率和体积分布参数，应用流式细胞仪检测血小板的凋亡率和活化率，采用二磷酸腺苷和肾上腺素检测血小板的聚集功能。
结果大容量血小板冻干复水后的数值恢复率为（66．3ʃ2．1）%，平均血小板体积较新鲜血小板有明显增加，冻干血小板的细胞凋亡率达20%左右；冻干和复水过程还造成小部分血小板被激活，其最大聚集率为新鲜血小板的50%左右。
结论大容量血小板冻干复水后的恢复率较低，形态结构、活性和功能指标均低于新鲜血小板，但基本可以满足血小板临床止血功能标准。
［关键词］血小板；冷冻干燥；大容量；聚集；流式细胞术［中图分类号］R457［文献标志码］A［文章编号］1672-271X（2012）05-0413-03Preliminary study on the preservation of large volume of human platelets by freeze-drying WANG Bo1，ZHANG Cun-hai1，XU Meng-jie2，XU Xian-guo3，CHEN Guang-ming2，ZHANG Shao-zhi2．1．In-tensive Care Unit，117Hospital of PLA，Hangzhou，Zhejiang310013，China；2．Institute of Refrigeration and Cry-ogenics，Zhejiang University，Hangzhou，Zhejiang310027，China；3．Institute of Blood Transfusion，Blood Center of Zhejiang Province，Hangzhou，Zhejiang310006，China［Abstract］Objective Towards a clinical application of the technology of freeze-drying preservation of human platelets in certain military situations，a primary study on the freeze-drying of large volume of human platelets was conducted．Methods A specially designed blood vessel was used as the lyophilization container．The human platelets were rehydrated directly after lyophiliztion．The cell recovery rate，mean platelet volume and platelet distribution width were analyzed by a blood-cell counter．The apoptosis rate and activation rate were re-corded by a flow cytometry．The aggregation function was tested with adenosine diphosphate and epinephrine．Results The recovery rate of rehydrated platelets reached（66．3ʃ2．1）%．Compared with fresh control the mean platelet volume of rehydrated platelets increased significantly．The apoptosis rate was about20%according to the analysis of the flow cytometry，and a small part of platelets were activated during the freeze-drying and re-hydration process．The maximal aggregation rate was approaching approximately50%of that of fresh control．Conclusion Freeze-drying preservation of large volume of human platelets resulted in a comparatively low cell recovery rate compared with that of small volumes，and the morphology，aggregation function was also affected，but meet the clinical requirement of coagulation on the whole．［Key words］platelet；freeze-drying；large volume；aggregation；flow cytometry血小板保存技术的局限性造成目前血小板的供应不足和浪费。
冷冻干燥法为血小板长期保存的一种有效方法［1-2］，但现阶段仍局限在小容量（≤10ml）样本，还不能于临床批量应用。
临床输血治疗一般采用血袋，容量大于现有的实验研究样本。
本研究在瓶装小容量（1ml）血小板冻干保存的基础上，尝试采用特制血盒进行大容量（100ml）血小板的冻干作者简介：王波（1962-），男，山东潍坊人，硕士，主任医师，硕士研究生导师，从事战、创伤危重病研究作者单位：1．310013浙江杭州，解放军117医院重症医学科；2．310027浙江杭州，浙江大学制冷与低温研究所；3．310006浙江杭州，浙江省血液中心输血研究所保存，并对冻干血小板复水后的数值恢复率和形态分布，以及聚集和流式等活性指标进行检测比较。
1材料与方法1．1实验材料血小板浓缩液［（1 1．5）ˑ109/ ml］来自健康献血者，浙江省血液中心提供，实验前存于22ħ中震荡过夜。
主要试剂：海藻糖（北京京科宏达生物技术有限公司）、牛血清白蛋白（上海生工生物工程公司）、血小板聚集诱导剂二磷酸腺苷（adenosine diphos-phate，ADP）和肾上腺素（Chrono-log公司）、流式试剂CD61-PerCP，Annexin V-FITC，PI染色剂和结合缓冲液（MultiSciences公司）、CD62P-PE（eBioscience 公司）、PAC-1-FITC（BDIS公司）。
主要溶液：海藻糖加载缓冲液（含50mmol/L海藻糖，100mmol/L NaCl，10mmol/L KCl，10mmol/L EGTA，10mmol/L咪唑，pH值为6．8）；冻干保护剂（含有20%海藻糖，1%牛血清白蛋白，9．5mmol/L HEPES，142．5mmol/L NaCl，4．8mmol/L KCl，1 mmol/L MgCl2）；复水溶液为以生理盐水稀释的血浆（1ʒ1）。
主要仪器：冷冻干燥机（LabConco，美国）、恒温振荡水浴（Bellco Glass，美国）、流式细胞仪（FACS-Calibur，BD，美国）、血球计数仪（CELL－DYN1700，Abbott，美国）。
特制冻干血盒为230mmˑ120mmˑ25mm的长方体，以医用塑料制作，医用无纺布（透气不透水）密封并预留溶液充注口。
1．2血小板冷冻干燥血小板浓缩液离心洗涤后重悬于海藻糖加载缓冲液中，于37ħ水浴中振荡孵化4h。
洗涤后再重悬于冻干保护剂中，调整浓度约为0．1ˑ109/ml。
将100ml血小板冻干悬浮液装入特制冻干血盒中，密封充注口。
冻干悬浮液在－60ħ中预冻4h后，迅速置于－30ħ的冻干机搁板上，抽真空进行一次干燥100h；随后搁板升温至20ħ，二次干燥持续时间40h。
干燥过程中冷阱温度维持－80ħ，真空度1Pa左右。
冻干后加入100ml复水溶液，轻轻振荡至冻干样品完全溶解后用于实验。
1．3血小板计数采用血球计数仪测量血小板浓度，血小板平均体积（mean platelet volume，MPV）和血小板分布宽度（platelet distribution width，PDW）。
计算血小板的数值恢复率（为冻干复水后的血小板数/冻干前的血小板数ˑ100%）。
1．4血小板流式实验调整血小板浓度，依次加入流式试剂按常规染色处理后，在流式细胞仪上进行分析，采用CellQuest软件计算血小板凋亡率和活化率。
另取新鲜血小板同样处理并计算。
1．5血小板聚集实验以新鲜浓缩血小板为对照组，ADP和肾上腺素为聚集诱导剂（浓度分别为20μmol/L和50μmol/L），用血球计数仪对聚集前的复水血小板悬浮液和聚集后的复水血小板进行细胞计数，计算聚集率［3］（1－聚集前悬浮液中血小板数/聚集后上清液中血小板数ˑ100%）。
1．6统计学处理采用SPSS16．0统计软件进行统计分析，检测数据以均值ʃ标准差（xʃs）表示。
采用双尾t检验分析对比，以P＜0．05为差异有统计学意义。
2结果2．1冻干复水后血小板的恢复率和形态分布冻干血小板复水后的数值恢复率为（66．3ʃ2．1）%，MPV 较新鲜血小板明显增加（P＜0．01），PDW略有增大但与新鲜血小板无显著差异（P＞0．05）。
见表1。
表1冻干复水后血小板与新鲜血小板的MPV和PDW值（n=5）分组MPV（fL）PDW（%）冻干复水后血小板12．4ʃ0．6*17．3ʃ0．7新鲜血小板9．9ʃ0．616．5ʃ0．8注：与新鲜血小板比较，*P＜0．012．2冻干复水后血小板的凋亡和活化检测采用流式细胞仪检测冻干复水后血小板的凋亡和活化结果如图1所示。
冻干复水后血小板比较新鲜血小板，部分细胞呈现Annexin V-FITC阳性，即细胞膜上出现早期凋亡的标志，未凋亡的细胞占血小板总数的（80．3ʃ6．3）%。
同时冻干复水后血小板的PAC-1表达率较低，但CD62P表达率较高，活化早期的血小板（PAC-1-FITC呈阳性）占血小板总数的（2．5ʃ1．8）%，而活化晚期的血小板（CD62P-PE呈阳性）占血小板总数的（12．8ʃ4．6）%。
