20种中草药提取物的体外抗菌作用研究

22种中草药体外抗菌作用的研究中草药自古以来就被广泛应用于中医中草药体外抗菌学研究，近年来，越来越多的研究报告显示，许多中草药具有广谱抗菌活性。

本文将介绍22种中草药的体外抗菌作用研究。

1. 黄芩(Huang Qin)：黄芩具有对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、肺炎克雷伯菌等多种常见细菌的抑制作用。

2. 当归(Dang Gui)：当归可抑制大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和白色念珠菌等多种细菌的生长。

3. 莪术(E Zhu)：莪术对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和链球菌等具有显著的抗菌活性。

4. 丹参(Dan Shen)：丹参对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌具有抑制作用。

5. 白芍(Bai Shao)：白芍可抑制大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的生长。

6. 当归(Dang Shen)：当归对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的生长具有抑制作用。

7. 山楂(Shan Zha)：山楂具有对金黄色葡萄球菌和白色念珠菌的抑制作用。

8. 牛蒡子(Niu Bang Zi)：牛蒡子对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和链球菌等具有抗菌活性。

9. 郁郁葱葱(Yu Yu Cong Cong)：郁郁葱葱对白色念珠菌和大肠杆菌有明显的抑制作用。

10. 菊花(Ju Hua)：菊花可抑制金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的生长。

11. 蓝根(Lan Gen)：蓝根对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌具有抑制作用。

12. 萝卜(Ruo Bo)：萝卜具有对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抑制作用。

13. 桂皮(Gui Pi)：桂皮对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌具有抑制作用。

14. 钩藤(Gou Teng)：钩藤可抑制金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和白色念珠菌的生长。

15. 红景天(Hong Jing Tian)：红景天对白色念珠菌和金黄色葡萄球菌有明显的抑制作用。

16. 金银花(Jin Yin Hua)：金银花具有对链球菌和大肠杆菌的抑制作用。

17. 藏红花(Zang Hong Hua)：藏红花对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌具有抗菌活性。

中草药提取物的抗菌作用及其机理研究近年来，中草药提取物在抗菌领域引起了广泛关注。

中草药作为中国传统医学的重要组成部分，具有丰富的药用资源。

通过提取和浓缩中草药中的有效成分，可以获得抗菌作用较强的中草药提取物。

本文将探讨中草药提取物的抗菌作用及其机理研究。

中草药提取物的抗菌作用主要体现在对多种病原微生物的抑制和杀灭上。

研究表明，中草药提取物对细菌、真菌和病毒均具有一定的抗菌作用。

例如，黄连、黄芩等中草药提取物对细菌感染具有显著的抑制作用；苍术、茵陈蒿等中草药提取物对真菌感染有很好的抑菌效果；而金银花、板蓝根等中草药提取物则对病毒感染起到了重要的抗病毒作用。

中草药提取物的抗菌机理研究主要集中在其活性成分和作用靶点上。

中草药提取物中的有效成分具有各种不同的抗菌机制。

其中，一些成分可以通过破坏微生物细胞壁、膜结构等方式杀死细菌；还有一些成分可以抑制微生物的生物合成过程，干扰其生长和繁殖。

此外，中草药提取物还可以调节机体免疫系统的功能，增强机体抵抗力，从而对抗菌有一定的辅助作用。

此外，中草药提取物的抗菌作用还与其提取方法有关。

目前，常用的提取方法包括浸提、溶剂萃取、超声波提取等。

每种提取方法都有其特点和适用范围。

合理选择提取方法可以提高中草药提取物的抗菌活性，并减少对微生物的副作用。

然而，与化学合成药物相比，中草药提取物的抗菌作用可能存在一定的局限性。

首先，中草药提取物的抗菌活性通常较弱，需使用较高浓度才能达到显著抑制作用。

其次，部分中草药提取物具有一定的毒性和副作用。

因此，在应用中草药提取物时，需要仔细评估其药理活性和安全性，合理确定剂量和用药途径。

总体而言，中草药提取物具有一定的抗菌作用，并且在抗菌机理研究领域也取得了一些进展。

进一步的研究可以从以下几个方面展开：首先，深入研究中草药提取物的抗菌活性和毒性关系，寻找较低剂量下具有高效抗菌活性的有效成分。

其次，探索中草药提取物与化学合成药物的联合应用，以提高治疗效果和降低不良反应。

中草药提取物抑菌作用研究文选近年来，随着抗生素滥用和耐药问题的日益严重，人们对寻找新的抗菌剂的需求也越来越迫切。

中草药作为传统医学的重要组成部分，被广泛认为具有抗菌活性。

本文选将围绕中草药提取物的抑菌作用展开讨论，并呈现一些相关研究的最新成果。

1. 中草药提取物的抗菌活性及机制研究许多中草药已被发现具有显著的抗菌活性。

例如，多个研究证实黄连提取物对多种细菌具有抗菌效果。

同时，对黄连提取物的进一步研究发现，其抗菌活性可能与其所含的生物活性化合物，如黄连碱和黄连苦苷等有关。

此外，许多其他中草药提取物，如苦参、金银花、菊花和黄芩等，也展示了抗菌作用，并被认为具有广谱抗菌活性。

针对中草药抗菌活性的机制研究主要集中在以下几个方面。

首先，一些中草药提取物通过抑制细菌细胞膜的合成和功能来发挥抗菌作用。

其次，中草药提取物还可通过改变细菌细胞内的生物活性物质代谢，如抑制DNA、RNA和蛋白质等的合成，从而干扰细菌的正常生理过程。

此外，一些研究表明，中草药提取物还可通过增加细菌的氧化应激和产生有毒自由基，以及干扰细菌的细胞分裂等进程来发挥抗菌作用。

2. 中草药提取物的应用前景和挑战中草药提取物具有广泛的应用前景，特别是在治疗耐药菌感染和替代抗生素方面。

许多研究已证实中草药提取物对多种致病菌具有剂量依赖性的抑菌活性，包括耐药菌株。

与传统抗菌药物相比，中草药提取物具有天然、多组分和相对较低毒性等优势。

此外，中草药提取物常被用于改良抗菌材料的制备，如抗菌纺织品、骨修复材料和医用敷料等，以拓展其在临床医学和生物材料领域的应用。

然而，中草药提取物的应用也面临一些挑战。

首先，对于中草药提取物抗菌活性的研究存在差异性，可能受到多种因素的影响，如制备方法、基质选择、提取条件和反应环境等。

其次，中草药提取物作为复杂多组分混合物，存在成分稳定性和一致性的问题，对于其抗菌效果的评价和标准化也需要进一步研究。

此外，与抗生素相比，中草药提取物通常需要较高的浓度才能展示抗菌效果，这可能会对其在医疗应用中的实际可行性产生限制。

苦参提取物体外抗菌实验研究一、概览哎呦这可是个不小的课题啊！不过别着急，咱们先来简单了解一下这个实验研究的背景和目的。

话说这苦参可是一味神奇的中药，据说它含有丰富的抗菌成分，对各种细菌、真菌都有很好的抑制作用。

那我们今天就来研究一下，通过提取苦参中的这些抗菌成分，看看它们在物体表面到底能不能起到抗菌的作用呢？这可是一个既有趣又有意义的实验哦！A.研究背景和意义在当今社会，随着人们生活水平的提高，对健康的要求也越来越高。

而抗菌作为一种重要的健康保障手段，受到了越来越多人的关注。

苦参作为一种传统的中草药，具有很好的抗菌效果。

因此研究苦参提取物体外抗菌的作用机制和方法，对于开发新的药物和保健品具有重要的意义。

B.目的和方法本实验的目的是探究苦参提取物对物体表面的抗菌效果，我们采用了两种方法进行实验。

第一种方法是将苦参提取物涂抹在物体表面，然后观察一段时间后是否仍然有细菌生长。

第二种方法是在不同的温度下分别将苦参提取物涂在物体表面，然后观察一段时间后是否仍然有细菌生长。

通过这两种方法，我们可以得出苦参提取物对物体表面抗菌的效果。

二、文献综述近年来随着抗菌药物的广泛应用，耐药菌株的出现已成为全球公共卫生领域的一大挑战。

为了应对这一问题，研究者们开始寻找更加安全、有效的抗菌方法。

苦参作为一种传统的中草药，具有很好的抗菌活性，因此受到了广泛关注。

本文将对近年来关于苦参提取物体外抗菌实验研究的文献进行综述，以期为今后的研究提供参考。

在过去的研究中，苦参提取物已经被证明具有很好的抗菌活性。

例如一篇发表在《中国药学杂志》上的研究报道了苦参提取物对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和绿脓杆菌等常见细菌的抑制作用。

此外另一篇发表在《中药材学报》上的研究表明，苦参提取物对白色念珠菌也有很好的抑制作用。

这些研究结果表明，苦参提取物具有良好的抗菌活性，值得进一步研究。

然而目前关于苦参提取物抗菌机制的研究还相对较少，一些研究认为，苦参中的生物碱成分可能是其抗菌活性的主要原因。

21种中药提取物体外抗菌活性研究
李金鸽;胡丞丞;付培蕾;冯爽;李珂;李文渊
【期刊名称】《工业微生物》
【年(卷),期】2024(54)1
【摘要】测试21种中药乙醇提取物对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌和大肠杆菌的体外抑菌效果。

通过乙醇回流法制备中药乙醇提取物,采用二倍
梯度稀释法测定21种中药提取物的抗菌活性。

在21种中药乙醇提取物中,铜绿假单胞菌和大肠杆菌没有展现出明显的抑菌活性,然而金银花、红景天、大黄等13种乙醇提取物对金黄色葡萄球菌都表现出了明显的抑菌活性,MIC的范围为
0.84~14.92 mg/mL,其中金银花的抑菌效果最好,其MIC为0.84 mg/mL;金银花、桔梗、秦皮等8种乙醇提取物对枯草芽孢杆菌表现出了明显的抑菌活性,MIC的范
围为3.54~17.96 mg/mL,其中秦皮的抑菌效果最好,其MIC为3.54 mg/m L。

在21种中药乙醇提取物中,金银花、红景天、大黄、桔梗、秦皮的抗菌效果最好,且这些药物对革兰氏阳性菌的抑菌效果比革兰氏阴性菌好。

【总页数】4页(P63-66)
【作者】李金鸽;胡丞丞;付培蕾;冯爽;李珂;李文渊
【作者单位】郑州工业应用技术学院药学与化学工程学院;郑州工业应用技术学院
河南省水环境与健康工程技术研究中心
【正文语种】中文
【中图分类】R28
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23种中草药的体外抗菌活性筛选研究作者：张泽萍胡欢左国营来源：《广西植物》2019年第04期摘要：為考察中草药抗菌物质基础筛选出活性提取物，该研究通过80%乙醇冷浸和95%乙醇回流提取制备23种中草药的提取物，采用琼脂扩散法测量抑菌圈直径，用微量液体培养基倍比稀释法测定最低抑菌浓度（minimum inhibitory concentration，MIC）和最低杀菌浓度（minimum bactericidal/fungicidal concentration，MBC/MFC），并测定了提取物对临床4种常见病原菌体外抗菌活性。

结果表明：紫珠草、千斤拔、黄龙尾等9种中草药对金黄色葡萄球菌有较强的抑菌活性，其MIC/MBC值除个别菌是12.5 mg·mL-1外，其他都在0.09～3.12 mg·mL-1之间;千斤拔、大红袍、过江龙等5种中草药对铜绿假单胞菌有较强抑菌活性，其MIC/MBC值在3.12～12.5 mg·mL-1之间;紫珠草、千里光、石楠等13种中草药对大肠埃希菌有较强的抑菌活性，其MIC/MBC值在0.09～6.25 mg·mL-1之间;八角对白色念珠菌有较强抑菌活性，其MIC/MFC值在0.78～12.5 mg·mL-1之间。

23种中草药的抗细菌活性较好，尤其是千斤拔、大红袍、过江龙、八角、黄药子对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌都具有较好的抑菌活性，具有广谱抗菌活性;但对真菌抑菌效果不明显，仅有八角对白色念珠菌有抑菌活性。

此外，提取溶剂浓度、提取温度和提取时间对中草药的提取率和活性均有影响，冷提稍优于热提。

关键词：中草药，金黄色葡萄球菌，铜绿假单胞菌，大肠埃希菌，白色念珠菌，体外抗菌中图分类号：Q946， R285文献标识码：A文章编号：1000-3142（2019）04-0499-12Abstract：In order to investigate the antimicrobial material base of Chinese herbal medicine and screen the active extracts， 80% ethanol cold soaking and 95% ethanol reflux extraction were used to prepare the extracts from 23 traditional Chinese herbs. The agardiffusion method was used to measure the inhibition zonediameters（IZDs）， the minimum inhibitory concentration （MIC） and minimum bactericidal / fungicidal concentration（MBC/MFC） were measured by the microdilution method todetermine the in vitro antimicrobial activity of the extracts against four common clinical pathogenic microoranisms. The results showed that some of the 23 ethanol extracts had strong inhibitory effects， among which nine species like Callicarpa macrophylla， Flemingia philippinensis and Agrimonia pilosa extracts showed stronger inhibition against Staphylococcus aureus. The ranges of MICs/MBCs were between 0.09 and 3.12 mg·mL-1， except for a small number of strains with the MIC/MBC at 12.5 mg·mL-1. The extracts from five species like Flemingia philippinensis， Campylotropis hirtella， and Entada phyaseoloides showed stronger inhibition against Pseudomonas aeruginosa， the ranges of MICs/MBCs were between 3.12 and 12.5 mg·mL-1. The extracts from thirteen species like Callicarpa macrophylla， Senecio scandens and Piper wallichii showed stronger inhibition against Escherichia coli， the ranges of MICs/MBCs were between 0.09 and 6.25 mg·mL-1. The extracts from Illicium verum showed stronger inhibition against Candida albicans， the ranges of MICs/MFCs were between 0.78 and 12.5 mg·mL-1. Generally， the ethanol extracts from 23 traditional Chinese herbs showed good antibacterial activities， especially Flemingia philippinensis， Campylotropis hirtella， Entada phaseoloides， Illicium verum and Dioscorea bulbifera showed a broad spectrum of antibacterial activities against Staphylococus aureus，Pseudomonas aeruginosa and Escherichia coli. Their fungicidal effect was weak， only Illicium verum showed inhibitory effect on Candida albicans. In addition， extraction temperature， time and solvent concentration affected the extraction rate and the activity of extracteddrugs， with hot extraction slightly better than cold extraction.Key words：traditional Chinese herbal medicine， Staphylococcus aureus， Escherichia coli，Pseudomonas aeruginosa， Candida albicans， in vitro antimicrobial自1943年青霉素应用于临床以来，抗生素对保障人类健康起到了重大作用。

20味中药提取物对无乳链球菌的体外抑菌活性研究彭练慈;殷中琼;贾仁勇;李莉;代如意;曲径;刘明辉;陈萍【摘要】【目的】筛选对无乳链球菌Streptococcus agalactiae具有良好体外抑菌效果的中药．【方法】通过乙醇回流、超声波方法提取20味中药的抗菌活性部位，采用试管二倍稀释法测定黄连Coptis chinensis等20味中药提取物对无乳链球菌的最低抑菌浓度（ Minimal inhibitory concentration ，MIC）和最低杀菌浓度（ Minimal bactericidal concentration ， MBC），并评价抗菌活性较强的几味中药的体外联合抑菌效果．【结果和结论】乌梅Prunus mume、黄连、黄芩Scutel-laria baicalensis、虎杖Polygonum cuspidatum和地榆Sanguisorba officinalis 5味中药提取物对无乳链球菌的MIC范围为7.80～31.25 mg/mL．蒲公英Taraxacum mongolicum、茵陈Artemisia scoparia、秦皮Fraxinus rhynchophylla、艾叶Arte-misia argyi、黄柏 Phellodendron chinense、鱼腥草 Houttuynia cordata、紫花地丁 Violae yedoensis 和白头翁 Pulsatilla chinensis 8味中药提取物的MIC范围为62.50～125.00 mg/mL．何首乌Po．multiflorum、苦参Sophora flavescens、穿心莲Andrographis paniculata、杜仲Eucommia ulmoides、连翘Forsythia suspensa、金银花Lonicera japonica和夏枯草Prunel-la vulgaris 7味中药提取物的MIC范围为250.00～500.00 mg/mL．联合抑菌试验结果表明，黄芩、虎杖、地榆和黄连的联合抑菌指数（FICI）≤1，虎杖、黄芩和地榆的FICI＞2．黄连、黄芩、虎杖和地榆对无乳链球菌均具有很强的体外抗菌活性，地榆、黄连为相加作用，黄连、黄芩和虎杖为协同作用，地榆与黄芩、虎杖为拮抗作用．%Objective] Screening for the traditional Chinese medicines which have good antibacterial effects on Streptococcus agalactiae in vitro.[Method] Using ethanol reflux andultrasonic method , ex-tracts of 20 different traditional Chinese medicines were obtained .Minimal inhibitory concentration ( MIC) and minimal bactericidal concentration ( MBC) of Coptis chinensis and other 19 extracts of tradi-tional Chinese medicines on St.agalactiae were detected by macrodilution broth method , and combined antibacterial effects in vitro of them were also observed .[Result and conclusion] The MICs of the ex-tracts obtained from Prunus mume, Coptis chinensis, Scutellaria baicalensis , Polygonum cuspidatum and Sanguisorba officinalis against St.agalactiae ranged from 7.80 to 31.25 mg/mL.The MICs of the ex-tracts obtained from Taraxacum mongolicum, Artemisia scoparia, Fraxinus rhynchophylla, Artemisia arg-yi, Phellodendron chinense, Houttuynia cordata, Violae yedoensis and Pulsatilla chinensis ranged from 62.50 to 125.00 mg/mL.The MICs of the extracts obtained from Po.multiflorum, Sophora flavescens, Andrographis paniculata, Eucommia ulmoides, Forsythia suspensa, Lonicera japonica and Prunella vul-garis ranged from 250.00 to 500.00 mg/mL.The results of joint bacteriostatic test showed that the frac-tional inhibitory concentration index ( FICI) of the extracts obtained from Sc.baicalensis, Po.cuspida-tum, Sa.officinalis and C.chinensis was less than or equal to 1.The FICI of Po.cuspidatum, Sc.ba-icalensis and Sa.officinalis was more than 2.C.chinensis, Sc.baicalensis, Po.cuspidatum and Sa.offi-cinalis showed a good antibacterial effect against St.agalactiae in vitro.The combination of Sa.officina-lis and C.chinensis was characterized by a additive effect , whereas the combination of C.chinensis, Sc. baicalensis and Po.cuspidatum was characterized by a synergismeffect .The combination of Sa.officina-lis and Sc.baicalensis, Po.cuspidatum showed antagonism effect .【期刊名称】《华南农业大学学报》【年(卷),期】2014(000)004【总页数】4页(P22-25)【关键词】无乳链球菌;中药提取物;抗菌活性【作者】彭练慈;殷中琼;贾仁勇;李莉;代如意;曲径;刘明辉;陈萍【作者单位】四川农业大学动物医学院，四川雅安625014;四川农业大学动物医学院，四川雅安625014;四川农业大学动物医学院，四川雅安625014; 四川农业大学预防兽医研究所，四川雅安625014;四川农业大学动物医学院，四川雅安625014;四川农业大学动物医学院，四川雅安625014;四川农业大学动物医学院，四川雅安625014;四川农业大学动物医学院，四川雅安625014;四川农业大学动物医学院，四川雅安625014【正文语种】中文【中图分类】S825.6无乳链球菌Streptococcus agalactiae又称B群链球菌(GBS)，可引起奶牛乳房炎，我国因无乳链球菌引起的奶牛乳房炎占总发病率的20% ～40%.目前，对于奶牛乳房炎的治疗主要依赖抗生素，由于反复大量使用，造成乳汁中抗生素残留日益严重，耐药菌株不断出现，使乳房炎的治疗效果不断下降［1-2］.中草药具有调节畜禽机体免疫力、杀灭或抑制细菌和病毒等作用，并因其低毒、低残留、不易产生耐药性等特点越来越受到人们的重视［3］，从传统中草药中筛选出有效的抗无乳链球菌药物符合食品安全和公共卫生需要.本研究选取黄连Coptis chinensis等20味中药作为研究对象，以水和乙醇对其有效成分进行提取.通过测定黄连等20味中药提取物对无乳链球菌的最低抑菌浓度(Minimal inhibitory concentration，MIC)和最低杀菌浓度(Minimal bactericidal concentration，MBC)，筛选得到具有良好体外抗菌活性的中药提取物，然后通过棋盘稀释法［4-5］研究不同中药提取物两两联合对无乳链球菌的体外抑制效果，为进一步研制治疗奶牛乳房炎的中药组方制剂提供参考.1 材料与方法1.1 材料1.1.1 菌株无乳链球菌编号为CVCC1886，购自中国兽药监察所.1.1.2 药材黄连(产地四川，批次:080406)、黄芩Scutellaria baicalensis(产地陕西，批次:040824)、乌梅Prunusmume(产地四川，批次:120315)、虎杖Polygonum cuspidatum(产地四川，批次:081102)、地榆Sanguisorba officinalis(产地陕西，批次:040827)、蒲公英Taraxacum mongolicum(产地贵州，批次:100217)、苦参Sophora flavescens(产地云南，批次:081121)、何首乌Po.multiflorum(产地甘肃，批次:080301)、茵陈Artemisia scoparia(产地河北，批次:080923)、秦皮Fraxinus rhynchophylla(产地山西，批次:100330)、金银花Lonicera japonica(产地四川，批次:080919)、穿心莲 Andrographis paniculata(产地四川，批次:100310)、黄柏Phellodendron chinense(产地四川，批次:080923)、艾叶 Ar.argyi(产地甘肃，批次:080921)、鱼腥草Houttuynia cordata(产地四川，批次:100310)、杜仲Eucommia ulmoides(产地云南，批次:080916)、连翘 Forsythia suspensa(产地四川，批次:100310)、白头翁Pulsatilla chinensis(产地四川，批次:100310)、夏枯草 Prunella vu lg aris(产地河南，批次:101114)、紫花地丁Violae yedoensis(产地四川，批次:100310)20味中药均购于四川雅安惠民堂药业连锁有限责任公司，由四川农业大学药学系副教授范巧佳鉴定为正品.1.1.3 培养基加有5%小牛血清的营养肉汤，鲜血营养琼脂培养基按照常规方法制作，用于无乳链球菌的培养.1.1.4 仪器设备和试剂电热恒温培养箱、超净工作台、旋转蒸发仪、索氏提取器、微量进样器、二甲亚砜、无水乙醇、T型涂布棒、90 mm玻璃培养皿.1.2 方法1.2.1 有效成分的提取按照文献［6-16］的方法提取黄连等20味中药的有效成分，乌梅、黄连、黄芩、虎杖、蒲公英、茵陈、秦皮、黄柏、鱼腥草、紫花地丁、白头翁、何首乌、苦参、穿心莲、杜仲、连翘、金银花和夏枯草采用乙醇回流提取法，地榆和艾叶采用超声波提取法.各自合并滤液，浓缩制成浸膏，并计算浸膏得率.使用前将浸膏用适量二甲亚砜溶解，制成生药质量浓度为1 g/mL的药液，100℃流通蒸汽灭菌30 min，置于4℃冰箱备用.1.2.2 细菌菌悬液的制备挑取新鲜培养无乳链球菌的2个菌落接种于3 mL的肉汤培养基中，置于37℃恒温摇床中培养18～24 h后取出.吸取菌液0.5 mL，用生理盐水作 10-1梯度稀释，取 10-7、10-8、10-9 3个梯度的菌液0.1mL分别在6个鲜血琼脂培养基上均匀摊开，放入37℃恒温培养箱中培养18～24 h.计算出原液的细菌个数为1.6×1011 CFU/mL.临用前将菌原液用肉汤培养基稀释成菌液浓度为1.6×109 CFU/mL.1.2.3 体外抑菌试验测定MIC:采用试管2倍稀释法，取18支灭菌试管，将其中16支分为试验组和阴性对照组，每组8支.18支试管分别加营养肉汤1 mL.在2组的第1管中分别加1 mL药液，混匀后吸取1 mL至第2管中，依次类推，直至第8管，第8管吸取1 mL弃去.然后，向试验组的8支试管中加0.1 mL的稀释菌液，阴性对照组8支试管不加菌液，加0.1 mL生理盐水.第17管不加药液加0.1 mL菌液作为阳性对照，第18管不加药液和菌液作为空白对照.则试验组和阴性对照组的第1管至第8管的药液浓度依次为 500.00、250.00、125.00、62.50、31.25、15.60、7.80、3.90 mg/mL.置于37 ℃ 恒温摇床中培养18～24 h.以无菌生长的最低稀释度为MIC.测定MBC:观察药物MIC以上未见细菌生长的各管培养物，分别各取0.1 mL移种至不含药物的鲜血营养琼脂平皿上，轻轻推开药液，置37℃培养过夜，观察有无细菌生长.平皿培养基中，计数少于5个菌落者作为该药的MBC［17］.1.2.4 体外联合抑菌试验根据单味中药的体外抑菌结果，选择其中抑菌活性较强的中药分别以其中2种药的 4MIC，2MIC，MIC，1/2MIC，1/4MIC 分别进行联合.以黄连与黄芩为例:用灭菌后的2 mL EP管50个，分为试验组和对照组.在第1～6行沿X轴(从左到右)每管中依次加入用肉汤稀释好的4MIC、2MIC、MIC、1/2MIC、1/4MIC 的黄连药液各 0.2 mL.以同样的方法在第1～6列沿Y轴方向(从上到下)每管中依次加入用肉汤稀释好的1/4MIC、1/2MIC、MIC、2MIC、4MIC的黄芩药液各0.2 mL，将两药混合均匀后加入制备好的菌液40μL，对照组加入等量的营养肉汤，其他操作同试验组.37℃培养18～24 h，观察结果.结果判断依据:联合抑菌指数(Fraction inhibitory concentration index，FICI)=甲药联合时的MIC/甲药单独时的MIC+乙药联合时的MIC/乙药单独时的MIC.FICI≤0.5时为协同作用，0.5＜FICI≤1时为相加作用，1＜FICI≤2时为无关作用，FICI＞2时为拮抗作用.2 结果与分析2.1 20味中药提取物对无乳链球菌的体外抑菌活性20味中药提取物对无乳链球菌的体外抑菌结果见表1.由表1可知，黄连、黄芩、乌梅、虎杖和地榆5味中药提取物的MIC的范围为7.80～31.25 mg/mL，MBC≤31.25 mg/mL抑菌效果最好.蒲公英、茵陈、秦皮、艾叶和紫花地丁5味中药提取物的MIC均为62.50 mg/mL，抑菌效果较好.黄柏等10味中药提取物的MIC均大于或等于125.00 mg/mL，抑菌效果较差.表1 20种中药提取物对无乳链球菌的体外抑菌活性Tab.1 Antim icrobial activities of active ingredients extracts of twenty tradition Chinese medicines to Streptococcus agalactiae in vitro mg·mL-1中药提取物MIC MBC黄连62.50 125.00 31.25 31.25黄芩 7.80 7.80乌梅 31.25 31.25虎杖15.60 15.60地榆 15.60 15.60蒲公英 62.50 62.50苦参 250.00 250.00何首乌250.00 250.00茵陈 62.50 62.50秦皮 62.50 125.00金银花 500.00 500.00穿心莲 500.00 500.00黄柏 125.00 125.00艾叶 62.50 125.00鱼腥草 125.00 125.00杜仲 500.00 500.00连翘 250.00 250.00白头翁 125.00 125.00夏枯草 500.00 500.00紫花地丁2.2 黄连等4味中药提取物对无乳链球菌的体外联合抑菌活性通过单味药的体外抑菌结果，选择黄连、黄芩、虎杖和地榆进行体外联合抑菌试验，联合抑菌结果见表2.根据FICI值的判定依据，黄芩提取物与虎杖提取物、黄芩提取物与黄连提取物及黄连提取物与虎杖提取物对无乳链球菌的FICI≤0.50，为协同作用.地榆提取物与虎杖提取物及地榆提取物与黄芩提取物对无乳链球菌的FICI＞2，为拮抗作用.地榆提取物与黄连提取物对无乳链球菌的FICI=1，为相加作用(表2). 表2 4味中药两两联合用药对无乳链球菌的FICI1)Tab.2 The FICI to pairw ise combination of four herbs against Streptococcus agalactiae联合药物黄芩虎杖黄连地榆MICA MICC MICA MICC MICA MICC MICA MIC FICI 作用效应黄芩+虎杖 7.80 0.96 15.60 1.95 0.25 C协同黄芩+黄连 7.80 1.95 31.25 7.80 0.50 协同黄芩+地榆 7.80 15.60 15.60 31.25 4.00 拮抗虎杖+黄连 15.60 1.95 31.25 3.90 0.50 协同虎杖+地榆 15.60 15.60 15.60 31.25 3.00 拮抗黄连+地榆31.25 15.60 15.60 7.80 1.00相加1)MICA、MICC分别为单药、联合用药的MIC，单位均为mg·mL-1.3 讨论中药成分复杂，提取其中的有效成分对于提高其药效具有重要作用.中药提取方法众多，其中乙醇回流法、超声波提取法因操作简单方便，适合试验操作而被广泛使用.本研究根据20味中药的不同有效成分，分别采用乙醇回流法和超声波提取法对20味中药的有效成分进行提取［6-16］，沿用文献报道筛选的最佳工艺条件，使有效成分得到了极大的提取，从而保证了药效.20味中药提取物的体外抑菌活性试验结果表明，虎杖、黄连和黄芩的 MIC分别为15.60、31.25、7.80 mg/mL，其MBC≤31.25 mg/mL说明黄连、黄芩和虎杖具有很强的抑菌作用.该结果与王庆玲等［17］和金建玲等［18］报道结果一致.抑菌活性好的地榆及抑菌活性较好的紫花地丁和蒲公英比金建玲等［18］报道的抑菌效果更优.本研究选取文献报道中筛选出的最佳提取工艺条件对黄连［6］、黄芩［7］、虎杖［8］等20味中药的有效成分进行提取，使提取物中的有效成分尽可能地多，从而达到了较好的抑菌效果.陈微等［19］报道夏枯草和黄柏对大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌有很好的抑菌活性，但在本研究中对无乳链球菌的抑菌效果并不好，可能因为不同的提取方法以及中药提取物的pH不同，对不同的细菌产生不同的抑菌效果，且提取物中不溶成分偏多，对中草药抗菌活性成分有一定的影响，使得抑菌效果不那么理想.联合抑菌试验显示，黄连和黄芩、虎杖联合都产生协同作用，具有良好的抗菌作用.地榆和黄芩、虎杖联合都产生拮抗作用.地榆的有效成分是鞣质，具有大分子多元酚类结构，容易发生缩合反应或沉淀反应而失去相应的抗菌活性，与黄芩、虎杖联合后，3种有效成分发生化学反应，可能使药物的有效结构发生改变，导致联合后产生拮抗作用.本研究表明，黄连、黄芩和虎杖联合产生协同作用，增强了抑菌效果，可以组成一个复方.本研究为抗无乳链球菌的中药组方提供参考.参考文献:［1］倪春霞，蒲万霞，胡永浩，等.奶牛乳房炎病原菌的分离鉴定及耐药性分析［J］.西北农业学报，2010，19(2):20-24.［2］杨锐，李英伦，李金良，等.四川雅安临床型奶牛乳房炎病原菌分离鉴定及耐药性分析［J］.中国兽医杂志，2009，45(4):41-42.［3］闫丽霞.中药制剂技术［M］.北京:化学工业出版社，2004.［4］MARCHETTIO，MOREILLON P，GLAUSER M，et al.Potent synergism of combination of the combination of fluconazole and cyclosporine in Candida albicans［J］.Antimicrob Agents Chemother，2000，44(9):2373-2381.［5］MUKHERJEE P K，SHEEHAN D J，HITCHCOOK C A ，etbination treatment of invasive fungal 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