血栓与止血的检验操作规程

医学讲义血栓与止血检验的基本方法血栓与止血检验是一种常见的临床检验方法，用于评估患者的凝血功能以及血液内血栓形成的风险。

在医学讲义中，通常会详细介绍血栓与止血检验的基本方法。

以下是一个超过1200字的讲义示例，涵盖了血栓与止血检验的各个方面。

一、血栓检验1.凝血酶原时间（PT）凝血酶原时间是评估外源凝血通路的指标，也常用于观察患者的抗凝治疗情况。

常用的计算方法是比较患者的凝血酶原时间与正常参考范围的比值，称为国际标准化比值（INR）。

一般来说，INR低于1表示凝血功能正常，高于1则表示凝血功能异常。

PT的正常范围通常为11-13秒。

2.活化部分凝血时间（APTT）活化部分凝血时间是评估内源凝血通路的指标。

类似于PT，APTT的正常范围通常为30-40秒。

延长的APTT可能与继发性凝血因子缺乏或特定抗凝药物（如肝素）的使用有关。

3.凝血酶时间（TT）凝血酶时间用于评估凝血酶浓度，以及血浆中抗凝因子的活性。

正常情况下，凝血酶时间为15-20秒。

4.D-二聚体（D-Dimer）D-二聚体是降解纤维蛋白过程的产物，因此，它的水平可用于评估血浆中纤维蛋白的分解程度。

高水平的D-二聚体可能表明存在血栓形成或者纤维蛋白分解增加。

因此，D-二聚体被广泛用于排除深静脉血栓栓塞症（DVT）和肺栓塞的可能性。

5.血小板计数与活化血小板计数常用于评估患者的血液凝聚能力。

正常成年人的血小板计数通常在150-450×109/L之间。

此外，血小板功能的评估可以通过使用成熟的血小板活化试剂和流式细胞术等检测方法进行。

6.纤维蛋白原（Fibrinogen）纤维蛋白原是一种在凝血过程中转化为纤维蛋白的血浆蛋白，也是凝血功能的重要指标。

正常情况下，纤维蛋白原的水平为2-4g/L。

纤维蛋白原水平的异常可能与出血或血栓形成有关。

二、止血检验1.出血时间出血时间是评估止血过程的指标之一、此测试方法通常通过在特定部位划开一小段皮肤，并观察血液停止流出所需的时间。

提醒：复习血栓与止血检验部分时，不可仅仅看《临床血液学检验》教材，因为还有不少内容在《临床检验基础》教材上，注意后者的第二章“血液一般检验”部分的第四节：血栓与止血一般检查（P71~P81）血栓与止血（thrombosis and hemostasis）是机体止凝血和抗凝血机制动态平衡失调的一种病理生理过程。

一、血小板与血管壁的相关检查（一）出血时间测定（Bleeding time, BT）是指毛细血管刺伤后自然出血到自然止血所需的时间。

此过程反映了皮肤毛细血管与血小板之间的相互作用，包括血小板粘附、激活、释放以及血小板聚集等反应，当血管和（或）血小板功能有异常时，出血时间可出现变化。

【测定方法】：血压计束缚于上臂，成人40mmHg，儿童20mmHg；消毒皮肤后，用出血时间测定器或采血针穿刺皮肤，血液自然流出，开始记时；每间隔30s用滤纸吸干流出的血液，直到血液不再流出，停止计时。

【参考值】：各种方法略有差别；出血测定器：8min分钟以内。

采血针法（IVY法）：2-7min。

采血时间测定器法伤口大，操作较复杂，但是灵敏度和准确性好，是国际上推荐使用的方法。

IVY法的影响因素多，准确性和重复性不如出血测定器法。

【临床意义】：出血时间延长，表示一期止血缺陷常见于：（1）血管结构和功能异常，如遗传性出血性毛细血管扩张症；（2）血小板数量及功能异常，如血小板减少性紫癜，血小板无力症等；（3）严重的凝血因子缺乏，一般凝血因子缺乏BT不延长；（4）药物干扰，主要阿斯匹林、非类固醇抗炎药及其它抗血小板药物、抗菌素如青霉素和头孢类药物等也可使BT延长。

（二）毛细血管脆性试验（束臂试验）（capillary resistance test，CRT）用物理学方法，于上臂加压，给毛细血管以负荷，检查一定范围内新出现的皮肤出血点来判断毛细血管的通透性和脆性，又叫毛细血管抵抗力试验。

当毛细血管本身的结构和功能、血小板的质和量以及体液因子有缺陷或受到某些化学物质、物理因素的作用时，毛细血管的脆性和通透性增加。

血栓与止血的检验操作规程血管壁与内皮细胞检验出血时间（BT）出血时间检测是指皮肤受特定条件的外伤后，出血自行停止所需的时间。

此过程反映皮肤毛细血管与血小板相互作用，包括血小板粘附，血小板活化和释放以及血小板聚集等反应。

1. 出血时间“测定器法”自肘前窝凹下二横指处，经常规消毒后，使刀片由“测定器”内刺入皮肤，启动秒表，每隔半分钟用干净滤纸吸干流出的血液，直至出血自然停止，按停秒表，记录出血时间。

2. Duke法，自耳垂或指尖取血。

【方法与操作】见《全国临床检验操作规程》（第二版）【注意事项】测定器法：1. 采取部位应保暖，血液应自动流出。

2. 由于刺入皮肤的刀片长度和深度均固定，故“测定器法”的结果较为准确。

3. 滤纸吸干流出血液时，应避免与伤口接触。

4. 试验前1周内不能服用抗血小板药物，如阿司匹林等，以免影响结果。

血小板数量和功能检验血小板计数和平均血小板体积测定血小板计数：目视计数法。

【标本】末梢血或抗凝静脉血。

【方法与操作】见《全国临床检验操作规程》（第二版）。

【试剂】1. 草酸铵法稀释液。

2. 许汝和稀释液。

【附注】1. 血小板稀释液要清洁。

防微粒和细菌污染。

试管和吸管也应清洁、干净。

2. 针刺应稍深，使血流通畅。

拭去第一滴血后，首先采血作血小板检测，动作要快，防止血小板聚集和破坏。

采取标本后尽快计数。

3. 血液稀释液充分混匀后，滴入计数池内后，要静置10~15min。

室温高时注意保持计数池周围的湿度，以免水分蒸发。

4. 计数时光线要适中，注意有折光性的血小板与杂质灰尘相区别，附在血细胞旁边的血小板也要注意，不要漏掉。

血小板计数仪计数【标本】末梢血。

【方法与操作】使用血小板计数仪及与其相匹配的稀释液。

操作详见仪器使用说明书。

平均血小板体积（MPV）测定【标本】根据仪器的要求用末稍血或静脉取血注入抗凝管（EDTA.Na2或肝素）【方法与操作】自动化血细胞计数仪均可检测血小板功能检验血小板粘附试验【标本】自静脉取血1.0~1.5ml。

血栓与止血检验的基本方法一、一期止血缺陷筛查试验 要点1： 出血时间（bleeding time，BT） （1）原理：测定在皮肤受特定条件外伤后，出血自然停止所需的时间即为出血时间。

BT反映了毛细血管与血小板的相互作用，包括内皮下组织与血小板黏附（通过vWF的作用）、血小板的聚集和释放等反应，以及PGI2与TXA2的动态平衡。

（2）临床意义 出血时间延长见于血小板减少症；先天性血小板功能异常，如血小板无力症、血小板贮存池病；获得性血小板功能异常，如尿毒症、药物影响、异常蛋白血症、骨髓增生性疾病；血管性血友病；遗传性血管周围结缔组织病如艾-唐综合征。

一般凝血因子缺乏出血时间不延长，但某些严重的因子缺乏（如因子Ⅹ和Ⅺ）及无纤维蛋白原血症可以延长。

出血时间缩短见于某些严重的高凝状态和血栓性疾病。

此外，出血时间还广泛用于外科手术前的出血筛选和抗血小板药物的监控，以免发生出血。

（3）注意事项 试验前一周患者应停服阿司匹林、噻氯吡啶等抗血小板的药物。

要点2： 束臂试验（tourniquet test或capillary fragility test，CFT） （1）原理 通过前臂局部加压，使静脉血流受阻，给予毛细血管以负荷，观察前臂皮肤一定范围内新出现的出血点数目，来估计血管壁的完整性及其脆性。

（2）参考值 5cm直径圆圈内新出血点的数目：男性少于5个；女性及儿童少于10个。

（3）临床意义 新出血点的数目超过正常为阳性，见于 ①血管壁结构和（或）功能缺陷，如：遗传性出血性毛细血管扩张症、过敏性紫癜、单纯性紫癜及其他血管性紫癜。

②血小板的量和（或）质异常，如：原发性和继发性血小板减少症、血小板增多症、先天性（遗传性）和获得性血小板功能缺陷症。

③血管性血友病（vWD）。

二、二期止血缺陷筛查试验 要点3： 凝血酶原时间测定（prothrombin time，PT） （1）原理： 在受检血浆中加入过量的组织凝血活酶（人脑、兔脑、胎盘及肺组织等制品的浸出液）和钙离子，使凝血酶原变为凝血酶，后者使纤维蛋白原转变为纤维蛋白。

第一节血栓与止血检验标本的采集与处理血栓与止血检验的标本采集以及前处理直接影响实验结果的准确性，因此，要求所有步骤均应规范操作（相关检测项目可参照卫生行业标准WS／T359-2011《血浆凝固实验血液标本的采集及处理指南》的要求）。

一、标本的采集（一）采血前的准备工作采血时，首先应该确认患者姓名，并且将姓名和编号写在贮血容器上。

安慰患者，努力减轻患者的恐惧心理。

尽可能地保证每次采血都在同样的条件下进行，即患者处于休息状态，并且在早餐前采血。

服用某些药物或某些生理状况（如怀孕、情绪激动或剧烈运动）会对一些凝血试验结果造成影响。

阿司匹林、双嘧达莫等双联抗栓药物能抑制血小板聚集；口服避孕药、雌激素会使血小板黏附功能、聚集功能和纤维蛋白原，凝血酶原及凝血因子Ⅶ、Ⅸ、X、Ⅺ的活性明显增高；刷烈运动或输注肾上腺素时，因子Ⅷ活性快速上升；口服香豆素类抗凝药物，可以使维生素K依赖的凝血因子（因子Ⅱ、MⅦ、Ⅸ、X）和抗凝蛋白（蛋白C、蛋白S）等活性下降。

故一般在进行此类检验时，应停用有关药物2周，因故不能停药者，必须注明用药状态。

（二）采血的技术要点1．患者要求取血时患者应松弛，环境温暖，防止静脉挛缩，止血带的压力应尽可能小，压力大及束缚时间长可造成局部血液的浓缩和内皮细胞释放组织型纤溶酶原激活物（ tissue plasminogen activator，t－PA），后者将引起纤溶活性增加。

2．部位除了出血时间（BT）及对新生儿的某些检测外，绝大多数凝血检测均应使用静脉血。

3．采血人员应技术熟练，“一针见血”，以防止组织损伤和外源性凝血因子进入针管。

反复静脉穿刺可以导致血小板活化，致使血小板计数（PLT）假性减少；储存时间影响PLT标本应保存于室温，低温可激活血小板，储存时间过久可导致PLT偏低。

因此，标本应置室温，2小时内完成检测。

4．试管市售的真空采血管，由于具有采血便捷、定量且有多种抗凝剂可供选择，有的管壁已进行了硅化等优点，因此非常适合于血栓与止血的检验。

血栓与止血标本采集和处理的标准操作程序
【目的】指导凝血标本的采集，为了获得准确的检验结果，标本采集和处理必须规范化，也是质量控制的重要条件。

【该SOP变动程序】本标准操作程序的改变，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报请专业组长及科主任签字后生效。

【标本采集】
1、病人的准备：首先确认病人姓名，并将姓名写在真空管上，安慰病人，以减轻其恐惧心理，尽可能保证每次早餐前采血，且病人处于休息状态。

了解近期用药情况和特殊生理状况，并注明。

例如阿斯匹林、潘生丁等药物能抑制血小板聚集；服避孕药会使血小板粘附、聚集功能、纤维蛋白原及多种凝血因子活性明显增高；当剧烈运动或输注肾上腺素时VII因子活性会快速上升。

2、标本采集：按真空采血管采血法标准操作程序用蓝色帽（枸椽酸钠抗凝剂）的采血管准确收集血液至刻度，血液与抗凝剂比例为1： 9.
【标本处理】
1、采血完毕，立即摇动试管，使血液与抗凝剂充分混匀，但要避免用力振摇。

2、离心取血浆：30r/min离心10分钟，取血浆进行试验。

3、标本保存：血浆标本原则上应立即送检，并在2小时内检测完毕。

2-8T保存不宜超过6小时，22-24C保存不宜超过2小时。

4、样本暴露于空气中可使PH值升高，因此若不能立即测定应将样本加塞保存。

【注意事项】
1、采血人员应技术熟练，要求“一针见血”以防止组织损伤、外源性凝血因子进入针管。

采血时病人应放松，环境应温暖，防止静脉挛缩，止血带压力要尽可能小，并且不要超过3分钟，采血前也不要拍打静脉。

2、当需收集几份标本时，应将血凝管放在第二管收集。

3、不可在输液侧手臂采血，更不可在输液针头内抽血。